紫外分光光度计测蛋白浓度
大豆中蛋白质含量的测定实验报告
大豆中蛋白质含量的测定实验报告大豆是一种富含蛋白质的植物，因此对大豆中蛋白质含量的测定非常重要。
本实验旨在通过化学方法测定大豆中蛋白质的含量，并对结果进行分析和讨论。
实验材料和仪器：1. 大豆样品2. 硫酸钠溶液3. 氢氧化钠溶液4. 酸性消化液5. NaOH溶液6. 氮气吹扫装置7. 精密天平8. 恒温水浴9. 离心机10. 紫外分光光度计实验步骤：1. 准备大豆样品：将大豆磨成粉末，并将其过筛以获得均匀的颗粒大小。
2. 水解反应：取一定量的大豆样品加入酸性消化液中，放入恒温水浴中进行水解反应，使蛋白质完全水解为氨基酸。
3. 碱解反应：将水解后的溶液中加入适量的NaOH溶液，使溶液呈碱性，以便将其他干扰物质转化为不溶性沉淀。
4. 沉淀处理：将碱解后的溶液进行离心处理，将沉淀分离出来。
5. 沉淀洗涤：用硫酸钠溶液对沉淀进行洗涤，去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的沉淀放入烘箱中干燥，直至恒定质量。
7. 称重：使用精密天平称取干燥后的沉淀质量。
8. 光度计测定：将一定量的沉淀溶解于适量的NaOH溶液中，使用紫外分光光度计测定溶液的吸光度。
9. 蛋白质含量计算：根据标准曲线，计算出大豆中蛋白质的含量。
实验结果与分析：根据实验测定，我们得到了大豆样品中蛋白质的含量。
通过对标准曲线的分析，我们可以得知大豆样品中蛋白质的浓度。
从实验结果中可以看出，大豆中蛋白质的含量较高，这也符合我们对大豆富含蛋白质的认识。
在实验中，我们采用了水解和碱解的方法，这是常用的蛋白质测定方法之一。
水解反应将蛋白质水解为氨基酸，使其更容易测定；碱解反应则将其他干扰物质转化为不溶性沉淀，方便后续步骤的进行。
为了准确测定大豆中蛋白质的含量，我们进行了沉淀处理和洗涤步骤，以去除杂质。
这些步骤的目的是提高测定的准确性和精确度。
同时，干燥步骤的进行可以保证质量的恒定，进一步提高测定结果的可靠性。
通过紫外分光光度计的测定，我们可以得到溶液的吸光度，进而计算出蛋白质的浓度。
球蛋白提纯实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在通过盐析法和凝胶层析法，对血清中的球蛋白进行提纯，并通过醋酸纤维素薄膜电泳法鉴定提纯后的球蛋白纯度。
二、实验原理血清中的蛋白质根据电泳法可分为五类：清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和δ-球蛋白。
其中，β-球蛋白含量约占血清总蛋白的16%，每100 mL血清中约含1.2 g左右。
不同种类的蛋白质在分子量、溶解度以及带电荷情况上存在差异，这些差异是进行蛋白质分离和提纯的基础。
1. 盐析法：利用清蛋白和球蛋白在高浓度中性盐溶液中溶解度的差异进行沉淀分离。
在半饱和硫酸铵溶液中，球蛋白沉淀析出，而清蛋白仍溶解在溶液中。
通过离心分离，沉淀部分即为含有β-球蛋白的粗制品。
2. 凝胶层析法：利用蛋白质与无机盐类之间分子量的差异进行分离。
当溶液通过Sephadex G-25凝胶柱时，分子直径大的蛋白质不能进入凝胶颗粒的网孔，而分子直径小的无机盐能进入凝胶颗粒的网孔。
在洗脱过程中，小分子的盐会被阻滞而后洗脱出来，从而达到去盐的目的。
3. 醋酸纤维素薄膜电泳法：用于鉴定提纯后的β-球蛋白纯度。
通过电泳分离蛋白质，根据其迁移率判断纯度。
三、实验材料与仪器材料：1. 血清2. 硫酸铵3. Sephadex G-25凝胶4. 醋酸纤维素薄膜5. 电泳缓冲液6. 标准蛋白质仪器：1. 离心机2. 凝胶层析装置3. 电泳装置4. 显微镜四、实验步骤1. 盐析法提纯：a. 将血清与硫酸铵溶液混合，使硫酸铵浓度达到半饱和。
b. 将混合液置于离心机中，以3000 r/min离心15分钟。
c. 取上清液，沉淀即为含有β-球蛋白的粗制品。
2. 凝胶层析法去盐：a. 将Sephadex G-25凝胶加入凝胶层析装置中，加入适量蒸馏水平衡。
b. 将粗制品加入凝胶层析装置中，让其自然洗脱。
c. 收集洗脱液，即为去盐后的β-球蛋白。
3. 醋酸纤维素薄膜电泳鉴定：a. 将去盐后的β-球蛋白与标准蛋白质混合，进行电泳分离。
紫外可见分光光度计的作用
紫外可见分光光度计的作用紫外可见分光光度计是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的实验仪器，它的作用十分重要。
本文将从多个角度来探讨紫外可见分光光度计的作用。
一、测定物质的吸光度紫外可见分光光度计主要用于测定物质的吸光度。
通过测量物质在紫外和可见光波段的吸收情况，可以得到物质在不同波长下的吸光度谱。
这对于研究物质的结构、浓度、反应动力学等都具有重要意义。
例如，可以通过测定DNA或蛋白质样品在不同波长下的吸光度，来研究其浓度、纯度以及构象的变化。
二、定量分析物质浓度紫外可见分光光度计可以利用比尔－朗伯定律，根据样品溶液的吸光度与溶液中物质的摩尔浓度之间的线性关系，来定量分析物质的浓度。
这种方法被广泛应用于药物分析、环境监测、食品检测等领域。
例如，可以利用紫外可见分光光度计测定水中重金属离子的浓度，从而判断水质的安全性。
三、反应动力学研究紫外可见分光光度计在反应动力学研究中也发挥着重要作用。
通过监测反应体系吸光度的变化，可以研究反应的速率、反应机理等。
例如，可以利用紫外可见分光光度计测定酶催化反应体系中底物浓度的变化，来研究酶的催化机制。
四、质量控制和质量保证紫外可见分光光度计在药物生产、食品加工等领域中，被广泛应用于质量控制和质量保证。
通过测定样品的吸光度，可以判断样品的成分是否符合要求，从而保证产品的质量。
例如，药品生产中可以利用紫外可见分光光度计测定药物样品中的杂质含量，确保药品的安全性和有效性。
五、教学和科研紫外可见分光光度计在教学和科研中也扮演着重要角色。
它是化学、生物等专业学生进行实验的常用仪器，通过实验操作可以帮助学生更好地理解光谱学原理和测量方法。
同时，紫外可见分光光度计也是科研人员进行实验研究的重要工具，为他们提供了可靠的数据支持。
紫外可见分光光度计在化学、生物、医药等领域中具有广泛的应用。
它可以用于测定物质的吸光度、定量分析物质浓度、研究反应动力学、质量控制和质量保证，同时也在教学和科研中发挥着重要作用。
分光光度计测定物质浓度实验
绘制图表：将 实验数据绘制 成图表，便于 观察和分析数 据的变化趋势。
数据分析：对 实验数据进行 分析，找出可 能存在的误差 和干扰因素， 提高实验的准
确性。
添加标题 添加标题 添加标题 添加标题
数据保存：将 实验数据保存 在安全的地方， 以备后续分析
和参考。
添加标题
添加标题
关闭电源，拔掉电源线
添加标题
● 烧杯：用于溶解、稀释、混合等操作 ● 试管：用于少量试剂的反应或测试 ● 滴定管：用于精确滴定液体体积 ● 容量瓶：用于精确配制溶液 ● 离心管：用于离心分离液体和固体 ● 移液管：用于精确转移液体 ● 漏斗：用于过滤或转移液体 ● 玻璃棒：用于搅拌、转移液体或固体 ● 滴定管夹：用于固定滴定管 ● 玻璃器皿清洗剂：用于清洗玻璃器皿
数据分析：根 据处理后的数 据，分析物质 的浓度和吸光 度之间的关系
结果展示：将 分析结果以图 表或文字的形 式展示在PPT 中
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浓度计算公式： C=A/V
A：吸光度，V：溶 吸光度A可以通过 溶液体积V可以通 浓度C可以通过浓 浓度计算结果可以
度、数据处理
04
注意事项：避免样品污染、保持仪器清洁、
Байду номын сангаас
正确操作仪器
● 实验试剂：硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、 硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、 硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫 酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫 酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫 酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫 酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫 酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸 锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸 钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸 银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸 铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸 锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸锡、硫酸银、硫酸铜、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫酸钙、硫酸锌、 硫酸亚铁、硫酸铝、硫酸锰、硫酸钴、硫酸镍、硫酸铅、硫酸镉、硫酸
紫外分光光度计标准曲线
紫外分光光度计标准曲线
一、引言
紫外分光光度计是一种常用的实验室仪器，广泛应用于生物、化学、药物等领域。
为了保证其准确性和可靠性，必须建立标准曲线，以便进行质量控制和数据比对。
本文将详细介绍紫外分光光度计标准曲线的建立方法及其应用。
二、仪器和试剂
仪器：紫外分光光度计
试剂：纯化水、乙醇、盐酸、标准蛋白
三、实验步骤
1.制备标准溶液
将标准蛋白溶解于盐酸中，稀释至一定浓度，用纯化水调节pH值。
将溶液转移到紫外分光光度计比色皿中备用。
2.建立标准曲线
分别取10 ml盐酸、10 ml纯化水和10 ml标准蛋白溶液，加入比色皿
中，用紫外分光光度计测定其吸光度值。
根据吸光度值绘制标准曲线。
重复上述步骤，以确保数据准确性和可重复性。
3.样品测试
将待测试样品溶解在乙醇中，并按照建立的标准曲线测定其吸光度值。
根据标准曲线和测试结果计算样品中目标物质的浓度。
四、结果与分析
通过以上实验操作，建立了目标物质的标准曲线，同时也测定了待测
试样品中目标物质的浓度。
通过比较标准曲线和样品测定结果，可以
确定样品中目标物质的浓度，从而实现质量控制和数据比对。
五、结论
紫外分光光度计标准曲线的建立是实验室工作中重要的一步。
通过采
用本文所述实验步骤，可以准确、快速地建立标准曲线，并用于定量
分析样品中目标物质的浓度。
同时，需要注意实验过程中的各项细节，避免误差的产生，以提高实验结果的准确性和可靠性。
紫外分光光度法原理
紫外分光光度法原理
紫外分光光度法是一种常用的分析化学方法，它利用物质对紫外光的吸收来进
行定量或定性分析。
其原理是基于物质分子在紫外光照射下吸收特定波长的光能，从而产生电子跃迁，使得物质分子发生能级跃迁，从而产生吸收现象。
这种吸收现象与物质的结构和化学键有关，因此可以通过测定吸光度来确定物质的浓度或进行化合物的鉴定。
紫外分光光度法的原理基础是比尔-朗伯定律，该定律表明物质溶液对紫外光
的吸收与其浓度和光程成正比。
根据比尔-朗伯定律，可以利用吸光度与浓度之间
的线性关系来确定物质的浓度。
这种原理使得紫外分光光度法成为一种简单、快速、准确的分析方法，被广泛应用于生物化学、药物分析、环境监测等领域。
紫外分光光度法的工作原理是通过紫外可见分光光度计来实现的。
该仪器利用
光源产生一定波长的光，经过样品后，光强度的变化被探测器检测到，并转化为电信号。
根据比尔-朗伯定律，吸光度与浓度成正比，因此可以根据样品吸光度的测
定值来计算出物质的浓度。
在实际应用中，紫外分光光度法可以用于测定各种有机化合物、药物、生物分
子等的浓度。
例如，可以利用紫外分光光度法来测定DNA、蛋白质、激素等生物
分子的浓度，也可以用于药物的含量分析，甚至可以用于环境水样中有机物的监测。
总之，紫外分光光度法是一种重要的分析方法，其原理基于物质对紫外光的吸
收现象，利用比尔-朗伯定律来实现浓度的测定。
通过紫外分光光度法，可以快速、准确地测定各种有机化合物的浓度，具有广泛的应用前景。
紫外吸收法测定蛋白质含量
紫外吸收法测定蛋白质含量（一）原理蛋白质分子中含有酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸等残基，它们的结构中具有共轭双键，对紫外光有吸收作用，其最大值在280nm波长处。
在此波长附近，蛋白质溶液的光吸收值与其含量（范围是0.1~1.0mg/ml）成正比，因此，280nm的吸光度可用作蛋白质的定量测定。
若将已知不同浓度的蛋白质标准溶液在280nm处测定，并作标准曲线，即可求得未知溶液的蛋白质浓度。
此法测定迅速，用量较少，而且不消耗样品和试剂。
但若样品中含有其他在280nm吸收的物质，如嘌呤嘧啶等化合物时，就有干扰作用。
（二）试剂及器材（1）标准蛋白质溶液：准确称取经凯氏定氮法校正的结晶牛血清白蛋白，配制成浓度为1mg/ml的溶液。
（2）待测蛋白质溶液：浓度为1mg/ml左右的蛋白质溶液。
（三）操作1. 280nm的光吸收法（1）标准曲线的绘制：取8支试管，编号后按下表加入试剂。
管号试剂(ml)1 2 3 4 5 6 7 8标准蛋白质溶液0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.0 蒸馏水 4 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0蛋白质浓度（mg/m l）0 0.1250.250.3750.50.6250.751.OD280混匀，选用光程为1cm的石英比色杯，在紫外分光光度计280nm波长处以0号管调“零”分别测定各管溶液的光密度（OD280）。
以纵坐标为光密度值，横坐标为蛋白质浓度绘出标准曲线。
（2）样品测定：取待测蛋白质溶液1ml，加入蒸馏水3ml，混匀，按上述方法测定280nm波长处的光密度值，并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。
2．280nm和260nm的吸收差法将待测的蛋白质溶液稀释到光密度在0.2 ~2.0之间，在波长280nm和260nm处以相应的溶液作空白对照，分别测得待测样品的光密度值（OD280和OD260）。
应用280nm和260nm的吸收差法经验公式直接计算出蛋白质浓度。
His标签蛋白纯化实验步骤
His标签蛋白纯化实验通过实验，学习和了解 His-Tag 融合蛋白的表达、纯化原理和方法，掌握相关仪器设备的操作使用。
一、实验原理金属螯合离子亲和色谱（IMAC）是常见的亲和纯化方案之一，主要利用介质配体螯合的金属离子吸附纯化表面带组氨酸、色氨酸或半胱氨酸残基的蛋白。
His-tag 融合蛋白是目前最常见的表达方式，而且很成熟，它的优点是表达方便而且基本不影响蛋白的活性。
Ni IDA Beads 可以用于各种表达来源（如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞）的组氨酸标签（6xHis-tagged）蛋白的纯化。
它是以 4%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联了三配位的亚氨基二乙酸（IDA），螯合镍离子（Ni ）后，可以形成比较稳定的平面四边形结构，从而有更多的位点与组氨酸标签上的咪唑环继续配位，达到结合目的蛋白的效果（产品化学结构见图 1.1 所示）。
二、实验准备试剂菌种、LB 培养基、氨卞青霉素、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)、His-Tag 蛋白纯化试剂盒实验仪器和设备移液器、恒温振荡箱、超声破碎仪、离心机、紫外检测仪、冰箱三、实验步骤第一步、菌体制备1、取 2 支 4ml LB 培养基试管，超净台中操作。
每管加入 4ul 菌种，4ul 氨卞青霉素。
放入 37 度恒温振荡箱 180rpm，过夜培养，16 小时。
2、将菌种加入 800ml LB 培养基，800ul 氨卞青霉素，放入 37 度恒温振荡箱 180rpm培养 4 小时，OD600 约 0.6-0.8。
3、加入 IPTG 800ul，放入 37 度恒温振荡箱 180rpm 培养 4 小时。
4、离心 8000rpm 离心 10min 收集菌体，-80 度保存菌体。
第二步、菌体破碎1、将菌体取出，加入 50ml Lysis Buffer 磁力搅拌悬浮，待无明显块状即可。
2、超声 4s 停 6s，36°保护温度，超声 30min。
3、将破碎好的裂解液离心取上清（11000rpm ,20min ,4℃），准备上样。
bca测蛋白浓度原理
bca测蛋白浓度原理BCA测蛋白浓度原理。
BCA蛋白定量法（Bicinchoninic Acid Assay）是一种用于测定蛋白质浓度的方法，它是通过将蛋白质与BCA试剂中的铜离子在碱性条件下形成紫色螯合物，然后通过比色法来测定螯合物的光密度，从而间接反映蛋白质的浓度。
BCA法相对于传统的Lowry法和Bradford法，具有灵敏度高、线性范围广、对常见干扰物质的抗干扰能力强等优点，因此在生物化学和分子生物学领域得到了广泛的应用。
BCA测蛋白浓度的原理主要包括以下几个方面：1. 蛋白质与BCA试剂的反应。
BCA试剂是由硫代巯基双胺（DTT）、碱性氢氧化钠、蛋白质还原剂（如硫代巯基乙酸钠）和BCA螯合剂（如双肌酮）组成的。
在碱性条件下，蛋白质与BCA试剂中的铜离子结合形成紫色螯合物，螯合物的光密度与蛋白质的浓度成正比。
因此，通过测定螯合物的光密度，可以间接测定蛋白质的浓度。
2. 比色法测定蛋白质浓度。
BCA法测定蛋白质浓度的关键在于比色法。
在螯合物形成后，可以利用紫外-可见分光光度计测定螯合物的光密度，进而计算出蛋白质的浓度。
BCA法对于常见的蛋白质（如牛血清白蛋白）有很好的线性响应，因此可以通过标准曲线来准确测定未知样品的蛋白质浓度。
3. 干扰物质对测定的影响。
在进行BCA测蛋白浓度时，一些干扰物质可能会影响测定结果。
例如，一些还原剂、螯合剂和胶体物质都可能对BCA法的测定结果产生干扰。
因此，在进行测定时，需要对可能的干扰物质进行充分的考虑，并采取相应的措施来减小干扰的影响。
总的来说，BCA测蛋白浓度的原理是基于蛋白质与BCA试剂中的铜离子在碱性条件下形成紫色螯合物，然后利用比色法测定螯合物的光密度来间接测定蛋白质的浓度。
在进行测定时，需要注意干扰物质对测定结果的影响，以及采取相应的措施来减小干扰的影响。
BCA法作为一种快速、灵敏、准确的蛋白质浓度测定方法，在生物化学和分子生物学领域得到了广泛的应用。
实验4+紫外吸收法测定蛋白质含量
• 本法操作简便迅速，且不消耗样品(可以回收)，低
浓度的盐类不干扰测定，在蛋白质和酶的生化制备 及其它研究中应用广泛，多用于纯化之蛋白质的微 量测定，尤其是适合于柱层析分离中蛋白质洗脱情 况的检测。 • 核酸在280nm波长下也有一定吸收能力，可能发生 干扰。混有核酸时必须分别测定280nm和260nm两
误差。
• (4) 比色皿内盛液应为其容量的2/3～3/4，过少会 影响实验结果，过多易在测量过程中外溢，污染 仪器。 • (5) 拿放比色皿时，应持其“毛面”，杜绝接触 光路通过的“光面”。如比色皿外表面有液体， 应用滤纸吸干，以保证光路通过时不受影响。 • (6) 若待测液浓度过大，应适当稀释，一般应使 吸光度读数处于0.1～0.8范围内为宜。
实验七 紫外吸收法测定蛋白质含量
一、 实验目的：
• 学习紫外分光光度法测定蛋 白质含量的原理； • 熟练掌握紫外分光光度计测 定原理及使用方法。
二、 实验原理：
• 由于蛋白质中存在着酪氨酸、色氨酸及苯 丙氨酸残基，它们的结构中具有共轭双键， 对紫外光有吸收作用，其吸收高峰在 280nm波长处，且在此波长内吸收峰的光 密度值OD280nm与其浓度（范围是 0.1~1.0mg/ml）成正比关系，280nm的吸 光度故可作为蛋白质定量测定的依据。
?由于蛋白质中存在着酪氨酸色氨酸及苯丙氨酸残基它们的结构中具有共轭双键对紫外光有吸收作用其吸收高峰在对紫外光有吸收作用其吸收高峰在280nm波长处且在此波长内吸收峰的光密度值波长处且在此波长内吸收峰的光密度值od280nm与其浓度范围是0110mgml成正比关系280nm的吸光度故可作为蛋白质定量测定的依据
四、操作步骤
• 1．标准曲线制作
• 按表1分别向每支试管内加入各种试剂，混 匀。以光程为1cm的石英比色杯，在 280nm波长处测定各管溶液的光密度值 OD280nm。 • 以蛋白质浓度为横坐标，光密度值为纵坐 标，绘出标准曲线。
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紫外分光光度法测定蛋白质含量
一、实验目的
1.学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。
2.掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。
3.掌握TU-1901紫外可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理
1.紫外-可见分光光度法，是以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。
紫外光：10-400 nm
可见光：400-780 nm(可被人们的眼睛所感觉)
特点：带光谱、分子光谱应用：定性分析最大吸收波长; 定量分析：朗伯-比尔定律(标准曲线法和标准加入法)
a.定性分析原理：吸收曲线：吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状
b.定量分析原理：根据朗伯-比耳定律： A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
c. 仪器组成部件: 各种类型的紫外可见分光光度计，如下图所示，从总体上来说是由五个部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装置。
2.本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验原理：
(1)蛋白质可作定量分析的原因：蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，所以蛋白质溶液在275--280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。
在一定浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，服从朗伯-比耳定律，因此可作定量分析。
该法测定蛋白质的浓度范围为0.1—1.0mg/mL。
(2)此种方法测量的准确度差一点的原因：由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同，所处的微环境也不同，所以不同蛋白质溶液在280nm的光吸收职也不同。
据初步统计，浓度为1.0 mg/mL的1800种蛋白质及蛋白质亚基在280nm的吸光度在0.3—3.0之间，平均值为1.25+/-0.51。
所以此种方法测量的准确度差一点。
(3)有嘌呤、嘧啶等核酸类干扰时的经验公式：若样品中含有嘌呤、嘧啶等核酸类吸收紫外光的物质，在280nm处来测量蛋白质含量时，会有较大的干扰。
核酸在260nm 处的光吸收比280nm更强，但蛋白质却恰恰相反，因此可利用280nm及260nm的吸收差来计算蛋白质的含量。
常用下列经验公式计算：蛋白质浓度
(mg/mL)=1.45A280-0.74A260 (A280和A260分别为蛋白质溶液在280nm和
260nm处测得的吸光度值) 还可以通过下述经验公式直接计算出溶液中的蛋白质的含量：蛋白质浓度(mg/mL)=F* A280*D*1/d
其中A280为蛋白质溶液在280nm处测得的吸光度值;
d为石英比色皿的厚度(cm);
D为溶液的稀释倍数;F为校正因子
(4)稀溶液中蛋白质浓度测定的经验公式：蛋白质的肽键在200—250nm有强的紫外吸收。
其光吸收强度在一定范围与浓度成正比，其波长越短，光吸收越强。
若选用
215nm可干扰及光散射，用215nm和225nm光吸收差值与单一波长测定相比，可减少非蛋白质成分引起的误差，因此，对稀溶液中蛋白质浓度测定，可选用215nm和225nm光吸收差法。
常用下列经验公式：蛋白质浓度(mg/mL)=0.144(A215-A225)
(A215和A225分别为蛋白质溶液在215nm和225nm处测得的吸光度值
三、仪器与试剂
仪器：TU-1901紫外-可见分光光度计，比色管(10ml的5个)，吸量管。
试剂：标准蛋白质溶液：5.00 mg/mL溶液、0.9% NaCl 溶液，待测蛋白质溶液(牛血清白蛋白)。
四、实验步骤
1.基本操作
(1)启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器,预热半小时。
(2)用吸量管分别吸取0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL 5.00 mg/mL标准蛋白质溶液于5只10 mL 比色管中，用0.9% NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。
用1 cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液为参比(参比溶液不可取出).
(3)在工作界面上选择测量项目为光谱扫描，设置扫描参数(起点：400nm，终点：250nm，速度：中，间隔：1.0nm，单次扫描)
(4)将两个均装有0.9%NaCl溶液的1cm石英比色皿放入测量池中，进行基线扫描，然后选定量测定，校零，在调回光谱扫描。
2.吸收曲线的制作:(找出最大吸收波长) 将放在前面的比色皿中溶液换为0.3 mg/mL 的蛋白质溶液，点击START进行扫描，得到如下吸收曲线，从曲线中我们可以看出此标准蛋白质溶液的最大吸收波长为278nm，此波长下的吸光度为0.1984。
3. 标准曲线的制作：在工作界面上选择测量项目为光度测量设置测量条件 ( 测量波长： 278.00 nm) 。
用 1 cm 石英比色皿，以 0.9%NaCl 溶液为参比，在 278nm 处分别测定以上所配标准溶液的吸光度 A278 ，记录如下：以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线：
4. 样品测定：配制三份待测蛋白质溶液， ( 取待测蛋白质溶液 2.0mL 分别于 3 只10mL 比色管中，用 0.9% NaCl 溶液稀释至刻度 ) 按上述方法测定 278 nm 处的吸光度。
得吸光度依次为 0.3906 ， 0.3765 ， 0.3848 。
平均值为 A278=0.3840, 根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度为 0.6101mg/mL 。
转换后待测蛋白质溶液的浓度为 C= 0.6101mg/mL •10 mL /2.0mL=3.0505mg/mL。