TRIS-MOPS缓冲液(10×)
TAE概述
一、电泳缓冲液概述电泳缓冲液是指在进行分子电泳时所使用的缓冲溶液，用以稳定体系酸碱度。
常见的核酸电泳缓冲液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。
作用缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。
电泳时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应（4OH--4e->2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。
一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，是溶液两极的pH保持基本不变。
电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。
电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。
特点二、TAE是使用最广泛的缓冲系统。
其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。
TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。
TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb 的片段时分离效果更好。
TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。
TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。
三、50×TAE Buffer 配制方法：1。
常用缓冲液配方及缓冲范围
常用缓冲液配方及缓冲范围缓冲液是一种水溶液，其中含有在酸性或碱性条件下能够保持pH稳定的化学物质。
缓冲液广泛应用于生物化学、分子生物学、生物技术和医学等领域的实验和研究中。
下面是一些常用的缓冲液配方及其应用范围。
1. Tris缓冲液Tris缓冲液是一种中性缓冲液，常用于生物化学和分子生物学实验。
它的配方通常为：- 10 mM Tris base-1mMEDTA-向溶剂中调整pH至7.4Tris缓冲液可用于DNA和RNA的电泳、酶反应、细胞培养等实验中。
2.PBS缓冲液PBS（磷酸盐缓冲液）是一种常用的生物学缓冲液，具有缓冲能力强和与生物体液成分相似的特点。
它的配方通常为：-137mMNaCl-2.7mMKCl-10mMNa2HPO4-2mMKH2PO4-向溶剂中调整pH至7.4PBS缓冲液可用于细胞培养、免疫荧光染色、蛋白质凝胶电泳等实验中。
3.TAE缓冲液TAE（三乙酸缓冲液）是一种常用的核酸电泳缓冲液，其配方为：- 40 mM Tris base-20mM醋酸-1mMEDTA-向溶剂中调整pH至8.0TAE缓冲液可用于DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳，如聚丙烯酰胺凝胶电泳（）和琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis）。
4. Tris-HCl缓冲液Tris-HCl缓冲液是一种常用的酸性或碱性缓冲液。
它的配方基于Tris缓冲液，在Tris缓冲液基础上调整pH的方法是在配方中加入稀盐酸或稀氢氧化钠。
例如，对于Tris-HCl缓冲液的配方为：- 50 mM Tris base-向溶剂中加入HCl调整pH至所需的值（通常为7.2至9.0）Tris-HCl缓冲液可用于酶反应、蛋白质组学研究、PCR等实验中。
这只是一些常用的缓冲液配方，根据不同实验需求和物质稀释要求，还有其他许多缓冲液的配方。
对于缓冲液的选择，关键在于根据实验要求选取适当的缓冲体系，并对缓冲液中所需的化学物质浓度、pH值等进行精确调整。
TAKARA实验室常规试剂配制方法
TAKARA实验室常规试剂配制方法TAKARA实验室是一家提供生命科学研究和临床诊断解决方案的公司。
其产品线包括分子生物学试剂、细胞培养耗材、蛋白质研究试剂和临床诊断试剂等。
在TAKARA实验室产品的使用过程中，常规试剂的配制方法是非常重要的一部分。
本文将介绍一些TAKARA实验室常规试剂的配制方法。
1. Tris缓冲液的配制方法Tris缓冲液可用于蛋白质电泳，DNA和RNA电泳等实验中。
配制方法如下：1）将Tris酸粉末称取至容器中。
2）加入蒸馏水溶解，并调节pH至所需值（一般为8.0）。
3）使用0.22μm的滤器进行过滤。
2.PBS缓冲液的配制方法PBS缓冲液是一种常用的生理盐水缓冲液，在细胞培养和免疫染色实验中经常使用。
配制方法如下：1）将NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4按指定比例称取至容器中。
2）加入蒸馏水溶解，并调节pH至所需值（一般为7.4）。
3）使用0.22μm的滤器进行过滤。
3.LB培养基的配制方法LB培养基是一种常用的大肠杆菌培养基，在分子生物学实验中经常使用。
配制方法如下：1）将Tryptone、Yeast Extract和NaCl按指定比例称取至容器中。
2）加入蒸馏水溶解，并使用自动调pH仪调节pH至所需值（一般为7.0）。
3）将容器密封，并在121℃高压灭菌器中高压灭菌15-20分钟。
4. RNase-Free水的制备方法RNase-Free水在RNA实验中非常重要，保证实验的可靠性和准确性。
制备方法如下：1）将蒸馏水倒入洁净的玻璃烧杯中。
2）放入微波炉中加热，每隔一段时间取出搅拌一次，直至水沸腾。
3）冷却后，使用0.22μm的滤器进行过滤。
4）将过滤后的水贮存在RNase-Free的容器中。
5.甲醛溶液的配制方法甲醛溶液可用于细胞固定和染色实验。
配制方法如下：1）将甲醛溶液称取至容器中。
2）加入蒸馏水溶解，使浓度达到所需值（一般为4%）。
3）使用0.22μm的滤器进行过滤。
northern 杂交
RNA提取方法一、改良异硫氰酸胍提取法试剂及其配制异硫氰酸胍变性液：贮存液－在含484ml 水（经DEPC处理）, 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠（pH7.0）和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g异硫氰酸胍，加热至60~65℃并持续搅拌使之充分溶解。
贮存液室温保存备用（不超过3个月）。
工作液－在每50ml贮存液中加入0.35ml2-ME即配制成工作液。
工作液于室温下保存不超过1个月。
工作液各成分的终浓度为：4mol/L异硫氰酸胍25mol/L柠檬酸钠pH 7.00.5%(w/v)N-十二烷基肌氨酸(Sarkosyl)0.1mol/L巯基乙醇(2-ME)其它溶液：2mol/L乙酸钠 (NaAc) 缓冲液 (pH 4.0)水饱和酚（pH 3.5）49∶1 (v/v) 氯仿/异戊醇100%异丙醇70%乙醇（用DEPC处理水配制）DEPC处理后高压灭菌水试验程序1．取0.5~1g左右新鲜植物组织置于研钵中，加入液氮，迅速研磨成均匀的粉末。
2．将粉末全部移入冰上预冷的离心管中，并向其中加入5ml异硫氰酸胍变性液，轻轻摇动离心管使混合均匀。
3．顺序加入2mol/l NaAc 0.5ml、水饱和苯酚5ml、氯仿/异戊醇1ml，每加入一种试剂都轻轻摇动离心管混合均匀，最后将离心管盖紧，倒转几次混合均匀，冰浴15min.。
4．4℃条件下15000g离心30min.，将上层水相转移至另一干净的离心管中，并加入等体积的异丙醇，混匀后置于－20℃冰箱冷冻1h.。
5．4℃条件下13000g离心25min.，小心去除上清液，沉淀溶于1.5ml异硫酸胍变型液中（体积为第一次变性液的1/3），再加入等体积的异丙醇，混匀后置于－20℃冰箱冷冻1h.。
6．4℃条件下13000g离心20min.，沉淀用70%乙醇洗一次，晾干后溶于适量体积（50μg/100μl）的DEPC处理水中，检测后分装，置于－70℃低温条件下保存。
pbs缓冲液的配方()
PBS缓冲液的配方发布日期:2008-11-11 热门指数:865PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。
以下是我的总结：母液的配制：0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。
然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：0.1M PB（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
若需要 NaCL 的话，加入 NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。
另：其它各种另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方：pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml）5.7 93.56.55.8 92 85.9 90 106.0 87.7 12.36.1 85 156.2 81.5 18.56.3 77.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 37.5 6.7 56.5 43.5 6.8 51 496.9 45 557.0 38 62 7.1 33 67 7.2 28 72 7.3 23 77 7.4 19ml 81ml 7.5 16 84 7.6 13 87 7.7 10.5 0.5 7.8 8.5 91.57.9 7 938.0 5.3 94.7 分子生物学常用溶液配制发布日期:2008-8-25 热门指数:3471分子生物学常用溶液配制一、分子生物学常用贮存液的配制1．30%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml 的水中。
tris-hcl缓冲液稀释方法
tris-hcl缓冲液稀释方法
Tris-HCl缓冲液是一种广泛应用的中性缓冲液，可以用于生物化学、分子生物学、细胞生物学等领域。
在实验中，Tris-HCl缓冲液的pH稳定性较好，能够保持在7.2-9.0之间，且氧化还原性和离子强度也较低。
因此，为了确保实验结果的准确性和稳定性，常常需要
对Tris-HCl缓冲液进行稀释。
这里介绍一种Tris-HCl缓冲液稀释方法。
材料和试剂
Tris-HCl缓冲液（1 M，pH 8.0）
反应管
去离子水
稀释方法
1. 准备所需试剂和材料，如Tris-HCl缓冲液、反应管和去离子水。
2. 根据实验需要，计算所需Tris-HCl缓冲液的体积。
3. 另取一支新的干净反应管，向其中加入所需Tris-HCl缓冲液的体积，注意将提示
在瓶子上的pH值调整到所需pH值。
4. 将所需稀释倍数的去离子水加入到反应管中，使得最终Tris-HCl缓冲液的体积达
到所需值。
例如，若需要150 mL 0.1 M Tris-HCl缓冲液，可先加入15 mL 1 M Tris-HCl 缓冲液，然后加入135 mL 去离子水。
5. 使用pH计检查Tris-HCl缓冲液的pH值是否符合所需值。
稀释后的Tris-HCl缓冲液可以在4℃下保存约1个月，也可以根据实验需要进行重新配制。
总结
以上就是Tris-HCl缓冲液的稀释方法，通过此方法，可以根据实验需要快速准确地调配所需体积的缓冲液。
同时，在使用过程中也要注意缓冲液的质量和保存条件，以免影响
实验结果的可靠性和准确性。
实时荧光定量PCR具体实验步骤
实时荧光定量PCR操作步骤以下实验步骤仅供参考：1样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。
手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。
4℃下12000rpm离心15分钟。
离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。
RNA全部被分配于水相中。
水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。
加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm离心10分钟。
此时离心前不可见的RNA 沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。
混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2RNA质量检测1）紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。
然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液浓度和纯度。
①浓度测定A260下读值为1表示40μgRNA/ml。
样品RNA浓度(μg/ml)计算公式为：A260×稀释倍数×40μg/ml。
具体计算如下：RNA溶于40μlDEPC水中，取5ul，1:100稀释至495μl的TE 中，测得A260=0.21RNA浓度=0.21×100×40μg/ml=840μg/ml或0.84μg/μl取5ul用来测量以后，剩余样品RNA为35μl，剩余RNA总量为：35μl×0.84μg/μl=29.4μg②纯度检测RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。
Tris镁盐缓冲液(1X,pH7.8)
Beijing Leagene Biotechnology Co., Ltd.
版本：A3 修改日期：2023.12.15
Tris 镁盐缓冲液(1×,pH7.8)
产品简介：
Tris(三羟甲基氨基甲烷)为弱碱，分子式为C 4H 11NO 3，相对分子量为121.14, 在25℃下pKa 为8.1，Tris 缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0～9.2之间，用来作为各种缓冲液的基础成分，调节酸碱度。
硫酸镁(Magnesium sulphate)分子量为120.39，分子式为MgSO 4，用途极为广泛，可用于医药、工业、饲料等领域。
Leagene Tris 镁盐缓冲液(1×,pH7.8)由Tris-HCl 缓冲液(50mM,pH7.8)、10mM 硫酸镁等组成，简称TM ，pH 值约为7.8，属于pH 缓冲液，直接使用。
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作，无需稀释，直接使用。
注意事项：
1、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
有效期：12个月有效。
编号 名称 R00260 Storage Tris 镁盐缓冲液(1×,pH7.8) 500ml RT 使用说明书 1份。
Tris
缓冲液缓冲溶液（英文：buffer solution）是一种能在加入少量酸或碱和水时大大减低pH变动的溶液。
pH缓冲系统对维持生物的正常pH值和正常生理环境起到重要作用。
多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。
在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们是蛋白质缓冲系统、重碳酸盐缓冲系统以及磷酸盐缓冲系统。
每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。
在生化研究工作中，常常需要使用缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。
研究工作的溶液体系pH值的变化往往直接影响到研究工作的成效。
如果“提取酶”实验体系的pH值变动或大幅度变动，酶活性就会下降甚至完全丧失。
所以配制缓冲溶液是一个不可或缺的关键步骤。
常用作缓冲溶液常用作缓冲溶液的酸类由弱酸及其共轭酸盐组合成的溶液具有缓冲作用。
生化实验室常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。
如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的化学反应。
硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。
柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。
磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。
而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。
三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑制作用。
其主要缺点时温度效应。
这点往往被忽视，在室温pH是7.8的Tris缓冲液，4℃时是8.4，37℃时是7.4，因此，4℃配制的缓冲液在37℃进行测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。
在pH7.5以下，其缓冲能力极为不理想。
缓冲溶液组成缓冲体系由１、弱酸和它的盐（如HAc---NaAc）2、弱碱和它的盐（NH3.H2O---NH4Cl）3、多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐（如NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液组成。
三种生物缓冲剂MOPS、HEPES、CHAPS的特征和应用
MOPS、HEPES、CHAPS的特征和应用MOPS的特征MOPS的全化学名称为3-（N-Morpholino）-Propanesulfonic Acid，是一种两性离子生物缓冲剂。
常温下为白色粉末状固体，亲水性高，水溶性好（20℃时1000 g / L）。
将MOPS 溶于水时，其水溶液外观为无色。
MOPS的应用和注意事项由于有用的pH范围介于6.5和7.9之间，MOPS经常用于分子生物学和生化研究。
MOPS 不仅是用于蛋白质纯化和提取的pH缓冲剂，还是细菌，酵母和哺乳动物细胞的缓冲培养基的成分，也是通过琼脂糖凝胶电泳分离RNA的运行缓冲液的最佳选择。
由于缺乏与大多数金属离子形成螯合物的能力建议在制备含金属离子的溶液时将MOPS用作非配位缓冲液。
需要注意的是，如果您打算在使用MOPS之前对其进行灭菌，请不要对其进行高压灭菌。
根据相关研究文献，当通过高压灭菌法对MOPS进行灭菌时，未知的淡黄色物质会作为降解产物产生，因此，推荐使用通过孔径为0.2微米或更小的膜过滤来进行MOPS灭菌。
HEPES的特征HEPES的全化学名称为4-羟乙基哌嗪丙磺酸，是一种非离子两性生物缓冲剂。
常温下为白色粉末状固体，亲水性高，水溶性好。
HEPES缓冲液的应用由于培养中细胞的生长和代谢会导致培养基的环境pH值发生剧烈变化，因此，为了维持可以稳定培养细胞的环境，有必要向其中添加适量的某些生物缓冲液。
文化媒体。
但是，市场上有如此多的生物缓冲液和替代品可用于细胞培养，为什么要使用HEPES？大多数细胞的最佳培养环境是pH 7.2-pH 7.4，HEPES的缓冲范围恰好在pH 6.8-pH 8.2内，这对于细胞培养是有利的。
与其他缓冲液（例如PBS（磷酸盐缓冲盐水）和TRIS）相比，HEPES在维持细胞培养基的pH值方面具有更高的稳定性，这也是HEPES广泛用于细胞培养，组织培养，蛋白质纯化和提取，免疫沉淀，细胞裂解，活细胞成像和其他生物/生化研究的原因。
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北京索莱宝科技有限公司
TRIS-MOPS缓冲液（10×）
货号：T1510
规格：100ml/500ml
保存：2-8℃，12个月；不可冻存。
产品说明：
3-(N-吗啉基)丙磺酸简称MOPS，分子式为C7H15NO4S，分子量为209.26，CAS号为1132-61-2。
MOPS 属于生物缓冲剂，经常用于配制RNA和蛋白电泳缓冲液。
Solarbio生产的Tris-MOPS电泳缓冲液(10×)主要由tris、MOPS、EDTA、SDS组成，主要用于bis-tris凝胶的电泳缓冲液。
适合分离14-200kd的蛋白。
操作步骤（仅供参考）：
本产品为10×浓缩液，临用前稀释成1×工作浓度，可直接用去离子水稀释10倍后使用。
注意事项：
1.本产品为高倍浓缩液，环境温度较低时可能会有结晶析出，可加热助溶，待溶解完全后再行稀释使用；
密封保存，防止污染。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴手套操作。
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