Cre_lox位点特异性重组系统在高等真核生物中的研究进展
Cre-loxP、CRISPR-Cas9技术与病毒载体在基因敲除中的联用
基因敲除技术在病毒感染性疾病治疗中的应用
基因敲除技术能够消除病毒复制所需的宿主细胞内基因从而阻止病毒的复制和感染。
基因敲除技术可以用于开发新型抗病毒药物通过抑制病毒复制或干扰病毒生命周期的关键环节 来治疗病毒感染。
基因敲除技术可以用于基因治疗通过将正常基因导入宿主细胞替代缺陷基因恢复细胞功能达到 治疗目的。
CRISPR-Cs9与病毒载体的联用
Cre-loxP技术用于控制基 因表达
CRISPR-Cs9技术用于编 辑基因
病毒载体在基因敲除中的重 要作用
Cre-loxP、CRISPR-Cs9 技术与病毒载体的联用原理
三者联用的优势与挑战
优势：Cre-loxP、CRISPR-Cs9技术与病毒载体在基因敲除中的联用可以实现高效、精准 的基因敲除有助于研究基因功能和疾病治疗。
基因敲除技术简介 Cre-loxP系统在基因敲除中的应用 CRISPR-Cs9系统在基因敲除中的应用 病毒载体在基因敲除中的联用
基因敲除技术在癌症治疗中的应用
基因敲除技术能够精准地编辑人类基因为癌症治疗提供了新的手段。
通过敲除致癌基因或激活抑癌基因基因敲除技术可以有效抑制癌症细胞的生长和扩散。 基因敲除技术在癌症治疗中具有个体化、精准化的特点可以降低治疗副作用和提高治疗 效果。 目前基因敲除技术在癌症治疗领域仍处于研究阶段但已取得了一定的成果和进展。
基因敲除技术还可以用于疫苗开发通过消除病毒基因中的关键位点降低病毒的毒力或致癌性从 而开发出更安全、更有效的疫苗。
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未来展望与研究方向
Cre-loxP、CRISPR-Cs9技术与病毒载体联用技术的发展 前景
技术改进：随着 基因编辑技术的 不断进步CreloxP、 CRISPR-Cs9与 病毒载体的联用 技术将得到进一 步优化提高敲除 效率和应用范围。
基因打靶 cre-loxp重组酶系统
基因打靶基因打靶包括：胚胎干细胞的获得和培养、打靶载体的构建、重组ES细胞的筛选、嵌合体小鼠的制备、基因敲除小鼠的建立、Cre-loxP系统、FLP/FRT系统和条件性基因敲除、基因敲入和大规模ES细胞突变库的建立。
基本概念：1.基因打靶：是利用同源重组技术来定点改变物种的基因组顺序和结构，从而在突变的个体内来研究基因及基因组的功能。
2.基因敲除：是使用基因组中某个/某几个基因或基因的顺式元件产生缺陷，从而在突变体内。
3.丧生正常的功能，来推测这些基因或元件原来在体内的功能。
基因敲入：在个体基因组中定点加入某个/某几个基因或顺式元件，使之表达或发挥作用，从而研究该基因或顺式元件在体内的功能。
4.基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段。
它的产生和发展建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，并促进了相关技术的进一步发展。
自1987年早期胚胎干细胞技术建立及第一例基因剔除小鼠诞生以来，基因打靶的研究进展迅速，给现代生物学和医学研究带来了革命性的变化，并直接引发了现代生物学和医学研究各个领域中许多突破性的进展，成为后基因组时代研究基因功能最直接和最有效的方法之一。
一、胚胎干细胞的获得和培养基因打靶中用的小鼠ES细胞系有：D3、E14、R1、J1、CCE，均来源于129小鼠品系和其杂交品系（因为这类小鼠具有自发突变形成畸胎瘤和畸胎肉瘤的倾向，是基因敲除的理想实验动物）。
ES 623和B6-IIIES细胞系，来源于C57BL/6小鼠品系。
BALB/c-I，来源于BALB/c小鼠品系。
常用的饲养层细胞为PMEF（小鼠原代胚成纤维细胞。
PMEF需6 Gy的X 射线照射或丝裂霉素C处理细胞抑制生长后才能用作饲养细胞）。
建立ES细胞的过程中，最好采用只传了2-3代的原代小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养细胞，所取得的ICM（内细胞团）只有10％-30％的几率建立ES细胞系。
一旦ES 克隆被确定，接下来应该考虑检查ES细胞的核型。
Cre-loxp系统的构建及无选择标记转基因苹果植株的获得
园艺学报，2016，43 (2)：205–217.Acta Horticulturae Sinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0579；http：//www. ahs. ac. cn 205Cre/loxp系统的构建及无选择标记转基因苹果植株的获得李茂福，王媛花，王华，金万梅*（北京市农林科学院林业果树研究所，北京市落叶果树工程技术研究中心，农业部华北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，北京 100093）摘 要：利用Cre/loxp系统位点专一性重组的特点构建诱导表达的定位重组系统，特异性地敲除转基因植物的选择标记基因。
通过多重酶切、连接及测序后成功构建植物表达载体pBI121-Cre-GUS。
利用农杆菌介导的叶盘法将此目标基因转入平邑甜茶中，通过抗性筛选和PCR鉴定获得转基因阳性植株。
对阳性植株进行热激诱导后通过PCR及GUS染色进行检测转基因植株的删除效果，最终获得了无选择标记基因的转基因苹果植株。
关键词：平邑甜茶；烟草；Cre/loxp重组删除系统；无选择标记基因中图分类号：S 661.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2016）02-0205-13 Constructed the Cre/loxp Recombination Inducible Excision System and Obtained Marker-free Transgenic Apple PlantsLI Mao-fu，WANG Yuan-hua，WANG Hua，and JIN Wan-mei*（Institute of Forestry and Pomology，Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Beijing Engineering Research Center for Deciduous Fruit Trees，Key Laboratory of Biology and Genetic Improvement of Horticultural Crops（North China），Ministry of Agriculture，Beijing 100093，China）Abstract：Used the Cre/loxp to establish inducible expression systems with site-specific recombination ability，to eliminate the selectable marker genes in transgenic plants specifically. Firstly，a binary expression vector PBI121-Cre-GUS with the Cre/loxp system was constructed to eliminate a marker gene from transgenic plants conveniently by digesting three intermediate vector and pBI121. Secondly，transgenic Malus hupehensis var. pinyiensis were obtained by using Agrobacterium mediated leaf disc method. These transgenic plants were induced by heat shock. Subsequently，the elimination efficiency was determined by GUS staining and PCR amplification. Finally，the transgenic plants without selectable marker gene were obtained.Key words：Malus hupehensis var. pinyiensis；tobacco；Cre/loxp recombination excision system；marker-free selectable gene随着转基因产品的不断商品化，人们对其生物安全性心存疑虑。
Cre—loxp系统的构建及在牙釉质发育中的应用
Cre—loxp系统的构建及在牙釉质发育中的应用Cre-loxp系统是近年来广泛应用在各领域的重组酶系统。
该系统由组织特异性重组酶cre和loxp位点组成。
可以通过对特定的DNA序列进行准确的切割及连接，达到在基因水平上对生物体进行定向遗传改造的目的。
牙釉质的发育离不开各种转录因子的作用，利用该系统对各转录因子的缺失或突变的研究，探讨特定时间、特定部位目的基因的异常改变对牙釉质发育的影响。
[Abstract] Cre-loxp system is recombinant enzyme systems，widely used in various fields in recent years.The system consists of a tissue-specific recombinase cre and loxp site components.Through specific DNA sequences accurate cutting and connection，at the genetic level to achieve the purpose of orienting genetically engineered organisms.Enamel development is inseparable from the role of various transcription factors，utilization of the system for each missing or mutated transcription factors，investigate the effect of abnormal changes in a particular time parts of the gene of enamel development.[Key words] Cre-loxp system；Loxp site；Recombinase cre；Transcription factors随着国民经济的日益发展，人们对口腔保健的意识也越来越强。
Cre／loxp重组系统在转基因植物中删除标记基因的应用
安徽 农 学 通 报 ， ｎ ｕ ｎ ｒ Ｓ ｉＢ ｌ ２ １ ，７ ０ ） Ａ ｈｉ ｇｉ ｅ ｕ１ ０ １ １ （ １ ． ． ．
Ｃ ｅ ｌ ｐ重 组 系 统 在 转 基 因 植 物 中 删 除 标 记 基 因 的应 用 ｒ／ｏ ｘ
郑 雪 琴
（ 建 师 范大 学 生 命 科 学 学 院 ， 建 福 州 福 福 ３ ００ ） ５ １８
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Ａｂｓｒ ｃ ： ｅ ｅ ｔ ｂｅ ｍ ａ ｋ ｒｇ ｎ ｓ ａｅ ｎｅ ｅ ｓ ｒ ｆ ｒｐ ａ ｅ ｅ ｉ ｒ ｎ ｆ ｒ ｔｏ ，ｂｕ ａ ｅ ａｔｎｔ ｎｓａ ｏ ｔｔ ｅ ｕ ｉ ｆ ｔ ａ ｔ Ｓ ｌ ｃａ ｌ ｒ ｅ ｅ ｅ ｒ ｃ ｓ ａｙ ｏ ｌｎｔｇ ｎ ｔｃ ｔａ ｓｏ ｍａｉ ｎ ｔｃ ｕｓ ｔｅ ｉ ｂ ｕ ｈｅ ｓ ｅ ｔｔ ｏ ｏ ｖ
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＿＝ ・＿ ［ ］◆ －一
组 酶 来 获得 无 标 记 基 因的 转 基 因植 株 。
关键 词 ： ｒ ｌ ｐ Ｃ ｅ ｏ ；转基 因植 物 ；标 记基 因 ；基 因删 除 ／ ｘ
利用Cre-Lox系统如何制备条件性敲除小鼠
利用Cre-Lox系统如何制备条件性敲除小鼠Cre-Lox系统的优势在于可以利用组织特异性启动子特异性控制Cre在特定组织的表达，以实现在特定组织细胞中对目的基因的敲除或改造，更好的规避全身敲除小鼠的胚胎致死现象。
1. Cre鼠的类型及应用为了更好的控制Cre重组酶的表达时间，通过使用具有雌激素受体的突变配体结合结构域的Cre融合蛋白（Cre-ERT），可以实现对Cre活性的时间控制，该蛋白可以通过他莫昔芬诱导而被激活[1]。
在无他莫昔芬诱导时，Cre-ERT融合蛋白与热激蛋白Hsp90结合，定位于细胞质中；当他莫昔芬给药诱导时，Hsp90脱离Cre-ERT融合蛋白，使Cre-ERT融合蛋白暴露核定位信号进入细胞核，发挥基因重组的作用[3]。
这一融合蛋白的介入相当于为Cre-Lox系统加装了一个由他莫昔芬控制的外源开关，使得体内基因编辑更具时空灵活性。
为了提升该系统的灵敏性、特异性，ER配体结合结构域被进一步突变为Cre-ERT2，该系统对他莫昔芬代谢活性物质4-羟基他莫昔芬（TAM主要通过肝脏的细胞色素P450酶代谢为活性产物4-OH-TAM）的敏感性提升了10倍[4]。
同样的，Cre-ERT2并非完美无暇，Poorva Sandlesh等人研究发现CreERT2-Lox系统在敲除SSRP1的应用中，存在效率过低问题[5]。
Cre鼠常用于与Flox小鼠杂交进行条件性的目的基因敲除，但也有研究将Cre鼠用于切割位于报告基因前的终止序列，以达到荧光标记特定细胞的目的，进一步研究细胞命运。
2. Flox鼠与Cre鼠的配繁在实际应用中，通过不同的Flox鼠与Cre鼠的配繁可以实现多种研究目的，通过组织/细胞特异性Cre鼠敲除特定组织/细胞群体的特定基因是最为常见的一种。
F0代与野生鼠互配获得F1代杂合子，F1代杂合子（flox/+）互配得到F2代纯合子（flox/flox），F2代纯合子（flox/flox）与全身/组织特异性工具鼠交配获得F3代（flox/+, Cre），F3代（flox/+, Cre）互配得到F4代（flox/flox, Cre），即cKO/cKI纯合子。
通过CreloxP重组酶系统对四膜虫基因N端进行表位附加的构建共27页文档
31、只有永远躺在泥坑里的人，才不会再掉进坑里。——黑格尔 32、希望的灯一旦熄灭，生活刹那间变成了一片黑暗。——普列姆昌德 33、希望是人生的乳母。——科策布 34、形成天才的决定因素应该是勤奋。——郭沫若 35、学到很多东西的诀窍，就是一下子不要学很多。——洛克
ห้องสมุดไป่ตู้
通过CreloxP重组酶系统对四膜虫基因N 端进行表位附加的构建
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
2006—101利用Cre／lox重组系统在转基因动物中筛选高效表达外源基因的“友好”基因座
2006—101利用Cre／lox重组系统在转基因动物中筛选高效表达外源基因的“友好”基因座佚名【期刊名称】《药物生物技术》【年(卷),期】2006(13)4【摘要】本研究目的是利用Cre／lox重组系统进行“友好”基因座的筛选，即利用一个两端带有lox位点的标记基因去转染动物细胞或生产转基因动物，获得可以高效表达外源基因的“友好”基因座。
一旦筛选到好的基因座，就建成了一个可以在动物体稳定地高效表达外源基因的技术平台。
为此，利用野生型loxP位点和含有一个点突变的lox511位点分别构建两个载体pSL loxGFP和pSL loxIFN。
【总页数】1页(P298-298)【关键词】转基因动物;loxP;外源基因;高效表达;基因座;Cre;筛选;系统;重组;动物细胞【正文语种】中文【中图分类】R-332;R378.23【相关文献】1.利用Cre/lox重组系统在转基因动物中筛选高效表达外源基因的"友好"基因座[J], 桑璐;郭英;任立明;安晓荣;候健;关宏;陈永福2.表达Cre重组酶Cre-pCEP4载体的构建及其在Cre/loxP重组系统中的应用 [J], 周杨;朱建国;唐小春;闫森;宋娜;张明军;李莉;欧阳红生;逄大欣3.利用Cre/lox重组系统获得无选择标记的SKTI抗虫转基因烟草 [J], 宋洪元;任雪松;司军;李成琼;宋明;雷建军4.Cre-lox重组系统介导转基因烟草中外源基因删除的研究 [J], 甄伟;汪阳明;丁伟;陈溪;胡鸢雷;林忠平5.利用Cre/lox特异位点重组系统获得无选择标记转AtMYB12基因的马铃薯 [J], 马连杰;刘海峰;王志强;代丽丽;丁新华;储昭辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。