可溶性糖测定方法
样品中可溶性糖的测定
样品中可溶性糖的测定一、目的通过对样品中可溶性糖的测定，初步掌握利用紫外-可见分光光度计进行定量的测定方法和仪器使用技术。
二、原理可溶性糖的测定方法有很多，本实验采用蒽酮比色法。
在强酸条件下，蒽酮与可溶性糖（包括还原性糖和非还原性糖）作用生成蓝绿色糖醛衍生物，该蓝绿色颜色深浅与含糖量成正比，可在625nm下进行比色测定。
三、仪器用具和试剂仪器用具：分光光度计、试管、移液管、离心机等。
试剂：蒽酮：100mg蒽酮溶于50ml浓H2S04（化学纯）中，当天配制当天使用。
蔗糖标准液（1mg/ml已配制好）：精确称取0.1000g蔗糖（分析纯），在小烧杯中加水溶解，定容至100ml，加2-3滴浓H2S04，该溶液可长期保存。
四、测定方法1．样品处理方法：将水样放入离心管中，10，000rpm离心2min后，准确吸取1ml作为待测样品，每个样品重复一次。
若是植物样品，则取干粉末样品0.05~0.1g左右, 放入塑料小试管中，加6-8ml蒸馏水，在沸水浴中煮沸20分钟，取出冷却，3500转/分离心10分钟，取上清，重复提取2次，收集上清，用蒸馏水定容至50 ml，作为待测样品，每个样品重复一次。
2．标准曲线的配制：准确吸取1mg/ml的蔗糖标准液5ml，加水定容量50ml，得到浓度为0.1mg/ml蔗糖同时取待测液1.0ml，加蒽酮4.0ml，在40℃水浴中显色10-15分钟。
（注：各管在加入蒽酮试剂时要迅速，加完后用力振荡1-2分钟。
）3.1 Cary分光光度计：打开分光光度计，机器预热5-10分钟：打开计算机，双击Carywin进入Cary软件包主菜单；双击Concentration图标，进入操作界面，单击Setup进行参数设置:仪器参数：分析波长：625nm; 狭缝：2.0nm; 丫轴读值：Abs标准曲线参数：浓度单位：mg/ml；个数：6; 浓度值：将计算所得值填入;待测样品参数：个数：20（多设，预防不够）设置完毕，单击OK，退出Setup，当右侧出现红色625nm，则表明仪器已准备好。
(整理)可溶性糖测定.
引言可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的植物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。
对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。
因此，可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。
而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中，是人体热量的最最主要来源，具有较高的营养价值。
本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。
1 蒽酮比色法1.1 原理糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关。
在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。
由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。
1.2 仪器与材料1.2.1实验仪器分光光度计，电炉，铝锅，电子天平，20ml刻度试管，刻度吸管5ml 1支、1ml 2支，漏斗。
1.2.2实验试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。
（2）浓硫酸（比重1.84）。
1.2.3实验材料植物叶片。
1.3 实验方法1.3.1标准曲线的制作取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。
然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。
然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
蒽酮比色定糖法测定可溶性糖含量
蒽酮比色定糖法测定可溶性糖含量实验目的1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2.学习求标准曲线方程—最小二乘法3. 掌握分光光度计的使用实验原理蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
上述特定的糖类物质，反应较稳定。
反应式：该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。
实验步骤1．求标准曲线方程取6只试管，按下表配制（移取）葡萄糖（G）标准溶液，沸腾7分钟取出，用自来水冷至室温，用721分光光度计比色，波长620nm，1＃管作为参比(保留)，求标准曲线方程。
（G浓度为200μg／mL，蒽酮试剂：2克蒽酮／每升85%H2SO4）2. 样品含糖量的测定（1）取菜叶（包菜和白菜两个样）准确称取1.00克剪碎研细后，放入大试管，加入25mL蒸馏水，煮沸10分钟，通过漏斗滤入250mL容量瓶中（可以抽滤），并用煮沸蒸馏水提取两次，滤液并入容量瓶中，滤纸上的残渣用水冲两次，冷却定容至刻度。
（2）吸取0.5mL 滤液于编号的三只试管中，以蒸馏水补足1.00mL；另吸取1.00mL滤液于另编号的三只试管中，加蒽酮试剂5.0mL（于冷水浴中操作），摇匀后于沸水浴中煮沸7分钟，取出冷却至室温，以求标准曲线的1＃管作为参比，用721分光光度计在620nm处测吸光度或透过率。
最小二乘法求标准曲线方程的公式：X：G 的浓度（μg／mL）Y：吸光度A＝－�ST本实验要求相关系数r≥0.99。
可溶性糖测定
可溶性糖测定1、费林试剂甲称取硫酸铜（CuSO4·5H2O，分析纯）34.6 g溶于水中，稀释至1000ml，过滤，贮于棕色瓶内。
2、费林试剂乙称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4O6H4·4H2O，分析纯）173g 溶于水中，稀释至1000ml，用石棉垫漏斗抽滤。
3、亚甲基蓝溶液称取1g亚甲基蓝（分析纯）溶于100ml水中。
4、酚酞指示剂称取酚酞（C20H14O4）1g，溶于95%酒精90ml，再加蒸馏水10ml装入滴瓶内。
5、20—30%NaOH 用粗天平称取NaOH20—30g，溶于100ml蒸馏水中6、葡萄糖标准溶液准确称取2.000g葡萄糖用水溶解后转入1000ml容量瓶中，加入浓HCl（分析纯）0.5ml，加水至1000ml。
即为2mg\ml转化糖标准溶液，可保存3—4个月。
7、费林试剂的标定取费林试剂甲、乙各5ml混合液于100ml三角瓶中，置500W电炉上加热，使其在2min左右沸腾，准确煮沸2min，此时不离开电炉，立即加入0.5%亚甲基蓝指示剂6滴，并继续以每4—5s的滴速滴加标准糖液，直至溶液蓝色褪尽为终点。
用准确滴定标准糖液的毫升数乘以标准糖液浓度（2mg\ml），即得10ml费林试剂所相当的糖的毫克数。
8、样品预处理取待测枣样品适量，去核，切块，60℃恒温箱烘干，磨碎。
称取20g 样品加入160ml水，充分混合为匀浆，双层纱布过滤至烧杯中。
9、还原糖测定用吸管取45ml待测液放入100ml容量瓶中，定溶，摇匀。
取费林试剂甲、乙各5ml加入100ml三角瓶中，加蒸馏水5ml，加热至沸，加2—3滴1%亚甲基蓝指示剂，用待测液滴定至蓝色泡沫全部褪去，呈现红色，记录待测液消耗毫升数。
待测液单糖含量（%）=滴定标准糖液的毫升数×4÷待测液滴定的毫升数10、可溶性总糖测定吸取待测液45ml于100ml容量瓶中，加水20—30ml，再加浓HCl 3ml,在80±2℃水浴加热10min，放入冷水槽中冷却后，加酚酞指示剂2滴，用20—30%NaOH溶液中和，用稀酸和稀碱调节至微红色，用水定溶。
硫酸苯酚法测可溶性总糖含量
硫酸苯酚法测可溶性总糖含量一、测定原理可溶性糖主要有能溶于水及乙醇的可溶性单糖和寡聚糖。
糖在浓硫酸作用下脱水生成糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚所合成一种橙红色化合物，在10~100mg 范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，因此可用比色法在此波长下测定。
硫酸苯酚法可以用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高且不受蛋白质存在的影响，产生的颜色稳定时间160min以上。
二、实验试剂1．90%苯酚溶液：称取90g苯酚，加蒸馏水定容至100ml。
2．9%苯酚溶液：取3ml 90%苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配先用。
3．浓硫酸（比重1.84）4．1%蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80 ℃下烘至恒重，精确称取1.000 g ，加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
5．100μg/L 蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液lml加入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。
三、仪器设备分光光度计，50ml比色管7支，移液管四、实验步骤1．标准曲线的制作取20 ml刻度试管6支，从0～5分别编号，按表1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1ml 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20 s 时间加入5ml浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8ml，在室温下放置30 min ，显色。
然后以空白为参比，在485 nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25 ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
3．测定吸取0.5ml样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5 ml，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。
由标准线性方程求出糖的量，计算测试样品中糖含量。
四、结果计算可溶性糖含量（％）X = ﹙C×D／M﹚×100X———每百克样品总糖含量C———在标准曲线上查得的糖含量（g）D———稀释倍数M———样品重量(g)。
植物体内可溶性糖含量的测定
植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
一、目的：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
二、原理糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，反应如下：糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区620nm波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。
此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，并具有灵敏度高，简便快捷，适用于微量样品的测定等优点。
三、实验材料、仪器及试剂1．材料：植物组织叶片2．仪器：分光光度计恒温水箱20ml具塞刻度试管（3支）漏斗100ml 容量瓶刻度试管试管架剪刀研钵3．试剂：（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。
（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1．葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（O D），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。
2．样品中可溶性糖的提取称取1克叶片，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。
可溶性蛋白、可溶性糖、淀粉、淀粉酶测定方法
可溶性蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝法）一、实验原理考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。
考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在465 nm，后者在595 nm。
在一定蛋白质浓度范围内蛋白质－色素结合物在595 nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。
故可用于蛋白质的定量测定。
蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2 min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1 h内保持稳定。
该反应非常灵敏，可测微克级蛋白质含量，所以是一种比较好的蛋白质定量法。
二、实验材料、仪器和试剂1.仪器设备分光光度计，离心机，研钵，2. 试剂(1)牛血清白蛋白配成1000 μg/mL和100 μg/mL。
(2)考马斯亮蓝G-250：称取100 mg考马斯亮蓝G-250溶于50 mL 90%乙醇中，加入85%（W/V）磷酸100 mL，最后用蒸馏水定容至1000 mL。
此溶液在常温下可放置一个月。
(3)90%乙醇(4)磷酸（85%，W/V）三、实验步骤：1.可溶性蛋白的提取称取新鲜植物样品约0.5 g置于研钵中，加入5 mL 4o C下预冷的浓度为50 mmol/L，pH 7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入10 mL离心管中，在4 o C冰箱中静置10 min，于15000 rpm/min下冷冻离心25 min，上清液即为蛋白提取液。
4 o C下保存备用。
2.标准曲线的绘制(1)0-100 μg/mL标准曲线的制作取6支试管，按下表数据配制0-100 μg/mL血清白蛋白液各1 mL。
准确吸取所配各管溶液0.1 mL，分别放入10 mL具塞试管中，加入5 mL考马斯亮蓝G-250试剂，盖塞，反转混合数次，放置2 min后，在595 nm下比色，绘制标准曲线。
配制0-100 μg/mL血清白蛋白液管号 1 2 3 4 5 6100 μg/mL牛血清蛋白量(mL)蒸馏水量(mL)蛋白质含量(mg)1.00.20.80.020.40.60.040.60.40.060.80.20.081.00.10(2)0-1000 μg/mL标准曲线的制作另取6支试管，按表10-2数据配制0-1000 μg/mL牛血清白蛋白溶液各1 mL。
蒽酮比色法测定可溶性糖
实验三蒽酮比色法测定可溶性糖
一、原理：糖在浓硫酸作用下可经脱水反应生成糖醛，并能进一步与蒽酮反应生成蓝绿色的糖醛衍生物，在一定浓度范围内，其颜色深浅与浓度大小成正比。
二、材料与仪器
植物叶片、分光光度计、水浴锅、漏斗、容量瓶、烧杯
三、步骤
1、取植物叶片0.15g，放入刻度试管中，加蒸馏水10ml。
2、将试管置于沸水中加热提取30min。
3、将提取液过滤，定容于25ml容量瓶。
4、取0.5ml提取液，依次加入1.5ml蒸馏水、0.5ml蒽酮乙酸乙酯溶液和5ml硫酸。
5、沸水浴保温1min。
6、630nm波长下，测定溶液吸光度值。
四、结果计算
可溶性糖含量（mg/g）=217.37X−3.0742∗25
w∗1000∗0.5。
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可溶性糖测定方法
可溶性糖测定是食品分析中常用的方法之一，用于测定食品中可溶性糖的含量。
可溶性糖是指在食品中可溶于水并能发挥甜味的一类糖类化合物，如蔗糖、葡萄糖、果糖等。
常用的可溶性糖测定方法主要有高效液相色谱法、酶法和红外光谱法等。
高效液相色谱法是一种快速、准确的测定可溶性糖的方法。
该方法利用高效液相色谱仪对样品中的糖进行分离和检测。
首先，将食品样品加热转化为液体状态，然后将样品注入高效液相色谱仪进行分离。
分离完成后，通过检测器检测出糖的吸收峰，根据峰的面积计算出样品中可溶性糖的含量。
酶法是一种常用的测定可溶性糖含量的方法。
该方法利用特定的酶催化反应将可溶性糖转化为可以检测的产物。
常用的酶包括葡萄糖氧化酶、蔗糖酶和果糖酶等。
首先，将食品样品与适当的缓冲液混合，加入酶催化剂后进行反应。
反应完成后，通过比色法或荧光法等检测方法测定反应产物的含量，从而得出样品中可溶性糖的含量。
红外光谱法是一种非破坏性的测定可溶性糖含量的方法。
该方法利用红外光的特征吸收峰来鉴定和定量可溶性糖的含量。
首先，将食品样品制备成薄片或粉末，并放置在红外光谱仪中进行测定。
红外光谱仪会发射红外光，样品对红外光的吸收谱进行测定。
通过与标准样品的比较，可以计算出样品中可溶性糖的含量。
以上是常用的可溶性糖测定方法，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，选择合适的方法需要综合考虑样品的性质、仪器设备的可用性和实验室的经验等因素。
此外，需要注意的是，不同方法可能会测得不同的结果，因此在比较不同样品或不同研究结果时需要谨慎处理。
另外，还需要注意样品的制备方法和储存条件等因素对测定结果的影响，以保证测定结果的准确性和可靠性。
总之，可溶性糖测定是食品分析中重要的一环，不同的测定方法可以提供不同角度对可溶性糖含量进行测定。
无论是高效液相色谱法、酶法还是红外光谱法，都可以根据实际需要选择合适的测定方法，以获得准确可靠的结果。