微生物学实验思考题

微生物学实验思考题

微生物学实验思考题

实验1 培养基的配置

1、简述配置培养基的基本步骤及注意事项。

步骤：配料-溶解-调PH-加入琼脂-融化-分装-封口（棉花纱布或封口膜）-灭菌

注意事项

①加热溶化过程中，要不断的搅拌，防止琼脂糊底。最后，补足所失水分。

② pH值要按照各种不同培养基的要求调整。

③分装时注意不要使培养基沾染在管口或者瓶口上，以免沾污棉塞引起杂菌污染。

④培养基的灭菌时间和温度需要按照各种培养基的规定进行，培养基灭菌后，须放在37℃温箱培养24-48h，以检查灭菌是否彻底。

2、为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口要塞上棉塞才能使用？

为了防止外界微生物进入三角瓶或试管，保持三角瓶或试管内部无菌状态或微生物的纯培养状态。同时又允许空气进入，给内部菌种提供适宜生存环境。

3、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？

如果不进行灭菌培养料内的微生物就会发酵生长，从而破坏培养基内的营养成分，并且由于这些微生物的生长过程中分分泌一种或多种毒素从而抑制目的菌的生长。

检查无菌的方法：将灭菌的培养基放入37℃温室中培养24~48小时，若无杂菌生长，即可证明为无菌的。。

4、配置培养基为什么要调节pH？

因为不同微生物所需环境的PH不同,同时在微生物的生长过程中由于营养物质的分解、代谢产物的积累,培养基的PH也会发生改变,故

培养基在配置时以及在微生物培养过程中都需要调节PH。

5、什么是选择培养基？它在微生物工作中有何重要性？

选择性培养基是指根据某种微生物的特殊要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。

利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。

实验2 高压蒸汽灭菌

1、如何检查培养基灭菌是否彻底？

将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h，若无杂菌生长即已彻底。

2、高压蒸汽灭菌开始之前为什么要将锅内冷空气排尽？灭

菌完毕后，为什么要待压力降到0是才能打开排气阀？

灭菌主要因素是温度而非压力，排出冷空气后关上排气阀，维持所需压力。

压力未降至”0“便开盖取物可能会导致的后果：压力锅压力骤然降低，引起容器中的溶液喷

出容器口导致污染或者导致人烫伤。

3、灭菌在微生物实验操作中有何重要意义？

防止培养基被污染；防止杂菌影响实验结果。

4、黑曲霉的孢子与芽孢杆菌的芽孢子对热的抗性哪个最强？为什么？

芽孢杆菌的芽孢强。因为前者主要用于繁殖，抗逆性弱，后者是休眠体，抗逆性强。

5、干热灭菌完毕后，在什么情况下才能开箱取物？为什么？待电烘箱内温度降到70℃以下后才能开箱取物。电烘箱温度未降到70℃以前，切勿打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。

实验3 微生物的接种技术

如何做到避免在接种时污染杂菌？从接种前准备工作和接

种时的无菌操作法两方面来说明。

②在超净工作台上操作,工作台在使用前要紫外消毒,酒精消毒等

③应在酒精灯火焰前操作

④取菌种前灼烧接种针或接种环（要烧红）

⑤烧红的接种针（环）稍事冷却再取菌种,以免烧死菌种

⑥接种后应尽快塞上棉塞

实验4土壤微生物的分离和纯化

1、稀释分离时，为何要将融化的培养基冷却到50℃左右，才倒入装有菌液的培养皿内？

过高的温度会使细菌失去活性，且一般菌体的最适温度为37度左右,50度开始观察可以观察到菌体在什么温度的时候活性最大。

2、如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？

通过观察菌落特征，单个菌落再次划线分离。

3、如果要分离得到嗜盐细菌，在什么地方取样品为宜？简述理由。

长期保持高盐度的环境，存活的微生物适应了该环境，成为嗜盐细菌。反之，不适应该环境的细菌则无法在那里生存下来。

实验5 光学显微镜的结构和使用方法

使用油镜观察标本时为何要加香柏油？

香柏油的折射率n=1.52，与玻璃基本相同。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。

实验6 细菌的染色技术

1、简单染色法的用途？

可用以观察微生物的形状、大小以及细胞排列状态。

2、革兰氏染色法中哪个步骤可以被省去而不影响最终结果？什么情况下可用？

复染。确定细菌为G+（革兰氏阳性）时。

3、作革兰氏染色涂片时为什么不能过于浓厚？其染色成败

的关键是什么？

如果过于浓厚,菌体会很难吸附到载玻片上,染色冲洗过程中很容易别冲下来；2、表层被染色,但是内层菌体很难染色。

乙醇脱色是染色操作成败的关键。脱色时间不足容易使革兰氏阴性菌（G-）被误认为是革

兰氏阳性菌（G+）；脱色时间过长容易使G+被误认为G-。

4、当你对一株未知菌进行染色时，怎样确证你的染色技术

操作正确，结果可靠？

可用已知菌与未知菌进行混合涂片，使二者染色条件保持一致。若已知菌的结果与预期相符，则证明操作正确，结果可靠。

实验7微生物的显微镜直接计数法

血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减

少误差？

误差主要来自实际误差、方法误差、仪器误差。

减少误差：保持样品的纯净、细胞溶液必须震荡均匀、样品浓度适中、血球计数板要整洁清晰。

实验8 细菌生长曲线的测定

1、为什么用比浊法测定的细菌生长只是表示细菌的相对生

长状况？

因为比色法只能判断菌的相对密度，而没有办法区分活菌和死菌，因此只能表示细菌的相对

生长状况。

2、在生长曲线中为什么会出现稳定期和衰亡期？在生产实践中怎样缩短延迟期？怎样延长对数期及稳定期？怎样控

制衰亡期？试举例说明。

培养基的营养有限，在菌的数量达到环境允许最大值时，同种菌之间竞争剧烈，故出现稳定期，随着营养的进一步消耗，菌没有足够的营养，出现死亡，所以出现了衰退期。缩短延迟期，可以采用营养成分与原来相近的培养基，或者采用该种菌原来类似的生长条件与营养。延长对数期和稳定期，恒化器可以将微生物保持在对数期进行研究，恒浊器可以使细菌连续生长。控制衰退期可以及时补充营养，分离出死菌。

实验10抗生素效价的测定

1、影响抑菌圈大小的因素？

①敏感菌的浓度（用量)；