抗血小板药物与阻断CD40信号对动脉粥样硬化影响
阮长耿 血小板的研究进展.ppt
苏州大学附属第一医院 江苏省血液研究所 阮长耿
一、血小板黏附、活化在血栓形成中的重要性
• 在生理性止血及动脉血栓形成过程中，血小板粘附到暴露的 血管内皮下基质并发生血小板活化是血栓形成的起始阶段， 进而产生血小板聚集和释放反应，最终导致血小板血栓形成。
• 现状：参与黏附的相关分子的结构、信号传导以及这些分子 缺陷所引起的临床疾病和症状；
实验室检查
血常规、血管内溶血相关检查 vWF多聚体分析 vWF-cp活性测定 vWF-cp抗原测定 vWF-cp自身抗体测定 vWF-cp基因突变检查 ADAMTS-13/FXI Complex ELISA
vWF多聚体分析
vWF-cp活性测定
SDS-PAGE加免疫印迹（Furlan方法） 双向免疫辐射计（Obert方法） 残余胶原结合试验（Gerristsen方法） 残余瑞斯脱霉素辅因子活性试验(Bohm方法） 特异性微小重组底物（GST-VWF73-H）用于vWF-cp活性 检测
ADAMTS13 抗原测定（ELISA）
ADAMTS13 自身抗体测定（ ELISA）
治疗：
诊断明确或高度怀疑本病时应尽早开始治疗。 1，血浆置换及输注新鲜血浆
仍是目前最有效方法，60％－90％病例有效，血 浆置换量每天2－3升（20ml—30ml/Kg），严重者可 增加至40ml—80ml/Kg。病情稳定后继续1－2周。 2，免疫抑制剂
在狒狒的Folts模型中，6B4 Fab片断2 mg·kg－1注射。GPIb封闭率 69%；股动 脉CFR抑制率100%；瑞斯托霉素诱导的 血小板聚集抑制率100%；血小板数、出 血时间无明显变化，PT、APTT正常。
Folts 模型
Reopro对CFRs发生的影响
百令胶囊联合贝那普利对老年肾性高血压患者氧化应激、血管内皮功能和网膜素-1的影响
中西医结合 杂志 ，１９９１；１１（５）：２５７．
５ Ｗｕ Ｍ ．Ｌｉ ＹＧ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４０－ＣＤ４０Ｌ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Nhomakorabeaａｔｒｉｘ
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４ 参考 文献
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（编辑 滕 欣航 ）
他汀类药物的非降脂作用
• 抑制血管平滑肌细胞增生和游走，抑制斑块生长和新 病抗免疫作用
• Mulhaupt等. (Cardiovasc Res. 2003)
• 观察四种他汀对 IFN-gamma 诱导的人血管细胞 CD40 表达的 作用。发现他汀能减少 CD40 的表达及其相关的血管细胞激活， 此作用并非通过 NOS- 或 PPAR-途径。 • 用重组人 CD40L 激活血管细胞，给予他汀处理能显著减少 IL-6, IL-8 和 MCP-1。 • 对人颈动脉粥样硬化病变作免疫染色研究，发现他汀治疗组 CD40 表达少于对照组。 • 提示他汀类药物抗动脉粥样硬化作用的可能机理。 • 可能作为免疫调节剂用于器官移植后。
• Usui H. Nephrol Dial Transplant (2003年) • 糖尿病大鼠模型 • 西力伐他汀给药4周 • 有效地预防肾小球损伤 • 可能通过抗炎作用: 在DN肾病的早 期阶段减轻氧化应激、NF-κB活性， ICAM-1表达，以及巨噬细胞侵润。
改善内皮功能
• 他汀类药物能改变高胆固醇血症时血管内皮的旁分泌功能，使 内皮从主要是促血栓形成和血管痉挛向抗血栓和扩张血管方向 转变。 • 他汀类治疗改善高胆固醇血症患者内皮功能的机理与NO(上调 eNOS)有关。 • NO调节血管内皮抗动脉粥样硬化功能，包括抑制白细胞和血 小板的黏附、调节血管张力，以及血流与血管壁之间抗血栓界 面的产生和维持。
抗栓作用
• 降低血小板反应性（血小板 TXA2 产生减少） • 可能逆转高胆固醇血症时血栓形成-纤溶失衡。在凝血瀑布 的各阶段抑制促凝活性，包括组织因子活性、凝血酶原转 化为凝血酶，以及凝血酶的活性和降低纤维蛋白原水平。 并通过影响tPA 和PAI-1 活性刺激纤溶作用。 • 在人脐静脉内皮细胞、冠脉内皮细胞的体外研究中，阿托 伐他汀和辛伐他汀中被证实能明显增加 thrombomodulin （TM） 的表达和活性。
P2Y12受体抑制剂减轻血栓炎症
P2Y12受体抑制剂减轻动脉血栓炎症哈尔滨医科大学附属第一医院，田野，孙鑫快速及有效地恢复心肌灌注是治疗急性心肌梗死（acute myocardial infarcti on, AMI）的关键。
已证实血栓中炎症细胞（中性粒细胞及单核-巨噬细胞）的浸润抑制AMI患者冠脉介入治疗术后的心肌灌注。
因此，减少血栓中炎症细胞的浸润是促进心肌灌注的潜在治疗策略。
P2Y12受体抑制剂，如氯吡格雷、普拉格雷及替格瑞洛等，已被广泛的应用于AMI患者抗血小板治疗中。
大量研究表明，P2Y12受体在中性粒细胞及单核-巨噬细胞也有表达，且P2Y12受体抑制剂具有抗炎作用。
我们的研究证实，氯吡格雷及替格瑞洛可显著地减少动脉血栓中炎症细胞的浸润，提示P2Y12受体抑制剂可能通过减轻动脉血栓炎症促进心肌灌注。
1. 炎症细胞促进动脉血栓的形成及抑制心肌梗死后的心肌灌注1.1 中性粒细胞及单核-巨噬细胞促进动脉血栓的形成研究表明，中性粒细胞（Neutrophils）在微血管中阻滞，可通过释放溶酶体酶、碱性磷酸酶、组胺、白三烯类物质、花生四烯酸、自由基及脂氧酶代谢物等损伤内皮细胞或其他组织，导致血小板聚集。
同时，中性粒细胞被激活后，形成伪足，胞质变得僵硬，使得其可塑性和可变性降低，通过血管的时间延长，影响血流。
另外，中性粒细胞产生和释放大量的炎症因子激活血管内皮系统，改变粘附和抗凝物质的生物特性，促进细胞外胶原连接成分降解，导致组织因子等致凝物质的激活，触发凝血系统，最终促进血栓形成。
单核-巨噬细胞（monocyte-macrophages）可促进动脉血栓形成。
研究证实，动脉粥样斑块局部炎症反应引起斑块中单核-巨噬细胞大量表达组织因子，而破裂的斑块可将活化的组织因子直接释放入血管腔，诱发血栓形成。
同时，越来越多的研究提示循环中单核-巨噬细胞组织因子的表达增加，导致急性血栓性事件中高凝状态的发生。
单核-巨噬细胞组织因子的表达增加还能促进血小板活化和P -选择素的结合，最终引起纤维蛋白的形成和沉积。
冠心病诊治新进展董建新资料
CABG 109
PCI 219
2019/6/28
药物组 风险比 P值 101 0.94 0.68 109 1.17 0.28
66
1.28 0.12
106 1.03 0.82 243 1.23 0.34
稳定型冠心病PCI与保守治疗比较
• 对于无近期心肌梗死的慢性稳定性冠心 病患者，与药物保守治疗相比，PCI并不 能在死亡、心肌梗死或需要随后的血运 重建治疗方面提供任何益处。
易损斑块的特点
管腔
纤维帽
纤维帽薄
脂
外膜 脂核大
核
大量的炎症细胞
不稳定病变
管腔
脂 核
管腔狭窄不严重
斑块呈隐藏状态“隐藏” ， 不但血管影像无法发现， 且在触发血栓形成之前无 症状，不造成缺血
稳定病变
2019/6/28
冠心病的分型
• 昨天
– 冠心病的分型是以后果来 定义的，如Q波心肌梗死 ，非Q波心肌梗死，
感染 2%
消化系统 4%
其他 17% 心血管
疾病
36%
呼吸系统 15%
肿瘤 19%
2019/6/28
冠心病的流行程度和分布特征
（一）冠心病的死亡率： 2005年城市居民：46.3/10万
农村居民：22.2/10万 与年龄的关系：65-69岁(城市)142.9 /10万
(农村)81.0 /10万 是45-49岁的9倍 而且男性均高于女性
布） 6、城市无体育锻炼的78.4%
2019/6/28
冠心病的预防
• 1、原始预防：目标人群：青少年，目的 是有效地防止或减少高血压、血脂异常 、糖尿病、肥胖等心血管疾病危险因素 的发生。方法：健康教育，健康的生活 方式（合理膳食、适量运动、不吸烟、 限酒、心理平衡）、健康消费品健康的 环境等。
植物化合物对血小板功能的影响
植物化合物对血小板功能的影响王鑫淼;许杨;王崧;王军平【摘要】Phytochemicals which could inhibit and promote the functions of platelet and its mechanism are classified and summarized to provide the reference for further development and utilization.%对血小板功能有抑制或促进作用的植物化合物及其机制进行分类总结,为进一步针对性的开发和利用提供参考.【期刊名称】《西部中医药》【年(卷),期】2018(031)001【总页数】6页(P126-131)【关键词】血小板;血栓;多酚;黄酮类;植物化合物【作者】王鑫淼;许杨;王崧;王军平【作者单位】第三军医大学军事预防医学院,重庆 400038;第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R973血小板由骨髓巨核细胞产生，人体每天约产生1×1011个血小板［1-2］。
血小板的主要功能是凝血和止血，此外，还参与机体的其他生理功能，如：炎症反应、血管生成、非特异性免疫、肿瘤转移等［3-6］。
正常的血小板的数量和功能对维持机体健康有重要影响。
血小板数量增多，功能活跃，会导致血液黏稠度增加，严重者甚至出现血栓，导致心脑血管疾病的发生。
而血小板数量减少和功能减退，则会导致各种出血性疾病的发生。
目前，关于血小板减少症的治疗药物不多，并且价格昂贵，还有明显的毒副作用。
因此，寻找安全、有效、低廉的促血小板生成的药物迫在眉睫。
已有研究报道［7］，多酚等植物化合物具有抑制血小板聚集而发挥着预防和治疗心脑血管疾病的作用，同时，也有一部分化合物有促进血小板生成和增强血小板功能的作用。
冠心病的诊治
病例4
患者，男，65岁，劳累后上腹部、心前区闷 痛1天，在外院诊断为冠心病，心绞痛。 经休息、吸氧，静滴硝酸甘油24小时后病情 无好转，疼痛阵发性加重，时有恶心呕吐。 查体：腹肌紧张，右上腹压痛，莫非氏征 （＋），ECG示Ⅱ、Ⅲ、avF ST段水平下移 0.75～1.0mv。腹部B超示胆囊增大，囊壁增厚， 无结石影像。UCG未发现器质性病变。 诊断：急性胆囊炎，胆心综合征
误区二：
对“类似” 心绞痛的病变鉴别不慎， 造成误诊
病例 3
患者、男性、53岁、阵发上腹部疼痛伴烧 灼感一周，加重一天就诊于消化科门诊， 在问诊过程中突发晕倒、大汗、面色苍白。 急诊心电图Ⅱ、Ⅲ、aVF ST 段抬高， CAG：RCA完全闭塞，植入支架后上述症 状完全消失。 诊断：冠心病，急性下壁心梗
胸痛时ECG出现心律失常（如房颤、室速）提示冠心病
的可能，但缺乏特异性
二、胸部X线检查
冠心病患者胸部X线检查常常是正常的
胸痛患者如果胸部X线检查发现冠状动脉钙化则提示
冠心病的可能性较大
三、超声心动图
常规超声心电图对帮助确诊冠心病作用不大，但能提供
某些鉴别诊断信息（瓣膜病变、心肌病变）
冠心病常见的诊断误区
误区一：
对不型胸痛的临床表现 认识不足，造成漏诊
病例 1
患者，男，53岁，因间断头晕及左上 肢发麻一月去当地医院就诊，体检无阳性 体征，拟诊为“颈椎病”，给予理疗及颈 椎牵引一周，症状未见改善。入院体检正 常，颈椎CT无异常。ECG提示：STV1~V5 水平型压低0.05mv， 冠脉造影证实前降支狭窄80％，植入支 架后完全缓解。 诊断为冠心病，心绞痛。
1、反映心肌坏死的标志物： 肌红蛋白的心肌特异性不高，但灵敏度高、阴性结 果对于ACS诊断有重要的价值（1-2h）； 肌钙蛋白是目前诊断心肌损伤和坏死特异性最强、 敏感性较高的生化标志物。cTnI优于cTnT 。（2-4h）
急性冠脉综合征炎症标记物及抗炎治疗研究进展
急性冠脉综合征炎症标记物及抗炎治疗研究进展（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【关键词】急性冠脉综合征全球每年约1900万人死于心脏疾病，其中急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）为最主要的临床类型，其包括不稳定心绞痛、非ST段抬高心肌梗死。
动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）不稳定斑块的破裂导致冠状动脉内血栓形成被认为是大多数ACS发病的主要原因。
目前对于ACS的诊断和危险分层主要依据患者的临床症状和心电图上的心肌缺血的变化。
但是临床上近1/3的患者没有特异性的临床症状（如胸痛等），特别是以老年人和糖尿病人居多，而心电图的诊断敏感性只有40%～50%。
炎症在动脉粥样硬化及其并发症的一系列变化中起了一个中心的角色，有介于此，一些炎性介质的血浆浓度被用作为预测未来心血管事件出现的标记物，而且其预测价值是独立于传统的标记物诸如血脂浓度、心肌钙蛋白之外的。
1 ACS发病主要病理机制不稳定斑块的破裂或糜烂溃疡以及富含血小板的血栓形成是两个最重要的步骤。
而ACS的临床表现则依赖于冠状动脉的闭塞程度、持续时间以及侧支循环的形成情况。
根据ACS的病理发生特点可将其分为三个阶段，第1阶段是不稳定斑块的形成和斑块破裂。
第2阶段是由于斑块破裂引起的一系列病理生理变化，最终形成冠状动脉血栓。
第3阶段是冠状血栓形成，冠状动脉血流受限可能引起心肌缺血，导致心肌损伤和坏死。
在这连续进展的3个阶段中第1阶段是始动阶段，炎症在不稳定斑块的形成和破裂的过程中起了决定性的作用，炎性细胞侵于血管内膜下，分泌炎性介质，削弱了斑块的稳固性，促使其破裂。
此外血流速率和涡流及血管结构也可能是斑块破裂的重要原因。
对于那些高危的ACS患者，在其未发生心肌坏死前就将其识别出来并及时进行稳定斑块和抗血小板、抗血栓治疗阻止病变进展意义重大。
2 炎症标记物2.1 C-反应蛋白（CRP）和血清淀粉样蛋白-A（SAA）近年来，CRP作为肝脏产生的急性期反应蛋白越来越受到重视。
阿司匹林关于肾脏的作用利弊
阿司匹林关于肾脏的作用利弊【关键词】阿司匹林肾脏阿司匹林在临床应用已有百余年。
最近几年来，多项大型临床实验均证明阿司匹林在预防血栓性疾病(脑梗死，心绞痛，心肌梗死等)，减少心脑血管事件发病率和死亡率发挥了极为重要的作用。
不管是美国、欧洲，仍是中国的高血压病指南中均指出:无禁忌证的高血压病患者应终身服用阿司匹林。
高血压病和心脑血管事件在肾脏病患者中相当普遍，但是，阿司匹林同时也是一种非甾体类抗炎药，对肾脏有潜在的毒性作用，究竟如何衡量利弊，仍是值得商议的问题。
1 阿司匹林的作用机制20世纪60年代末期，Vane等第一通过实验证明传统的非甾体抗炎药（NSAIDs），是通过抑制环氧化酶(COX)的活性，阻断花生四烯酸(AA)代谢成前腺素(PGs)而发挥抗炎作用。
AA经COX生化途径代谢产物为前列腺素(PGs)、前列环素(PGI2)和血栓素(TXA2，TXB2)，其中前列腺素的终产物PGE二、PGF二、PGD2及PGI2与炎症的发生和进展有着紧密关系，要紧作用于微循环，改变血管通透性，并通过其它介质引发痛觉致敏。
抑制TXA2的形成，是阿司匹林抗血栓形成的重要机制。
阿司匹林在人体血循环中的半衰期短(15～20min)，可是却能在较短的半衰期内将血小板中的COX-1永久性灭活，由于血小板没有细胞核，酶不能再生，因此，天天一次小剂量的阿司匹林（75～300mg）足以维持对血小板TXA2产物的完全抑制。
血循环中的血小板每日更新10%，天天1次服药只需抑制此前生成的有功能的血小板，就能够维持90%以上血小板不发挥作用，相反，抑制COX－2途径的病理进程(痛觉过敏和炎症)需要较大剂量和较短的给药距离，因为COX－2对阿司匹林的灵敏性较低且有核细胞可迅速从头合成该酶，因此当阿司匹林用来抗炎而不是抗血小板时其剂量相差可达100倍。
目前以为，小剂量阿司匹林（75mg/d～300mg/d）要紧用于抗血小板作用，中等剂量阿司匹林（500mg/d～3g/d）具有解热镇痛效应，而大剂量阿司匹林（超过4g/d）具有消炎及抗风湿作用。
缺血性卒中诊断评估与治疗策略
Vascular death
1 myocardial infarction 1 intracranial hemorrhage 1 major hemorrhage (not intracranial) 1 fatal CHF 1 aortic aneurysm rupture 1 sudden death
TEE与多层螺旋CT（MSCT）
• 从急性缺血性卒中前瞻性研究的150例患者中选择30例病因不明的患 者
• TEE共检测出8位患者 (29.6%) 存在主动脉弓斑块，而多层螺旋CT共 检测出12位患者 (40%)存在主动脉弓斑块
• 在检测主动脉弓斑块的大小和性质方面，多层螺旋CT比TEE更敏感
TEE：多层螺旋CT（MSCT）：HR-MR？
2014-9-8
卒中病因
TOAST LAA
狭窄率≥50％
CS
PAD
梗死灶＜1.5CM
OE
UE
关注：临床特点、影像学、辅助检查 1993：经典TOAST 2001：英国南伦敦改良- TOAST 2005：美国SSS- TOAST 2007：韩国改良- TOAST
CCS心源性栓塞危险因素的定义
左心房/左心耳附壁血栓 持久性心房颤动 陈发性房颤 病态窦房结综合征 房扑 近期心肌梗死（一个月内） 风湿性二尖瓣或主动脉瓣病变 心脏机械瓣和生物瓣膜置换 射血分数<28%的慢性心肌梗塞 射血分数<30%的症状性充血性心衰 扩张型心肌病 非细菌性血栓性心内膜炎 感染性心内膜炎 左房粘液瘤 心脏瓣膜赘生物 二尖瓣环钙化 房间隔动脉瘤 卵圆孔未闭 卵圆孔未闭合并房间隔动脉瘤 左室非血栓性动脉瘤 无二尖瓣狭窄或房颤的孤立性左房湍流 主动脉弓粥样硬化易损斑块证据
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抗血小板药物与阻断CD40信号对动脉粥样硬化影响张峻，陈纪林，顾晴，关婷，陈曦中国医学科学院 中国协和医科大学 阜外心血管病医院 冠心病诊疗中心，北京（100037）E-mail：zhangjun-cv@摘要目的 探讨抗血小板药物、抗CD40L抗体及合用对动脉粥样硬化的影响。
方法 雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型对照组、抗血小板药物组（阿司匹林+氯吡格雷）、抗CD40L抗体组、合用组（阿司匹林+氯吡格雷+抗CD40L抗体）。
测血脂、sVCAM-1和sICAM-1浓度。
观察主动脉组织病理形态学改变，测定斑块巨噬细胞、平滑肌细胞百分率。
Western 杂交分析测定MMP-9的蛋白表达。
结果 抗血小板药物及抗CD40L抗体治疗可明显降低sVCAM-1和sICAM-1浓度（P<0.01），减轻动脉粥样硬化，减少斑块巨噬细胞，增加平滑肌细胞（P<0.05），对血脂无影响（P>0.05），合用则作用增强（P<0.05）。
抗CD40L抗体可降低MMP-9的表达（P<0.01），抗血小板治疗无此作用。
结论 抗血小板治疗及阻断CD40信号可抑制炎症反应，减轻动脉粥样硬化，稳定斑块，对血脂无影响，联合治疗有协同作用。
关键词 动脉粥样硬化 CD40-CD40L 阿司匹林 氯吡格雷 载脂蛋白E基因敲除小鼠中图分类号 R5411.引言动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种多因素、多环节的慢性炎症性疾病 [1]。
抗血小板药物是防治AS最基本的治疗，新近的研究表明其还可抑制斑块进展[2-4]。
而CD40-CD40L系统作为重要的炎症信号通路，可能是AS进展的关键环节[5]。
本研究以载脂蛋白E基因敲除小鼠为AS动物模型，对比观察抗血小板治疗和阻断CD40信号以及两者联合治疗对AS病变的影响，为临床防治AS提供一个可能的新的思路。
2.材料与方法材料：阿司匹林，无锡阿斯特拉制药有限公司；氯吡格雷，塞诺菲圣德拉堡民生制药有限公司；小鼠抗CD40L抗体，美国SouthernBiotech公司。
研究对象分组：8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠37只，由北京维通利华实验技术有限公司提供。
予以西方饮食（常规小鼠饲料+20%脂肪+0.15%胆固醇）喂养，建立实验性动脉粥样硬化模型，随机分为4组：○1模型对照组（n=10）；○2抗血小板药物组（n=10，阿司匹林58mg/kg·d-1+氯吡格雷14mg/kg·d-1 灌胃）；○3抗CD40L抗体组（n=8，250ug/0.5mL 腹腔注射，2次/周）；○4合用组（n=9，阿司匹林58mg/kg·d-1和氯吡格雷14mg/kg·d-1 灌胃+抗CD40L抗体250ug/0.5mL腹腔注射，2次/周）。
高脂饮食喂养和治疗共16周。
取与载脂蛋白E基因敲除小鼠有相同遗传背景的健康雄性近交系C57BL/6小鼠6只作为正常对照。
生化指标测定：小鼠麻醉后摘除眼球取血，用7060型全自动生化分析仪（日本HITACHI 公司生产）测定血清总胆固醇、甘油三酯；采用酶联免疫吸附法测血清可溶性血管细胞粘附分子-1（soluble vascular cell adhesion molecule-1，sVCAM-1）、可溶性细胞间粘附分1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20030023031）资助子-1（soluble intercellular adhesion molecule-1，sICAM-1）水平（试剂盒购自美国LIFEKEY公司）。
病理形态学观察：各组动物麻醉后，剪开胸腔，游离主动脉，剥离外膜脂肪组织。
大体标本纵行剖开，置于10%福尔马林液中固定，行油红O染色后摄像，采用天地病理和细胞图像分析系统TD200测量斑块面积和内膜面积，计算斑块/内膜面积比。
取主动脉分为胸主动脉和腹主动脉2部分，胸主动脉均分为3段，每段分别切取4μm厚的标本制成病理切片，行苏木素-伊红、弹力纤维染色，将动脉等距分成5点（包括内膜最厚处），采用图像分析系统测量血管横断面的管壁厚度、斑块截面积，最后将3段标本切片的各相应指标加以平均。
免疫组织化学分析：取4μm厚的胸主动脉组织横截面切片做巨噬细胞、平滑肌肌动蛋白的免疫组织化学染色，采用图像分析系统计算阳性百分率。
Western杂交分析：将液氮保存的腹主动脉组织进行Western杂交分析，方法参照文献[6] 。
一抗基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司；辣根过氧化物酶标记的抗山羊IgG（0.8g/L）抗体（购自北京中山生物技术有限公司）1：1000稀释。
统计学分析：各计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用方差分析， P<0.05为差异有显著性。
统计学分析均用SPSS11.5软件。
3.结果血脂水平变化：正常对照组实验前后血脂水平无变化（P>0.05）。
模型对照组和各治疗组高脂饮食喂养16周后，甘油三酯水平无明显改变（P>0.05），总胆固醇水平则较实验开始时显著升高（P<0.01）。
模型对照组和各治疗组之间血脂水平变化无显著性差异（P>0.05）（见表1）。
表1. 各组小鼠的血脂水平比较正常对照组模型对照组抗血小板药物组抗CD40L抗体组合用组甘油三酯（mmol/L）实验前 1.19±0.46 3.41±0.90a 2.98±0.85 a 2.85±0.55 a 3.02±0.73 a实验后 1.42±0.53 2.85±0.55 a 3.19±1.04 a 3.10±0.89 a 2.89±0.83 a胆固醇（mmol/L）实验前 2.79±0.26 16.06±6.56b 16.59±4.23 b 17.04±6.41 b 17.34±7.07 b 实验后 3.26±1.01 26.77±8.47 b,c31.63±8.90 b,c 28.64±6.77 b,c 30.39±8.12 b,c a： P<0.05，b：P<0.01，与正常对照组比较；c：P<0.05，实验后与实验前比较。
血清sVCAM-1和sICAM-1浓度变化：各治疗组sVCAM-1和sICAM-1浓度显著低于模型对照组（P<0.01）；各治疗组之间，抗血小板药物组和抗CD40L抗体组之间没有显著差异（P>0.05），合用组的水平明显低于抗血小板药物组和抗体组（P<0.05）（见表2）。
病理形态学变化主动脉纵剖面大体标本：正常对照组主动脉内膜光滑平整，管壁呈半透明状。
模型对照组管壁病变最明显，斑块面积、斑块/内膜面积比明显大于各治疗组（P<0.05），其中，抗血小板药物组和抗CD40L抗体组之间没有显著差异（P>0.05），合用组的水平明显低于抗血小板药物组和抗体组（P<0.05）（见表2）。
主动脉横截面组织切片：正常对照组动脉内膜无脂纹和斑块形成，弹力板完整。
模型组有明显斑块形成，含大量泡沫细胞，富含脂质，可见胆固醇结晶，管壁厚度、斑块截面积显著大于各治疗组（P<0.05），弹力板变性、断裂。
抗血小板药物组与抗CD40L抗体组病变减轻各指标在抗血小板药物组与抗体组间无显著差异（P>0.05）。
合用组病变最轻，斑块较小，泡沫细胞和脂质减少，管壁厚度、斑块截面积明显小于抗血小板药物组和抗CD40L抗体组（P<0.05），弹力板基本完整（见表2，图1）。
图1. 小鼠主动脉组织切片（×200）A为模型组，B抗血小板药物组，C为抗CD40L抗体组，D为合用组。
免疫组织化学分析结果：与模型组相比，抗血小板药物组、抗CD40L抗体组及合用组斑块中的巨噬细胞阳性百分率分别降低了49.65%、52.21%、90.72%，而平滑肌细胞含量则分别增加118.80%、114.23%、227.54%（P<0.05），其中合用组水平显著低于抗血小板药物组与抗CD40L抗体组（P<0.05），而抗血小板药物组与抗体组间没有显著差异（P>0.05），（见表2，图2）。
表2. 各组小鼠可溶性血管细胞粘附分子-1、可溶性细胞间粘附分子-1和病理学指标结果比较模型对照组抗血小板药物组抗CD40L抗体组合用组sVCAM-1（ng/mL） 780.61±128.47 432.37±83.47 a 406.15±86.98 a 305.76±89.81a,b sICAM-1（ng/mL） 743.72±109.42 515.54±79.85 a 491.60±128.79a 393.32±83.85a,b斑块大体面积（mm2） 9.41±3.95 3.40±0.97a 3.17±1.58a 1.07±0.45 a,b斑块/内膜面积比 43.77±15.63% 16.99±4.32% a 16.38±6.84%a 5.71±2.86%a,b管壁厚度（μm） 110.61±21.40 57.28±12.66 a 52.65±10.75a 34.85±7.15 a,b斑块截面积（μm2） 35698.89±5042.9118091.56±4642.05a18289.70±7673.13a8464.19±3890.55a,b 平滑肌细胞阳性率 7.66±4.04% 18.45±4.45%a 18.41±4.26%a 25.09±3.52%a,b巨噬细胞阳性率 43.23±14.29% 16.42±6.98% a 15.88±4.65%a 4.01±2.53% a,b a： P<0.01，与模型对照组比较；b：P<0.05，与抗血小板药物组和抗CD40L抗体组比较。
平滑肌细胞巨噬细胞图2. 小鼠主动脉粥样硬化病变的免疫组织化学分析（×400）A为模型组，B抗血小板药物组，C为抗CD40L 抗体组，D为合用组。
基质金属蛋白酶-9蛋白的表达：模型对照组、抗血小板药物组、抗CD40配体抗体组、合用组MMP-9蛋白的表达分别是正常对照组的430.38%、404.96%、221.80%、262.33%，与模型组相比，抗血小板药物组没有显著差异；抗CD40L抗体组和合用组则明显下降（P<0.01），两组间无显著差异（P>0.05）（见图3）。