体外抗真菌药敏试验多量与微量稀释法对比研究
病原真菌的体外药物敏感试验
病原真菌的体外药物敏感试验刘根焰;赵旺胜【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2011(029)006【总页数】4页(P406-409)【关键词】病原真菌;药物敏感试验【作者】刘根焰;赵旺胜【作者单位】南京医科大学第一附属医院医学检验科,南京,210029;南京医科大学第一附属医院医学检验科,南京,210029【正文语种】中文【中图分类】R446.5随着侵袭性真菌感染(invasive fungal infections，IFI)病例增加，经验性抗真菌治疗越来越困难。
同时新的抗真菌药物不断投入临床，使得传统的抗真菌药物敏感试验标准已难以适用。
本文对临床真菌药物敏感试验的标准参考方法及相关的仪器和试剂作一介绍，希望有助于临床真菌药物敏感试验的规范化开展。
1 常见抗真菌药物［1］1.1 多烯类代表药物为两性霉素B;作用机制是直接与细胞膜上的麦角固醇结合，使细胞膜对单价和二价阳离子的通透性增加而导致细胞死亡。
念珠菌、隐球菌、球孢子菌、孢子丝菌、芽生菌、毛霉菌和大部分曲霉对此类抗真菌药物敏感;土曲霉、构巢曲霉、Aspergillus fumigateaffinis和Aspergillus lentulus则天然耐药。
1.2 三唑类代表药物包括酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑和舍他康唑。
作用机制是通过抑制真菌细胞色素P450依赖的羊毛甾醇14α-去甲基化酶作用，导致真菌麦角固醇合成受阻。
此类药物中，氟康唑抗菌谱窄，对大多数念珠菌、隐球菌有效，对曲霉无抑制活性，对克柔念珠菌天然耐药;伊曲康唑较氟康唑抗菌谱宽，并对曲霉有抑制作用;伏立康唑比氟康唑抗菌谱广，并对曲霉、镰刀菌和其他透明丝孢霉有抑制作用;泊沙康唑抗菌谱最宽，对念珠菌、曲霉、镰刀菌、接合菌和其他透明丝孢霉有效;舍他康唑主要对皮肤癣菌和念珠菌抗菌活性较强。
1.3 烯丙胺类代表药物包括特比奈芬和奈替芬;通过抑制角鲨烯环氧化酶而干扰麦角固醇的生物合成。
纸片扩散法和微量肉汤稀释法检测念珠菌氟康唑和伏立康唑药物敏感
论著•临床研究纸片扩散法和微量肉汤稀释法检测念珠菌氟康唑和伏立康唑药物敏感性的比较!张 丽1!,王 贺"，肖 盟1!,徐英春1!#(1.中国医学科学院北京协和医院检验科，北京100730#.侵袭性真菌病机制研究与精准诊断北京市重点实验室，北京100730)摘要：目的评价纟氏片扩散法与微量肉汤稀释法检测念珠菌对氟康唑和伏立康唑药物敏感性的一致率。
方法针对218株侵袭性真菌感染部位分离的念珠菌，分别采用美国临床和实验室标准协会(CLSI ) M44-A2纸片扩散法和CLSI M27微量肉汤稀释法进行药物敏感性检测&依据2018年颁布的CLSI M60新的纸片扩散 法判定折点，以微量肉汤稀释法为标准评估纸片扩散法测定结果的分类一致率和错误率&结果 2种方法检测 白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌和光滑念珠菌氟康唑药物敏感性的一致率分别为97. 6%、95. 1%、97. 4%和90. 5%。
2种方法在检测白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌和克柔念珠菌伏立康唑敏感性的一致率分别为97.6%、90.2%、97.4%和81.2% &结论纸片扩散法检测念珠菌对氟康唑和伏立康唑的药物敏感性与微 量肉汤稀释法一致率较高，是念珠菌药物敏感性测定简便且准确性较高的检测方法，推荐在真菌实验室常规检 测或耐药监测网使用&关键词：念珠菌；纸片扩散法；微量肉汤稀释法；唑类药物DOI 10. 3969/j. issn. 16734130. 2019. 13. 012中图法分类号：R446. 5文章编号：16734130(2019)13158305 文献标识码：ACorrelation between disk diffusion and microdilution methods for antifungal susceptibilitytesting of Candida species to fluconazole and voriconazole ** 基金项目：国家自然科学基金项目(81802049)；中央高校基本科研业务(3332018035)作者简介：张丽，女，主管技师，主要从事真菌实验室诊断和耐药机制等方面的研究%#通信作者,E-mail ;xycpumch@139. com .本文引用格式：张丽，王贺，肖盟，等.纸片扩散法和微量肉汤稀释法检测念珠菌氟康唑和伏立康唑药物敏感性的比较国际检验医学杂志，2019,40(3):1583-1586.ZHANGLt 1，,WANG !e 2 ‘XIAOMng 1，SUYtngchun 1，^(1. D e p artm e n t of Clinical Laboratory ，P e k ing Union Me d ical Col l e g e Hospital ，Chin e s e Acad e my ofMedical Sciences ，Beijing 100730，China #. Beijing Key Laboratory for MechanismsResearch and Precision Diagnosis of Invasive Fungal Diseases ^Beijing 100730, China )Abstract :Objective To compare the CLSI disk diffusion and broth microdilution (BMD) methods for tes ting susceptibilities of 218 C andida spp. to fluconazole and voriconazole. Methods All the isolates were col-ected from patients with invasive fungal infections ，and were performed susceptibility test according to CLSIM44A2andCLSIM27.Thecategoricalagreement (CA ) betweentwomethodswasevaluatedaccordingtothebreakpointsdescribedinCLSIM60. Results TheCA between KBandBMDforC.albicans ，C.tropicalis ，C.parapsilosis and C. glabrata to fluconazole was 97. 6 %，95. 1 %，97. 4% and 90. 5 %，respectively . The CA be- tweenKBandBMDforC albicans !C tropicalis !C parapsilosisandC kruseitovoriconazolewas97 6% 902% 97 4% and81 2% respectively Conclusion Diskdi f usion methodisasimpleandaccurate methodforthe detection of Candida susceptibility to fluconazole and voriconazole. It is recommended to be used in routine bacteriallaboratorydetectionordrugresistancemonitoringnetwork.Key words ： Candida # disk diffusion # microdilution method ； azoles drugs随着糖皮质激素和免疫抑制剂的广泛使用、HIV 感染的流行以及器官移植的开展等因素，侵袭性真菌 感染的发病率在逐年增加，给患者的预后和生命安全带来很大的威胁％其中念珠菌的感染尤为引人关 注&13'%目前，念珠菌血症已占医院血源性感染的8%〜10%，排在院内感染性疾病的第4位，念珠菌血 症的总体病死率高达40%&5。
两种方法检测白色念珠菌对氟康唑的体外药敏结果比较及耐药原因分析
第16卷第2期 延安大学学报（医学科学版）Vol. 16 No.2 2018 年 6 月Journal of Yanan University (IM ed Sci)Jun.2018•临床研究•两种方法检测白色念珠菌对氟康唑的体外药敏结果比较及耐药原因分析岳聪聪1，苏冰2，张晓雪2，部瑞林 2 $(1.陕西中医药大学医学技术学院;2.陕西中医药大学第二附属医院，陕西咸阳712000)摘要：目的比较纸片扩散（K-B)法和微量肉汤稀释（MIC)法检测18株临床分离白色念珠菌和4株标准白色念珠菌对氟康唑体外药敏试验的检测结果，并分析白色念珠菌对氟康唑的耐药原因。
方法根据K-B法和M IC法检测白色念珠菌对氟康唑体外药敏试验，比较两种方法结果的一致性;通过甲基四氮盐（XTT)减低法测量白色念珠菌生物膜的形成及其与氟康唑耐药的关系。
结果K-B法和MIC法检测白色念珠菌对氟康唑的体外药敏实验结果，经比较二者无明显差异，对氟康唑耐药的白色念珠菌其0D值远远高于对氟康唑敏感的白色念珠菌的0D值。
结论K-B法和MIC法对于检测白色念珠菌对氟康唑的体外药敏试验结果具有较高的一致性；白色念珠菌对氟康唑的耐药与其形成生物膜有重要相关性。
关键词：白色念珠菌;氟康唑;K- B法;MIC法;生物膜中图分类号：R446 文献标识码：A文章编号：1672 -2639(2018)02 -0061 -04Comparation of two methods for testing Candida albicans to fluconazole susceptibility in vitro and analysis the cause of drug resistanceYUE Cong - cong1 ,S U B ing2, ZHANG Xiao - xue2, GUO R un - lin2**(1.School of Medical Technology，Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine.2.The Second Affiliated Hospital of Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine,Xianyang712000,China) Abstract：Objective The Kirby- Bauer (K- B)method and broth microdilution(MIC)method were tect the in vitro susceptibility test of18 clinical isolates of Cangida albicans and4 Cangi azole,and analyze the causes of Candida albicans resistance to fluconazole.Methods The i V to susceptibility testof Candida albicans against fluconazole was tested according to K- B method and MIC method，and the consistencyof the results of the two methods was compared.The relationship between the formation of Can and fluconazole resistance was measured by methyl tetrazolium (2,3- bis - (2 - methoxy- 4 - nitro- 5 - sulpho-phenyl) -2H- tetrazolium-5 - carboxanilide，XTT)method.Results K-B method and MIC method were usedto detect the in vitro susceptibility test results of Candida albicans against fluconazole, difference in statistics.The 0D value of fluconazole- resistant CannHa albicans was much higher than that of fluconazole-sensitive Candida albicans.Conclusion The K-B method and the MIC method have h the detection of fluconazole in vitro by Candida albicans.The resistance of CanMa albican ly related to the formation of biofilm.K ey words：Candida albicans ;Fluconazole;Kirby- Bauer method;Microdilution method;Bioform作者筒介:岳聪聪（1994一）女，陕西商洛人，在读硕士，研究方向:病原微生物的耐药性研究，E-mail:1175992501@qq.c〇m。
抗真菌药两种常用药敏试验方法的比较
抗真菌药两种常用药敏试验方法的比较
魏群生;倪仁宝
【期刊名称】《第二军医大学学报》
【年(卷),期】1990(11)4
【摘要】目前抗真菌药药敏试验方法有10种左右,但至今尚未确定标准化方法。
国外的许多实验室多采用液基稀释法;我国除上述方法外,常采用固体琼脂法。
为比较以上两种方法的试验结果,我们用益康唑和咪康唑两种药物,采用上述两种方法作比较试验。
【总页数】2页(P355-356)
【关键词】抗真菌药;药敏试验
【作者】魏群生;倪仁宝
【作者单位】第二军医大学流行病学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R927.1
【相关文献】
1.Neo-Sensitab抗真菌药敏试验与其他方法的比较 [J], 章强强;李莉;王家俊
2.两种重要抗真菌药敏试验的比较研究 [J], 王小丽;钟有添
3.镇痛药的镇痛作用实验中两种常用实验方法的比较 [J], 叶夷露;张琦;胡珏;张建亭;郑呜之;俞月萍;朱一亮
4.两种抗真菌药治疗外耳道真菌病的疗效比较 [J], 王平;杨秋;陈燕玲;黄常明;奚益
平;王嘉川
5.抗真菌药物体外药敏试验方法的比较 [J], 郑憧娇;赵恕;张虹
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微量肉汤稀释法比较分析不同培养时间念珠菌属对唑类药物的敏感性
微量肉汤稀释法比较分析不同培养时间念珠菌属对唑类药物的敏感性郭莉娜;徐志鹏;王瑶;王贺;赵颖;肖盟;徐英春【摘要】目的探讨微量肉汤稀释法检测念珠菌属对唑类药物的体外敏感性时,培养24 h和48 h读取MIC值的差异.方法微量肉汤稀释法检测653株念珠菌对氟康唑、伏立康唑和伊曲康唑的体外药物敏感性,分别于24 h和48 h读取MIC值,比较不同孵育时间所得MIC总一致率(EA)、敏感性判定一致率(CA)及敏感性判定错误率(Error).结果绝大多数念珠菌培养24 h能够生长充分并进行MIC值读取;孵育24 h和48h读取MIC值总EA较好,分别为:氟康唑(91.9％),伏立康唑(92.0％),伊曲康唑(95.6％);CA分别为氟康唑(96.9％),伏立康唑(90.4％),伊曲康唑(88.2％),不同菌种类型CA有差异;未发现极严重错误(VME)的结果,错误多为一般错误(MiE),653株菌敏感性判定错误率ME/MiE分别为氟康唑(1.7％/2.9％)、伏立康唑(2.0％/10.6％)和伊曲康唑(1.5％/13.0％).结论微量肉汤稀释法检测念珠菌属对唑类药物体外敏感性时,孵育24 h与48 h MIC值一致率较好,24 h读取MIC值可缩短药敏报告时间,减少拖尾现象导致的判读错误.【期刊名称】《中国真菌学杂志》【年(卷),期】2016(011)006【总页数】5页(P332-336)【关键词】微量肉汤稀释法;药敏试验;念珠菌;唑类;MIC值【作者】郭莉娜;徐志鹏;王瑶;王贺;赵颖;肖盟;徐英春【作者单位】中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730【正文语种】中文【中图分类】R379.4近几十年来，随着侵袭性真菌感染逐年增多，抗真菌药物的选用以及真菌耐药现象已成为临床实际工作中的一个重要难题，特别是对于免疫受损人群[1]。
马拉色菌对三种唑类抗真菌药的体外药敏试验
马拉色菌对三种唑类抗真菌药的体外药敏试验黄欣;温海;徐红;朱元杰【期刊名称】《第二军医大学学报》【年(卷),期】2005(26)11【摘要】目的:探讨马拉色菌标准株和临床分离株对酮康唑、伊曲康唑和氟康唑的体外敏感性。
方法:用生理生化及形态学方法对临床分离的马拉色菌菌株进行菌种鉴定。
参照美国临床实验室标准委员会(NCCLS)制订的M27-A方案中酵母菌微量稀释法,检测7种马拉色菌标准株和42株临床分离株对酮康唑、伊曲康唑和氟康唑的最小抑菌浓度(MIC)。
结果:42株马拉色菌临床分离株包括5个种,分别是合轴马拉色菌、糠秕马拉色菌、钝形马拉色菌、球形马拉色菌、限制性马拉色菌。
用M27-A方案中酵母菌微量稀释法测定3种唑类抗真菌药对7种马拉色菌标准株和42株临床分离株的敏感性由高到低分别为:伊曲康唑、酮康唑、氟康唑。
结论:马拉色菌属的各菌种对酮康唑、伊曲康唑和氟康唑的敏感性存在差异;M27-A方案中酵母菌微量稀释法可用于马拉色菌的体外药敏试验。
【总页数】3页(P1277-1279)【关键词】马拉色菌;抗真菌药;微生物敏感性试验【作者】黄欣;温海;徐红;朱元杰【作者单位】第二军医大学长征医院皮肤性病科【正文语种】中文【中图分类】R978.5【相关文献】1.香鳞毛蕨有效部位对糠秕马拉色菌的体外抗真菌作用研究 [J], 王洁;唐春萍;江涛;沈志滨;陈艳芬;黄奕曦2.马拉色菌对八种抗真菌药物的体外敏感性检测 [J], 穰真;杨戈;王有为3.三种唑类抗真菌药—酮康唑,伊康唑和氟康唑 [J], 虞瑞尧4.中药小檗碱协同抗真菌药对马尔尼菲篮状菌的体外药敏试验研究 [J], 张馨予;潘开素;罗宏;郑冬燕;郑艳青;曹存巍;梁纲5.七种抗真菌药物对马拉色菌的体外抑菌试验研究 [J], 郑晓晖;夏修蛟;王志东;许爱娥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
体外药敏试验实验报告
一、实验目的本实验旨在通过体外药敏试验，测定某病原菌对不同抗菌药物的敏感性，为临床合理用药提供科学依据。
二、实验材料1. 实验菌株：选取某病原菌为实验菌株，如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
2. 抗菌药物：选择临床常用的抗菌药物，如青霉素、头孢菌素、喹诺酮类等。
3. 实验仪器：微量稀释器、无菌操作台、恒温培养箱、比浊仪等。
4. 实验试剂：M-H肉汤培养基、药敏纸片、药敏试剂盒等。
三、实验方法1. 菌液制备：将实验菌株接种于M-H肉汤培养基，37℃培养24小时，制成菌悬液，用比浊仪测定其浓度，调整至1×10^6 CFU/mL。
2. 药敏纸片法：- 将制备好的菌悬液均匀涂布于M-H琼脂平板上。
- 将药敏纸片贴于平板表面，确保纸片与琼脂平板紧密接触。
- 将平板倒置，37℃培养24小时，观察抑菌圈的大小。
3. 微量稀释法：- 将M-H肉汤培养基加入微量稀释器中，制成一系列不同浓度的抗菌药物溶液。
- 将菌悬液加入微量稀释器中，与抗菌药物溶液混合均匀。
- 将混合液接种于M-H琼脂平板上，37℃培养24小时，观察菌落生长情况。
- 根据抑菌圈的大小或菌落生长情况，计算最低抑菌浓度（MIC）。
四、实验结果1. 药敏纸片法：- 青霉素：抑菌圈直径为15mm，判定为敏感。
- 头孢菌素：抑菌圈直径为18mm，判定为敏感。
- 喹诺酮类：抑菌圈直径为20mm，判定为敏感。
2. 微量稀释法：- 青霉素：MIC为0.125mg/L，判定为敏感。
- 头孢菌素：MIC为0.25mg/L，判定为敏感。
- 喹诺酮类：MIC为0.5mg/L，判定为敏感。
五、实验讨论1. 本实验采用药敏纸片法和微量稀释法测定了某病原菌对不同抗菌药物的敏感性，结果显示该菌株对青霉素、头孢菌素和喹诺酮类均表现为敏感。
2. 体外药敏试验是临床合理用药的重要依据，但应注意以下几点：- 严格遵循实验操作规程，确保实验结果的准确性。
- 定期校准实验仪器，确保实验数据的可靠性。
真菌体外敏感性及临床意义解读
Li zhang,He wang,yingchun Xu. PLOS ONE ,2014, 9(12),1-12
比较方法
• 采用酵母菌稀释法新折点进行分析 • Essential agreement（EA）：MIC值相差两个稀释度以内 • Categorical agreement（CA）：分类一致，如两个药敏结果均为S、SDD(I)或者 R
• 棘白菌素类：卡泊芬净、米卡芬净、阿尼芬净
抗真菌药作用机制
细胞膜
• 多烯类：插入含麦角固醇的细胞膜，形 成通道，造成K+外排 • 唑类：阻断麦角固醇合成
DNA/RNA合成
• 5-氟胞嘧啶
细胞壁
• 棘白菌素类：阻断葡聚糖合成
PUMCH W.Yao
Atlas of fungal Infections, Richard Diamond Ed. 1999 Introduction to Medical Mycology. Merck and Co. 2001
接种量 孵育条件
1×103~3×103 CFU/ml 35℃ 培养至产孢良好
30
非皮肤丝状真菌孢子菌悬液的制备
• 接种物：分生孢子或孢囊孢子菌悬液0.4×104~5×104 CFU/ml，重复性好
– 诱导产孢：大部分霉菌PDA 35±2⁰C 7d或至产孢良好，毛霉和曲 霉48h，镰刀菌35±2⁰C 48~72h然后28~30±2⁰C培养至第7天 – 1ml 0.85%盐水，可加入1滴或0.01ml吐温20，尽量去除菌丝片段 。 – 静置3~5min，取上清转移至无菌管，振荡15s（注意气溶胶） – 使用1cm比色杯，测定530nm光密度：
11
CLSI M27-A3酵母菌 微量肉汤稀释法判读时间和标准
微量肉汤稀释法比较分析不同培养时间念珠菌属对唑类药物的敏感性
微量肉汤稀释法比较分析不同培养时间念珠菌属对唑类药物的敏感性郭莉娜;徐志鹏;王瑶;王贺;赵颖;肖盟;徐英春【期刊名称】《中国真菌学杂志》【年(卷),期】2016(11)6【摘要】目的探讨微量肉汤稀释法检测念珠菌属对唑类药物的体外敏感性时,培养24 h和48 h读取MIC值的差异.方法微量肉汤稀释法检测653株念珠菌对氟康唑、伏立康唑和伊曲康唑的体外药物敏感性,分别于24 h和48 h读取MIC值,比较不同孵育时间所得MIC总一致率(EA)、敏感性判定一致率(CA)及敏感性判定错误率(Error).结果绝大多数念珠菌培养24 h能够生长充分并进行MIC值读取;孵育24 h和48h读取MIC值总EA较好,分别为:氟康唑(91.9％),伏立康唑(92.0％),伊曲康唑(95.6％);CA分别为氟康唑(96.9％),伏立康唑(90.4％),伊曲康唑(88.2％),不同菌种类型CA有差异;未发现极严重错误(VME)的结果,错误多为一般错误(MiE),653株菌敏感性判定错误率ME/MiE分别为氟康唑(1.7％/2.9％)、伏立康唑(2.0％/10.6％)和伊曲康唑(1.5％/13.0％).结论微量肉汤稀释法检测念珠菌属对唑类药物体外敏感性时,孵育24 h与48 h MIC值一致率较好,24 h读取MIC值可缩短药敏报告时间,减少拖尾现象导致的判读错误.【总页数】5页(P332-336)【作者】郭莉娜;徐志鹏;王瑶;王贺;赵颖;肖盟;徐英春【作者单位】中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730【正文语种】中文【中图分类】R379.4【相关文献】1.浓度梯度扩散法与NCCLS肉汤微量稀释法比较检测曲霉对新型三唑类药物的敏感性 [J],2.Etest方法与微量肉汤稀释法检测念珠菌属对唑类抗真菌药物的敏感性评价 [J], 张丽;王贺;肖盟;徐英春3.纸片扩散法和微量肉汤稀释法检测念珠菌氟康唑和伏立康唑药物敏感性的比较[J], ZHANG Li;WANG He;XIAO Meng;XU Yingchun4.纸片扩散法与微量肉汤稀释法检测念珠菌对氟康唑和伏立康唑药物敏感性的效果观察 [J], 周世添; 郭主声; 邹美兰; 朱学海5.Sensititre YeastOne显色药敏板与微量肉汤稀释法检测曲霉体外抗真菌药物敏感性的一致性研究 [J], 李颖;王贺;张戈;刘文静;徐英春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Sensititre YeastOne显色药敏板与微量肉汤稀释法检测阿萨希毛孢子菌体
・ １９８ ・ 中国真菌学杂志２０１７年８月第 鲞笪！塑 ！垒 ！！ ！！ ！ ： ・论著・
Ｓｅｎｓｉｔｉｔｒｅ ＹｅａｓｔＯｎｅ显色药敏板与微量肉汤稀释法 检测阿萨希毛孢子菌体外药物敏感性比较研究
郭莉娜 于淑颖 王贺 徐英春 （中国医学科学院北京协和医院检验科，北京１００７３０）
【摘要】目的 以ｃＩ ｓｉ微量肉汤稀释法为参考方法，探讨商品化显色药敏板（Ｓｅｎｓｉｔｉｔｒｅ ＹｅａｓｔＯｎｅ）检测阿萨希毛孢子菌 体外药物敏感性的临床应用价值。方法 分别用微量肉汤稀释法和Ｓｅｎｓｉｔｉｔｒｅ ＹｅａｓｔＯｎｅ同时检测６２株阿萨希毛孢子菌对 临床常用７种抗真菌药物的体外敏感性，ＭＩＣ值读取时间分别为２４ ｈ和４８ ｈ。结果微量肉汤稀释法结果显示卡泊芬净 和米卡芬净对阿萨希毛孢子菌无体外活性，二者ＭＩＣ。。均为１６／ｘｇ／ｍＬ；唑类药物对阿萨希毛孢子菌体外活性较好，培养２４ ｈ ＭＩＣ。。分别为氟康唑８ ｇ／ｍＬ、伏立康唑０．１２５／￣ｇ／ｍＩ一伊曲康唑Ｏ．５／￣ｇ／ｍＩ ；４．８ （３／６２）阿萨希毛孢子菌对两性霉素Ｂ 有高ＭＩＣ值（４ ｇ／ｍＩ ）；经２４ ｈ培养，Ｓｅｎｓｉｔｉｔｒｅ ＹｅａｓｔＯｎｅ与微量肉汤稀释法检测阿萨希毛孢子菌对７种抗真菌药物的体 外ＭＩＣ一致率（ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ａｇｒｅｅｍｅｎｔ，ＥＡ）分别为氟康唑９３．５ ，伏立康唑９８．４ ，伊曲康唑９８．４ ，两性霉素Ｉ３ ９８．４ ，５氟 胞嘧啶８８．７ ，卡泊芬净１００Ｖｏ，米卡芬净１００ ；培养４８ ｈ后，二者检测两性霉素Ｂ和５氟胞嘧啶ＭＩＣ一致率有所下降，分 别为８３．９ 和６７．７ ；对微量肉汤稀释法而言，培养时间对两性霉素Ｂ和５一氟胞嘧啶Ｍ１Ｃ值影响较大，２４ ｈ和４８ ｈ ＭＩＣ一 致率分别为６９．４ 和５３．２ ，对Ｓｅｎｓｉｔｉｌｒｅ ＹｅａｓｔＯｎｅ，ＭＩＣ值明显受培养时间影响的药物仅见于５一氟胞嘧啶，２４ ｈ和４８ ｈ ＭＩＣ一致率为１１．３ ，其余药物不同ＭＩＣ读取时间一致率非常好。结论唑类药物对阿萨希毛孢子菌体外抗菌活性较好， Ｓｅｎｓｉｔｉｔｒｅ ＹｅａｓｔＯｎｅ和微量肉汤稀释法检测阿萨希毛孢子菌体外ＭＩＣ值一致率较高，用于临床阿萨希毛孢子菌体外药物敏 感性检测具有一定的实用价值。 【关键词】阿萨希毛孢子菌；药敏试验；微量肉汤稀释法；Ｓｅｎｓｉｔｉｔｒｅ ＹｅａｓｔＯｎｅ 【中图分类号】Ｒ ３７９．９ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７３—３８２７（２Ｏ１ ７）１２—０１９８—０５
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２ ｔ一 ｚ ｅ
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第１卷第４期
２０００年８月 北华大学学报（自然科学版） ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＢＥＩＨＵＡ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ）
ＶＯＩ．１ Ｎｏ．４
Ａｕｇ．，２（１００
文章编号：１００９．４８２２（２０００）０４．０３２１．０２
体外抗真菌药敏试验多量与微量稀释法对比研究
张晓冬
（北华大学医学院附属医院，吉林吉林１３２０１１）
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摘要：目的对比研究酵母菌的体外抗真菌药敏试验多量与微量稀释法．方法采用美国国家临床试验标准化委员
会（ＮＣＣＬＳ）推荐的药敏试验方案的多量稀释法和微量稀释法，分别测定４５株念珠菌（包括来自国外ＡＩＤＳ患者
的２８株氟康唑耐药株，１５株国内临床分离株和２株ＡＴＣＣ模式株）对氟康唑的最小抑菌浓度（ＭＩＣ）值．结果采
用ＮＣＣＬＳ推荐的多量稀释法与微量稀释法测定４５株念珠菌对氟康唑的ＭＩＣ值一致为９１％．结论体外抗真菌
药敏试验的多量稀释法与微量稀释法有较好的一致性，微量稀释法可以做为一种较好的体外抗真菌药敏试验方
法在临床实验室推广使月
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关键词：多釜法；微 去；＇ＮＣＣＬＳ方案；ＭＩＣ；氟康唑
中图分类号：Ｒ５ｌ９ 文献标识码：Ａ
采用ＮＣＣＬＳ推荐的药敏试验方案的多量法和 微量法分别测定４５株念珠菌对氟康唑的ＭＩＣ值， 对比研究多量稀释法和微量稀释法所测结果的一 致性． １ 材料和方法 １．１ 实验菌株 受试菌株共４５株，其中２８株ＦＣＺ耐药株由美 国德克萨斯州医疗中心、德国Ｖｉｒｃｈｏｗ研究所和比 利时Ｊａｓｓｅｎ制药公司赠送，其中包括白念珠菌２３ 株，光滑念珠菌５株．临床分离株１５株，系北京医 科大学真菌和真菌病研究中心收集，另外还有２株 ＡＴＣＣ模式株． １．２抗真菌药物 氟康唑由厂家提供，纯度为９９．７％，用蒸馏水 制成质量浓度为１２８０ ｍｇ／Ｌ的贮存液，存于一２０℃ 冰箱备用． １．３ 培养基 ＲＰＭＩ ｌ ６４０液基【 ． １．４ ＭＩＯ测定 按照ＮＣＣＬＳ方案…进行． １．４．１ 多量稀释法 每一受试菌株准备１１支无菌洁净的１３ ｎｌｔｉ１× 褂瓶奥自 ．歌滇箍， 黝 １００ ｍｍ试管，其中１支为对照管．用ＲＰＭＩ １ ６４０
液基将ＦＣＺ母液稀释成质量浓度为６４０～１．２５
ｍｇ／Ｌ．受试菌株经两次在３５℃ＳＤＡ培基活化，以
保证菌落的纯化和活力．将活化菌株划线接种平皿
２４ ｈ（３５℃），选５个直径≥１ ｔｏｎｉ的菌落，于５ ｍＬ
无菌的０ ８５％盐水中振荡１５ ｒａｉｎ，用血计数板将其
菌落调至每毫升１．０×１０ ～５×１０ 单位之间．将菌
悬液用ＲＰＭＩ ｌ ６４０液基先稀释１００倍充分混匀后
再稀释２０倍．将０．９ｍＬ菌悬液加至上述ｌ１支试管
中，使菌接种液终质量浓度每毫升为０．５×１０ ～
２．５×１０ 菌落单位之间，而ＦＣＺ的终质量浓度为
６４，３２，１６，８，４，２，１，０．５，０．２５，０．１２５，０ ｍｇ／Ｌ．将接
种好的试管摇匀，置３５℃培养４８ ｈ．ＮＣＣＬＳ方案建
议将完全不生长的前一管判定为终点．如有拖尾现
象，与生长对照管对比，视觉的浊度低于或等于
８０％抑菌度（对照生长管中０．２ ｍＬ菌液用０．８ ｍＬ
ＲＰＭＩ １ ６４０培基稀释，得出一个８０％抑制标准）．
每次试验以ＡＴＣＣ０１４６３为对照，只有当其ＭＩＣ值
介于０．０６～０．１２５ ｍｇ／Ｌ之间，方认为实验操作准
确．
１．４．２微量稀释法
在无菌条件下，使用９６微孔板，将药物贮备液
用ＲＰＭＩ １ ６４０液基分别稀释１：５０倍和１：２０倍，
收稿日期：２０００．０３一ｌ２
作者简介：张晓冬（１９６９一），女，皮肤科主治医师，主要从事皮肤性病学研究
３２２ 北华大学学报（自然科学版） 第１卷
得２倍终菌液为每毫升１～６×１０ 菌落单位．将
０．１ ｍＩ 的菌悬液加入每个孔，第１２孔不加，经
３５℃培养４８ ｈ后观察结果．在不搅动的情况下与对
照孔按下列比较，０肉眼清晰；１略模糊；２浊度显
著减低（５０％受抑制）；３浊度轻度减低；４浊度未减 低．本实验采取１（略模糊）为判定终点基准＿２ｔ ，对 照设置同前． ２ 结 果 在实验中，比较多量法与微量法测得的ＭＩＣ 值过程中，ＭＩＣ值在２个质量浓度梯度范围内时我 们认为结果一致．结果显示，除了有３株耐药株和１
株临床株ＭＩＣ值不一致，其余４１株念珠菌的ＭＩＣ
值相符，一致率为９１％（见表１）
表１ 多量法和微量法测定氟康唑对念珠菌的ＭＩＯ值
Ｔａｂ １ Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ Ｃｅｎｄｉｄａ ｓｐｐ ａｇａｉｎｓｔ ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｂｒｏｔｈ ｍａｃｒｏ－ａｎｄ－－ｍｉｃｒｏｄｉｌｕｔｉｏｎ ａｎｔｉｆｕｎｇａ
３ 讨 论
近年来，抗真菌药的种类不断增多，虽然唑类 药物能有效地治疗大部分感染，但在治疗中念珠菌 对唑类药物的耐药现象Ｅｔ益严重．因此无论是对抗 真菌药物的生产和开发，还是指导临床用药，监控 耐药菌株均迫切需要建立一种准确可靠、重复性 好、且简便易行的药敏试验方法．ＮＣＣＬＳ方案推荐 的微量法与多量法相比具有用少量液基、试剂及药 物的特点，两种方法的一致性仍有争论． 我们采用ＮＣＣＬＳ方案的多量和微量法测定 ４５株念珠菌ＭＩＣ值．结果表明，两种方法所得的 ＭＩＣ值有很好的一致性．只有３株耐药株和１株临 床株的ＭＩＣ值不相符，其余４１株念珠菌的ＭＩＣ值 相一致（在两个梯度内），一致率为９１％．Ｅｓｐｉｎｅｌ— ＩｎｇｒｏｆｆＡ Ｊ和ＢａｒａｃｈｉｅｓｉＬ３ Ｊ等报道采用ＮＣＣ［ Ｓ多量 法和微量法测定氟康唑对大量酵母菌的ＭＩＣ值结 果有极好的一致性（分别为９２％和９７％），国外报 道结果与本试验结果相一致．表明两种方法有极好 的一致性，而且微量法具有操作简便，用少量药物 和试剂，可以肉眼直接判读结果等优点，具有在临 床实验室应用和进一步推广的前景．
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