酶联免疫检测实验的原理和技术要点
酶联免疫吸附试验方法类型及反应原理
酶联免疫吸附试验方法类型及反应原理酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的生物化学分析方法，用于检测并定量测定生物样品中的抗体或抗原。
ELISA方法包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接竞争ELISA等。
下面将对这些方法的类型和反应原理进行详细介绍。
1.直接ELISA直接ELISA是最简单的ELISA方法之一、在这种方法中，微孔板表面上涂覆有抗原，然后加入待检测样品，如血清等。
待检测样品中的抗体与涂覆的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
然后加入特异性抗体，这些抗体已标记有酶，比如辣根过氧化物酶（horse radish peroxidase，HRP），然后加入适当的底物。
酶与底物反应产生比色或荧光信号，信号的强度与待测样品中抗原或抗体的浓度成正比。
2.间接ELISA间接ELISA是常用的ELISA方法之一，比直接ELISA灵敏度更高。
在这种方法中，微孔板表面上涂覆有抗原，然后加入待检测样品，如血清等。
待检测样品中的抗体与涂覆的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
然后加入与待测抗体特异性的二抗，这些二抗已标记有酶，如HRP，再加入适当的底物。
酶与底物反应产生比色或荧光信号，信号的强度与待测样品中抗原或抗体的浓度成正比。
3.竞争ELISA竞争ELISA是一种用于测定样品中抗原或抗体浓度的ELISA方法。
在这种方法中，微孔板表面上涂覆有特异性抗体，然后加入待检测样品和已标记的抗原或抗体。
待检测样品中的抗原或抗体与涂覆的抗体竞争结合，形成复合物。
然后加入特异性的抗原或抗体，这些抗原或抗体已标记有酶，比如HRP，继续竞争与涂覆抗体结合。
酶与底物反应产生比色或荧光信号，信号的强度与待测样品中抗原或抗体的浓度成反比。
4.间接竞争ELISA间接竞争ELISA是一种用于测定样品中抗原或抗体浓度的高灵敏度ELISA方法。
在这种方法中，微孔板表面上涂覆有抗原。
酶联免疫吸附法原理
酶联免疫吸附法原理酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的生物化学分析方法，它基于抗体与抗原相互作用的原理，可以用于检测特定蛋白质的存在和浓度。
酶联免疫吸附法具有高灵敏度、高特异性和易操作等优点，因此在医学诊断、生物学研究和生物制药等领域得到了广泛的应用。
首先，酶联免疫吸附法的原理是基于抗体与抗原的特异性结合。
在实验中，首先将待检测的抗原溶液加入到微孔板中，使其吸附在孔板表面。
然后，加入特异性的一抗抗体，与待检测的抗原发生特异性结合。
接着，加入酶标记的二抗抗体，它会与一抗抗体结合形成复合物。
最后，加入底物，酶与底物发生反应产生可测的信号，通过测定信号的强度来确定待检测抗原的存在和浓度。
其次，酶联免疫吸附法的原理还包括两种常用的方法，间接法和夹心法。
间接法是指在待检测抗原与一抗抗体结合后，再加入酶标记的二抗抗体，通过二抗抗体与一抗抗体的结合来增强检测信号。
夹心法是指在待检测抗原与一抗抗体结合后，再加入抗原特异性的酶标记抗体，形成抗原-抗体-酶标记抗体的夹心复合物，从而增强检测信号。
此外，酶联免疫吸附法还可以根据检测信号的产生方式分为颜色反应法和发光反应法。
颜色反应法是指在酶与底物发生反应后产生可见的颜色变化，通过比色计或酶标仪来测定信号强度。
发光反应法是指在酶与底物发生化学反应产生发光信号，通过发光计来测定信号强度。
发光反应法具有高灵敏度和低背景信号的优点，因此在一些对灵敏度要求较高的实验中得到了广泛的应用。
总的来说，酶联免疫吸附法原理简单、灵敏度高、特异性强，操作简便，可以同时检测多个样品，因此在科研和临床诊断中得到了广泛的应用。
随着生物技术的不断发展，酶联免疫吸附法在蛋白质检测、疾病诊断和药物研发等领域将会发挥越来越重要的作用。
酶联免疫捕获法
酶联免疫捕获法是一种用于检测环境中病毒或细菌的方法，其基本原理是利用酶标记技术，将目标物质与特异性抗体结合，并通过酶催化底物显色反应，对显色的深浅进行测定和分析。
这种方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、分析时间短等优点。
具体操作过程如下：首先，将酶标记物和特异性抗体结合，形成复合物。
然后，加入捕获抗体，将复合物捕获，形成免疫复合物。
接下来，加入洗涤液清洗免疫复合物，去除未结合的物质。
最后，加入底物显色剂，在特定的波长下测定光密度值，即可判断出目标物质的存在与否。
这种方法可以用于检测多种病毒和细菌，如流感病毒、新型冠状病毒等。
通过改变酶标记物和特异性抗体的组合，还可以检测不同种类的物质。
此外，酶联免疫捕获法的灵敏度较高，能够检测到低浓度的目标物质。
同时，这种方法具有较高的特异性，能够避免干扰物质的干扰。
在应用过程中，酶联免疫捕获法也存在一定的局限性。
首先，这种方法不能用于现场检测，需要一定的时间和实验室条件。
其次，酶标记物的稳定性会影响检测结果，需要妥善保存和管理。
最后，这种方法需要一定的专业知识和技能，才能正确使用和解读结果。
总之，酶联免疫捕获法是一种具有广泛应用前景的方法，适用于多种病毒和细菌的检测。
虽然存在一定的局限性，但其特异性强、灵敏度高、操作简便、分析时间短的优点使其在疾病预防控制和公共卫生领域中具有重要作用。
在未来的发展中，随着技术的不断进步和应用领域的扩展，酶联免疫捕获法有望在更多领域得到应用。
酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）的
酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验enzyme linked immunosorbent assayELISA的基本原理的基本原理的基本原理的基本原理方法类型及反应原理方法类型及反应原理方法类型及反应原理方法类型及反应原理、、、、试剂制备试剂制备试剂制备试剂制备和和和和临床意义临床意义临床意义临床意义酶免疫技术是三大经典标记免疫技术之一是以酶标记抗体或抗原为主要试剂的一种标记免疫分析技术。
随着相关新技术的不断问世如杂交瘤单克隆抗体技术使各种对抗原决定簇高度特异的单克隆抗体可以在体外批量生产、生物素亲和素放大系统的应用以及与化学发光和电化学发光技术的偶联等明显地提高民分析和测定方法的特异性、灵敏度及其自动化程度使酶免疫技术不断更新应用范围不断拓宽。
当前酶免疫技术已与形式各异、各具特点和用途的定位、定量和超微量测定的标记免疫分析技术融合发展在医学和生物学中的应用日益广泛是取代放射免疫技术的主要方法之一。
酶免疫技术的特点酶免疫技术的特点酶免疫技术的特点酶免疫技术的特点酶免疫技术是以酶标记抗原或酶标记抗体为主要试剂通过复合物中的酶催化底物呈色而对被测物进行定性或定量的标记免疫技术。
基本原理基本原理基本原理基本原理是将酶与试剂抗原或抗体用交联剂结合起来此种酶标记抗原或抗体与标本中相应抗体或抗原发生特异反应并牢固结合在加入相应的酶的底物时底物被酶催化生成呈色产物在免疫组化染色时可指示待测反应物的存在和定位在酶免疫测定中则可根据呈色物的有无和呈色深浅作定性或定量观察。
由于此技术是建立在抗原抗体反应和酶的高效催化作用的基础上故而该技术具有检测灵敏度高、特异性强、准确性好等特点而且可与其他技术偶联而衍生出适用范围更广的新方法。
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面并保持其免疫活性。
②使抗原或抗体与某重酶连接成酶标抗原或抗体且既保留其免疫活性又保留酶的活性。
③标本中的抗原或抗体、标记抗原或抗体能按一定的次序与固相载体表面的抗体或抗原反应并通过底物与酶的反应来反映标本中的抗原或抗体的量。
酶联免疫吸附试验的原理、操作方法及注意事项
影响实验结果 。 因此 ， Ｅ ＩＡ试验实际操作 中除了 在 ＬＳ 选 择优 良仪器设 备和试 剂外 ，正确 的操 作是保 证
ＥＩ ＬＳ Ａ检测结果准确可靠的必要条件。 必须熟知试验
每 次 加样 必 须 更 换 吸头 ，做 到 １ 样 品 １个 吸 个
振动 ３ 秒 ， Ｏ 使底物与终止液充分混合再读数 。
４７酶标仪读数 环节 ．
使 用 前 应 先 预热 仪 器 １～ ０分 钟 ，并 调 整 到 试 ５３
验要求 的波长 ， 使测定结果更稳定。 最 好 先 擦拭 微 孔 板底 部并 压 平 板条 ，避 免 反 应 板底划痕 、 不平 、 印或 液面高度差异造成 干扰 ， 指 致 使读数结果不准确 。因此要保持酶标板干净， 不能用 手触 摸板 底 留下指 印 。
４５ 洗 涤 反 应 板 环 节 ．
ＥＩ ＬＳ Ａ试验是靠洗 涤来达到分离游离 和结合 的 酶标记物。 酶联免疫 吸附板每次洗涤要充分。 通过洗 涤 以消除残 留在板孔 中没能与固体抗原或抗体结合 的物质 ，以及在反应过程 中非特异吸附于固相载体 上的干扰物质 。如果洗涤不充分 ， 应该除去的杂质没 有洗 掉 ， 这样 就会 影 响试验 结果 。 洗板时需保证微孔板平放 ， 将洗涤液注满各孔 ， 尽量避免漏液 、 溢液现象。
Ｅ ＩＡ反应终 止 后需 要在 １ ＬＳ Ｏ分钟 内读 数 ，否则
头 ，以免发生交叉 污染。每次加样应加在板孔的底
部 ， 免加在孔壁上部 ， 注意不可溅 出 ， 可产生 避 并 不 气泡 ， 以免加 样 不 准确 ， 响 试验结 果 。 影
酶联免疫吸附实验技术的使用教程
酶联免疫吸附实验技术的使用教程酶联免疫吸附实验技术（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的生物学实验技术，用于检测特定蛋白质或其他生物分子在样本中的存在和浓度。
它具有高灵敏度、特异性强、操作简单、快速等优点，被广泛应用于医学诊断、生物学研究和药物研发等领域。
本文将为您介绍酶联免疫吸附实验技术的基本原理、步骤和注意事项，以帮助您正确使用该技术。
一、基本原理酶联免疫吸附实验技术基于免疫学原理，利用抗原与抗体之间的特异性结合反应进行测定。
关键步骤包括抗原吸附、抗体结合、酶标记物检测和信号生成。
1. 抗原吸附将待测物质（通常为蛋白质）吸附到固相载体上，常用的载体有微孔板、磁珠等。
将待测样本加入载体，通过吸附作用使样本中的抗原固定在载体表面。
2. 抗体结合在抗原吸附之后，加入与待测物质特异性结合的抗体，与待测物质形成免疫复合物。
该抗体通常被称为一抗，它可以与待测物质的特定表位结合。
3. 酶标记物检测加入与一抗结合的二抗，二抗的产生可以使用不同的方式，最常见的方式是将二抗与酶（如辣根过氧化物酶HRP）结合。
该二抗被称为酶标记物。
酶标记物可以与一抗结合的免疫复合物发生结合，形成一抗-酶标记物-二抗的三联复合物。
4. 信号生成加入底物（通常为染色底物），酶标记物与底物发生反应，产生可见的颜色变化或荧光。
底物被酶催化后，形成染色产物，其量与待测物质的浓度成正比。
通过颜色变化或荧光强度的定量测定，可获得待测物质的浓度。
二、实验步骤酶联免疫吸附实验技术的基本步骤包括涂布、包被、结合、洗涤、检测和分析。
1. 涂布将待测样本加入微孔板的孔中，使待测物质与孔壁的固相载体进行特异性吸附。
一般需在恒温条件下孵育孔板，以确保充分的吸附。
2. 包被在涂布后，加入与待测物质特异性结合的一抗，使其与待测物质形成免疫复合物。
一抗待定时间后，将其洗去，以去除未与待测物质结合的抗体。
3. 结合加入酶标记的二抗，使其与一抗结合，并形成一抗-酶标记物-二抗的三联复合物。
酶联免疫吸附试验原理
酶联免疫吸附试验原理酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测样品中特定蛋白质或其他分子的存在。
它的原理是利用酶标记的抗体与特定抗原结合，通过酶底物的反应产生可检测的信号，从而实现对目标分子的定量或定性分析。
首先，ELISA试验通常包括固相吸附、抗原或抗体结合、酶标记抗体结合和底物反应等步骤。
在固相吸附步骤中，将抗原或抗体固定在微孔板上，形成固相。
接着，样品中的抗原与固相上的抗体结合，形成复合物。
然后，加入酶标记的抗体，与复合物中的抗原结合。
最后，加入底物，酶催化底物反应产生可测量的信号。
其次，ELISA试验可分为间接法、夹心法、竞争法和直接法等不同类型。
在间接法中，样品中的抗原与固相上的抗体结合，然后酶标记的抗体与抗原结合，形成“抗原-抗体-酶标记抗体”复合物。
在夹心法中，样品中的抗原与固相上的抗体结合，然后加入酶标记的抗原，形成“抗体-抗原-酶标记抗原”复合物。
在竞争法中，固相上的抗原与样品中的抗原竞争结合酶标记的抗体。
在直接法中，固相上的抗原与酶标记的抗体直接结合。
最后，ELISA试验具有灵敏度高、特异性强、操作简便、成本低等优点，因此被广泛应用于医学诊断、生物学研究和药物开发等领域。
在临床诊断中，ELISA可用于检测各种感染病原体、肿瘤标志物、激素、免疫球蛋白等，具有重要的临床意义。
在生物学研究中，ELISA可用于检测细胞因子、蛋白质相互作用、酶活性等，为科研提供重要数据。
在药物开发中，ELISA可用于药物代谢产物的检测、药物的药效学评价等，对药物研发具有重要意义。
总之，酶联免疫吸附试验原理简单清晰，操作方便，应用广泛，是一种重要的实验方法，对医学、生物学和药物开发等领域具有重要意义。
通过不断的技术改进和方法优化，ELISA将在未来发挥更加重要的作用，为人类健康和科学研究做出更大的贡献。
简述酶联免疫吸附试验的原理及基本步骤
简述酶联免疫吸附试验的原理及基本步骤酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析样本中的特定抗原或抗体。
ELISA的原理是利用抗原与抗体的特异性结合来检测和测量样本中的目标物质。
ELISA通常分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接竞争ELISA等几种类型，但它们的基本原理相似。
一般来说，ELISA的基本步骤包括以下几个方面：1. 涂层：将特异性抗体固定在试验板的表面上，通常是通过将抗体溶液加入试验板孔中，然后在适当条件下进行孵育。
固定在试验板上的抗体将被用于捕获待检测的抗原或抗体。
2. 绑定：将待检测的样本加入试验板中，样本中的抗原或抗体与固定在试验板上的抗体发生特异性结合。
样本中的目标物质与固定在试验板上的抗体形成抗原-抗体复合物。
3. 洗涤：洗涤试验板以去除未结合的样品成分。
这一步骤的目的是去除非特异性结合的物质，以减少背景干扰。
4. 检测：加入辅助抗体(常为酶标记的抗体)，该抗体能够与已结合在试验板上的抗原-抗体复合物发生特异性结合。
这些酶标记的抗体可以是与抗体结合的酶，如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)。
然后，添加适当的底物使酶产生可检测的信号。
5. 信号检测：通过所使用酶催化的底物的反应产生的颜色或荧光等信号，可以对样品中目标物质的含量进行定量测量。
这一步骤可以使用吸光度计或荧光分析仪进行信号的测量和记录。
ELISA具有高灵敏度和特异性，广泛应用于医学、生物学、环境科学等领域，用于检测病原体、抗体、激素、药物等物质的存在和浓度。
它不仅可以用于疾病的诊断和监测，还可以用于药物筛选、生物分子的定量分析和研究等。
酶联免疫原理
酶联免疫原理酶联免疫原理，也称为酶联免疫吸附法，是一种常用的免疫学实验技术。
它利用酶的高效催化作用和抗体的高度特异性结合，实现对待测物的检测和定量。
酶联免疫原理的基本步骤如下：1.涂覆固定抗体：将特异性抗体溶液涂覆在固相载体（如微孔板）上，形成抗原抗体复合物。
这一步骤的目的是固定抗体在固相载体上，以便后续的反应。
2.样品孵育：待测样品中含有目标物质（如抗原或抗体），将样品加入到涂覆有抗体的孔中，使待测物与固定抗体结合。
孵育过程中，孔中的抗体与待测物发生特异性结合。
3.洗涤：通过洗涤的步骤，去除未结合的样品和其他干扰物，以减少非特异性背景信号的干扰。
洗涤的次数和方式会根据实验要求和具体试剂的说明进行调整。
4.二抗结合：在洗涤后，加入与待测物结合的二抗，二抗是与待测物的抗体结合的抗体。
二抗通常是与酶结合的抗体，如辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗兔IgG。
5.洗涤：再次洗涤以去除未结合的二抗。
6.底物反应：加入适当的底物，使其与酶发生反应，并产生可测量的信号。
常用的底物有TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）和ABTS （2,2'-联氨基双（3-乙基苯并噻唑啉硫酸））。
7.反应终止：通过加入适当的反应终止剂，如硫酸或酸溶剂，停止底物的反应，避免信号的继续增强。
8.测量：利用光密度计或酶标仪测量底物反应产生的信号，一般以吸光度为单位。
测量的结果与待测物的浓度呈正相关关系。
酶联免疫原理的优点在于其高灵敏度和高特异性。
酶能够催化底物的转化，使信号放大，提高检测的灵敏度。
抗体的高度特异性结合能力则保证了实验结果的准确性和可靠性。
此外，酶联免疫原理还具有批量处理的能力，可以同时处理多个样品，提高实验的效率。
酶联免疫原理在生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域得到广泛应用。
例如，利用酶联免疫原理可以检测血清中的蛋白质、激素、病毒、细菌等生物分子，用于疾病诊断和监测。
酶联免疫原理还可以用于药物的筛选和监测，评估药物的药效和毒性。
酶联免疫吸附试验实验报告
酶联免疫吸附试验实验报告实验目的：本实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）技术，检测特定抗原或抗体的存在，进而了解其在疾病诊断、治疗监测和流行病学研究中的应用。
实验原理：酶联免疫吸附试验是一种基于抗原-抗体特异性结合的固相免疫测定技术。
在实验中，首先将抗原或抗体固定在固相载体（如微孔板）上，然后加入待测样本，通过特异性结合形成抗原-抗体复合物。
随后，加入酶标记的第二抗体，与抗原-抗体复合物结合。
最后，加入底物产生可检测的信号（如颜色变化），通过光度计测定吸光度，从而定量分析抗原或抗体的含量。
实验材料：1. 微孔板2. 待测样本（血清、尿液等）3. 特异性抗体或抗原4. 酶标记的第二抗体5. 底物溶液6. 洗涤缓冲液7. 标准品8. 光度计实验方法：1. 准备微孔板，将特异性抗原或抗体稀释后固定在微孔板的孔中。
2. 将待测样本加入到相应的孔中，使其与固相的抗原或抗体发生特异性结合。
3. 洗涤微孔板，去除未结合的样本。
4. 加入酶标记的第二抗体，使其与抗原-抗体复合物结合。
5. 再次洗涤微孔板，去除未结合的第二抗体。
6. 加入底物溶液，使酶催化底物产生颜色变化。
7. 使用光度计测定各孔的吸光度，根据标准曲线计算待测样本中抗原或抗体的浓度。
实验结果：实验结果显示，通过测定不同浓度的标准品，我们建立了标准曲线。
将待测样本的吸光度值代入标准曲线，计算得到样本中抗原或抗体的浓度。
实验数据表明，吸光度与抗原或抗体的浓度呈正相关，符合ELISA实验的预期结果。
实验讨论：本实验中，ELISA技术成功地用于检测特定抗原或抗体的存在。
然而，实验过程中可能存在一些影响结果准确性的因素，如样本的稀释比例、酶标记抗体的活性、底物的稳定性等。
此外，实验操作的标准化和重复性也是保证结果可靠性的关键。
实验结论：通过本实验，我们掌握了ELISA技术的原理和操作流程，并成功应用于抗原或抗体的定量检测。
该技术在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用前景。
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酶联免疫检测实验的原理和技术要点
一、基本原理
1971 年 Engvall 和 Perlmann
发 表 了 酶 联 免 疫 吸 附 剂 测 定
（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于 IgG 定量测定的文章，使得 1966
年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方
法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②
使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活
性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原
或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体
上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受
检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物
的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分
析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高
的敏感度。
二、主要的检测模式
ELISA 可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有 3 种必要的试
剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来
源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。
（一）双抗体夹心法
双抗体夹心法（图 15-4）是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：
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1
图 15-4 双抗体夹心法测抗原示意图
（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。
（2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗
体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
（3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗
体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
（4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗
原的定性或定量。
根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法
测定标本中的抗体。
（二）双位点一步法
在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分
别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步（图
15-5）。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，
测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的 ELISA 提高到新水平。
图 15-5 双位点一步法示意图
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2
在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。
当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复
合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。
（三）间接法测抗体
间接法（图 15-6）是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固
相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：
（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。
（2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤
后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，
在洗涤过程中被洗去。
（3）加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固
相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人 IgG
抗体。
（4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。
本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。
图 15-6 间接法测抗体示意图
（四）竞争法
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竞争法（图 15-7）可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗
原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：
（1）将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。
（2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标
本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以
同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与
固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最
充分的量。洗涤。
（3）加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待
测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。
图 15-7 竞争法测抗原示意图
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（五）捕获法测 IgM 抗体
血清中针对某些抗原的特异性 IgM 常和特异性 IgG 同时存在，后者会干扰 IgM 抗体的测定。
因此测定 IgM 抗本多用捕获法（图 15-8），先将所有血清 IgM（包括异性 IgM 和非特异性 IgM）
固定在固相上，在去除 IgG 后再测定特异性 IgM。操作步骤如下：
图 15-8 捕获法测 IgM 抗体示意图
（1）将抗人 IgM 抗体连接在固相载体上，形成固相抗人 IgM。洗涤。
（2）加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的 IgM 抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其
他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。
（3）加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性 IgM 结合。洗涤。
（4）加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。
（5）加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性 IgM 抗体存在，是为阳性反
应。
（六）应用亲和素和生物素的 ELISA
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