HNL、PCT、CRP及膜联蛋白A1对COPD合并呼吸系统感染的诊断价值

山东医药２０１７年第５７卷第６期　ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ及膜联蛋白Ａ１对ＣＯＰＤ　合并呼吸系统感染的诊断价值　

黄志卫　，陆玲　（１钦州市第一人民医院，广西钦州５３５０００；２北海市第四人民医院）　

摘要：目的探讨血清中性粒细胞载脂蛋白（ＨＮＬ）、降钙素原（ＰＣＴ）、Ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）及外周血单个核细胞　中膜联蛋白Ａ１表达对慢性阻塞性肺疾病（ＣＯＰＤ）合并呼吸系统感染的诊断价值。方法　选择ＣＯＰＤ患者１５２例，　其中合并呼吸系统病毒感染４７例（病毒感染组）、细菌感染６３例（细菌感染组）、无感染４２例（对照组）。分别采用　ＥＬＩＳＡ法、化学发光法和免疫速率法检测各组血清ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ，采用实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ法检测各组外周血单个核细胞中膜联蛋白Ａ１　ｍＲＮＡ及蛋白表达。结果　细菌感染组血清ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ水　平高于病毒感染组和对照组（Ｐ均＜０．０５），病毒感染组ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ水平与对照组比较Ｐ均＞０．０５。细菌感染　组ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ阳性率分别为９４．５８％、８５．７１％、７３．０２％，均高于病毒感染组和对照组（Ｐ均＜０．０５），病毒感染　组血清ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ阳性率与对照组比较Ｐ均＞０．０５。以对照组为阴性组，以细菌感染组为阳性组构建ＲＯＣ曲　线，ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ诊断细菌感染的灵敏度分别为９１．４３％、８２．９１％和７８．２２％，特异度分别为９４．７１％、９１．３５％和　８２．４４％，阳性预测值分别为９０．２１％、７０．８１％和６０．７３％。细菌感染组及病毒感染组患者外周血单个核细胞中膜　联蛋白Ａ１　ｍＲＮＡ及蛋白表达水平较对照组均升高，病毒感染组高于细菌感染组（Ｐ均＜０．０５）。结论　联合检测　血清ＨＮＬ、ＰＣＴ和ＣＲＰ有助于ＣＯＰＤ合并呼吸系统细菌感染和病毒感染的鉴别诊断，外周血单个核细胞中膜联蛋　白Ａ１的表达可作为其有力补充。　关键词：慢性阻塞性肺疾病；中性粒细胞载脂蛋白；降钙素原；Ｃ反应蛋白；膜联蛋白Ａ１；呼吸系统感染　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－２６６Ｘ．２０１７．０６．０１７　中图分类号：Ｒ５６３　文献标志码：Ｂ　文章编号：１００２－２６６Ｘ（２０１７）０６－００５１－０３　

慢性阻塞性肺疾病（ＣＯＰＤ）是一种以气流阻塞　为特征的慢性呼吸道疾病，易出现反复急性加重，导　致肺功能恶化甚至呼吸衰竭ｌｌＩ２］。ＣＯＰＤ急性加重　常由微生物感染诱发　］，然而病原体培养等手段费　用较高且耗时较长。因此，早期诊断ＣＯＰＤ患者呼　吸系统是否并发微生物感染及感染微生物的类型，　有助于早期干预，预防感染急性加重。研究显示，细　菌感染患者血清中性粒细胞载脂蛋白（ＨＮＬ）和降　钙素原（ＰＣＴ）水平明显升高，可用于细菌感染的早　期诊断、预后判断及疗效监测　Ｊ。膜联蛋白Ａ１是　近年新发现的一种抗炎蛋白，在调节炎症代谢产物　及单核细胞黏附过程中发挥重要作用＿５　Ｊ。本研究　根据ＣＯＰＤ患者感染的微生物类型（细菌感染和病　毒感染）进行分组，比较其血清ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ及外　周血单个核细胞中膜联蛋白Ａ１　ｍＲＮＡ及蛋白的表　达，探讨上述指标在ＣＯＰＤ患者合并呼吸系统感染　的诊断价值，为临床鉴别诊断提供快速、准确、方便　的实验室指标。　１资料与方法　１．１　临床资料收集２０１４年６月～２０１６年６月我　院收治的ＣＯＰＤ患者１５２例，男９１例、女６１例，年　龄４０～９Ｏ岁。均符合２０１４版ＧＯＬＤ中的诊断标　准。合并呼吸系统细菌感染６３例（经细菌培养证　实），男３９例、女２４例，年龄（６７±１２）岁；病毒感染　４７例（经相关病毒抗体检测证实），男２８例、女１９　例，年龄（６９　４－１０）岁；无感染４２例，男２４例、女ｌ８　例，年龄（６５　４－８）岁。人选者近期未给予抗生素或　抗病毒药物治疗。排除孕妇、合并其他感染性疾病、　恶性肿瘤、严重肝肾功能不全等疾病患者。　１．２血清ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ检测采集空腹静脉血，　离心分离血清，使用Ｒａｙｔｏ　ＲＴ－６０００全自动酶标仪检　测ＨＮＬ，全自动生化分析仪检测ＰＣＴ、ＣＲＰ。所有操　作均严格按试剂盒说明书进行。　１．３　外周血单个核细胞中膜联蛋白Ａ１　ｍＲＮＡ表　达检测　采用实时荧光定量ＰＣＲ方法。使用总　ＲＮＡ提取试剂盒提取外周血单个核细胞中的总　ＲＮＡ，逆转录合成ｃＤＮＡ。以ｅＤＮＡ为模板，按照　ｑＰＣＲ试剂盒说明书配制反应体系，进行扩增反应。　采用Ｐｒｅｍｅｒ　Ｐｒｅｍｉｅｒ软件设计引物，引物序列：上游　５　－ＣＣＴＧＧＡＴＣＧＣＡＴＡＡ　ｒＧＡＡＧＡ．３　；下游５　一ＣＴＡ一　５】　ＡＧＣＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＡｒｒＩｌＧＡＧＡ－３　。反应条件：９５℃　１０　ｍｉｎ；９５　ｃＩ＝１５　ｓ，５９℃３０　Ｓ，７２　ｏＣ　３０　Ｓ，４０个循　环。以ＧＡＰＤＨ为参照进行相对定量分析，用２－Ａ岫　法计算目的基因相对表达量。　１．４外周血单个核细胞中膜联蛋白Ａｌ蛋白表达　使用蛋白提取试剂盒提取外周血单个核细胞全蛋　白，取２０　进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺ＳＤＳ—　ＰＡＧＥ凝胶电泳，半干转１５　Ｖ　６　ｍｉｎ，５％脱脂奶粉封　闭２　ｈ，加入一抗４℃摇床孵育过夜，加入ＨＲＰ标记　的二抗，室温摇床孵育２　ｈ。凝胶成像分析仪上成像　并进行分析。以Ｂ—ａｃｔｉｎ为内参，计算膜联蛋白Ａ１　与Ｂ—ａｃｔｉｎ内参灰度值的比值。　１．５统计学方法采用ＳＰＳＳ１７．０统计软件。计数　资料以　±ｓ表示，两样本问比较采用ｔ检验，多样本　间比较采用单因素方差分析；率的比较采用　检　验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　２结果　２．１三组血清ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ水平比较细菌感　染组血清ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ较病毒感染组和对照组升　高（Ｐ均＜０．０５），病毒感染组各指标与对照组比　较，Ｐ均＞０．０５。见表１。　表１各组血清Ｉ玎　、ＰＣＴ、ＣＲＰ水平比较（ｉ±ｓ）　注：与对照组比较，　尸＜０．０５；与病毒感染组比较，　Ｐ＜０．０５。　２．２各组ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ阳性率比较　以ＨＮＬ＞　５５．９　ｇ／Ｌ、ＰＣＴ＞０．０５　ＩＸｇ／Ｌ、ＣＲＰ＞１０　ｍｇ／Ｌ为阳　性。各组ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ阳性率见表２。细菌感染　组ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ阳性率高于病毒感染组和对照组　（Ｐ均＜０．０５），病毒感染组与对照组比较，Ｐ均＞　０．０５。　表２各组ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ阳性率比较（％）　注：与对照组比较，　Ｐ＜０．０５；与病毒感染组比较，　Ｐ＜０．０５。　２．３　ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ对ＣＯＰＤ合并呼吸系统感染　的诊断价值　由于病毒感染组血清ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ　水平及阳性率与对照组比较无统计学差异，故本研　究以细菌感染组为阳性组、对照组为阴性组构建　ＲＯＣ曲线，结果显示，ＨＮＬ和ＰＣＴ的敏感性、特异性　和阳性预测值均高于传统检测指标ＣＲＰ，具有更好　的诊断价值。见表３。　５２　山东医药２０１７年第５７卷第６期　表３血清ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ对ＣＯＰＤ合并呼吸系统　细菌感染的诊断价值　２．４各组外周血单个核细胞中膜联蛋白Ａ１　ｍＲＮＡ　及蛋白表达比较细菌感染组及病毒感染组外周血　单个核细胞中膜联蛋白Ａ１　ｍＲＮＡ及蛋白表达较对　照组升高（Ｐ＜０．０５或＜０．０１），病毒感染组高于细　菌感染组（Ｐ均＜０．０１）。见表４。　表４各组外周血单个核细胞中膜联蛋白Ａ１　ｍＲＮＡ　及蛋白表达比较（ｉ±　）　

注：与对照组比较，　Ｐ＜０・０５，一Ｐ＜０．０１；与细菌感染组比　较，　Ｐ＜Ｏ．０１。　３讨论　ＣＯＰＤ急性加重指疾病过程中，患者短期内咳　嗽、咳痰、气喘和（或）喘息加重，痰量增多，呈脓性　或黏液脓性，可伴发热等炎症明显加重的表现，易导　致肺功能恶化，甚至呼吸衰竭，危及患者的生命　Ｊ。　ＣＯＰＤ的急性加重常由微生物感染诱发，主要包括　细菌、病毒和真菌等　Ｊ。病原体的分离培养是诊　断细菌感染的金标准，但细菌培养操作复杂，需要特　定的生长时间和生长环境；对标本要求高，临床上以　不合格标本居多；检出率较低，需多次留取样本反复　送检，给患者和医务人员造成负担。由于以上种种　原因，导致医务人员不能及时制定治疗方案，错过最　佳治疗时间，延误病情。病原体抗原或抗体检测的　敏感性和特异性均较高，但检测试剂只针对一种病　原体，临床应用具有一定的局限性。因此，早期诊断　ＣＯＰＤ患者呼吸系统是否并发微生物感染及感染微　生物的类型，有助于在感染早期对ＣＯＰＤ患者进行　诊断和干预，预防ＣＯＰＤ急性加重。　ＨＮＬ是载脂蛋白超家族成员，是中性粒细胞的　脱颗粒产物，在天然免疫的铁消耗抑菌策略中主要　作为乳铁蛋白的抗菌作用的补充　Ｊ。文献报道，　ＨＮＬ比ＷＢＣ、ＥＳＲ、ＣＲＰ等更能用于细菌感染的早　期诊断和动态监测，是近年来备受关注的感染性指　标。ＰＣＴ由１１６个氨基酸组成活性的降钙素前体，　主要在肝脏产生，其他如单核细胞也可产生。文献　报道，ＰＣＴ能够有效预测院内感染患者的病死率，与　山东医药２０１７年第５７卷第６期　感染密切相关【１。’“ｊ。ＣＲＰ的临床应用广泛，主要用　于细菌和病毒感染的鉴别诊断，但其峰值出现常常　滞后于炎症的发生，且在类风湿活动期、肿瘤等疾病　患者的体内亦有增高，因此ＣＲＰ临床应用效果并不　理想。本研究结果显示，ＣＯＰＤ合并细菌感染组　ＨＮＬ、ＰＣＴ、ＣＲＰ水平显著高于ＣＯＰＤ合并病毒感染　组及对照组，说明三者可用于细菌感染的早期诊断，　并可用于ＣＯＰＤ合并细菌感染和病毒感染的鉴别诊　断。细菌感染组血清ＨＮＬ和ＰＣＴ的敏感性、特异　性、阳性预测值均高于ＣＲＰ，说明ＨＮＬ和ＰＣＴ对　ＣＯＰＤ合并细菌感染的诊断价值优于ＣＲＰ，且以　ＨＮＬ更优。　膜联蛋白Ａ１是一种重要的炎症调控蛋白，在　炎性代谢产物生成、中性粒细胞、单核细胞与内皮细　胞黏附的过程中起重要作用　，　Ｊ，但膜联蛋白Ａ１　

的表达在ＣＯＰＤ合并细菌或病毒感染患者外周血单　个核细胞中的表达变化如何未见报道。本研究显　示，细菌感染组和病毒感染组外周血单个核细胞中　膜联蛋白Ａ１　ｍＲＮＡ及蛋白表达均较对照组升高，　且病毒感染组高于细菌感染组。说明膜联蛋白Ａ１　的表达变化可作为鉴别细菌和病毒感染的指标。由　于病毒感染时ＨＮＬ、ＰｅＴ、ＣＲＰ表达无明显变化，而　膜联蛋白Ａ１表达显著升高，因此膜联蛋白Ａｌ可作　为病毒性感染诊断的有力补充。文献报道，ｍｉＲＮＡ、　ｐ３８磷酸化状态等可调控膜联蛋白Ａ１表达　３Ｉ¨　，　但在ＣＯＰＤ合并细菌或病毒感染患者外周血单个核　细胞中膜联蛋白Ａ１的表达变化机制尚未可知，需　进一步研究。　综上所述，血清ＨＮＬ、ＰＣＴ联合外周血单个核　细胞膜联蛋白Ａ１检测，有利于ＣＯＰＤ合并细菌或　病毒感染的鉴别诊断；且三者检测操作简单、耗时较　短、适用性强，值得临床推广应用。　参考文献：　［１］Ｙｕａｎ　ＬＦ，Ｄａｉ　Ｘ，Ｙａｎｇ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｂｅｎｅｆｉｔｓ　ａｎｄ　ｓａｆｅｔｙ　ｏｆ　ｒｎｆｌｕｍｉｌａｓｔ　ｉｎ　ＣＯＰＤ：ａ　ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　ｒｅｖｉｅｗ　ａｎｄ　ｍｅｔａ—ａｎａｌｙ—　ｓｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｃｈｒｏｎ　Ｏｂｓｔｒｕｃｔ　Ｐｕｌｍｏｕ　Ｄｉｓ，２０１６，１１：１４７７－１４８３．　［２］Ｗｅｄｚｉｃｈａ　ＪＡ，Ｓｅｅｍｕｎｇａｌ　ＴＡＲ．ＣＯＰＤ　ｅｘａｃｅｒｂａｔｉｏｎｓ：ｄｅｆｉｎｉｎｇ　ｔｈｅｉｒ