高效液相色谱法测定蒜油中大蒜素的含量

大蒜素是百合科葱属植物蒜的有效成分之一， 其 化学名为三硫二丙烯。大量的动物实验和临床验证 证明， 大蒜油中的大蒜素具有明确而显著的抗癌和 保 护 心 血 管 的 作 用 ［１－ ２］。 其 含 量 的 测 定 多 用 正 己 烷 提取， 用液相色谱法测定［３ｇ－ ｌｉｎ１，２， ＹＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ ｂｏ１， ＸＩＥ Ｆｅｎｇ１， ＬＵ Ｙａｎｇ１， ＴＡＮ Ｈｏｎｇ１， ＨＥ Ｊ ｉｎ－ ｌｉｎ１
（１．Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒｃｈ Ｃｅ ｎｔｅ ｒ ｏｆ Ｐ ｈｙｓ ｉｃａ ｌ Ｔｅ ｓ ｔｉｎｇ ａ ｎｄ Ｃｈｅ ｍｉｃａ ｌ Ａｎａ ｌｙｓ ｉｓ ， Ｇｕｉｙａ ｎｇ ５５０００１； ２．Ｃｈｉｎａ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅ ｒｓ ｉｔｙ， Ｇｕｉｙａ ｎｇ ５５０００２）
（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ， ５μｍ）； 流动相： 甲醇－ 水－ 甲酸（７５∶２５∶０．１）； 流速１ｍＬ／ｍｉｎ； 检测波长２２５．８ｎｍ。大蒜素
浓 度 在４５．１２￣２２５．６ｍｇ／Ｌ范 围 内 呈 良 好 线 性 关 系（ｒ＝０．９９９８）， 平 均 回 收 率 为９９．７２％， ＲＳＤ为 ０．２７％（ｎ＝
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱仪， Ｇ１３１５Ｂ ＤＡＤ（二极
管阵列）紫外检测器； 大蒜素化学对照品： 中国药品生 物 制 品 检 验 所 ， 含 量８８．４ ％； 蒜 油 ： 贵 州 味 美 食 品 工业有限公司； 甲醇为色谱纯， 其他试剂为分析纯， 水为纯净水。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 色谱柱： ＺＯＲＢＡＸ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－ Ｃ１８柱（４．６ｍｍ×１５０
１０μＬ ， 计算ＲＳＤ为０．２７ ％。
２．７ 稳定性试验
取１６９．２ｍｇ／Ｌ的 供 试 品 溶 液 ， 分 别 于０、２ｈ、４ｈ、
６ｈ、８ｈ进 样 ， 每 次１０μＬ， 以５次 进 样 的 峰 面 积 计 算 。
结果ＲＳＤ为０．２８ ％。
２．８ 样品测定
精密称取大蒜 油２０．２０ｇ置１００ｍＬ容 量 瓶 中 ， 用 正
取 适 量 大 蒜 素 对 照 品 溶 于 正 己 烷 ， 在 Ａｇｉｌｅｎｔ １１００型 紫 外 检 测 器 上 进 行 紫 外 扫 描 ， 发 现 大 蒜 素 在 ２２５．８ｎｍ波长处有最大吸收， 因此选择２２５．８ｎｍ作为测 定波长。 ２．３ 系统适应性研究
分别精 密 进 样１０μＬ浓 度 为１６９．２ｍｇ／Ｌ的 对 照 品 和 浓度为２０２．０ｇ／Ｌ的样品注入高效液相色谱仪， 记录色 谱图， 结果见图１。
参考文献： ［１］ 王 鹏，雷 正 杰，等．大 蒜 素 化 学 成 分 抗 肿 瘤 作 用 研 究 进 展
［Ｊ］．解 放 军 药 学 报 ，１９９９，１５（６）：２２ ［２］ 郎 彝 江，张 光 远．大 蒜 有 效 成 分 的 研 究［Ｊ］．中 草 药 ，１９８１，１
（１）：４ ［３］ 华 东 理 工 大 学 分 析 化 学 教 研 组．分 析 化 学［Ｍ］．北 京：高 等
教 育 出 版 社 ，１９９４
１８２ Ｎｏ． ４． ２００７
分析检测
高效液相色谱法测定 蒜油中大蒜素的含量
宋光林１，２， 杨鸿波１， 谢 峰１， 陆 洋１， 谭 红１， 何锦林１ （１．贵州省理化测试分析研究中心， 贵阳 ５５０００１； ２．贵州大学， 贵阳 ５５０００２）
摘要： 建立高效液相色谱法测定蒜油中大蒜素含量的方法。采用ＨＰＬＣ法ＺＯＲＢＡＸ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－ Ｃ１８柱
表１ 回收率试验结果
加入量 测得量 回收率 平均回收率 ＲＳＤ
（ｍｇ／Ｌ） （ｍｇ／Ｌ）
（％）
（％）
（％）
４５．１２
４４．８３
９９．３６
４５．１２
４５．０２
９９．７８
９９．７２
０．２７
４５．１２
４４．９５
９９．６２
６７．６８
６７．４８
９９．７０
６７．６８
６７．７４
１００．１
２．６ 精密度试验
取６７．６８ｍｇ／Ｌ的对照品溶液， 连续进样５次， 每次
２．５ 回收率试验 分 别 精 确 称 取 已 知 含 量 的 蒜 油５份 置１００ｍＬ容 量
瓶中， 再分别精确加入１．１２８ｇ／Ｌ的大蒜素对照品溶液 ４．０ｍＬ ３份， ６．０ｍＬ ２份置１００ｍＬ容量瓶中 ， 用正己烷 溶解并稀释至刻度， 摇匀， 作为供试品溶液， 进样 １０μＬ测试， 按２．４计算回收率， 结果见表１。
从图１ 可见， 空白溶液不干扰大蒜素成分的检 出， 主峰与相邻峰的分离度大于１．５ｍｉｎ。 ２．４ 标准曲线的绘制
精 确 称 取 大 蒜 素 对 照 品 ０．１１２８ｇ置 １００ｍＬ容 量 瓶 中 ， 用 正 己 烷 稀 释 至 刻 度 ， 摇 匀 。 精 密 吸 取４．０ｍＬ， ６．０ｍＬ， ８．０ｍＬ， １０．０ｍＬ， １５．０ｍＬ， ２０．０ｍＬ对 照 品 置 于 １００ｍＬ 容 量 瓶 中 ， 用 正 己 烷 稀 释 成 ４５．１２ｍｇ／Ｌ、 ６７．６８ｍｇ／Ｌ、 ９０．２４ｍｇ／Ｌ、 １１２．８ｍｇ／Ｌ、 １６９．２ｍｇ／Ｌ、 ２２５．６ｍｇ／Ｌ至刻度， 摇 匀 。分 别 进 样１０μＬ， 以 对 照 品 浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标进行回归， 得回归 方 程ｙ＝２．３５９８ｘ ＋０．４７４６（ｒ＝０．９９９８）。 大 蒜 素 浓 度 在 ４５．１２￣２２５．６ｍｇ／Ｌ范围内呈良好线性关系。见图２。
己烷稀释至刻度， 摇匀， 同一样品的大蒜油做５次平 行 试 验 ， 分 别 进 样１０μＬ， 按 外 标 法 以 峰 面 积 计 算 大
蒜素含量， 测定结果见表２。
表２ 样品测定结果（％）
编号 含量（ｍｇ／Ｌ） 含量（％） 平均值（％） ＲＳＤ（％）
１
１５８．５８
０．６９４
２
１５８．８１
０．６９５
０．６９１
５）。高效液相色谱法测定蒜油中大蒜素的含量， 测定方法操作简单、结果准确、重复性好。
关键词： 高效液相色谱法； 大蒜素； 大蒜油
中图分类号： ０６５７．７＋２
文献标识码： Ａ
文章编号： １００５－ ９９８９（２００７）０４－ ０１８１－ ０２
Ｄｅ ｔｅ ｒｍｉｎａ ｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌｌｉｃｉｎ ｉｎ ｇａ ｒｌｉｃ ｏｉｌ ｂｙ ＨＰ ＬＣ
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｔｏ ｅｓ ｔａｂｌｉｓ ｈ ａｎ ＨＰ ＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｌｉｃｉｎ ｉｎ ｇａｒｌｉｃ ｏｉｌ． Ｃｈｒｏｍａｔｏ－ ｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｉｎｃｌｕｄｅｄ ＺＯＲＢＡＸ Ｅｃｌｉｐｓ ｅ ＸＤＢ－ Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ ， ｍｅｔｈａｎｏｌ Ｈ２Ｏ－ ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ （７５∶２５∶０．１） ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓ ｅ， ｔｈｅ ＵＶ ｄｅｃｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２２５．８ｎｍ ， ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １．０ｍＬ／ｍｉｎ． Ｒｅｓ ｕｌｔｓ ： Ｔｈｅ ｓ ｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ａｌｌｉｃｉｎ ｓ ｈｏｗｅｄ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔ ｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅ ｏｆ ４５．１２￣２２５．６ｍｇ／Ｌ （ｒ＝０．９９９８）， ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９９．７２％ ｗｉｔｈ ＲＳ Ｄ ｏｆ ０．２７％（ｎ＝５）． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｆｏｕｎｄ ｔｏ ｂｅ ｓ ｉｍｐｌｅ，ｓ ｅｎｓ ｉｔｉｖｅ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ， ｒｅｐｒｏｄｕｃｅａｂｌｅ， ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓ ｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔ ｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｌｉｃｉｎ ｉｎ ｇａｒｌｉｃ ｏｉｌ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： ＨＰ ＬＣ； ａｌｌｉｃｉｎ； ｇａｒｌｉｃ ｏｉｌ
收稿日期： ２００６－ ０９－ ２０ 基金项目： 海南大学科研基金项目（Ｋｙｊｊ０４２７）。 作者简介： 宋光林（１９７６－ ）， 男， 贵州人， 硕士研究生， 研究方向为大蒜油中大蒜素含量的测定。
Ｎｏ． ４． ２００７ １８１
分析检测
ｍｍ， ５μｍ）， 流动相： 甲醇－ 水－ 甲酸（７５∶２５∶０．１）， 流速 １ｍＬ／ｍｉｎ， 检测波长２２５．８ｎｍ。 ２．２ 检测波长的选择
０．５５
３
１５７．９０
０．６９１
４
１５６．７６
０．６８６
５
１５７．２１
０．６８８
３ 讨论
实 验 结 果 表 明 ， 大 蒜 素 浓 度 在 ４５．１２～２２５．６ｍｇ／Ｌ 范 围 内 与 色 谱 峰 面 积 呈 良 好 线 形 关 系 （ｒ ＝０．９９９８）， 平 均 回 收 率 有 ９９．７２％ ， 精 密 度 测 定 结 果 ＲＳＤ 为 ０．２７％， 说明本研究所用方法准确可靠， 可用于对蒜 油中大蒜素的含量测定。本方法采用样品用正己烷 直接稀释进样检测， 测定方法简便， 快捷， 测定结 果准确。本方法为大蒜素制品的含量检测提供一种 新的方法， 为进一步完善蒜油的质量检测标准提供 参考。