巴氏染色原理及操作步骤
13.巴氏染色液
巴氏染色液说明书【产品名称】巴氏染色液【产品名称】巴氏染色液PAP Staining Solutions【产品编号】PAP-500ml,PAP-1000ml,PAP-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml 2500ml；橘黄G6染色液500ml、1000ml 2500ml；EA50染色液500ml、1000ml 2500ml。
【预期用途】主要用于对脱落细胞的组织细胞学染色。
【检验原理】巴氏染色液由3部分组成：苏木素染色液、橘红G6染色液和EA50染色液。
苏木素染色液，是一种针对正常以及变态细胞学涂片染料，对核膜、核质、核仁染色效果非常清晰。
涂片标本可是妇科或非妇科的，如痰液，尿液及细胞学穿刺样本。
为获得优质的染色效果，苏木素染液技术完全按照帕氏染色法，以及OG-6染液；EA 31染液；同时供应选择性多色复染染料，如EA50试剂；EA65试剂，满足细胞学染色需求。
橘黄G6染色液，是橘黄G (Orange G) 染料添加磷酸（PMA）后的酒精溶液。
Papanicolaou染色，首先用苏木素将细胞核染色，之后用OG-6 试剂和EA试剂继续染色。
橘黄G染料对细胞质染色，并保持在成熟细胞和角质化细胞。
之后的EA试剂对未染色的细胞组分染色，如鳞状细胞，核仁，纤毛，红细胞。
测试样本可为妇科细胞样本和非妇科细胞样本，如痰液，尿液，细胞穿刺等。
为获得优质的染色效果，OG-6试剂特性与其他用于Papanicolaou染色法中染色试剂-苏木素试剂，EA 31试剂，及对比染色试剂EA50试剂，EA65试剂相符。
EA50染色液,为伊红Y和亮绿SF酸（加入了磷钨酸，PTA）染液的酒精溶液。
Papanicolaou染色，首先用苏木素将细胞核染色，之后用OG-6 试剂和EA试剂继续染色。
橘黄G染料对细胞质染色，并保持在成熟细胞和角质化细胞。
之后的EA试剂对未染色的细胞组分染色，如鳞状细胞，核仁，纤毛，红细胞。
实验五 人体细胞Barr氏小体的制备与观察
间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微米大小的反光极强 的颗粒状亮点，即为巴氏小体。材料不同，观察结果 可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核 膜较远或接近核中央制备与观察
一、实验目的
掌握 X - 染色质鉴别方法，识别 X - 染色质的 形态特征及部位。
二、原理
巴氏小体，又叫巴尔体（Barr body），指雌性动物的体细胞在间期 时，在核膜内面的一块染色很深的染色质。巴氏小体实际上是浓缩 了的X染色体，其上的基因不转录。 哺乳动物的雌性细胞有两个X染色体，其中一条来自母方，另一条 来自父方，在胚胎发育的早期，这两个X染色体中的一条浓缩形成 巴氏小体，因此雌性哺乳动物的体细胞中都含有一个巴氏小体和一 个能转录的X染色体，而雄性哺乳动物的体细胞有一条可转录的X 染色体和一条Y染色体。随着细胞分裂，巴氏小体也要复制，但上 面的基因从不转录。如果这个动物是三倍体，体细胞中也只有一个 能转录的X染色体，其余的X染色体都会浓缩形成巴氏小体。 巴氏小体只有女性有，巴氏小体数=X染色体数-1。
三、材料
人口腔黏膜细胞
四、方法步骤——人体细胞Barr氏小体的制备与观察 用灭菌牙签刮取口腔黏膜细胞； 涂片与风干（涂抹一下，不要来回涂）； 染色及压片（滴卡宝品红压片）： 染色10min后，盖上盖玻片，一头蒸馏水冲 洗，另一头用滤纸吸干。
五、观察结果——Barr body
观察人不同形态的X-染色体，并绘图
巴氏小体_实验报告
一、实验目的1. 掌握巴氏小体的制备方法；2. 观察并识别巴氏小体的形态特征及所在部位；3. 了解巴氏小体的形成机制及生物学意义；4. 通过实验学习显微镜操作技巧。
二、实验原理巴氏小体（Barr body）是指在雌性哺乳动物细胞中，除了活跃的X染色体外，另一条X染色体在间期细胞核中发生异固缩而形成的深染小体。
巴氏小体是X染色质的一种表现形式，其形成机制与性别决定和剂量补偿效应有关。
三、实验材料1. 生理盐水；2. 固定液（甲醇:冰醋酸=3:1）；3. 巴比妥缓冲液（pH 7.4）；4. 染色液（苯酚品红染液）；5. 显微镜；6. 载玻片；7. 盖玻片；8. 牙签；9. 吸管；10. 镜台；11. 镜头；12. 光源。
四、实验步骤1. 取材：受检者清水漱口数次，用洁净牙签从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次，第一次舍去，第2、3次分别涂于干净载玻片上。
拔取女性带有毛囊的头发（约2cm），置于载玻片上。
2. 固定：将置于离心管中的材料（口腔粘膜细胞），首先2000rpm离心20min，弃上清，加入新配置的固定液（甲醇:冰醋酸=3:1），37℃下静置30min。
3. 染色：加入苯酚品红染液，染色约20min。
4. 洗涤：用生理盐水冲洗载玻片，去除多余的染液。
5. 观察与计数：在显微镜下观察细胞核，寻找巴氏小体。
对每个视野内的细胞核进行计数，记录巴氏小体的数量。
6. 数据处理：计算巴氏小体的出现频率，并与文献报道的正常女性口腔粘膜细胞中巴氏小体出现的概率（30%~50%）进行比较。
五、实验结果1. 巴氏小体在女性口腔粘膜细胞中普遍存在，且数量较为稳定。
2. 巴氏小体的出现频率在30%~50%之间，与文献报道的正常女性口腔粘膜细胞中巴氏小体出现的概率相符。
六、实验分析1. 巴氏小体的制备与观察方法简便易行，能够较好地反映女性细胞中X染色质的形态与数量。
2. 巴氏小体的存在与性别决定和剂量补偿效应密切相关。
HE染色和巴氏染色两种不同方法在宫颈液基细胞检查中应用价值
HE染色和巴氏染色两种不同方法在宫颈液基细胞检查中应用价值1. 引言1.1 背景介绍宫颈液基细胞检查是一种常见的癌症筛查方法，通过对宫颈细胞进行染色和观察，可以及早发现潜在异常细胞的存在，从而帮助医生及时进行治疗和干预。
而在宫颈液基细胞检查中，HE染色和巴氏染色是两种常用的染色方法。
HE染色是指用苏木精红染色液对细胞组织进行染色，然后通过镜检查细胞结构和形态的变化，从而判断细胞是否正常。
HE染色在宫颈液基细胞检查中具有较高的分辨率和清晰度，可以清晰显示细胞的核质比和细胞核的形态，有利于医生进行细胞学分析和诊断。
巴氏染色是一种特殊的染色方法，可以通过染色剂对细胞核进行染色，使异常细胞核在显微镜下呈现出特殊的形态和颜色。
巴氏染色在宫颈液基细胞检查中常用于检测细胞的DNA含量和核型，可以帮助医生判断细胞的恶性程度和预后。
HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中发挥着重要的作用，它们可以相互补充，提高检测的准确性和灵敏度，为患者提供更准确的诊断和治疗方案。
1.2 研究目的研究目的是通过比较分析HE染色和巴氏染色两种不同方法在宫颈液基细胞检查中的应用价值，探讨它们在临床实践中的优劣势和适用范围。
具体来说，我们的研究目的包括以下几个方面：1. 比较HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中的染色效果和细胞形态学分析的准确性，评估它们对细胞结构和形态的显现能力。
2. 探讨HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中的操作流程和技术难易度，比较它们的操作成本和时间消耗。
3. 调查HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中的临床应用情况和效果评价，探讨它们在筛查、诊断和预后评估等方面的作用及价值。
通过深入研究HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中的不同应用价值，我们旨在为临床医生提供更具参考意义的细胞学诊断方法，促进宫颈疾病的早期发现和治疗，提高宫颈液基细胞检查的准确性和可靠性。
1.3 意义宫颈液基细胞检查是一种重要的筛查方法，可用于早期发现宫颈病变及癌变，对于提高宫颈癌的早期发现率和治疗效果具有重要意义。
巴氏染色液EA 染色液使用说明书
用液体基质的细胞学方法（LBC），刷子刷下细胞学样本，立即浸入固定液（CitoFix）
固定。染色前，从固定液中分离样本细胞（离心固定液），置于载玻片上，准备
进一步染色。
巴氏（Papanicolaou）染色法，进行性染色：
染色之前，样本材料应收集并固定于载玻片上。
如样本已经用 CitoSpray 固定并干燥，应放置于 95 % 乙醇（Histanol 95）中
染色结果：
蓝色—细胞核
黄色至橙色—角质化细胞
粉色至红色—表皮鳞状细胞，红细胞，核仁，纤毛
绿色—其他细胞胞质（副基底和中层鳞状细胞，柱状细胞，多核细胞白细胞，淋
巴细胞，组织细胞，腺癌细胞及未分化癌细胞）
【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C 和 +25°C
之间。保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接
阳光直射。产品使用效期为 2 年，具体效期见标签。
【适用仪器】不适用
【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进
行实验。
为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。
根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。 【参考文献】
上海科汇生物技术有限公司
1. Papanicolaou, G.N. (1941): Some improved methods for staining vaginal smears. J Lab Clin Med. 2. Papanicolaou, G.N. (1942): A new procedure for staining vaginal smears. Science. 3. Carson, F.L., Hladik C. (2009): Histotechnology: A self-instructional text, 3rd ed. ASCP Press.
HE染色和巴氏染色两种不同方法在宫颈液基细胞检查中应用价值
HE染色和巴氏染色两种不同方法在宫颈液基细胞检查中应用价值【摘要】宫颈液基细胞检查是一项重要的筛查方法，而HE染色和巴氏染色是其中常用的染色方法。
本文从染色原理和特点入手，探讨了两种染色方法在宫颈液基细胞检查中的应用价值。
HE染色可以清晰显示细胞核和细胞质，有利于细胞形态学的分析和诊断；而巴氏染色则能够突出核蛋白质，有助于观察病理性细胞改变。
通过比较两种染色方法的优劣，我们发现结合使用可以提高宫颈液基细胞检查的准确性，进一步优化细胞学诊断的技术和方法。
结合HE染色和巴氏染色的优势，能够更全面地评估细胞形态学的特征，为临床诊断提供更加可靠的依据。
【关键词】关键词：HE染色、巴氏染色、宫颈液基细胞检查、应用价值、原理、特点、比较、优势、准确性、细胞学诊断、技术、方法。
1. 引言1.1 HE染色和巴氏染色两种不同方法在宫颈液基细胞检查中应用价值HE染色是一种广泛应用的染色方法，其原理是利用不同细胞结构和染色质的亲和性，通过镜下观察不同颜色反映出细胞的特征。
在宫颈液基细胞检查中，HE染色可以帮助医生明确细胞形态、结构和异型细胞的出现，从而提高癌前病变和癌症的诊断准确性。
相比之下，巴氏染色是一种特异性染色方法，其原理是利用特定的染色剂选择性染色细胞某些成分，如细胞核或核蛋白。
巴氏染色在宫颈液基细胞检查中能够更加清晰地显示细胞核的形态和结构，有助于鉴别异常细胞和癌细胞。
HE染色和巴氏染色在宫颈液基细胞检查中各有其独特的应用价值，结合使用能够提高检查的准确性，进一步优化细胞学诊断的技术和方法，为宫颈癌的早期筛查和诊断提供更为可靠的依据。
2. 正文2.1 HE染色的原理和特点HE染色是一种最常用的组织学染色方法之一，它利用荧光染料霰粒子，使细胞核染色为蓝色，胞质染色为红色，从而观察细胞内各种结构和器官。
HE染色的原理主要是通过染色剂对细胞成分的亲和性，将细胞内的不同结构染色出不同颜色来，以帮助研究和诊断细胞组织的形态结构。
人类X染色质（巴氏小体）制备与观察
⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）制备与观察⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）的制备与观察摘要巴⽒⼩体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染⾊体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染⾊⼩体，在遗传学、细胞观察⽅⾯有重要意义。
实验中作者取⼈⼝腔颊部上⽪细胞与发根⽑囊细胞进⾏硫瑾染⾊操作，通过显微观察对巴⽒⼩体进⾏识别与计数，描述巴⽒⼩体的形态，并统计其在不同性别⼈体细胞中的出现率。
引⾔在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除⼀条X染⾊体外，其余的X染⾊体失活并呈异固缩状态，此即为巴⽒⼩体。
⼜称X⼩体、性染⾊质，直径约1µm，通常位于间期核膜边缘。
1949年，加拿⼤学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现⼀种染⾊很深的⼩体，⽽在雄性猫中则极少出现[1]。
通常⼈类男性细胞核中很少或没有巴⽒⼩体，⽽⼥性有1个，性染⾊体异常的患者如XXY、XXYY、XXX、XXXY等，巴⽒⼩体的数量＝X染⾊体数量－1。
综合巴⽒⼩体与哺乳动物性染⾊体的剂量补偿效应，Lyon M．F 于1961年提出Lyon 假说，主要内容有：(1)正常的雌性哺乳动物两条X染⾊体只有⼀条在遗传上有活性，另外⼀条失活；(2)X染⾊体失活是随机的。
因此表达是随机的，结果在杂合⼦中会出现嵌合现象（mosaic）。
例外：有袋类失活的X染⾊体全部是⽗⽅的。
(3)失活发⽣在胚胎发育的早期，如⼈在受精后的16天（5000-6000个细胞时）。
⼀个细胞的⼀条染⾊体⼀旦失活，这个细胞的后代细胞中该染⾊体均失活。
Lyon假说虽然可以解释⼀些问题但不是全部，如⼈类中的44AXO型个体表现为Turner 综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合症。
随着⽣物学和医学的发展⼈们已经认识到单条X染⾊体失活现象是普遍存在的，但失活的染⾊体上存在失活区和⾮失活的。
如⼈类中位于X染⾊体上的基因，G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶⾎第Ⅷ因⼦）等是⾮失活的，⽽Xg⾎型基因是失活的。
人类巴氏小体的制备及观察
X染色质检查的临床应用
正常女性间期细胞 核中X染色质阳性率 为10％－30％，而 男性则低于1％。 X染色质
核膜
性别的快速鉴定 胎儿性别鉴定
实验步骤
取口腔上皮细胞涂于载玻片上，自然干燥
甲醇，冰醋酸（3：1）固定15分钟， 干燥 依次放入95%乙醇、70%乙醇、50%乙醇，蒸馏水中， 5NHcl分化5秒钟 蒸馏水漂洗3次，
相关概念：
剂量补偿效应：指在xy性别决定的生物中，使 性连锁基因在两种性别中有相等或近乎相等的 有效剂量的遗传效应。 主要类型： 1.X染色体的转录速率不同（果蝇）。 2.雌性体细胞中有一条x染色体是失活的。 （人、哺乳类）
Lyon假说： 1961年由Lyon提出，又称单个活性X染色体 假说。 1．正常雌性哺乳动物的体细胞中，两条X染 色体中只有一条有活性(activation X, Xa)， 另一条失活(inactivation X, Xi)； 2．失活是随机的； 3．失活发生在胚胎发育的早期； 4．杂合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体 (mosaic)。
实验原理
X染色质的相关知识：发现过程及基本形态 形成过程 本质 临床应用
发现过程及其基本形态
1. 1949年Barr等在雌猫 的神经元细胞中发现 一种浓缩小体，而雄 猫无。而且在其他物 种的雌性个体组织细 胞核中都有。因此X染 色质又称Barr小体。
X染色质的形成过程
女性：46，XX 男性：46，XY
性别的快速鉴定胎儿性别鉴定取口腔上皮细胞涂于载玻片上自然干燥甲醇冰醋酸固定15分钟干燥依次放入95乙醇70乙醇50乙醇蒸馏水中5nhcl分化秒钟蒸馏水漂洗每次23分钟23分钟硫堇染色10分钟染色质的识别方法
实验一
人类细胞中巴氏小体的观察
快速巴氏染色液 注意事项
快速巴氏染色液注意事项快速巴氏染色液是一种常用的细胞染色方法，具有快速、简单、显色明亮等优点。
然而，在使用快速巴氏染色液时，我们需要注意一些事项，以确保染色效果的准确性和稳定性。
以下是使用快速巴氏染色液的注意事项：1. 样本制备：在进行细胞染色前，样本制备非常关键。
首先，要确保样本的新鲜度，尽量选择新鲜组织或细胞。
其次，样本处理要轻柔，避免引起细胞破裂或变形。
最后，要注意样本固定的时间和方法，固定时间过短或过长都会影响染色效果。
2. 清洗步骤：在染色之前，样本需要进行充分的清洗，以去除可能的干扰物质。
清洗步骤应该重复进行，直到洗涤液不再有颜色残留为止。
同时，要避免使用含有蛋白酶或酸碱性溶液进行清洗，以免影响细胞的形态和染色结果。
3. 染色时间控制：染色时间的控制对于快速巴氏染色液来说非常重要。
染色时间过短会导致染色不均匀或染色效果不明显，而染色时间过长则可能出现过度染色的情况。
因此，在染色之前，要根据样本类型和染色液的浓度进行试验，以确定最佳的染色时间。
4. 染色液的使用：在使用快速巴氏染色液时，要注意染色液的储存和使用。
首先，要避免染色液暴露在阳光下或高温环境中，以免影响染色效果。
其次，要定期检查染色液的有效期，过期的染色液可能会导致染色效果不佳。
最后，要遵循染色液的供应商提供的使用说明，按照正确的比例稀释染色液，避免使用过量或过少的染色液。
5. 染色结果的观察和记录：染色完成后，要仔细观察染色结果，并及时记录。
观察时要注意细胞的形态和染色的均匀性。
如果发现染色结果不理想，可以尝试调整染色时间或染色液的浓度。
同时，要将染色结果进行记录，以备后续分析和比较。
使用快速巴氏染色液时需要注意样本制备、清洗步骤、染色时间控制、染色液的使用和染色结果的观察和记录等方面。
遵循这些注意事项，可以提高染色效果的准确性和稳定性，为后续的细胞分析和研究提供可靠的基础。
巴氏或H-E染色检查
巴氏或H-E染色检查文章目录*一、巴氏或H-E染色检查的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、巴氏或H-E染色检查的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、巴氏或H-E染色检查的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、巴氏或H-E染色检查的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、巴氏或H-E染色检查的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应巴氏或H-E染色检查的基本信息1、定义巴氏或H-E染色检查是对肿瘤细胞检查方法之一,两者的详细介绍:巴氏染色法:本法染色特点是细胞具有多色性颜色,色彩鲜艳多彩。
涂片染色的透明性好,胞质颗粒分明,胞核结构清晰,如鳞状上皮过度角化细胞胞质呈橘黄色;角化细胞显粉红色;而角化前细胞显浅绿色或浅蓝色,适用于上皮细胞染色或观察阴道涂片中激素水平对上皮细胞的影响。
此方法的缺点是染色程序比较复杂。
苏木精—伊红(hemotoxylin eosin,HE)染色法:该方法染色透明度好,核与胞质对比鲜明。
染色步骤简便,效果稳定。
适用于痰液涂片,觖质核呈紫蓝色,胞质淡玫瑰红色,红细胞呈淡朱红色。
2、专科分类肿瘤科3、检查分类生化检查4、适用性别男女均适用5、是否空腹空腹巴氏或H-E染色检查的正常值和临床意义1、正常值身体处于动态平衡中,没有疾病。
2、临床意义异常结果:在恶性积液中,巴氏或H-E染色检查约60%可发现形态不规则、细胞体大小不均、胞核大并可见核仁、胞质受色较深的成堆或散在分布的恶性肿瘤细胞,易见呈腺腔样排列的腺癌细胞。
但积液中肿瘤细胞一般较难判断肿瘤的来源。
胸腔原发性肿瘤主要是恶性间皮瘤,发病率较低,约为1%-4%。
转移性恶性肿瘤约占95%左右,80%左右为腺癌,鳞癌仅占2%-3%,淋巴瘤或白血病可占5%-11%。
需要检查的人群:疑似有恶性肿瘤性胸水等相关疾病者。
巴氏或H-E染色检查的检查过程及注意事项1、检查过程肺泡-支气管灌洗液细胞学检查使用细胞离心涂片机或用离心沉淀物制成涂片,经H-E染色、巴氏染色后显微镜检查。
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巴氏染色原理及操作步骤
巴氏染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。苏木素染液，细胞核内的染色质主
要是去氧核糖核酸（DNA）,DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，
呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而被染色。苏木精在
碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。 分化：苏木素染色之后，用水洗去未结合
在细胞上的染液，但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液
1%盐酸酒精脱去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个过程称为染色的分化作
用。因酸能破坏苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。蓝化：分化之
后苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，而呈蓝色，
所以分化之后用水洗去酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变呈蓝色，
称蓝化作用，一般多用自来水浸洗即可变蓝，也可用温水（50度温水最佳）变蓝。EA50
染液的酸碱度对于巴氏染色的成功起着关键作用，EA50染液由伊红、亮绿、等染料配成。
伊红、亮绿、橘黄等属于酸性染料，在溶解媒中其发色团是负离子部分，发色团可与蛋
白质中带正电的氨基结合，从而是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色，但蛋白质所带正
负电荷的多少是随溶液的PH值而改变的，在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负
电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷钨酸在染色过程中，不但作为
媒染剂可增加染料的着色力，同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓
冲剂，可中和分化及蓝化时可能留下的少量酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于
上皮细胞及间皮组织的标本，是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法，该染色法不但
具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点。
巴氏染色法将胞核染为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿
色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色；细菌：灰色；滴虫：
淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；
红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色；腺癌胞质呈灰蓝色。
巴氏染色的操作方法及注意事项
染色有4个步骤：1、固定；2、核染色；3、胞浆染色；4、透明。
主要达到以下要求：1、核的结构清晰；2、透明度高；3、分色恰当。
一、固定
固定的目的细胞制片的迅速固定是制片过程中关键的一步，否则会影响
细胞学诊断的准确性。对于不同的标本需要不同的固定方法。最为常用的固
定方法是95％酒精作为固定液的湿固定法。酒精作为一种脱水剂能够防止细
胞内的酶捋蛋白质分解而自容，并凝固细胞内的物质如蛋白质、脂肪和糖类
等，使其保持与组织生活相仿的成分，从而使细胞各部分，尤其核染色质易
于着色。对于巴氏染色来说，酒精固定最为重要的。如果酒精浓度不足引起
的固定不佳，可造成细胞的人为变化，并可导致假阳性或假阴性的诊断。
1、固定方法湿固定法：作为用95％酒精固定液固定的细胞学标本一定
使用湿固定法。制片制备完后，趁标本新鲜而又湿润时，立即放入盛有95％
酒精的固定缸内。制片在固定液内至少保持15-30min。固定时间通常不超过
1周。这种制片染色后，颜色鲜艳，结构清晰。如果细胞制片需要送至另一
实验室或邮寄他处染色时，可以固定15min后，把制片取出后立即密封的容
器中或者使用甘油防止制片干燥。因为无论固定前或固定后的制片，如果发
生干燥后都会影响染色的效果。
2、固定注意事项固定液的过滤：为了防止细胞污染，凡是使用过的固
定液，必须过滤后才能再使用。使用过长的固定液，必须用酒精相对密度计
测定，酒精浓度低于90％时应该及时更换新液。湿固定的重要性：标本再新
鲜时及时固定时保证染色效果的重要因素。如苏木素对细胞核的染色，巴氏
染色中胞浆的特殊着色作用，均可因标本干燥后固定而大受影响。制片标本
的邮寄：标本再固定15min后取出，立即加甘油数滴于制片上，装入密封的
小盒中。实验室在收到标本后，先浸入95％酒精中，使甘油溶去，再进行染
色。
二、核染色
1、 苏木素液浸染时间一般在3-5min，但是必须随气温和燃料情况而
酌情改变。夏季或放置较久的苏木素染液容易着色，时间要缩短；冬季或新
配制的苏木素染液和应用已久较稀释的苏木素液不易着色，时间要延长。在
使用苏木素染色时，一般有2种方法：
1）过染法：首先有意识地进行深染，然后通过盐酸酸化过程使核染色
趋于合适。这种方法能够在酸化过程中把胞浆内黏附多余的苏木素染料去
掉，使胞浆染色更为鲜艳、清晰、多用于黏液多的标本。
2）淡染法：在核染色过程中，严格掌握染色时间，使核染色适宜而不
用盐酸酸化，但是胞浆中少量的苏木素会影响EA染色的质量。主要用于黏
液少的标本，避免在酸化和自 来水冲洗的过程中使细胞成片地脱落。在使
用苏木素染色时，一定要每日进行过滤，否则苏木素结晶会影响染色的质量。
一般苏木素染液可以使用较长时间，所以每日增加少量新鲜染液即可。
2、碱化碱化亦称返蓝过程，可以使用饱和碳酸锂或3％氨水碱化，目的
使苏木素及早显色，时间约数秒。更重要的是流水冲洗，可使蓝色显的更鲜
艳。碱性溶液亦需要充分漂清才不会妨碍下一步的胞浆着色及标本制成后的
颜色保存。分化和碱化溶液至少每天更换新液。
三、胞浆染色
胞浆染色在巴氏方法中亦称为OG—EA染色，它包括橘黄G（OG）和EA
两部分染色。由于橘黄G是一种小分子染料，能够很快地作用于胞浆，一般
染色时间不宜过长，通常1-2min。对于宫颈、阴道上皮中非正常角化细胞和
角化型鳞癌细胞的胞浆中都可以出现鲜艳的橘黄色。
四、封固制片
封固制片对于避免空气干燥的影响，制片经长期存放不褪色是非常重要
的。一般使用24mm×50mm或24mm×60mm的盖玻片，用二甲苯调配的中性树
胶进行封固。
五、透明
染色的最后一步是透明，使细胞的色度与细胞的重叠不致影响镜下检
查。这是在脱水与制片封固之间的一项重要步骤。最常用的透明溶剂使二甲
苯，二甲苯的折射率在1.494，载玻片的折射率在1.515，两者较为匹配。
如果二甲苯溶液出现颜色或变得浑浊，一定要更换新液。 巴氏染色操作流
程 95％乙醇固定（15min）→清水冲洗多次→苏木素染液（3-5min）→清水
冲洗三次→蓝化→95％乙醇漂洗→橙黄染液（1-10s）→95％乙醇漂洗→95％
乙醇漂洗→100%乙醇漂洗→EA50（3-5m）→95％乙醇漂洗→95％乙醇漂洗→
无水乙醇漂洗→无水乙醇（2min）→二甲苯（2min）→中性树胶封片
染色注意事项
1、细胞核着色不佳
（1）细胞核着色过浅：
1）盐酸分化时间过长或苏木素染液时间过长。需要缩短分化时间或延
长碱化时间；每日加入少量新鲜苏木素染液或重新配制苏木素液。
2）在固定之前制片干燥。所以对巴氏染色的制片需要严格遵守湿固定
的原则。
3）自来水的PH值偏酸性。使用碱性溶液。
（2）细胞核着色过深：
1）盐酸溶液浓度不够。适当加入几滴盐酸以增加浓度。
2）制片用高于95％以上浓度的酒精固定后可以出现染色过深。应用95％
酒精固定。
2、细胞浆着色不佳
（1）如果全片内胞浆都淡染，则需要延长染色时间或更换新液。
（2）如果胞浆不分色，均为浅红色。制片在固定前干燥或制片被有大
量球菌样细菌影响胞浆染色。此情况可以适当增加染色时间能够部分纠正不
分色状况。
（3）胞浆染成灰色或紫色，是由于苏木素染色时间过长或盐酸分化不
佳。经过褪色后重新苏木素可以纠正。
（4）由于标本的不同，同样配方的EA染液可造成偏蓝、偏绿和偏红，
对不同的标本应该使用不同的EA染液。一般认为，EA36和EA50用于妇科标
本，而EA65或改良EA用于非妇科标本。
（5）胞浆不分色的另一重要原因是由于EA染液的PH值不恰当所致。
如染色为红色，可以加少许磷钨酸溶液纠正；如染色均为蓝色或绿色，可以
加少许饱和碳酸锂溶液纠正。对于改良EA染液，每100ml染液加入2ml冰
醋酸后染色效果更佳；染液使用更持久