特殊细菌药敏试验规范化操作
细菌室支原体培养鉴定及药敏操作规程
细菌室支原体培养鉴定及药敏操作规程
1．原理及依据标准：
支原体分离鉴定培养基用于泌尿生殖道支原体(解脲支原体Uu和人型支原体Mh)的检测与诊断。
当有Uu和Mh生长，分解尿素和精氨酸引起PH上升，使以酚红为指示剂的培养基由黄转红。
依据珠海迪尔生物工程有限公司生产的试剂盒说明书。
2．标本的采集：
2.1、男性：用特别细的无菌棉拭子沾取无菌生理盐水少许深入尿道口内2～2.5cm处取分泌物，前列腺液亦可用沾取无菌生理盐水的无菌棉拭子尽量多的沾取。
2.2、女性：用沾取少许无菌生理盐水的棉拭子取宫颈内口1～2cm处单层柱状上皮细胞，取样拭子不可碰阴道壁。
2.3、支原体对干、热抵抗力差，标本采集后应立即送检。
整个采样过程应注意无菌操作。
3、标本接种：(本实验应注意无菌操作，避免污染杂菌)
3.1、取出培养基，放置接近室温，并在瓶盖上编号。
3.2、将采集的标本拭子插入培养瓶中，在靠近液面上方的瓶壁挤示压旋转拭子数次，使拭子中标本渗入到肉汤中：若为液体标本，取200 u 1加入培养基中；若为中段尿，经3000转／分离心15分钟取沉渣100ul 加入培养基中。
3.3、盖上瓶盖，置35～37℃孵箱，在24～48小时分别观察结果。
4、结果判读：
培养基变红，判断阳性，培养基黄色并清亮，判断阴性。
5、已检标本处理：密闭容器高压灭菌后，按医用垃圾处理。
支原体药敏试验操作方法
支原体药敏试验操作方法
支原体药敏试验是对支原体细菌进行敏感性测试，以确定它们对不同抗生素的敏感程度。
操作方法如下：
1. 支原体细菌的筛选：首先选择纯化的支原体细菌株，应当检查其纯度和生长状态。
2. 制备试验用平板：使用Mycoplasma agar制备支原体药敏试验的平板，其中包含需要测试的抗生素。
将平板温度调节在35~37之间。
3. 制备菌液：从培养基中收集支原体细菌并转入到PBS缓冲溶液中，用垫头过滤以去除未破裂的细胞。
4. 稀释菌液：将菌液根据需要的浓度逐渐稀释，通常为10^5~10^6 CFU /ml，以便于试验处理。
5. 接种平板：将菌液滴入含有抗生素的药敏试验平板中，用琼脂种培养。
6. 培养：将培养皿放入条件恰当的恒温孵化箱或培养箱中，恒温为35~37，将培养皿培养约3~5天。
7. 判断：在生长完全的区域观察菌落数量、生长状态等信息，根据指南判断其
敏感性和耐药性。
8. 结论：根据支原体所产生的菌落数量和生长状态，分析支原体对药物的敏感性或耐药性。
注意事项：
1. 操作过程中应保证操作环境的无菌性。
2. 需要严格按照试剂及培养基的说明书进行操作。
3. 在菌液制备及接种过程中要严格注意细菌的数量及浓度。
4. 抗生素在试验过程中的使用必须符合相关法律法规。
真菌药敏试验规范化操作
CLSI真菌药敏标准文件
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关联文件
M27-Ed4 2017.11 酵母菌肉汤稀释法药敏试验标准方法
M60
M27-S4
酵母菌肉汤稀释法药敏试验参考标准
废止
M38-A3 2017.11 丝状真菌稀释法药物敏感试验的参考方法
M61
M44-Ed2 2009.08 酵母菌纸片扩散药敏试验方法
7% 27%
40%
12% 14% 真菌药敏送检量
2508
13%
54%
16% 4% 13% 真菌血清送检量
4592
1万例以上 1000-9999例 100-999例 1-100例 0例
数据尚未发表
抗真菌药物
分类 多烯类
咪唑类
第一代 第二代
唑类（吡咯类）
三唑类
第三代 新一代
嘧啶类
丙烯胺类
胞嘧啶
棘白菌素类
菌株分类 非皮肤霉菌
皮肤霉菌
培养基 0.2%/2%葡糖 RPMI 1640, 0.165mol/L MOPS, pH 7.0±0.1
• PDA 35℃ 培养条件 • 毛霉目、曲霉48h；
• 镰刀菌35℃ 48~72h + 25~28 ℃至7d
接种量 0.5×104~5×104 CFU/ml
•PDA；燕麦琼脂（仅红色毛癣菌) •30℃ 4~5d 至产孢良好
酵母菌微量肉汤稀释法
• 改良培养基
– 含2%葡萄糖的RPMI, 0.165mol/L MOPS, pH 7.0 – 含MOPS的酵母氮的基础肉汤（新型隐球菌）
• 菌株传代
– 沙保弱培养基(SDA)或土豆培养基(PDA)，35℃ – 念珠菌 24h，隐球菌 48h
抗生素敏感试验操作规程
抗生素敏感试验操作规程一、抗生素敏感试验原理:抗生素敏感试验是测定抗生素或其它抗微生物制剂在体外抑制细菌生长的能力，通常用扩散法或稀释法。
1、扩散法敏感试验:有抗生素的纸片或药片贴在已接种试验菌的平板上，抗生素浓度梯度通过纸片上的抗生素的弥散作用而形成，距纸片一定范围内试验细菌的生长受到抑制，这种抑制生长与细菌敏感及其他诸因素相关。
2、稀释法敏感试验：为了定量测定抗生素的活性，抗生素与肉汤或琼脂培养基混合进行稀释，然后种入试验细菌，孵育过夜，以最低浓度抑制细菌生长的，称为最低抑菌浓度（MIC），然后将最低抑菌浓度与机体血清或体液中可获得浓度相比较，来确定恰当的临床治疗浓度。
（1）最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration。
MIC）:抗菌药物能够抑制细菌生长所需要的最低浓度。
单位：μg/ml或U/ml,mg/L。
（2）最低杀菌浓度（minimal bacteriacidal concentration，MBC）:抗菌药物杀灭细菌所需要的最低浓度。
单位：μg/ml或U/ml，mg/L。
（3）MIC90：能抑制90%试验菌株的最低药物浓度，即为该药对被测菌的MIC90。
（4）MIC50：能抑制50%试验菌株的最低药物浓度，即为该药对被测菌的MIC50。
二、抗生素敏感试验的作用：1、指导临床医生对各患者选择最佳抗生素。
2、在一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐药的微生物流行病学资料。
三、抗生素敏感试验的临床意义：1、敏感：表示被测细菌引起的感染，除禁忌症外，可用该抗生素常用剂量而达到治疗的目的。
2、中介：表示被测菌株可通过提高剂量受到抑制，或在药物被生理性浓集的部位受到抑制，由于微小的技术因素失控可以对结果解释错误，所以这一范围只是抑菌环直径介于敏感和耐药之间的“缓冲域”抑菌环落入中介范围，其意义不明确，如果没有其他可以替代的药物，应重复或再以稀释法测定MIC。
3、耐药：被测菌不能被该抗生素的常用剂量在组织内或血液中的浓度达到抑制作用，而且不管其剂量大小或细菌所在部位。
与耐药机制有关药敏试验的规范化-陈东科
1. 苯唑西林纸片筛选试验
方法：使用含1μg苯唑西林纸片（而不是甲氧西林 或萘夫西林）来检测葡萄球菌对甲氧西林的耐药性。 用直接菌落悬液法制备的接种物（0.5麦氏比浊浓度 菌液）接种MH琼脂平板， 待琼脂表面的水份干后， 贴苯唑西林纸片，于33℃-35℃孵育24h，测量抑菌 圈直径。
结果判断：按NCCLS/CLSI解释标准判断结果，金 黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌抑菌圈直径≤10mm为 耐药，≥13mm为敏感。除路邓葡萄球菌外的其它凝 固酶阴性葡萄球菌抑菌圈直径≤17mm为耐ห้องสมุดไป่ตู้， ≥18mm为敏感。
注意事项
（1）在透射光下仔细观察苯唑西林纸片周围抑菌
圈内有无细小菌落或轻微弥漫生长，如有说明耐药。
（2）试验温度超过35℃不能检测MRS。
（3）纸片扩散法结果如有疑问，必须进行mecA 基
因或PBP2a 测定、头孢西丁纸片试验、苯唑西林 MIC 试验或苯唑西林盐琼脂筛选试验，来确定是否
为MRS 菌株，选择其中一种试验结果进行报告。
检查有无细菌生长，任何生长都表示对苯唑西林耐
药（如图）。
注意事项：
为从凝固酶阴性葡萄球菌中检测出甲氧西林耐药 菌株，需要将琼脂平板孵育48小时。
3. 头孢西丁纸片法
方法： 应用标准的纸片扩散法试验条件接种MH琼脂
平板，使用含30μg头孢西丁纸片， 35℃孵育24h（如 耐药则在孵育18h后可报告结果）。使用反射光阅读
药性，头孢西丁纸片试验是首选方法（因为头孢西丁
较苯唑西林的敏感性高，如图）。
4. mecA 基因及PBP2a 测定
方法：可采用乳胶凝集或分子生物学等方法 进行检测（有成品试剂供应）。
结果判断：mecA 基因或PBP2a（mecA 基 因表达产物）检测阳性的葡萄球菌分离株，
细菌药敏试验
【试验意义】
2 药敏试验的意义 • 1. 可预测抗菌治疗的效果 • 2. 指导临床选择使用抗生素。 • 3. 提供所选择药物的依据； • 4. 监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握
耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐 药菌感染的发生和流行。
【实验材料 】
1.菌种：大肠杆菌肉汤培养物 1 管/组
2.各种药敏片：市售商品药敏片（或自制）1套 （4～5种）/人。
[问题与思考]
• 1.纸片药敏试验操作时应注意哪些事项? • 2.试述纸片扩散法药敏试验的原理及临床
意义。 • 3.纸片药敏试验的步骤及结果判定是什么？
≥18
≤14
15～17
≥18
≤12
13～17
≥18
≤13
13-15
≥18
≤12
13～14
≥15
【注意事项 】
• 影响因素药敏试验结果的因素 1、培养基：培养基质量和pH值。pH过低会导致
氨基糖苷类，大环内酯类失效，而青霉素活 力增强 。 2、药敏纸片的质量，含药量和保存方式 3、接种菌量。 4、试验操作质量：接种细菌后贴片时5～15 分钟； 5、培养时间：不超过24 h 。
细菌药敏试验 （纸片扩散法）
【学习目标】
1.掌握药敏试验的基本原理。 2.掌握药敏试验-纸片法的操作方法及判定。
3.了解药敏试验在实际生产中的指导意义。
【试验原理】
• 1 纸片扩散法原理
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的 琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水 分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的 梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生 长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。 并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关 关系，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
常见细菌药物敏感性试验报告规范中国专家共识
常见细菌药物敏感性试验报告规范中国专家共识微生物学检验为感染性疾病得诊断、治疗与控制提供了必不可少得证据。
因此微生物学检验报告就是临床与实验室等多方共同关注得焦点。
国内临床微生物学检验发展较为薄弱，报告存在着种种不足。
同时，临床与实验室得沟通存在一定不足，密切协作非常必要。
基于实际存在得问题，为规范国内临床微生物学检验药物敏感性试验报告，加强临床与实验室合作，发挥检验医师作用，特制订本共识，以期指导相关报告得规范化，减少错误，增加专业信息，提高服务质量，为临床医学诊、治、控提供坚实得科学依据。
本共识限于常见细菌得药物敏感性报告。
一、药物敏感性试验得意义与基本原则(一)意义药物敏感性试验可以检测细菌对于抗细菌药物得敏感性，为临床用药、新药研究、监测耐药变迁、发现耐药机制等提供客观证据[1]。
对于经验治疗，依据一方面来自医生自身得经验，一方面就是实验室长期不断提供得数据积累。
临床需要考虑不同感染得病原谱与常见病原对不同药物得敏感性；对于靶向治疗，特定分离株得具体药敏试验结果可以用于判断经验治疗选药合理性、经验治疗效果分析、调整治疗选药依据等。
(二)基本原则1．药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药：天然耐药就是细菌菌种固有得特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物得天然耐药[2]。
天然耐药信息一般由基础医学与临床文献提供。
部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。
常见菌种对各类药物得天然耐药见文献。
实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习与参考。
2．药敏试验测试得前提条件：实验室应具备相应检测得人员能力、客观条件、结果解释依据。
标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果得解释能力，能够提供临床会诊服务。
临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。
龙华医院细菌鉴定药敏系统性能验证试验标准操作规程
龙华医院细菌鉴定及药敏分析仪性能验证实验标准操作规程1．目的为了保证本实验室VITEK2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析仪运行正常，所出具的鉴定报告的准确性。
2．适用范围法国生物梅里埃生物有限公司VITEK2Compact全自动微生物鉴定及药敏分析系统。
3．室间质控3.1质控频率：参加上海市临床检验中心提供的检验专业室间质控，2次/12个月；参加全国临床检验中心提供的检验专业室间质控，2次/12个月。
3.2质控内容：采用VITEK2Compact系统的GN、GP、NH、YST、GP-67、GN-13鉴定卡对相关室间质控的菌株做鉴定。
3.3质控预期评价：结果正确。
4．室内质控4.1质控频率：1次/每批次。
4.2质控内容: GN: 鲍曼不动杆菌（ATCC BAA-747）、产酸克雷伯菌(ATCC 70324)、GP: 铅黄肠球菌 (ATCC 700327)、金黄色葡萄球菌 (ATCC 29213)YST: 光滑球似假丝酵母（ATCC MYA-2950）、葡萄牙假丝酵母 (ATCC 34449) NH: 流感嗜血菌（ATCC 9007）、嗜泡沫放线杆菌（ATCC33389）GN13:大肠埃希菌（ATCC25922）、大肠埃希菌（ATCC35218）、铜绿假单胞（ATCC27853）GP67:金黄色葡萄球菌（ATCC29213）、粪肠球菌（ATCC29212）4.3质控预期评价：结果正确，质控合格。
5．性能验证项目5.1微生物鉴定的符合率；6．性能验证频率：1次/12个月。
7．性能验证实验材料鲍曼不动杆菌（ATCC BAA-747）、产酸克雷伯菌(ATCC 70324)、铅黄肠球菌 (ATCC 700327)、金黄色葡萄球菌 (ATCC 29213)光滑球似假丝酵母（ATCC MYA-2950）、葡萄牙假丝酵母 (ATCC 34449)流感嗜血菌（ATCC 9007）、嗜泡沫放线杆菌（ATCC33389）大肠埃希菌（ATCC25922）、大肠埃希菌（ATCC35218）、铜绿假单胞（ATCC27853）、粪肠球菌（ATCC29212）7.1细菌选择（上海临床检验中心、上海汉尼有限公司提供）7.2微生物鉴定及药敏卡片：GN、GP、NH、YST、GN13、GN678．操作人员经岗位授权的技术人员。
细菌对抗菌药物的敏感试验(实验)
5．质量控制
采用标准菌株与测试菌在同一条件下做药敏试验。 标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内。如果超出该范围， 则不应发出报告，及时检查原因，予以纠正。
ATCC25923 金黄色葡萄球菌 ATCC25922 大肠埃希菌 ATCC27853 铜绿假单胞菌 ATCC29212 或 33186 粪肠球菌
金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验结果判断
无菌棉签 涂布
MH琼脂表面
室温 5min
贴含药纸片 35℃ 观察 16～18h 结果
操作注意事项：
菌液应在15分钟内接种完毕 接种后，平板放置时间不要超过5min 注意纸片距离
＞15mm ＞24mm
3．结果解释 测量抑菌圈直径，参照CLSI的标准解释结果。
20mm
4.影响纸片法药敏结果的因素 ①培养基质量 成分、pH、深度、硬度和表面 湿度等。 ②药敏纸片的质量 含药量和保存方式。 ③接种菌量 ④操作质量 接种后贴药片的时间；培养温度 和时间；抑菌圈测量工具的精度
大肠埃希菌抗菌药物敏感性试验结果判断
抗菌药物敏感性试验
成都医1.掌握纸片扩散法（K-B法）原理、操作 方法、结果的判读及其临床意义。
2.掌握纸片扩散法的质量控制。
实验内容 纸片琼脂扩散法（K-B法）
实验器材
1. 菌种： 金黄色葡萄球菌ATCC25923、 大肠埃希菌ATCC25922
（幼龄菌，1.5×108/ml） 2. 培养基：水解酪蛋白琼脂（MH琼脂）平板，1个/人 3. 抗菌纸片：青霉素（PEN）、红霉素(ERY)、庆大
霉素（GEN） 4. 其它：无菌生理盐水、无菌棉签、镊子、 接种环、
刻度尺（自带）、0.5 麦氏比浊管（相当于 1.5×108CFU/ml）
掌握液培养和药敏试验的操作要点
掌握液培养和药敏试验的操作要点液体培养和药敏试验是微生物学和临床药学中常用的实验技术，用于分离、培养和检测微生物的敏感性。
下面将介绍液体培养和药敏试验的操作要点。
一、液体培养操作要点1. 准备培养基和试管：选择合适的培养基，按照配方准备培养基溶液，加热煮沸并灭菌。
准备试管或培养瓶，要保持干净并灭菌处理。
2. 移植菌种：选择适当的菌株或微生物，用无菌环或无菌吸管将菌种接种到试管中的培养基上。
注意无菌操作，避免污染。
3. 培养条件：放置接种好的试管或培养瓶在恒温培养箱或恒温振荡培养箱中进行培养。
根据不同的微生物和实验要求，设置合适的培养温度、pH值和培养时间。
4. 培养过程中的观察和记录：定期观察培养物的颜色、透明度、沉淀物形成等变化，并记录相关观察结果。
同时注意照顾好培养物，避免震荡或摇晃过大。
5. 液体培养的保存与传代：若需要保存菌种，可将培养物从液体培养中分装到无菌的培养基或冷冻保存液中，并进行适当的保存条件。
若需传代，将培养物分装到新的培养基中再次培养。
二、药敏试验操作要点1. 准备药敏试验板：根据实验需求选择合适的药敏试验板，根据说明书或药敏试验方案，用吸管将试验板上的培养基均匀涂布。
2. 菌液制备：根据标准的方法，用无菌吸管或环取菌液，保证操作无菌并经标准化调整菌落悬浮液的浓度。
3. 涂布并做斑点扩散法：用无菌棉签或吸管头，将菌液均匀涂布于试验板上的培养基上，采用斑点扩散法，即在培养基上滴加一定浓度的抗生素溶液。
4. 药敏试验的培养条件：将涂好菌液和抗生素溶液的试验板，放置在恒温培养箱中进行培养。
根据不同的菌株和抗生素，设置合适的培养温度、时间。
5. 结果的判读与记录：观察试验板上菌落的生长情况，根据规定的标准对菌落的直径、抑菌圈的直径进行测量，并根据标准结果判定细菌的敏感性。
6. 实验结果的分析和报告：根据药敏试验的结果，判断细菌对不同抗生素的敏感程度。
结合临床实际情况，制定个体化的治疗方案，并进行相关记录和报告。
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文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 1文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 特殊细菌药敏试验的规范化操作
一、目前我国细菌药敏试验现状 20年以来，我国在卫生部和各地临床检验中心和检验学会的共同努力下引进CLSI药敏系列标准，使全国微生物实验室能在同一标准下进行质量控制活动。当前，微生物实验室对常见临床分离细菌的药物敏感试验的水平已有了显著的提高，但对特殊细菌的药敏试验的各个环节的规范操作还不能得到普及，对目前还无折点的细菌能否做药敏试验，以及如何判断细菌的药物敏感和耐药，仍然概念模糊，有待进一步规范和普及。 目前常见错误做法： （一）铜绿假单孢菌的药敏判断标准用于其他非发酵细菌；嗜血杆菌的标准用于卡他莫拉菌等的错误做法时有发生。 （二）借用同属细菌敏感标准 （三）借用同类抗生素的敏感标准 二、各菌属的药物敏感性报告及试验方法的CLSI药敏标准 （一）“嗜麦芽”菌属药敏报告标准 1.CLSI对“嗜麦芽”纸片药敏判断标准
米诺环素 30 ≤14 15-18 ≥19 左氧氟沙星 5 ≤13 14-16 ≥17 复方新诺明 1.25/23.75 ≤10 11-15 ≥16 2.CLSI对“嗜麦芽”稀释法判断标准
替卡西林/棒酸 ≤16/2 32/2-64/2 128/2 头孢他定 ≤8 16 ≥32 米诺环素 ≤4 8 ≥16 左氟沙星 2 4 ≥8 复方新诺明 ≤2/38 - 4/76 氯霉素 ≤8 16 ≥32 （二）无折点细菌的药物敏感试验报告 1. 其他药物的敏感性报告: CLSI推荐的药物可以报告MIC值和敏感度（S、I、R）， 临床需要的其他药物的药敏试验报告可以直接报告MIC值但不报告S、I、R。 2. 不要用认为相近细菌的折点代替报告S、I、R，这会误导医生用药。 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 2文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. （三）洋葱伯克霍德菌的药物敏感试验 1.CLSI 洋葱伯克霍德菌纸片法折点：
头孢他定 30 ≤17 18-20 ≥21 美罗培南 10 ≤15 10-19 ≥20 米诺环素 30 ≤14 15-18 ≥19 复方新诺明 1.25/23.75 ≤10 11-15 ≥16 2. CLSI洋葱伯克霍德菌稀释法折点 ：
替卡西林/棒酸 ≤16/2 32/2-64/2 ≥128/2 头孢他定 ≤8 16 ≥32 美罗培南 ≤4 8 ≥16 米诺环素 ≤4 8 ≥16 左氟沙星 ≤2 4 ≥8 氯霉素 ≤8 16 ≥32 复方新诺明 ≤2/38 - ≥4/76 （1）氯霉素不常规报告结果,只有在尿路感染时分离的细菌才报告结果。 （2）在纸片法药敏中只允许报告表中4个药物的敏感性,对其他药物可用于临床治疗但还没有足够的研究建立纸片扩散的折点。 （四）莫拉菌属的药物敏感试验报告 莫拉菌属至今尚无由CLSI颁布的标准操作方法和敏感性折点,该菌属是人体皮肤、黏膜、呼吸道正常细菌，很少会致病，有过报道的病例有该菌属引起的眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、脑脓肿、心包炎和心内膜炎。实验室药敏报告只能报告MIC值但不能报告敏感性。文献报告的资料是推断性。 （五）金黄杆菌属的药敏试验报告 脑膜败血性黄杆菌是最常见于临床标本，是条件致病菌，有文献报道的病例有新生儿脑膜炎，对成人很少致病，感染与插管有关。CLSI未颁布标准操作方法和敏感折点，药敏试验可报告MIC值。该菌属耐药特点：对氨基糖甙类、β-内酰胺类、四环素类、氯霉素类天然耐药；对治疗革兰阳性细菌药物利福平、红霉素、克林霉素、司帕沙星、复方新诺明和万古霉素敏感。 （六）丛毛菌属和食酸菌属的药敏试验 推荐用肉汤稀释方法或E-test方法，报告MIC值，不适合用纸片药敏方法。 （七）产碱杆菌属、无色杆菌属和苍白杆菌属的药敏试验 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 3文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 目前无药敏解释标准，建议采用稀释法药敏试验方法，报告MIC值，根据MIC和组织浓度判断敏感性。 1．粪产碱杆菌是产碱杆菌的代表株对氨苄西林、氨曲南和庆大霉素耐药。 2．木糖氧化无色杆菌 木糖氧化亚种是临床常见的分离株，对氨苄西林、氨基糖甙类、非抗假单孢菌的头孢菌素、氟喹诺酮和氯霉素耐药，但对派拉西林、替卡西林/棒酸、亚胺陪南、复方新诺明及抗假单孢菌头孢菌素敏感。 3．人苍白杆菌是苍白杆菌属代表菌，对β-内酰胺类耐药，但对亚胺陪南、复方新诺明、氨基糖甙类、氟喹诺酮类和四环素敏感。 （八）布鲁杆菌属药敏试验 不推荐做体外药敏试验，β-内酰胺类耐药和氟喹诺酮类有高的体外活性与临床疗效不一致。热病推荐首选药物是多西环素加庆大霉素或链霉素。 （九）军团菌药敏试验 目前无标准的试验方法和解释标准，肉汤稀释和E-test方法报告MIC值可作参考。首选用药大环内脂类、喹诺酮类，对β-内酰胺类体外敏感但体内疗效差。 （十）弯曲菌科细菌的药敏试验 1．弯曲菌科包括弯曲菌属、弓形菌属和螺菌属。目前无解释标准。CLSI M100-S16 2006年文件仅提供了质控菌株对部分抗生素的可接受范围和质量控制标准操作程序。 2．常寄生于人的牙周黏膜，可引起人胃肠炎和腹泻，胎儿弯曲菌可引起免疫低下患者菌血症。热病推荐对空肠弯曲菌首选药物为红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、多西霉素和克林霉素。幽门螺杆菌对克林霉素的折点是1ug/ml并与临床疗效一致，甲硝唑在体外敏感试验没有标准。 （十一）厌氧细菌的药敏试验 由于大多数用于厌氧细菌感染的药物对临床有很好的预期效果，所以并不推荐做常规的厌氧菌药敏试验,但在严重厌氧菌感染而常规治疗疗效差的情况下有必要测定 致病菌的MIC值,指导用药;在新药评价时需要做厌氧菌的药敏试验,用MIC值评价药效学。 随着厌氧细菌感染率的增长，厌氧细菌的耐药性也在不断增长，特别是脆弱拟杆菌已有报道对亚胺培南和甲硝唑的耐药株报道，几乎所有的脆弱拟杆菌均产生β-内酰胺酶，部分菌株产生超广谱β-内酰胺酶。越来越多的梭杆菌产生β-内酰胺酶导致对β-内酰胺酶抗生素耐药。 （十二）真菌的药敏试验 由于真菌药物敏感试验影响因素颇多，如真菌生长的速度、药物在体内的代谢、培养条件等，所以真菌药敏试验结果与疗效的一致性至今是本领域需要探讨的重要课题 。 1.酵母样真菌药敏试验 （1）酵母样真菌的药敏折点 1992年，NCCLS起草了《酵母菌的液体稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案》文件名称为文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 4文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. M-27P，用于检测引起深部感染的酵母样真菌，包括念珠菌、光滑球似酵母和新生隐球菌等菌对两新霉素-B（AmB）、5-氟胞嘧啶（5-FC）、氟康唑（FCZ）、伊曲康唑（ICZ）等的敏感性；1995年NCCLS对该草案作了修正，增加了微量稀释法起名为（M-27T）；1995-1997年NCCLS对终点判断方法进行了修定，形成了《酵母菌稀释法抗真菌药敏试验实施方案》（M-27A）；2002年NCCLS统一了微量稀释法中24h和48h终点判断方法，增加了新的抗真菌泊沙抗唑（posaconazole）、雷夫康唑（ravuconazole）和伏力康唑（vuliconazole VCZ）的试验方法和MIC参照范围，并将该方案修定出版，名为M-27A2。 （2）CLSI对酵母样真菌现有的标准
FCZ 8 16-32 - ≥64 ICZ ≤0.125 0.25-0.5 - ≥1 5-FC ≤4 - 8-16 ≥32 AmB - - - - VCZ ≤1 - 2 ≥4 （3）CLSI对酵母样真菌纸片法判断标准
S ≥19 ≥17 SDD 15-18 14-16 R ≤14 ≤13 2. 丝状真菌药敏试验 （1）丝状真菌的药敏折点：初始方案产生于1998年，命名为M-38P，该方案包括微量稀释法和洪量稀释法，对曲霉菌、镰刀菌、波氏假阿利什曼等丝状真菌有较好的一致性；2003年NCCLS对某些最低抑菌浓度（MIC）判定方法及影响因素作了多中心的研究和修正，并增加了新三唑类药物的试验方案，从此产生了现在用于实验室药敏试验和新药评价的常规方法M-38A。 （2）丝状真菌药敏报告：CLSI颁布的M-38P是丝状真菌肉汤稀释法抗真菌药敏试验,内容并无丝状真菌敏感性折点，只是描述了测试方案，包括试剂配制、操作方法、质量控制等程序。 3．关于真菌药敏报告 （1）Candida.Krusel(克柔假丝酵母)对氟康唑天然耐药,现已颁布的氟康唑对念珠菌的判断标准不适用，不管体外药敏结果均应报告耐药。 （2）AMB对念珠菌目前无判断标准。 （3）伊曲康唑的折点仅适用于黏膜念珠菌感染,对侵袭性感染时全身性用药并不适用，建议仅报告MIC不报告S、I和R。 （4）对5-FC现有的标准是基于联合用药情况下的敏感折点，如单独用药，该标准不适用。 （5）卡泊芬净至今无体内外相关性好和重见性稳定的药敏试验方法，至今无评定标准，但有报道可用MEC，即最低有效文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 5文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 浓度（能使真菌形态发生改变的最低药物浓度），用于评价药物的有效性。 4．E-test方法适合哪些真菌的药敏试验 E-test方法可适合多种真菌的药敏测试，包括酵母样真菌，如念珠菌、隐球菌状真菌，如曲霉菌、镰刀菌、毛霉菌、根霉菌、梨头霉、外瓶霉、帚霉等的药敏测试。 5.正确报告FUNGUS-3的规范方法 （1）FUNGUS-3试条中氟胞嘧啶只有2个稀释浓度，一个高浓度，一个低浓度，报告以敏感度报告； （2）当两个浓度均有菌生长,并生长超过80%,报告耐药“R”。 （3）当高浓度真菌被抑制80%或以上,低浓度孔真菌完全生长或生长80%报告“SDD”。 （4）当两个浓度均无真菌生长报告敏感“S”。 （5）可通过肉眼判读或是使用ATB仪器自动判读来观察生长情况：肉眼判读前，建议把试条放在黑暗的背景下（可从bioMerieux得到ATB FUNGUS 3可视化判读器）。对于每一个抗真菌制剂，从低浓度开始，与生长对照比较，在结果记录纸上记下每一个杯的生长得分。 （6）正确报告FUNGUS-3的药敏结果的方法：对于两性霉素B，最小抑菌浓度（MIC）是生长完全被抑制的测试杯的浓度（得分为“0”的测试杯）；对于氟康唑（FCA）, 伊曲康唑（ITR）和 伏立康唑（VRC），鉴于可能存在拖尾生长，最小抑菌浓度（MIC） 对应的测试杯得分可以是生长得分为“2”，“1”，或是“0”分。需要注意的是：在杯状凹外围的生长迹象应记录