了解琼脂糖凝胶电泳的不同类型与特点

琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和检测生物大分子（如蛋白质和

核酸）的技术。它基于琼脂糖在适当的缓冲溶液中形成凝胶的特性，

通过电场作用使待测大分子在凝胶中进行迁移分离的过程。琼脂糖凝

胶电泳可以分为几种不同类型，每一种都有其特点和应用领域。

一、水平琼脂糖凝胶电泳

水平琼脂糖凝胶电泳是最早应用于大分子分离的技术之一。它通过

在平板的琼脂糖凝胶上进行电泳，使待测样品在水平方向上进行迁移。由于凝胶厚度有限，水平琼脂糖凝胶电泳适用于分离较小的生物大分子。其优点是操作简单，分离速度较快，但由于凝胶曲线存在较大的

热效应，会导致样品的横向扩散，限制了其分辨率。

二、垂直琼脂糖凝胶电泳

垂直琼脂糖凝胶电泳是目前最常用的琼脂糖凝胶电泳技术。它通过

将琼脂糖溶解在缓冲液中，并在垂直的平板上形成等浓度的凝胶。待

测样品经过凝胶进行迁移分离时，受到凝胶微孔的筛选作用，使分离

结果更为准确。垂直琼脂糖凝胶电泳分辨率高，适用于分离和鉴定大

小较为接近的蛋白质和核酸。此外，可以根据需要选择不同浓度的琼

脂糖凝胶，以实现对分子大小范围的调控。

三、双向琼脂糖凝胶电泳

双向琼脂糖凝胶电泳是在垂直琼脂糖凝胶电泳的基础上发展而来的

一种技术。它通过改变缓冲液的电场方向以及凝胶孔道大小，使待测

样品在垂直方向上进行双向迁移分离。双向琼脂糖凝胶电泳具有更高

的分离能力和分辨率，在分离和鉴定蛋白质和核酸复杂混合物时表现

出优势。然而，双向琼脂糖凝胶电泳的操作相对复杂，需要更多的实

验条件和设备支持。

综上所述，琼脂糖凝胶电泳作为一种常用的生物大分子分离和检测

技术，具有多种类型和特点可供选择。水平琼脂糖凝胶电泳操作简单，分离速度较快，适用于较小的大分子；垂直琼脂糖凝胶电泳分辨率高，适用于分离更接近大小的生物大分子；双向琼脂糖凝胶电泳具有更高

的分离能力和分辨率，适用于复杂样品的分析。根据实验需求和目标，合适的琼脂糖凝胶电泳技术可以有效提高分离和鉴定的准确性和可靠性，为生物研究提供有力的支持。

琼脂糖凝胶电泳

一、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80％）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下。 1. 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。 2. 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大（约占98％~99％），近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。 3. 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。 4. 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质和同工酶。将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发展成免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系，由于建立了超微量技术，0.1ug蛋白质就可检出。

琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。二、DNA的琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。 1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系 ① DNA分子的大小在凝胶中，DNA片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。 ②琼脂脂糖的浓度如下表所示，不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。表琼脂糖浓度与DNA分离范围

琼脂糖凝胶电泳及其影响因素

琼脂糖凝胶电泳及其影响因素琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的克隆操作。琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果较好,其分辩力极高,甚至相差1bp的DNA片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对大量的DNA,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。目前,一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳。琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定: 1、 DNA的分子大小: 线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢。 2、琼脂糖浓度一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。 3、 DNA分子的构象当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA 移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的DNA图谱,则为同一种DNA。 4、电源电压在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长,片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大,因此电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大,所加电压不得超过5v/cm。 5、嵌入染料的存在荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA，使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降低15％。 6、离子强度影响电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶),电导率最小,DNA几乎不移动,在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。

琼脂糖凝胶电泳技术

电泳检测技术是指利用带电颗粒在电场中能向异性电极泳动这一现象来分离、纯化或分析检测供试品的一种生物化学技术。原理：许多生物分子都带有电荷，在电场作用下可发生移动，由于混合物中各组分所带电荷性质、数量以及相对分子质量各不相同，使在同一电场作用下，各组分的泳动方向和速率也各有差异，所以在一定时间内，它们移动距离不同，从而可达到分离鉴定的目的。 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，包括电荷效应和分子筛效应。琼脂糖是由天然的琼脂加工制得，是一种直链杂聚多糖，溶于热水，形成溶胶，冷却后成为孔径范围从50nm到大于200nm的大网孔径凝胶。由于孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用，该电泳技术是目前分离、分析DNA片段的标准方法。 DNA琼脂糖凝胶电泳的原理 DNA 分子是两性电解质，在高于其等电点的溶液（pH8.0~pH8.3 DNA分子本身的大小和构型、凝胶浓度决定了DNA分子的迁移速度。）中，碱基几乎不解离，磷酸基团全部解离，DNA 分子带负电荷，在电场中向正极移动。 DNA分子大小对迁移速率的影响：相对分子质量大，迁移慢；相对分子质量小，迁移快。DNA分子构型对迁移速率的影响：迁移速度：闭环﹥直链DNA﹥开环DNA。琼脂糖凝胶浓度的影响：同样大小的线性DNA片段，在不同浓度的琼脂糖凝胶中的迁移速度不同，浓度越大，迁移的越慢常用的电泳上样缓冲液含溴酚蓝，有的还含有二甲苯青，这些指示剂可以指示电泳的速度。溴化乙淀（EB）是核酸的染色剂，能插入DNA分子中形成荧光结合物，EB在紫外线照射下的发射荧光。荧光的强度与DNA的含量成正比，从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置及估计出待测样品的浓度。 EB是强致癌剂。电泳操作步骤(整个过程要求带一次性手套 1、胶槽准备 ①将凝胶托盘放入制胶盒中; ②将加样梳垂直插入到制胶盒的小凹槽内，梳齿底端和凝胶托盘有1mm的间隙; ③将制胶盒放在调整好的水平台上。 2、凝胶准备用1×TAE配制1％琼脂糖凝胶。 ①称0.15g琼脂糖置三角瓶中，加15ml 1×TAE; ②微波炉加热大约1分钟，熔化琼脂糖; ③熔化的琼脂糖自然冷却到60～70℃时，加入DNA染料，并轻轻混匀。 3、倒胶：将冷却致60℃的凝胶倒入准备好的制胶盒内，凝胶厚度3～5mm,室温下静置半小时左右冷却，凝胶固化。 4、轻轻拔出固定在凝胶中的加样梳。将带凝胶的凝胶托盘置于电泳槽中，并使样品孔位于电场负极，向电泳槽中加入1×TAE电泳缓冲液，越过凝胶表面即可,出去样品孔的气泡。 6、样品准备：向核酸样品中加入约为样品体积1/10的上样缓冲液，用加样器轻轻混匀。 7、上样：用加样器吸取样品，轻轻的加入到凝胶的样品孔中。加样量一般5-7μl。 8、盖上电泳槽，接通电源，开始电泳。开始电泳前，再次确认凝胶样品孔处于电场的负极。电泳条件：5v/cm；时间20-30分钟左右 9、电泳结束后，切断电源，取出凝胶。

两种电泳

凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种. 一、琼脂糖凝胶电泳: 琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法.琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物.根据琼脂糖的溶解温度，把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖.低熔点琼脂糖熔点为62～65℃，溶解后在37℃下维持液体状态约数小时，主要用于DNA片段的回收，质粒与外源性DNA 的快速连接等. (一)凝胶浓度凝胶浓度的选择依DNA分子的大小而定. 琼脂糖凝胶的浓度与DNA分离范围 (二)电泳缓冲液核酸电泳缓冲液有三种，即Tris-硼酸(TBE)、Tris-乙酸(TAE)和Tris-磷酸(TPE).TBE 与TPE缓冲容量高，DNA分离效果好，但TPE在DNA片段回收时含磷酸盐浓度高，容易使 DNA沉淀.TAE缓冲容量低，但价格较便宜，因而推荐选用TBE.缓冲液中的EDTA可螯合二价阳离子，从而抑制DNA酶的活性，防止PCR 扩增产物降解. 10XTBE缓冲液的配制 Tris硷，108克 EDTA，9.3克硼酸，55克

H2O至，1000ul (其PH应为8.0～8.2) 临用时用水稀至0.5XTBE(20倍稀释. (三)核酸电泳的指示剂与染色剂 1.指示剂:核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色.溴酚兰在碱性液体中呈紫兰色，在0. 6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色，它在 1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似. 指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液.载样缓冲液的作用有①增加样品密度，使其比重增加，以确保DNA均匀沉入加样孔内.②在电泳中形成肉眼可见的指示带，可预测核酸电泳的速度和位置.③使样品呈色，使加样操作更方便. 染色剂:核酸电泳后，需经染色后才能显现出带型，最常用的是溴化乙锭染色法，其次是银染色. 溴化乙锭(ethidium bromide，EB)是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光.根据情况可在凝胶电泳液中加入终浓度为 0.5ug/ml的EB，有时亦可在电泳后，将凝胶浸入该浓度的溶液中染色10～15min.琼脂糖凝胶EB染色，肉眼可见核酸电泳带，其DNA量一般>5 ng，当溴化乙锭太多，凝胶染色过深，核酸电泳带看不清时，可将凝胶放入蒸馏水浸泡30min后再观察. 银染色:银染色液中的银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛使Ag+还原成银颗粒，可把核酸电泳带染色黑褐色.主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色. 也用于琼脂糖凝胶染色.其灵敏度比EB高200倍.但银染色后，DNA不宜回收. (四)电泳 1.电泳装置: 电泳装置主要有电泳仪，电泳槽及灌胶模具等. 2.电泳方法: (1)用蒸馏水将电泳槽和梳子冲洗干净.放在水平桌面上，并架好梳子. (2)根据核酸分子量的大小配制不同浓度的琼脂糖凝胶，一般200～400bp的DNA片段，可配制1.2～1.7%浓度的琼脂糖用于电泳. 3.配制0.5XTBE电泳缓冲液100ml于三角烧瓶中，称取一定量的琼脂糖粉放入后沸水锅或微波炉内加热熔化.冷却至60℃(需要时可加入溴乙锭)，倒入电泳槽中，待凝固. 4.向电泳槽中倒入0.5XTBE，其量以没过胶面2mm为宜，小心移去梳子.如样品孔内有气泡，应设法除去.

琼脂糖凝胶电泳技术

1、实验目的：学习与掌握DNA电泳的技术方法，利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、含量以及分子量，及分离不同大小DNA片段。 2、实验原理：电泳概念及种类* ? 电泳：是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象电泳基本原理迁移率（或泳动度）是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度，可用下列公式计算：Ｕ=υ/E =(d/t)/(V/l) =dl/Vt Ｕ为迁移率（cm2·V-1·min-1）；υ为颗粒泳动速度（cm·s-1）；E 为电场强度（V·cm-1）； d 为颗粒泳动的距离（cm）；l为滤纸有效长度（cm）；V为实际电压（V）；t为通电时间（s或min）。通过测量d, l, V, t, 即可计算出被分离物质的迁移率。 1迁移率单位= 10-5 cm2·V-1·min-1在确定的条件下，某物质的迁移率为常数，是该物质的化学特征常数颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快，反之则泳动速度慢。

迁移率还与分子的形状，介质粘度，颗粒所带电荷有关，迁移率与颗表面电荷成正比，与介质粘度及颗粒半径成反比。影响琼脂糖电泳迁移的主要因素* 电场强度溶液的pH值溶液的离子强度电渗现象温度的影响支持物的影响电泳的分类按分离原理分类： 1.区带电泳 2.移界电泳 3.等速电泳 4.聚焦电泳

按有无固体支持物分类影响琼脂糖电泳迁移的主要因素DNA的大小 DNA的构象* 琼脂糖浓度* 缓冲液*

不同构像质粒分离不同大小DNA片段的合适琼脂糖凝胶浓度缓冲液 TAE：乙酸盐缓冲液 TBE：硼酸盐缓冲液 TPE：磷酸盐缓冲液

了解琼脂糖凝胶电泳的不同类型与特点

了解琼脂糖凝胶电泳的不同类型与特点琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和检测生物大分子（如蛋白质和核酸）的技术。它基于琼脂糖在适当的缓冲溶液中形成凝胶的特性，通过电场作用使待测大分子在凝胶中进行迁移分离的过程。琼脂糖凝胶电泳可以分为几种不同类型，每一种都有其特点和应用领域。一、水平琼脂糖凝胶电泳水平琼脂糖凝胶电泳是最早应用于大分子分离的技术之一。它通过在平板的琼脂糖凝胶上进行电泳，使待测样品在水平方向上进行迁移。由于凝胶厚度有限，水平琼脂糖凝胶电泳适用于分离较小的生物大分子。其优点是操作简单，分离速度较快，但由于凝胶曲线存在较大的热效应，会导致样品的横向扩散，限制了其分辨率。二、垂直琼脂糖凝胶电泳垂直琼脂糖凝胶电泳是目前最常用的琼脂糖凝胶电泳技术。它通过将琼脂糖溶解在缓冲液中，并在垂直的平板上形成等浓度的凝胶。待测样品经过凝胶进行迁移分离时，受到凝胶微孔的筛选作用，使分离结果更为准确。垂直琼脂糖凝胶电泳分辨率高，适用于分离和鉴定大小较为接近的蛋白质和核酸。此外，可以根据需要选择不同浓度的琼脂糖凝胶，以实现对分子大小范围的调控。三、双向琼脂糖凝胶电泳双向琼脂糖凝胶电泳是在垂直琼脂糖凝胶电泳的基础上发展而来的一种技术。它通过改变缓冲液的电场方向以及凝胶孔道大小，使待测

样品在垂直方向上进行双向迁移分离。双向琼脂糖凝胶电泳具有更高的分离能力和分辨率，在分离和鉴定蛋白质和核酸复杂混合物时表现出优势。然而，双向琼脂糖凝胶电泳的操作相对复杂，需要更多的实验条件和设备支持。综上所述，琼脂糖凝胶电泳作为一种常用的生物大分子分离和检测技术，具有多种类型和特点可供选择。水平琼脂糖凝胶电泳操作简单，分离速度较快，适用于较小的大分子；垂直琼脂糖凝胶电泳分辨率高，适用于分离更接近大小的生物大分子；双向琼脂糖凝胶电泳具有更高的分离能力和分辨率，适用于复杂样品的分析。根据实验需求和目标，合适的琼脂糖凝胶电泳技术可以有效提高分离和鉴定的准确性和可靠性，为生物研究提供有力的支持。

琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳原理琼脂糖是从琼脂中提取出来的，是由D-半乳糖和3、6-脱水-L-半乳糖结合的链状多糖，含硫酸根比琼脂少，因而分离效果明显提高。琼脂糖电泳具有以下优点：①琼脂糖含液体量大，可达98％～99％，近似自由电泳，但样品的扩散度比自由电泳小，对蛋白质的吸附极微；②琼脂糖作为支持体有分辨率高、重复性好等优点；③电泳速度快；④透明而不吸收紫外线，可以直接用紫外检测仪作定量测定；⑤区带可染色，样品易回收，有利于制备。琼脂糖凝胶电泳是分子生物学研究中常用的技术，可用于分离，鉴定和纯化DNA片段。DNA分子在电泳时带负电荷，因此在电场中向正极移动。DNA分子的迁移率决定于DNA分子大小、DNA的构型、凝胶浓度、电场强度四个因素。凝胶中的DNA可与荧光染料溴化乙锭(EB)结合，在紫外灯下可看到荧光条带，籍此可分析实验结果。 1. DNA分子的大小：线性DNA分子的迁移率与其分子量的对数值成反比。 2. DNA分子的形态：在同一浓度的琼脂糖凝胶中，超螺旋DNA分子迁移率比线性DNA分子快，线性DNA分子比开环DNA分子快。 3. 琼脂糖浓度：一定大小的DNA片段在不同浓度的琼脂糖凝胶中的迁移率是不相同的。相反，在一定浓度的琼脂糖凝胶中，不同大小的DNA片段的迁移率也是不同的。若要有效地分离不同大小的DNA，应采用适当浓度的琼脂糖凝胶。

4. 电场强度：每厘米凝胶电压不超过5V，若电压过高分辨率会降低，分离的线性范围会变窄。只有在低电压（1 V/cm）时，线性DNA分子的电泳迁移率与所用电压成正比。电场强度偏高还会产生大量热量，引起DNA片段的降解。一般来讲，大分子用较低电场强度以避免拖尾，小分子用较高电场强度以避免扩散。操作步骤： 1. 小胶板一般需凝胶15 ml，如果用八孔梳子，可加样15 μl。如果需要回收DNA片段，可适量扩大体积，并使用大齿梳子。 2. 凝胶浓度根据DNA分子大小而定。 3. 将凝胶成形模具水平放置于模具托盘中，将选好的梳子放好，梳子底部与模具之间会大约留1mm空间。 4. 称取DNA电泳用琼脂糖0.12 g放入专用的三角烧瓶中，加入15 ml 0.5×TAE缓冲液，混匀后，将烧瓶置于微波炉中，中低火3 min，直至琼脂糖完全溶解（0.8%）。 5. 关闭微波炉，取出三角烧瓶，将其置室温下冷却至70℃左右(手握烧瓶可以耐受)，再加入溴化乙锭(10mg/ml) 1.5 μl，轻轻混匀后（注意不要剧烈晃动，以免产生气泡），将凝胶溶液倒入胶板铺板。

琼脂糖凝胶电泳的特点

琼脂糖凝胶电泳的特点琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA 分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp至50kb的DNA片段。在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭(ethidum bromide ,EB)，在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带，在电场中，pH8.0条件下，凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。琼脂糖凝胶有如下特点： (1)DNA的分子大小在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数目的常用对数值成反比，分子越大迁移得越慢。 (2)琼脂糖浓度一个特定大小的线形DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度(t)成线性关系。 (3)电压低电压时，线状DNA片段迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，随着电压的增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。 (4)电泳温度DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时的温度影响不明显，不同大小的DNA片段其相对迁移速率在4℃与30℃之间不发生明显改变，但浓度低于0.5%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱，

最好在4℃条件下电泳。 (5)嵌入染料荧光染料溴化乙锭用于检测琼脂糖凝胶中的DNA，染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状迁移率降低15%。 (6)离子强度电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA电泳迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶，电导率最小，DNA几乎不移动，在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液)，则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化。琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA 限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。琼脂糖凝胶电泳试剂盒一套包含琼脂糖预制胶10块、高压快速电泳液15mL、DNA loading buffer6x 200µL、剪刀及使用手册，有8孔6*6、6孔6*6、13孔6*12、18孔6*12等多种规格。

琼脂糖凝胶电泳仪凝胶种类

琼脂糖凝胶电泳仪凝胶种类琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis）是常用的分离DNA、RNA和蛋白质分子的实验技术，其主要原理是依据目标分子的大小进行分离。在这一过程中，琼脂糖凝胶作为载体和分离介质起到了至关重要的作用。本文将介绍琼脂糖凝胶电泳实验中常用的凝胶种类及其特点。 1. 水平琼脂糖凝胶水平琼脂糖凝胶是最常见的琼脂糖凝胶电泳种类。其制备方法相对简单，可根据需要自行配制。水平琼脂糖凝胶通常用于分离较大的DNA片段（100bp-20kb），因其凝胶结构较松散，分辨率一般较低。 2. 竖直琼脂糖凝胶通过改变制备方法，制备出了竖直琼脂糖凝胶。相对于水平琼脂糖凝胶，竖直琼脂糖凝胶可以提高分辨率，使其适用于分离较小的DNA片段（20bp-1kb）和RNA分子。但由于制备方法较为复杂，竖直琼脂糖凝胶也较为昂贵，需要更高的实验技能。 3. 坡度（Gradient）琼脂糖凝胶坡度琼脂糖凝胶其实也是竖直琼脂糖凝胶的一种变形，经过特殊的制备技术，凝胶的浓度呈梯度分布（例如4%-20%），从下到上逐渐升高。这种凝胶可以在一个凝胶槽内分离出不同大小的目标分子，可同时分离出不同大小的DNA片段或蛋白质。坡度琼脂糖凝胶通常用于鉴定DNA或蛋白质的分子大小。 4. 聚丙烯酰胺凝胶（Polyacrylamide gel）除了琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶（Polyacrylamide gel）也是常用的凝胶种类。该凝胶通常用于分离较短的DNA或RNA（1bp-500bp）和小分子蛋白质。和坡度琼脂糖凝胶类似，聚丙烯酰胺凝胶的浓度也可控制。但相对于琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶的制备难度较高，需相对高的技术水平。综上所述，不同的琼脂糖凝胶电泳实验需要选择不同的凝胶种类。熟悉不同凝胶种类的特点和适用范围可以帮助科研人员正确进行琼脂糖凝胶电泳实验，提高实验的可靠性和效率。

凝胶电泳技术与应用

凝胶电泳技术与应用凝胶电泳是一种分离、纯化和检测生物分子的基础技术，广泛应用于基础生物学研究、临床诊断、药物研发等领域。它的原理是利用电场通过凝胶，分离不同大小、形状、电荷的生物分子，具有广泛的适用性和较高的分辨率。本文将从技术原理、类型、应用等方面介绍凝胶电泳的相关知识。一、技术原理凝胶电泳的技术原理是将电荷带有生物分子通过凝胶进行分离的技术，基于在电场作用下，带电分子沿着电场线移动到电极。具体分离原理是根据生物分子的大小、形状和电荷，选择不同类型的凝胶，如聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯凝胶等，通过不同的电场条件，形成不同的分离模式。带电分子在凝胶中的移动速度与电场强度成正比，与分子大小成反比，通过在凝胶中的移动，使得大分子迁移速度慢，小分子快，从而可以分离不同大小和形状的生物分子。二、类型 1、琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是凝胶电泳的早期经典技术，它使用的是具有多孔性结构的琼脂糖凝胶。琼脂糖凝胶的孔隙大小和形状可人为调整，从而实现不同大小和形状生物分子的分离。琼脂糖凝胶电泳具有简单、易用、成本低等特点，主要用于分离DNA、RNA等小分子。 2、聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳是近年来较常应用的一种凝胶电泳技术，它是通过将聚丙烯酰胺单体聚合成大分子链，形成具有透明度和稳定性的凝胶，进行生物分子的分离的。聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点是分辨率高、适用范围广，可以分离多种生物分子，并且可以形成各种形态的凝胶，如板状、柱状、管状等。

3、分子筛凝胶电泳分子筛凝胶电泳是一种基于生物分子大小的分离技术，例如蛋白质、多肽、核酸等，它利用不同的孔隙大小和形状来限制生物分子的通过，从而实现分离纯化的效果。分子筛凝胶电泳一般使用交替吸附凝胶或低熔点温度凝胶，具有分离效果好、可逆性强、重复性好等特点。三、应用凝胶电泳是一种广泛应用的分离技术，主要应用于生物学、医学、食品科学、环境监测、法医学等领域。 1、生物学领域凝胶电泳在生物学领域中广泛用于分离和检测DNA、RNA、蛋白质等生物分子，并用于基因测序、PCR检测等分子生物学实验。 2、医学领域凝胶电泳在临床诊断、药物研发、检查、生物制剂等领域有着广泛的应用。例如，通过血清蛋白质电泳检测，可以诊断肝病、肾病、白血病等恶性肿瘤。 3、食品科学领域凝胶电泳在食品科学领域中主要用于食品的质量检测和分析、鉴定食品加工中是否存在问题等。 4、环境监测领域凝胶电泳在环境监测领域中广泛应用于水体、土壤、空气、废物等的监测和分析。结语

琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳以琼脂糖凝胶作为支持介质的电泳称为琼脂糖凝胶电泳。二、琼脂糖凝胶电泳的准备和操作方法 1 、制备琼脂糖凝胶时注意避免产生气泡凝胶电泳分为垂直型和水平型，一般垂直型分离效果好于水平型。但水平型可制备低浓度琼脂糖，制胶和加样比较方便，且电泳槽制作简单、价格低廉。用缓冲液配制所需浓度的琼脂糖凝胶，水浴或微波炉中加热使琼脂糖完全融化，将溶液冷至 55 ? ，用少量琼脂糖凝胶将玻璃板或有机玻璃板封边，放置样品梳（梳齿下端离玻璃板 0.5 -1.0mm ）。接着将融化的琼脂糖凝胶溶液不间断地倒在玻璃板上或有机玻璃板模子中（厚度依样品浓度而定，须注意避免气泡混入） , 室温下自然凝固。待完全凝固后小心取出加样器，在电泳槽中加入适量电泳缓冲液，使胶板浸没在电泳缓冲液下约 1mm 处。 2 、样品制备与加样所加样品应有适当浓度与较小体积，用微量注射器缓慢加入样品，点样时电源必须处于关闭状态。为了指示电泳的距离，避免样品在电泳槽缓冲液中飘浮，常在制备好的样品中加入含有蔗糖或甘油以及指示剂（溴酚蓝、二甲苯青等）的上样缓冲液。另外，样品中含盐量不能太高，否则电泳中会出现区带消失、前沿

不齐等现象。样品中 DNA 含量以每条区带的 DNA 不少于0.1 μ g 为宜，DNA 浓度过高会使电泳区带变宽，泳动距离异常。样品的用量由加样孔的体积决定，通常为 10-50 μ g 。 3 、电泳电泳温度视需要而定。对于大分子的分离，宜低温，电压应低（一般不超过 5V/cm ）。普通电泳可在室温进行，电泳的电压为 5-15V/cm 。 4 、染色－以 DNA 电泳为例常用荧光染料溴化乙锭（ EB ）进行染色以观察在琼脂糖凝胶中的 DNA 条带。 EB 能插入 DNA 分子中碱基对之间，使 EB 与 DNA 结合（超螺旋 DNA 与 EB 结合能力小于双链闭环，而双链闭环的 DNA 与 EB 结合能力小于线状双链 DNA ）。将以染色的凝胶浸泡在 1mmol/lMgSO 4 溶液中 1 小时，可以降低未结合的 EB 所引起的背景荧光，以提高检测的灵敏度。琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。 1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系（1）DNA分子的大小在凝胶中，DNA片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。（2）琼脂脂糖的浓度如下表所示，不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。表琼脂糖浓度与DNA分离范围琼脂糖浓度 /% 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0

琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA

琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广，尤其适于分离大片段DNA。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。琼脂糖凝胶电泳操作流程准备干净的配胶板和电泳槽注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。选择电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。适合的电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。电泳的合适电压和温度电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA 电泳，温度应该低于15℃。注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象 DNA样品的纯度和状态

琼脂糖凝胶电泳解读

琼脂糖凝胶电泳 1.原理琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。蛋白质和核酸会根据pH 不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的 pH 在 6~9 之间，离子强度 0.02~0.05 为最适。常用 1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp 的 DNA 片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离 DNA 的范围为 0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达 10^7bp 的 DNA 片段。 DNA 分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA 分子在高于等电点的pH 溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链 DNA 几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速率向正极方向移动。 2操作流程准备干净的配胶板和电泳槽琼脂糖凝胶电泳：水平电泳注意 DNA 酶污染的仪器可能会降解 DNA ，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。 (1)电泳方法

一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个 bp 的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大 DNA 链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的DNA 链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。 (2)凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在 0.5～ 2% 之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的 DNA 带不易分辨，造成条带缺失现象。 (3)缓冲液常用的缓冲液有 TAE 和 TBE，而 TBE 比 TAE 有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低， pH 值上升，缓冲性能下降，可能使 DNA 电泳产生条带模糊和不规则的 DNA 带迁移的现象。三羟甲基氨基甲烷（ Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般简称为 Tris）是一种有机化合物，其分子式为 (HOCH2)3CNH2 。Tris 被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。例如，在生物化学实验中常用的 TAE 和 TBE 缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。 (4)电压和温度电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的 DNA 电泳，温度应该低于15℃。注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA 带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象 (5)DNA 样品的纯度和状态注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。乙醇沉淀可以去除多余的盐，用酚可以去除蛋白。注意变性的DNA 样品可能导致条带模糊和缺失，也可能出现不规则的DNA 条带迁移。在上样前不要对DNA 样品加热，用 20mM NaCl 缓冲液稀释可以防止DNA 变性。 (6)DNA 的上样

琼脂糖凝胶电泳

DNA琼脂糖凝胶电泳一、基本原理当把一个带净电荷(q)的颗粒放入电场，便有一个电场力(F)作用于其上。F 的大小取决于颗粒静电荷量及其所处的电场强度(E)，它们之间的关系可以表示成：F=E×q。由于F的作用，使带电颗粒在电场中向一定方向泳动。此颗粒在泳动的过程中还受到一个相反方向的摩擦力(f*v)阻挡。当这两种力相等时，颗粒则以速度(v)向前泳动：v=F/f,其中f为摩擦系数。根据Stoke公式，阻力大小取决于带电颗粒的大小、形状以及所处介质的粘度，即f=6πγη, γ为颗粒半径，η为介质粘度。该公式指球形颗粒所受的阻力。代入F＝E×q得到: v=E×q/6πγη.从这个公式可以看出，带电颗粒在电场中泳动的速度与电场强度和带电颗粒的净电荷量成正比，与颗粒半径和介质粘度成反比。带电颗粒在电场中泳动的速度常用泳动度(m)或者迁移率以下列公式表示： m＝μ/E=d*l/V*t d为带电颗粒泳动的距离(cm)，l为支持物的有效长度(cm)，t为通电时间(s)，V为加在支持物两端的电压。在一定条件下，任何带电颗粒都具有自己特定的泳动度。它是胶体颗粒的一个物理常数，可用其鉴定蛋白质、核酸等物质的纯度，还可以用其来研究蛋白质、核酸等物质的一些理化性质。影响泳动度的因子有颗粒的性质、电场强度、溶液的性质等。二、琼脂糖凝胶电泳

通常情况下，核酸类物质的分离、鉴定是采用琼脂糖凝胶(做支持物)电泳法进行的。用琼脂糖分离线性DNA时，其迁移率与该物质分子质量的关系密切，而与结构和碱基组成无关。这也是采用凝胶电泳法测定核酸分子质量的依据所在。此方法除了可以分离线性DNA外，还可以分离、分析细菌质粒的闭环DNA和开环DNA，以及分子质量不等的RNA片段。一般实验室采用的琼脂糖凝胶的浓度为0.3%——2%。不同的凝胶浓度，可以分离不同长度的DNA片段。具体见表格：琼脂糖凝胶电泳常用的缓冲液：

凝胶电泳实验报告模板

重庆大学研究生专业实验教学实验报告书重庆大学研究生院制实验课程名称：凝胶电泳实验实验指导教师：学院：专业及类别：生物学学号：姓名：实验日期：成绩：

一、实验目的 1.理解凝胶电泳的分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的基本原理。 2.熟练琼脂糖凝胶电泳实验的基本操作。 3.通过实验了解凝胶电泳实验的注意事项并在以后的实验中尽量避免。 4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、浓度和分子量以及分离大小不同的DNA片段。 5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小的方法。二、实验材料、用具及试剂 1.材料：菌落PCR产物（待检测DNA片段）； 2.用具：①琼脂糖凝胶电泳：电泳仪，水平板型电泳槽，电子天平，微量移液器（10µl），枪头，三角瓶，点样板，梳子，微波炉，凝胶成像仪； ②聚丙烯酰胺凝胶电泳：垂直板电泳槽，稳压稳流电泳仪，梳子； 3.试剂：琼脂糖，1×TAE缓冲液，载样缓冲液（Loading buffer），goldviwe 染料，DL5,000 DNA Marker (Takara)。三、实验原理核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴定和纯化DNA或RNA 片段，具有以下优点：便于分离、便于检测和便于回收。其工作原理相对而言比较简单、主要用到了物理学的电荷理论。当一种分子被放置在电场当中时，它们就会以一定的速度移向适当的电极，这种电泳分子在电场作用下的迁移速度，叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。也就是说，电场强度越大、电泳分子所携带的净电荷数量越多，其迁移的速度也就越快，反之则较慢。由于在电泳中使用了一种无反应活性的稳定的支持介质，如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺胶等，从而降低了对流运动，故电泳的迁移率又是同分子的摩擦系数成反比的。已知摩擦系

电泳技术的基本原理和分类

电泳技术的基本原理和分类电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。电泳技术的基本原理和分类在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。F＝QE质点的前移同样要受到阻力（F）的影响，对于一个球形质点，服从Stoke 定律，即：F′＝6πr ην 式中r 为质点半径，η 为介质粘度，ν 为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时：F＝F′即QE＝6πr ην 可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。前者包括Tise-leas 式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。区带电泳则包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。

自由电泳法的发展并不迅速，因为其电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等。而区带电泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较广泛。本节仅对常用的几种区带电泳分别加以叙述。影响电泳迁移率的因素 ⒈ 电场强度电场强度是指单位长度（cm）的电位降，也称电势梯度。如以滤纸作支持物，其两端浸入到电极液中，电极液与滤纸交界面的纸长为20cm，测得的电位降为200V，那么电场强度为200V/2 0cm ＝10V/cm。当电压在500V 以下，电场强度在2-10v/cm 时为常压电泳。电压在500V 以上，电场强度在20-200V/cm 时为高压电泳。电场强度大，带电质点的迁移率加速，因此省时，但因产生大量热量，应配备冷却装置以维持恒温。 ⒉ 溶液的pH 值溶液的pH决定被分离物质的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。例如蛋白质分子，它是既有酸性基团（- COO）H ，又有碱性基团（-NH2）的两性电解质，在某一溶液中所带正负电荷相等，即分子的净电荷等于零，此时，蛋白质在电场中不再移动，溶液的这一pH 值为该蛋白质的等电点（isoelctric point ，pI ）。若溶液pH 处于等电点酸侧，即pH pl ，则蛋白质带负电荷，向正极移动。溶液的pH 离pl 越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移率越大。因此在电泳时，应根据样品性质，选择合适的pH 值缓冲液。