电化学发光免疫分析
化学发光免疫分析
化学发光免疫分析化学发光免疫分析篇一：化学发光免疫分析方法化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。
其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态，当中间体由激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而实现定量分析。
化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物，因化学发光具有荧光的特异性，但与荧光产生需要激发光不同，化学发光由化学反应产生光强度，并不需要激发光，从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。
化学发光免疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。
免疫分析系统是将化学发光物质或酶标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。
化学发光分析系统是在免疫反应结束后，加入氧化剂或酶的发光底物，化学发光物质经氧化剂的氧化后，形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。
待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。
一、化学发光免疫分析方法的类别化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为3 大类，即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。
（一）化学发光免疫分析化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。
目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。
1. 鲁米诺类标记的化学发光免疫分析。
鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。
在碱性溶液中，鲁米诺可被许多氧化剂氧化发光，其中H2O2最为常用。
因发光反应速度较慢，需添加某些酶类或无机催化剂。
酶类主要是辣根过氧化物酶（HRP），无机类包括O3、卤素及Fe3+、Cu2+、Co2+和它们的配合物。
鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下，被H2O2等氧化剂氧化成3－氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子。
鲁米诺的发光光子产率约为0.01，最大发射波长为425 nm。
罗氏电化学发光原理
罗氏电化学发光原理罗氏电化学发光原理是指在电化学发光（Electrochemiluminescence，ECL）过程中，通过电化学手段激发物质发光的原理。
这一原理在生物医学领域中有着广泛的应用，特别是在免疫分析和生物传感器领域。
本文将对罗氏电化学发光原理进行详细介绍，以便更好地理解其在实际应用中的作用。
首先，罗氏电化学发光原理的基本过程是通过电化学反应来产生激发态物质，从而激发发光。
这一过程通常涉及到两种基本的反应，氧化还原反应和化学发光反应。
在氧化还原反应中，通过施加电压或电流，使得电极上的物质发生氧化还原反应，产生激发态物质。
而在化学发光反应中，激发态物质通过与另一种物质发生化学反应，释放出光子，产生发光现象。
这两种反应的结合，构成了罗氏电化学发光的基本原理。
其次，罗氏电化学发光原理的应用主要集中在生物医学领域。
在免疫分析中，罗氏电化学发光被广泛应用于检测生物分子，如蛋白质、核酸和细胞等。
通过将待测物与特定的标记物结合，利用罗氏电化学发光技术来检测标记物的信号强度，从而实现对待测物的定量分析。
在生物传感器领域，罗氏电化学发光也被用于构建高灵敏度、高选择性的生物传感器，用于检测生物分子的存在和浓度。
此外，罗氏电化学发光原理还具有许多优势。
首先，它具有高灵敏度和高选择性，能够在复杂的生物样品中进行精准的分析。
其次，罗氏电化学发光技术还具有快速、简便的特点，适用于高通量的实验操作。
此外，由于其不需要外部光源的激发，可以减少背景信号的干扰，提高检测的准确性。
总的来说，罗氏电化学发光原理是一种重要的生物分析技术，具有广泛的应用前景。
通过对其原理和应用的深入理解，可以更好地推动生物医学领域的研究和应用，为人类健康事业做出更大的贡献。
在实际应用中，我们需要不断改进和优化罗氏电化学发光技术，提高其灵敏度、稳定性和成本效益，以满足不断增长的生物医学研究和临床检测需求。
相信随着技术的不断进步和创新，罗氏电化学发光原理将会发挥更加重要的作用，为人类健康事业带来更多的突破和进步。
评价电化学发光免疫分析法(ECLIA)在梅毒检测中的应用效果
评价电化学发光免疫分析法 (ECLIA)在梅毒检测中的应用效果【摘要】目的探讨电化学发光免疫分析法(ECLIA)在梅毒检测中的应用效果。
方法梅毒患者血清标本51例和非梅毒患者血清样本91例，运用电化学发光免疫分析法和毒螺旋体抗体(ELISA)进行检测，对比敏感度、特异性和准确性。
结果电化学发光免疫与毒螺旋体抗体的敏感度为100％、98.04%，而特异性98.90%、100％，对比两方法差异无统计学意义(P>0.05)。
ECLIA方法在敏感性方面高于ELISA方法。
结论 ECLIA用于梅毒检测中，有着很高的敏感度，有着较高的特异性，且准确性也很高，在进行梅毒检测的时候，操作上比较的简便，能够进行快速的检测，结果较为客观，有着较好的重复性等。
【关键词】电化学发光免疫分析法；梅毒检测；诊断梅毒是一种慢性全身性性传播疾病，该疾病的引发主要由苍白密螺旋体苍白亚种感染造成的，梅毒的传染性非常强，能够对全身各器官进行侵犯，对多器官造成损害，对人们的身心健康造成严重的影响。
近年来我国梅毒的发病率呈现攀升的趋势[1]。
但部分梅毒感染者由于有着较长的潜伏期而没有明显的症状，难以及早地发现，若是没有得到有效的治疗，容易引发严重的并发症。
在对梅毒进行诊断的时候，梅毒血清检测是重要的指标。
选择敏感性高、特异性高、准确性高的检测方法，能够使筛查和诊断更加的快速、准确，从而符合检测机构的要求，这显得十分的重要。
本文对梅毒检测中使用的电化学发光免疫分析法进行了研究，现报告如下。
1资料和方法1.1一般资料将2019年5月-2020年8月收治的经过病史询问、临床症状分析、血清学试验诊断，确诊51例梅毒患者血清标本，91例非梅毒患者血清标本，样本年龄介于22至78岁之间，平均（40.11±3.57）岁。
1.2 方法使用E601电化学发光免疫分析仪，还有与之相配的梅毒检测试剂，通过化学发光免疫来对苍白密螺旋抗体机械能检测苍。
免疫化学发光法
免疫化学发光法免疫化学发光法是一种具有高灵敏度、高特异性的免疫分析方法，在生物医学领域得到了广泛应用。
下面是关于免疫化学发光法的各个方面的介绍。
1.直接法直接法是一种简单的免疫化学发光技术，通过将特异性抗体与发光标记物直接结合，形成免疫复合物，然后测定复合物发出的光强度，从而实现对目标分子的定量检测。
直接法的应用范围广泛，如肿瘤标志物、病毒和细菌等微生物的检测。
使用直接法时需要注意保证抗体的特异性，以及避免非特异性结合的影响。
2.间接法间接法是通过将特异性抗体与酶或化学发光物质结合，形成酶或化学发光标记的抗体，然后将该抗体与目标分子反应，形成免疫复合物，最后加入相应的底物或激发剂，根据发光强度实现对目标分子的定量检测。
间接法的灵敏度较高，适用于多种生物分子的检测。
需要注意的是，要确保抗体的特异性以及发光标记物的稳定性。
3.竞争法竞争法是一种免疫化学发光技术，通过将特异性抗体与目标分子和发光标记的竞争性抗体结合，形成免疫复合物，然后测定复合物发出的光强度，实现对目标分子的定量检测。
竞争法的应用范围包括激素、病毒和肿瘤标志物等生物分子的检测。
使用竞争法时需要注意保证竞争性抗体的特异性，以及避免非特异性结合的影响。
4.夹心法夹心法是一种免疫化学发光技术，通过将特异性抗体与目标分子和发光标记的抗体分别结合，形成夹心状的免疫复合物，然后测定复合物发出的光强度，实现对目标分子的定量检测。
夹心法的灵敏度较高，适用于多种生物分子的检测。
需要注意的是，要确保抗体的特异性和发光标记物的稳定性。
5.斑点免疫法斑点免疫法是一种将特异性抗体或抗原点状固定在支持物上的免疫分析方法。
在斑点免疫法中，待测样品中的目标分子与已固定的抗体或抗原相互作用，形成免疫复合物，然后加入发光标记物，形成点状发光。
通过测量发光强度，实现对目标分子的定量检测。
斑点免疫法的优点是灵敏度高、特异性强、操作简便，适用于多种生物分子的检测。
需要注意的是，要确保固定化抗体或抗原的特异性和稳定性。
化学发光免疫分析的类型-临床医学检验考试
化学发光免疫分析的类型-临床医学检验考试化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型：（一）化学发光酶免疫测定化学发光酶免疫测定（CLEIA）是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。
经过酶和发光两级放大，具有很高的灵敏度。
以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。
应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶，发光底物为dioxetane磷酸酯，固相载体为磁性微粒。
（二）化学发光免疫测定化学发光免疫测定（CLIA），是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。
吖啶酯是较为理想的发光底物，在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。
用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件：1.能参与化学发光反应医学`教育网搜集整理。
2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。
3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。
4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫活性。
鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。
（三）微粒子化学发光免疫分析该免疫分析技术有两种方法：一是小分子抗原物质的测定采用竞争法；医学|教育网搜集整理二是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。
该仪器所用固相磁粉颗粒极微小，其直径仅1.0μm，这样大大增加了包被表面积，增加抗原或抗体的吸附量，使反应速度加快，也使清洗和分离更简便。
其反应基本过程：（1）竞争反应：用过量包被磁颗粒的抗体，与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育，其免疫反应的结合形式有两种，一是标记抗原与抗体结合成复合物；二是测定抗原与抗体的结合形式。
（2）双抗体夹心法：标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式，即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。
（四）电化学发光免疫测定电化学发光免疫测定（ECLI）是一种在电极表面由电化学引发的特异性发光反应，包括电化学和化学发光两个部分。
分析中应用的标记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生N-羟基琥珀酰胺（NHS）酯，可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合，制成标记的抗体或抗原。
化学发光免疫分析技术
化学发光免疫分析技术发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态跃迁到激发态，然后再返回到基态，并释放光子的过程。
化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的化学能使分子激发而发光。
化学发光免疫分析是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的标记免疫分析技术，分为直接化学发光免疫分析，化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析。
化学发光免疫分析的类型一、直接化学发光免疫分析二、化学发光酶免疫分析三、电化学发光免疫分析发光免疫分析:是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。
发光:是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态（较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返回到基态，并释放光子的过程。
根据形成激发态分子的能量来源不同可分为:光照发光、生物发光、化学发光等。
光照发光（photoluminescence）是指发光剂（荧光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可见光（荧光）。
生物发光（bioluminescence）是指发生在生物体内的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP能，生成激发态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子的形式释放出来。
化学发光（chemiluminescence）是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。
某些物质(发光剂)在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。
一些化学反应能释放足够的能量把参加反应的物质激发到能发射光的电子激发态，若被激发的是一个反应产物分子，则这种反应过程叫直接化学发光。
若激发能传递到另一个未参加化学反应的分子D上，使D分子激发到电子激发态，D分子从激发态回到基态时发光，这种过程叫间接化学发光。
化学发光免疫分析技术原理简介(精)
化学发光免疫分析技术原理简介20 世纪60 年代即有人利用化学发光法测定水样中细菌含量和菌尿症患者尿液检查。
1977 年Halman 等将化学发光系统与抗原抗体反应系统相结合，创建了化学发光免疫分析法，保留了化学发光的高度灵敏性，又克服了它特异性不足的缺陷。
近年来对技术与仪器的不断改进，使此技术已成为一种特异，灵敏，准确的自动化的免疫学检测方法。
1996 年推出的电化学发光免疫技术，在反应原理上又具有一些新的特点。
这两种技术目前已在国内一些大型医院实验室用于常规免疫学检验。
一、化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法( chemiluminescence immunoassay , CLlA) 是把免疫反应与发光反应结合起来的一种定量分析技术，既具有发光检测的高度灵敏性，又具有免疫分析法的高度特异性。
在CLIA中，主要有两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。
免疫反应系统与放射免疫测定中的抗原抗体反应系统相同化学发光系统则是利用某些化合物如鲁米诺( luminol) 、异鲁米诺(isolu-minol) 、金刚烷( AMPPD) 及吖啶酯( AE) 等经氧化剂氧化或催化剂催化后成为激发态产物，当其回到基态时就会将剩余能量转变为光子，随后利用发光信号测量仪器测量光量子的产额。
将发光物质直接标记于抗原(称为化学发光免疫分析)或抗体上(称为免疫化学发光分析) ，经氧化剂或催化剂的激发后，即可快速稳定的发光，其产生的光量子的强度与所测抗原的浓度可成比例。
亦可将氧化剂(如碱性磷酸酶等)或催化剂标记于抗原或抗体上，当抗原抗体反应结束后分离多余的标记物，再与发光底物反应，其产生的光量子的强度也与待测抗原的浓度成比例。
发光免疫分析的灵敏度高于包括RIA 在内的传统检测方法，检测范围宽，测试时间短，仅需30 - 60min 即可。
试剂货架寿命长，稳定性好，具有大规模自动化测试的功能。
这项技术发展很快，已有许多厂商生产各具特色的测定仪器与配套试剂。
电化学发光免疫分析技术与临床应用
行 ，产 生 许多 光 子 ，光 电倍增 管 检测光 强 度 ，光强
度与 ［ ｕ（ｐ ） 的浓度呈线性关系，可测 出待 Ｒ ｂｙ３ ］
配 体 的含量 。 电化学 发光 免 疫分 析采 用链 霉 亲 和素一 生 物素 包 被技 术 ，这是 一 种新 型 生物反 应 放大 系统 。以直 径 为 ２８ｌｎ的磁 性 球 作 为 载 体 ，反 应 面积 比板 式 ．ａ 扩大了 ２ ３ ０～ ０倍 ，利 用 生 物 素 一链 霉 素 亲 和 素 的 牢 固结 合力 ，免 疫放 大 能力 和反 应 系统 中 的磁分 离 功 能 ，使免 疫 反应 在微 球表 面快 速 进行 。并 且 ，电
分析 ，能为 临床 准确 ，及 时 的诊 断疾 病 ，监 测治疗 效 果 显得 十 分必要 。 由于普通 的细菌 培养 方法 往往 存 在 培养 时 问过 长等 诸 多缺 陷 ，因此 ，现 在很 多 实 验 室 都在 寻求 快速 、灵敏 的检 测 方法 。研 究表 明用
放 大 核酸 序列 分析 的方法 对食 物 中沙 门杆 菌进 行检 测 ，结 果 表 明 ，应 用 Ｅ ＬＡ 技 术 在 １ 就 可 得 ＣＩ ８ｈ后
电化学 活性 底物 在 反应 中引起 的光 子发 射 。含三 丙
发光过 程产生许 多光子 ，使光信号 得 以增 强。因 此 ，其 检测 灵 敏度 大为 提 高 ，可达 到检 测浓 度小 于 １ ｍ ｌＬ的超 微量 物 质 ，线性 范 围也 可达 ６个 数 量 ｏ Ｐ ／
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
按检测形式分类 液相:反应经离心或分离措施后测定 固相:固定在固相载体中检测 均相:在液体中进行,不经离心或分离
电化学发光免疫分析
固相载体
电化学发光免疫分析
在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体 (抗原)，用三联吡啶钌标记抗体(抗原)，在反应体系内待测标 本与相应的抗原 (抗体)发生免疫反应后，形成磁性微粒包被 抗体-待测抗原-三联吡啶钌标记抗体复合物，这时将上述复合 物吸入流动室，同时引人TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表 面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记抗 体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光 反应，使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电 化学发光，光的强度与待测抗原的浓度成正比。
电化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析
三大经典酶免技术
发 光
酶 免
放 射
免
疫
免
疫
技疫Βιβλιοθήκη 技 术术技 术
电化学发光免疫分析
按标记物分类
化学发光免疫分析(鲁米诺) 化学发光酶免疫分析(辣根过氧化物酶,HRP) 微粒子化学发光免疫分析(二氧乙烷,磷酸脂)
电化学发光分析(三联吡啶钌)
生物发光免疫分析法(荧光素)
电化学发光免疫分析
稳定性:
钌化合物稳定性好,常温下半衰期 可达一年以上.被标记的蛋白活性在
2~5度可保持一年以上.试剂稳
定,35度可放置3周,标准曲线形态基 本保持不变
电化学发光免疫分析
应用 激素 病毒检测 肿瘤标志物
谢 谢！
Thank you!
第二步：
将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生 物素通过与亲和素的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体，形成双 抗体夹心法。
电化学发光免疫分析
下一步，蠕动泵将形成的[Ru(bpy)3]2+－抗体－抗原－抗体－磁珠复合 体吸入流动测量室，此时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。 同时，游离的TSH抗体（与生物素结合的和与[Ru(bpy)3]2+结合的抗体） 也被吸出测量室。紧接着，蠕动泵加入含三丙胺（TPA）的缓冲液，同时电 极加电压，启动ECL反应过程。发光剂[Ru(bpy)3]2+和电子供体TPA在阳极 表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应，使二价的[Ru(bpy)3]2+被氧 化成三价，后者是一种强氧化剂；另一方面，TPA 被氧化成阳离子自由基 TPA+●，后者很不稳定，可自发失去一个质子（H+），形成自由基TPA●， 这是一种很强的还原剂，可将一个电子给三价的[Ru(bpy)3]3+，使其形成 激发态的[Ru(bpy)3]2+，而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。激发态的 [Ru(bpy)3]2+通过荧光机制衰减，发射出一个波长620nm的光子，重新生 成基态的[Ru(bpy)3]2+。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光 子，光电倍增管检测光强度，光强度与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系， 故可测出待测抗原的含量。
电化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析
项目广泛 : 三联吡定钌NHS可与与蛋白质,
半抗原激素,核酸等各种化学物结合, 因此检测项目很广泛
例如检测小分子蛋白抗原时可采 用竞争法,检测大分子抗原时可采用 夹心法,检测抗体时可采用夹心法等
电化学发光免疫分析
灵敏度:<1pmol, 线性:>10000 时间:<20min
电化学发光免疫分析
发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态（较低能级）跃迁到激发态（较高能级）， 然后再返回到基态，并释放光子的过程。根据形成激发态分子的能量来源不同可分为: 光照发 光、生物发光、化学发光等。
电化学发光免疫分析
在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，称为化学发光剂 或发光底物。
三联吡啶钌
电化学发光免疫分析
原理：以电化学发光剂三联吡啶钌标记 抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体， 在电 场中因电子转移而发生特异性化学发光 反应，它包括电化学和化学发光两个过程。
电化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析
以TSH为例 第一步：
结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)3]2+ + N羟基琥珀 酰胺酯（NHS）的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血 清同时加入一个反应杯中，孵育9分钟。