基因多态性分析
DNA多态性及其分析
DNA多态性及其分析DNA多态性是指DNA序列在人群或物种中存在的差异。
这些差异可以以单个核苷酸的替代（单核苷酸多态性，SNP）、插入（插入/缺失多态性，INDEL）或重复序列（重复序列多态性）等形式存在。
这些多态性可以对个体之间的遗传差异进行研究，并被广泛用于种系关系、疾病易感性、药物反应等方面的研究。
DNA多态性的分析是指通过不同的实验方法来研究DNA中的差异。
常用的分析方法包括PCR（聚合酶链式反应）、测序、引物扩增长度多态性（PCR-RFLP）、串联重复序列（STR）等。
下面将详细介绍各种分析方法及其应用。
PCR是一种广泛应用的DNA分析方法，通过特定的引物扩增特定DNA序列，从而实现对该序列的研究。
PCR通常通过选择性引物来扩增目标序列，然后通过电泳或测序等方法来检测PCR产物。
PCR在研究DNA多态性中被广泛应用，例如通过扩增SNP位点来研究个体的遗传差异。
测序是一种可以直接读取DNA序列的方法，可以精确地测定DNA中的碱基序列。
测序方法包括Sanger测序、NGS（Next-Generation Sequencing）等。
测序方法可以用于鉴定SNP、INDEL等多态性，并且可以在同一次实验中检测多个位点。
PCR-RFLP（引物扩增长度多态性）是一种通过PCR扩增特定DNA序列后再通过限制性酶切来检测DNA多态性的方法。
不同的基因型会产生不同的酶切片段，从而可以通过电泳等方法来检测不同的基因型。
PCR-RFLP方法简单、便宜，并且适用于大规模筛查。
STR（串联重复序列）是指在DNA中串联重复的小片段DNA序列，STR位点的多态性通常由重复单元的数目和结构差异所决定。
STR是DNA指纹分析的主要依据，可以在法医鉴定、亲子鉴定等方面发挥重要作用。
DNA多态性的分析在生物学、医学等领域有广泛的应用。
例如，在种系关系研究中，通过分析DNA多态性可以揭示不同群体或物种之间的遗传关系。
在疾病研究中，通过对DNA多态性的研究可以发现与疾病相关的位点，从而对疾病的易感性进行分析。
ACTN3基因多态性对大学生立定跳远成绩的影响分析
文体用品与科技总第464期2021年4月(上)随着分子生物学技术与理论的发展及在体育相关学科的渗透,在遗传水平上寻找影响人类运动能力的相关基因并运用到运动员的早期选拨和评价体系中成为当前体育学科领域的重要研究内容。
其中运动能力相关的基因多态性研究已成为热点之一,在运动能力候选基因的现有研究中,α-肌动蛋白3(ACTN3)基因多态性是目前备受关注的与运动能力相关的基因,是仅次于ACE 基因I/D 多态性,研究数量排在第2位的多态位点。
ACTN3基因,又称金牌基因,自被报道以来,便引起了全世界体育研究者的极大兴趣。
ACTN3是肌动蛋白的结合蛋白,在骨骼肌中主要分布于Z 线,类似于致密体,其作用是固定肌原纤维肌动蛋白微丝的排列顺序。
ACTN3基因位于人类第11号染色体q13-q14,其第16号外显子上存在C →T 多态,使编码第577位氨基酸的密码子CGA (编码精氨酸R )变为TGA (为终止信号,不编码蛋白),从而造成ACTN3的缺失,称为ACTN3基因R577X 多态性(rs1815739,或称为C1747T 多态性)。
ACTN3这个金牌运动基因被多次验证与运动能力相关,但依然存在许多矛盾的结果。
究其原因,我们主要认为可能有二:其一,不同人群的遗传背景不同,在长期的进化中可能形成了人群差异;其二,关于该基因与运动的相关性研究主要集中在R577X 这一个遗传位点,忽略了该基因其他位点对运动的影响,是否还存在其他重要突变位点。
立定跳远是我国体育测评系统的重要指标,本研究拟分析ACTN3基因的4个多态性位点rs484358、rs490998、rs1815739及rs13897对大学生立定跳远成绩的影响,以反应该基因多态性对运动能力的影响。
1、研究对象与方法1.1、对象遴选海南某高校体重评分为100分、肺活量评分大于60分的203名在校大学生作为基因分型研究对象。
对所有对象进行立定跳远成绩测定,根据标准化评分进行分组,其中低于60分为不及格组,60-75分之间为及格组,76-85分为良好组,86分以上为优秀组。
遗传多态性的分析与解读
猜灯谜的方法技巧实用1篇猜灯谜的方法技巧 1关于猜灯谜的方法技巧猜灯谜的方法技巧初入门，要多猜、多想和多记，对揭晓的谜底要逐句逐字地细加推敲，由浅入深，从简到繁，逐步做到知其然且知其所以然。
在运用谜法、掌握规律、准确猜谜上，要注意如下几点：1、琢磨谜面，字字不放有不少谜的谜面，往往“虚则实之，实则虚之”。
猜时首先要看懂弄通谜面作者的用意，对谜条上的字句要细细推敲，每个字都不能轻易放过。
如：“宋字去了盖，不作木字猜”，打一字。
乍一看，谜底明明是个“木”，可是第二句限止不能猜“木”字;再把谜面反复读上几遍，原来“宋字”两字都是宝盖头，而将两个宝盖都去掉，即成“木子”，拼起来即成了“李”。
此谜妙在“字”字实用，使猜者有联想、思索的余地。
又比如：“离闹市，才回来，忙把门儿关”，打一字。
这条谜里有几个动词：“离”、“回来”、“关”，在谜面上遇有“增、损、离、合”含义的词类，猜时要先从拆字方法入手。
“闹”离了“市”为“门”，“才”字放进去即成“闭”，“关门”的含义也暗喻“闭”字，烘托了谜底“闭”字。
还有一则：“一叶障目，有己无人”猜“自”字，方法与上面相仿。
先把“一叶”象形为“丿”，遮在“目”字上成“自”，第二句“有己无人”即“自”字的含义反扣，加深对谜底的喧染，而谜面两句又自然天成。
谜面上凡带有“去、不、离、分、来、合、有、无”等字眼的，要实用这些字，从离合的拆字法入手。
2、掌握典故，广泛联想有些谜往往巧借典故，如果不知典故的来历，就不可能猜中。
诚然，灯谜的运典要以通俗为主，不可用生疏、冷辟和大家不熟悉的典故入谜。
运典创作的灯谜佳作举不胜举。
如有条谜：“愚公之居”打成语一。
愚公移山是大家熟悉的传说故事，猜这条谜时首先要把愚公居住的环境思索一下，门前有太行山和王屋山，故第一步想到谜底离不开“山、岭、峰、岩”等字;第二步再想是愚公的居住处所，谜底可能隐“门、户、家、房”等字。
想到了这些，再将素材剪拼，可能在脑里出现“家在山前”、“门外见峰”的语句，但都不是成语，这时，如果查一下《成语词典》或再思考一下，“开门见山”即油然而生。
我国主要地方山羊品种MSTN基因的MnlⅠ酶切多态性分析
维普资讯
河 南农 业科 学
我 国 主 要地 方 山羊 品种 ＭＳ Ｎ 基 因的 Ｔ Ｍ 工酶 切 多 态 性 分 析 ｎ ｌ
刘铮铸 １ ， 祥龙 ， ，李 ２ ， 巩元 芳 李 金泉 ，
（． １ 河北科技 师范学院动物科学系 ， 河北 昌黎 ０ ６ ０ ；２ 内蒙古农业大学动物科 学与医学学院 ， ６６０ ． 内蒙古 呼和浩特 ０ ０ １ ； １０ ８ ３河北农 业大学动物科技学院 ， ． 河北 保定 ０ １０ ） ７ ０ １
ｆａｍ ｅ ｔｗｅ ｅｃｏ ｅ ｎ ｅ ｕ ｎ ｅ ．Ｔｈ ｅ ｕｔ ｈ ｗｅ ｈ ｔｉ ７ ｂ Ｂ ｇ ｎ ｔ ｐ ａ ｎ ｕ ｓｉ — ｒｇ ｎ ｒ ｌｎ ｄａ ｄｓｑ ｅ ｃ ｄ ｅｒｓ ｌ ｓ ｏ ｄ ｔ ａ ｎ３ ９ ｐ， Ｂ ｅ ｏｙ ｅｈ ｄｏ ｅｓ ｂ ｔｔ ｕ
ｒ ｇｏ ｓｏ Ｓ ｅ ｉｎ ｆＭ ＴＮ ｅ ｅ ｇｎ ．
Ｋｅ ｏｄ ：Ｇ ａ；Ｍ Ｓ ｙｗ ｒｓ ｏｔ Ｎ：Ｇ ｎ ｔ ｌ ｒｈｓ ； Ｆ Ｐ； ｎ ｅ ｅｉ ｐ ｙ ｐ ｉ ｃ ｏ ｍｏ ｍ Ｒ Ｌ Ｍ ｌ Ｉ
肌 肉抑 制 素基 因 （ ｏｔｔ ， Ｔ 又 称 生 长 Ｍｙｓ ｉ ＭＳ Ｎ） ａｎ
努比亚山羊BMPR-IB基因多态性与其产羔性状的关联分析
努比亚山羊BMPR-IB基因多态性与其产羔性状的关联分析摘要：努比亚山羊是一种重要的肉毛双用品种，其产羔性状对于肉羊生产具有重要意义。
本研究旨在探讨努比亚山羊BMPR-IB基因的多态性与其产羔性状的关联，为努比亚山羊的遗传改良提供理论依据。
通过对努比亚山羊群体进行基因多态性检测和产羔性状观测，发现了BMPR-IB基因在努比亚山羊中存在着丰富的多态性，且该基因的多态性与产羔性状之间存在显著关联。
这一研究结果为进一步挖掘努比亚山羊的遗传资源和提高肉羊生产效率提供了重要参考。
引言努比亚山羊是一种古老的山羊品种，具有优良的肉毛双用性能，被广泛分布在我国的西北地区。
努比亚山羊以其肉质细嫩、产羔性能优异而闻名，因此备受肉羊生产者的青睐。
努比亚山羊的遗传改良与繁育工作一直是肉羊产业发展的重点之一。
BMPR-IB基因作为生长发育相关基因，在肉羊的生长发育及繁殖过程中发挥着重要作用。
研究努比亚山羊BMPR-IB基因的多态性与其产羔性状的关联，对于肉羊品种的遗传改良具有重要意义。
材料与方法1. 努比亚山羊样本采集：从某努比亚山羊养殖基地中随机选择100头努比亚山羊，采集其血液样品用于后续基因多态性分析。
2. BMPR-IB基因多态性检测：提取努比亚山羊血液样品中的DNA，采用PCR扩增技术对BMPR-IB基因进行扩增，然后利用限制性内切酶进行酶切，最后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对扩增产物进行分析，检测BMPR-IB基因的多态性。
3. 产羔性状观测：记录100头努比亚山羊的产羔性状数据，包括产羔数量、产羔间隔、产羔体重等相关信息。
4. 数据统计分析：利用SPSS软件对所得数据进行统计学分析，计算BMPR-IB基因的遗传多态性指标，然后进行产羔性状与BMPR-IB基因多态性的关联分析。
结果1. BMPR-IB基因多态性分析结果表明，在努比亚山羊群体中存在着丰富的BMPR-IB基因多态性，包括单核苷酸多态性(SNP)和插入缺失多态性(InDel)。
APOE基因多态性和脑瘫患儿的关联性分析的开题报告
APOE基因多态性和脑瘫患儿的关联性分析的开题报告一、研究背景与意义脑瘫（Cerebral Palsy，CP）是一种由于婴幼儿期大脑损伤引起的运动和姿势障碍，是儿童时期最常见的运动障碍之一。
CP患病率在全球范围内为1‰-4‰，占儿童功能障碍的50%-70%。
目前认为，CP的病因很复杂，既包括环境因素，也包括遗传因素和基因多态性。
APOE基因是一个多态性基因，其多态性影响人的认知和神经发育，与多种神经系统疾病有关，并且已被证明与CP患病风险有关。
因此，对于APOE基因多态性与脑瘫患儿的关联性进行探究，有助于深入了解脑瘫的病因学机制，为制定更合理的治疗方案和预防方法提供理论依据。
二、研究内容本研究将对CP患儿和年龄、性别匹配的正常儿童进行APOE基因多态性分析，并比较两组之间的基因型和等位基因分布情况，进一步探究APOE基因多态性在CP中的作用。
数据采用SPSS统计分析软件进行处理和统计学分析。
本研究旨在明确APOE基因多态性与脑瘫患儿的关联性，为制定更合理的治疗方案和预防方法提供理论依据。
三、研究方法1. 研究对象：纳入年龄在1-6岁的脑瘫患儿200例和同龄、性别匹配的正常儿童200例。
2. 样本采集：采用外周血标本采集APOE基因多态性数据。
3. 实验方法：采用PCR-RFLP技术进行APOE基因分型，在酶切后的PCR产物上进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，最终确定基因型。
4. 数据分析：采用SPSS统计分析软件进行统计学分析，比较两组之间APOE基因的基因型和等位基因频率分布情况。
四、研究预期结果与贡献本研究预计可以发现APOE基因多态性与脑瘫患儿的关联性，并探明其作用机制，为进一步研究脑瘫的病因学机制提供重要线索。
同时，本研究可以为制定更合理的治疗方案和预防方法提供理论依据，为脑瘫患儿的康复治疗和生活品质提升做出贡献。
特发性矮小患儿Shox基因突变及多态性分析
血 ３Ⅱ ， ｄ采用酚一氯仿抽提方法提取外周血基 因组 Ｄ Ａ， Ｎ 离心后取上清液 ， ８ 一 ０℃保存备用。采用常 规 Ｐ Ｒ扩增 ， Ｃ Ｃ Ｐ Ｒ反应 总体 积 ４ ， 中含 Ｔｑ ９ 其 ａ Ｄ ＮＡ聚合 酶 １０ 、０×反应 缓 冲液 ， 行 ３ ． １ 进 ２个循 环 。Ｐ Ｒ产 物 用 １５ 琼 脂 糖 凝 胶 检 测 。 个 样 品 Ｃ ．％ 每 进行 ３ ２次 Ｐ Ｒ反 应 ， 别 扩 增 Ｓｏ Ｃ 分 ｈｘ基 因外 显 子 ， 引物设计参考文献［ 】引物序列见表 １ ２ ， 。
成熟 ） 提示 Ｓｏ 因功 能似乎 与 骨骼 线性 生 长 的 ， ｈｘ基 启 动子 和 骨 骺 融 合 的抑 制 子 有关 Ｊ ｈｘ基 因逃 。Ｓｏ 能 与样 本量 小 、 种族 或 未检 测 Ｓｏ ｈｘ外显 子 １有 关 ，
有待进一步研究。
参考 文献 ： ・
［ ］Ｒ ｎｅＭＢ ｏ ａｄ ｅｎ ｎｕ ｎｔｅ ｅｎｔ ｎｏ ｉｉ ａ ｉ ｏ １ ａ ｋ ．Ｔ ｗｒｓａ ｏｓ ｓｓ ｆ ｉｏ ｆｄｏ ｔ ｃｓ ｒ ｅ ｏ ｈ ｄｉ ｉ ｐ ｈ ｈｔ ｓ ｔｒ［ ］ ｏｍ Ｒ ｓ ９ ６４ （ ）６ －６ ｔ ｕｅ Ｊ ．Ｈ ｒ ｅ，１９ ，５ ２ ：４６ ． ａ
凋亡 的软 骨 细 胞 上 ） 泛 表 达 。有 学 者 推 测 ， 拷 广 双 贝 Ｓｏ 基 因表 达可 能 具 有 潜 在 抑 制雌 激 素对 肢 骨 ｈｘ 中远 端 的负 性 生 长 作 用 （ 制 骨 骼 生 长 ， 进 骨骼 抑 促
８１
采用 Ｐ Ｒ产 物直 接测序 方 Ｃ
山东医药 ２ １ 年第 ５ 卷第 ２ 期 ００ ０ １
３ 讨 论
小 腿短 小 、 掌骨 、 短 曲腕畸形 、 携角增 大 、 提 肘外 翻 。 １ ２ 检 测方 法 ．
上海白猪(上系)氟烷基因位点多态性分析
’ ， ， ＇ ， ， ｌ ，， ’ ， ＇ ， ｍ
表 ２平
径 ， 肉用 雏 鸡 进 行 新 城 疫 Ⅳ 系 苗 免 疫 接 种 过 程 中 ， 时 辅 对 同 助使用 Ｐ ＨＡ， 明 显 提 高 机 体 特 异 性 抗 体 的 水 平 。另 有 学 可 者 报 道 ， ＨＡ 对 猪 圆 环 病 毒 病 、 传 染 性 胃肠 炎 有 免 疫 促 进 Ｐ 猪
由表 ２ 知 ， 免 １ 可 首 ０ｄ后 ， 验 组 阳 转 率 为 ５ ％ ， 照 试 Ｏ 对
组 阳转 率 为 ３ ． ， 验 组 阳转 率 比对 照组 提 高 １ ． ３３ 试 ６ ７个 百 分 点 ， 到显著水平 （ 达 Ｐ＜Ｏ ０ ） ．５ 。
作 用 。 。本 研 究 发 现 ，５ 日龄 断 奶 仔 猪 ， 免 疫 接 种 前 试 ３ 在 验 组 与 对 照 组 抗 体 滴 度 基 本 相 同 ， 免 疫 保 护 作 用 。首 免 无 １ 后 ， 验 组 阳 转 率 显 著 高 于 对 照 组 （ ０ｄ 试 Ｐ＜ ０ ０ ） 提 高 约 ．５，
１ ． 个 百 分 点 。二 免 １ ６７ ０ ｄ后 ， 验 组 阳 转 率 与 对 照 组 比有 试
所提高 ， 有达到显著水平 ， 试验组 抗体滴 度≥ ６ 没 但 ４的 比率 比对 照 高 出 ４ ． １ ６个 百 分 点 ， 在 较 高 的 抗 体 水 平 上 。表 明 处 Ｐ ＨＡ 与 猪 瘟 活 疫 苗 联 合 使 用 于 仔 猪 猪 瘟 免 疫 接 种 ， 免 疫 其 效 果 比单 用 猪 瘟 活 疫 苗 的效 果 好 ， 对 仔 猪 抵 抗 猪 瘟 病 毒 的 能
变态反应相关基因多态性与过敏病发生风险关联分析
变态反应相关基因多态性与过敏病发生风险关联分析引言：过敏病是一类常见的免疫相关疾病，如过敏性鼻炎、哮喘和湿疹等。
尽管环境因素在过敏病发生中起着重要作用，但越来越多的研究发现，基因多态性也对过敏病的发生风险有显著影响。
本文将探讨变态反应相关基因的多态性如何与过敏病的发病风险关联，并就目前的研究进展进行综述。
一、变态反应的基本概念变态反应是机体对外界抗原产生异常的免疫反应，通常导致过敏病的发生。
变态反应的过程包括抗原递呈细胞捕获、特异性抗体合成、细胞因子的释放以及细胞介导的炎症反应等，这些过程都受到基因的调控。
因此，研究变态反应相关基因的多态性对于理解过敏病发生的机制具有重要意义。
二、变态反应相关基因多态性与过敏病关系的研究1. 组织相容性复合体(MHC)基因MHC基因是指主要组织相容性复合体中编码HLA分子的基因。
多项研究发现，MHC基因多态性与多种过敏病的发生风险密切相关。
例如，HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR等基因位点的多态性与哮喘和过敏性鼻炎的发病风险明显相关。
此外，MHC基因在不同人群中的多态性分布也可能解释了不同人群对特定过敏原的敏感性差异。
2. 组织蛋白酶抑制剂基因组织蛋白酶抑制剂基因(TPIG)编码一种抑制组织蛋白酶活性的蛋白质。
研究发现，TPIG基因多态性与过敏性疾病的发生风险相关。
例如，TPIG基因中的rs2070854位点多态性与哮喘的易感性有关。
3. 细胞因子基因细胞因子是变态反应过程中重要的调节因子，其编码基因的多态性与过敏病的发生风险相关。
以过敏性鼻炎为例，研究发现，TNF-α、IL-4、IL-10等细胞因子基因的多态性与过敏性鼻炎的易感性有关。
4. 特异性细胞表面分子基因特异性细胞表面分子与免疫细胞的识别和激活密切相关。
研究发现，CD14、CD28和CD86等基因的多态性与哮喘和过敏性鼻炎等过敏病的发病风险相关。
三、基因多态性与过敏病发生风险关联的机制1. 基因表达调控基因多态性可能影响基因的表达水平，进而调控变态反应过程中的关键分子和细胞的功能。
绵羊KAP6.1基因的遗传多态性分析
， ，
ＨＩ Ｇ － ｉ ｇ ＹＡＮＧ ｎ － ｎ Ｙｏ ｇ ｌ ２ Ｓ ｕｏ ｑ ｎ ２ ＸＵ ｏ ｇ ｘａ ｇ ＨＵＡＮＧ —ｉ。 ｉ Ｃ ｎ —ｉｎ ２ Ｘｉｘａ ‘
西
２６ ７
南
农
业
学
报
２１ ０ ２年 ２ ５卷 １期
Ｖ０． ５ １２ Ｎｏ ．１
Ｓ ｕｈ ｓ ｉａＪ ｕｎ ｌ０ ｒｃ ｌ ｒｌＳ ｉｎ ｅ ｏ ｔｗｅ ｔＣｈｎ ｏ ｒ ａ ｆＡｇｉｕｔ ａ ｃｅ ｃ ｓ ｕ
文章编 号 ：０ １ ４ ２ （ ０２ ０ ０ ７ ０ １０ — ８ ９ ２ １ ） １— ２ ６— ６
，
，
，
பைடு நூலகம்
（ ． ｏ ｅｅｏ Ａ ｉ ｌ ｃｅｃ ， ｎｉ ｇＡ ｒｕｔ ａ ｎｖｒｔ， ｉｊ ｎ ｒｍｑ ８０ ５ ， ｈｎ ；． ｒ ｄ＆ Ｂｏｅｈ ｏ ｇ ｅ ａｏａ ｒ １ Ｃ ｆ ｇ ｆ ｎｍａ ＳｉｎｅＸｉ ａ ｇｉ ｌ ｒｌ ｉｅｓｙ Ｘｎｉ ｇＵｕ ｉ ３ ０ ２ Ｃ ｉａ２ Ｂｅ ｉ ｊｎ ｃ ｕ Ｕ ｉ ａ ｅ ｉｔ ｎ ｌ ｙＫ ｙＬｂ ｒｔ ｙｏ ｃ ｏ ｏ ｆ Ｓ ｅｐｉ ｉｔａ Ｘ ｎｉ ｇＳ ｉ ｚ ８２ ０ ，Ｃ ｉａ ３ Ｉｓｔｔ ｉ ａ ｃｅｃ ，ｉｅ Ａ ｔｎｍ ｕ ｒｆｃ ｒ ｃｄｍｙｏ ￣ｃｌ ｒｌ ｎ ｈｅ Ｂｎｕｎ，ｉｊ ｎ ｈｂ ｉ ３０ ０ ｈｎ ；．ｎｔ ｅ ｆ ｍ ｌ ｉｎｅ Ｔｂｔ ｕｏｏ ｏ ｓ ｅ ｔ ｅＡ ａ ｅ ｆ ｎ ａ ｅ ｉ ｏ Ａｎ ｕ Ｓ Ｐ ｅｕ Ａ ｕｔ ａ ｄ ｕ ａ
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
.
精品
人 基因多态性分析
一、实验目的
1. 了解基因多态性在阐明人体对疾病、毒物的易感性与耐受性、疾病临床
表现的多样性以及对药物治疗的反应性中的重要作用。
2. 了解分析基因多态性的基本原理和研究方法。
二、实验原理
基因多态性（gene polymorphism）是指在一个生物群体中，同时存在两种及
以上的变异型或基因型或等位基因，也称为遗传多态性（genetic polymorphism）。
人类基因多态性对于阐明人体对疾病的易感性、毒物的耐受性、药物代谢差异及
遗传性疾病的分子机制有重大意义；与致病基因连锁的多态性位点可作为遗传病
的诊断标记，并为分离克隆致病基因提供依据；病因未知的疾病与候选基因多态
性的相关性分析，可用于辅助筛选致病易感基因。
聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction—Restriction
Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP)分析是一种常用的DNA分子标记。
原理是通过PCR扩增获得目的基因。若目的基因存在等位变异（多态性），且变
异正好发生在某种限制性内切酶识别位点上，使酶切位点增加或者消失，则酶切
结果就会产生大小不同的片段，即片段长度多态性，再利用琼脂糖凝胶电泳分离，
可呈现出多态性电泳图谱。若将患者与正常的多态性图谱比较，可确定是否变异。
应用PCR-RFLP，可检测某一致病基因已知的点突变，进行直接基因诊断，也可
以此为遗传标记进行连锁分析进行间接基因诊断。
三、器材与试剂
1. 器材
.
精品
⑴离心机。
⑵DNA扩增仪。
⑶电泳仪。
⑷水平电泳槽。
⑸紫外检测仪。
⑹移液器。
2. 试剂
⑴口腔拭子DNA抽提试剂盒。
⑵琼脂糖。
⑶1×TAE电泳缓冲液：980ml蒸馏水中加入50×TAE母液20ml。
⑷50×TAE母液：Tris 121g，0.5M EDTA（pH8.0）50ml，冰醋酸 28.55ml，
定容至500ml。
⑸上样缓冲液（6×）：30mM EDTA，40%(V/V)甘油，0.05%（W/V）二甲
苯青FF，0.05%（W/V）溴酚蓝。
⑹10 mg/ml溴化乙锭（EB）。
⑺DNA Marker。
四、实验方法
1.基因组DNA抽提
⑴细胞采集：
口腔拭子（消毒后的棉签）擦拭两侧脸颊各10次，采集口腔粘膜脱落细胞，
将拭子转置于2mL离心管中，用剪刀将棉签部分剪下，加入DNA抽提试剂盒中
的400μL缓冲液GA。
.
精品
注意：为了保证样本不被食物或者饮料污染，取样前30分钟内请勿进食和饮水。
⑵DNA提取：
参照试剂盒说明书操作。
⑶样品保存：
DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。下次实验再用。
2. DNA浓度及纯度检测
可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测DNA样品的浓度与纯度。
⑴琼脂糖凝胶电泳法定性检测DNA
参照《实验16 DNA琼脂糖电泳》。
⑵紫外分光光度法定量检测DNA浓度及纯度
参照《实验20 动物肝脏DNA的提取和检测》。测定浓度后，稀释至0.25ug/uL
备用。
3. 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析
⑴查找基因序列
选择你感兴趣的目的基因，首先查阅文献，如果已有报道并提供了该基因在
Genbank中的ID号，可直接在美国国立生物技术信息中心（National Center for
Biotechnology Information）中搜索。登陆http://www.ncbi.nlm.nic.gov，①先选择
核酸数据库，点击下拉框选择Nucleotide，②再把Genbank ID号输入搜索框，点
击Search，如（图25-1）：
.
精品
图25-1 查找目的基因步骤1
如果只是知道基因的名字，则搜索框中输入基因名称，点击search。通常会
产生大量的搜索结果，例如搜索人乙醛脱氢酶基因，search后进入如下界面（图
25-2），共有700余条结果：
图25-2 查找目的基因步骤2
真核生物基因通常是断裂基因，含有大量间隔区，序列庞大，若查看全基因
序列，可点击Genomic，如果只想获取转录区，点击Transcript查看转录本，点
击后进入如下界面（图25-3）：
图25-3查找目的基因步骤3
.
精品
一些基因通过转录后加工，通常不止一个转录本，例如此处的ALDH2就有
2个，根据你所查阅的文献和这些序列中的解释综合考虑选择你所需要的序列。
点击后进入（图25-4）：
图25-4 查找目的基因步骤4
此页面中有关于该基因信息的详尽描述，可直接到页面底部查看基因序列
（图25-5）。
.
精品
图25-5 查找目的基因步骤5
⑵设计引物
设计引物的常用软件有Primer Premier 5.0，Oligo 6.22等，以及在线设计程序
如http://www.yeastgenome.org/cgi-bin/web-primer及NCBI上的Primer Blast等。
这些软件能根据引物设计基本原则以及你的需求，设计并推荐最优引物。引物设
计后交由商业公司合成。
⑶配制反应体系
在冰浴中，将以下成分依次加入无菌PCR管中
.
精品
10×PCR buffer 2.5 μL
dNTP mix （2mM） 2 μl
引物1（10pmol）
.
精品
1 μl
引物2（10pmol） 1 μl
Taq聚合酶 （2U/μl） 0.2μl
DNA模板（0.25ug/μl） 2μL
加ddH2O至25 μl，混匀后稍加离心。
⑷PCR
在核酸扩增仪上预设以下程序，放入PCR管，启动反应。
预变性：94℃，5min
变性：94℃，30sec
退火：X℃，30sec（退火温度通常比引物Tm低5℃）
延伸：72℃，30sec
39 cycle
末次循环后延伸：72℃，10min
⑸限制性酶切
利用软件Primer Premier 5.0寻找酶切位点，选择相应的限制性核酸内切酶，
酶切体系及反应条件参照酶试剂说明书。
⑹电泳检测
配制3%琼脂糖凝胶，取扩增产物5 -10 ul，进行电泳，同时加DNA分子量
标准（DNA Marker）作对照，紫外检测仪下观察并拍照，并分析结果。
5.统计与分析
根据限制性内切酶位点的有无得到一个1(位点存在)、0(位点不存在)数据矩
阵，统计所有样品的基因型，根据你的需要可用于遗传进化、疾病相关性、群体
.
精品
遗传学等多方面的分析。
.
精品
【思考题】
1.分析基因多态性还有什么方法，各自的优缺点是什么？
2.试举一例说明通过检测病人的基因多态性研究如何指导个性化用药。
如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！