总姜黄素3种单体高纯度同时分离方法

姜黄色素（ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄｓ，Ｃｕｒ）是 我 国 传 统 中 药 姜黄的主要活 性 成 分，主 要 包 含 姜 黄 素 （ｃｕｒｃｕｍｉｎ， Ｃｕｒ Ⅰ ）、脱 甲 氧 基 姜 黄 素 （ｄｅｍｅｔｈｏｘｙｃｕｒｃｕｍｉｎ， ＣｕｒⅡ）和 双 脱 甲 氧 基 姜 黄 素 （ｂｉｓｄｅｍｅｔｈｏｘｙｃｕｒｃｕ－ ｍｉｎ，ＣｕｒⅢ）３ 种 单 体。 现 代 药 理 学 研 究 表 明，Ｃｕｒ 具 有 明 确 的 抗 肿 瘤 活 性 ，抗 癌 谱 较 广 ，毒 性 和 不 良 反 应小，美国国立肿瘤 所 已 将 其 列 为 第 三 代 癌 化 学 预 防药 。 ［１］ 姜黄素类 化 合 物 结 构 相 近，药 理 作 用 也 相 似，由于其苯环上烷 氧 基 个 数 的 不 同 又 使 得 不 同 结 构 式 化 合 物 在 抗 癌［２］、抗 氧 化［３］ 作 用 等 方 面
基 金 项 目 ：安徽中医学院引进人才科研基金（２００９ｒｃ００１） 作 者 简 介 ：秦 晓 燕 （１９８６－），女 ，硕 士 研 究 生 通 信 作 者 ：陈 卫 东 ，０５５１－５１３６８１０，ａｎｚｈｏｎｇｄｏｎｇ＠１２６．ｃｏｍ
的性质存在较大差异。 关于姜黄素类化合物的药理功能研究报道较
多 ，但 由 于 分 离 工 艺 和 技 术 原 因 ，研 究 多 停 留 在 姜 黄 素混合物水平上，国 内 有 关 姜 黄 素 单 体 成 分 的 研 究 报道较少。如何将 Ｃｕｒ分 离 成 单 体，并 提 高 其 纯 度 和收率是当前亟需解决的难题。
ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｕｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｓａｌｉｄｒｏｓｉｄｅ ｗｅｒｅ ｓｅｒｖｅｄ ａｓ ｉｎｄｅｘｅｓ．Ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉ－ ｇａｔｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ ｖｏｌｕｍｅ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ，ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｎ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｕｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｓａｌｉｄｒｏｓｉｄｅ，ｉｎ ａｎ ａｔｔｅｍｐｔ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ａｎ ｏｐｔｉｍａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｘｔｒａｃ－ ｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗａｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ａｄｄｉｎｇ ｗａｔｅｒ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ｔｏ ６ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ｍａｔｅｒｉａ ｍｅｄｉｃａ，ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｆｏｒ ３ｔｉｍｅｓ，ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｆｏｒ １ｈｏｕｒ ｅａｃｈ ｔｉｍｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｓ ｆｅａｓｉｂｌｅ ａｎｄ ｒｅｌｉ－ ａｂｌｅ，ｓｏ ｉｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ Ｓａｒｇｅｎｔｏｄｏｘａ ｃｕｎｅａｔａ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｓａｒｇｅｎｔｏｄｏｘａ ｃｕｎｅａｔａ；ｓａｌｉｄｒｏｓｉｄｅ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ；ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
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安徽中医学院学报 第３１卷 第１期 ２０１２年２月 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＡＮＨＵＩ ＴＣＭ ＣＯＬＬＥＧＥ Ｖｏｌ．３１素３种单体高纯度同时分离方法
姜黄素提取液吸附 能 力，最 后 选 用 聚 酰 胺 树 脂 为 柱 色谱填料，选用８５％的乙醇溶液 获 得 较 好 的 洗 脱 效 果。尤本 明 等 用 ［１０］ ９ 倍 体 积 的 ７０％ 乙 醇 渗 漉 提 取 姜黄素，利用 Ｄ１０１大孔 树 脂 纯 化 姜 黄 素，上 样 料 液 ｐＨ 值调节 为 ７，用 ８０％ 乙 醇 洗 脱 获 得 姜 黄 素。 精 制工艺技术虽然有 许 多 研 究 报 道，但 在 工 业 化 生 产 应用时还要深入试验研究。
Ｃｕｒ的提取工艺技术相对比较简单、成熟，传 统 提 取 方 法 主 要 有 有 机 溶 剂 提 取 法 、碱 水 提 取 法 、酶 提 取法等；一些现代提 取 方 法 也 被 应 用 在 姜 黄 素 提 取 上，如微波提取法、超 声 提 取 法、超 临 界 流 体 萃 取 法 等 。 ［４］ 宿树兰等［５］比较渗漉法、乙醇回流法、超 声 提 取法和水煎煮法４ 种 提 取 方 法，结 果 渗 漉 法 所 得 的 姜 黄 素 含 量 为８．５４９ ２ｍｇ／ｇ，出 膏 率７．９０％ ，提 取
公 司 医 疗 设 备 厂 ；ＬＣ－４０１６ 低 速 离 心 机 ：安 徽 中 科 中 佳科学仪器有限公司；ＸＷ－８０Ａ 微型旋涡混合仪：上 海沪西分析仪 器 厂 有 限 公 司；ＷＲＳ－１Ｂ 型 数 字 熔 点 仪：江苏省 苏 州 市 丰 盛 电 子 科 技 有 限 公 司；ＡＢ－１３５ 型分析天平：梅 特 勒－托 利 多 仪 器 （上 海 ）有 限 公 司； ＬＣ－１５Ｃ ＨＰＬＣ 仪：日本岛津公司。 ２ 方 法 ２．１ 洗脱剂溶剂系统的选择 采用 ＴＬＣ 选择合适 的 姜 黄 素 洗 脱 溶 剂 ，选 用 多 种 展 开 剂 ，通 过 计 算 比 移
传 统 工 艺 所 得 姜 黄 素 粗 品 纯 度 较 低 ，不 易 干 燥 ， 常含有姜黄 脂 肪 油、姜 黄 树 脂 等 杂 质，采 用 柱 色 谱 法、大孔树脂吸附 法、活 性 碳 层 析 法、硅 胶 柱 层 析 法 等方法进行精制可提高姜黄素产品的纯 度［７－８］，如 刘 硕谦等［９］比较聚酰胺树脂和不同种类的大孔树 脂 对
值（ｒａｔｅ ｏｆ ｆｌｏｗ，Ｒｆ）以 确 定 分 离 效 果，选 择 分 离 效 果最好的展开剂作为柱色谱分离所用的洗脱剂溶剂
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安徽中医学院学报 第３１卷 第１期 ２０１２年２月 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＡＮＨＵＩ ＴＣＭ ＣＯＬＬＥＧＥ Ｖｏｌ．３１ Ｎｏ．１ Ｆｅｂ．２０１２
效果最好。姚煜东等 在 ［６］ １Ｌ 的 萃 取 釜 中 使 用 了 ３ Ｌ 的夹带剂，获得 了 ９８％ 的 提 取 率。 由 于 超 临 界 萃 取 设 备 昂 贵 ，加 上 使 用 夹 带 剂 量 较 大 ，因 此 推 广 应 用 还应综合考虑其经济性。
层析法是目前获取高纯度天然产物最有效的方法之 一，李剑明等 采 ［１２］ 用柱层析法 由 姜 黄 醇 提 物 中 成 功 地分离出 Ｃｕｒ Ⅲ，但未实现 ３ 种单体同时分离。 农 克良等 以 ［１３］ 体积比为３８∶１∶１的氯仿－乙 酸 乙 酯－甲 醇 混合溶剂作为洗脱 剂，采 用 硅 胶 柱 色 谱 一 次 过 柱 同 时分离３种 单 体，得 到 了 ８２％ 的 纯 色 素 的 总 收 率， 但未说明得到的色素纯度。本实验通过硅胶柱层析 方 法 ，将 ３ 种 单 体 依 次 洗 脱 ，为 进 一 步 研 究 姜 黄 素 单 体生物活性奠定基础。
姜黄素单体的分 离 多 采 用 薄 层 色 谱 （ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＴＬＣ）和高 效 液 相 色 谱（ｈｉｇｈ ｐｅｒ－ ｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）［１１］分 离 的 方 法 ，这 些 方 法 成 本 高 、不 适 合 大 量 样 品 分 离 。 柱
１ 材 料 １．１ 药 物 Ｃｕｒ Ⅰ 对 照 品 （ＨＰＬＣ 测 定 的 纯 度 ≥ ９８％）、ＣｕｒⅡ 对 照 品 （ＨＰＬＣ 测 定 的 纯 度 ≥９８％）、 ＣｕｒⅢ（ＨＰＬＣ 测 定 的 纯 度 ≥９９％）：上 海 锐 谷 生 物 科技有限公司；Ｃｕｒ原料（纯度 ≥９５％）：河南广晔天 然色素有限公司。 １．２ 试 剂 柱 层 层 析 硅 胶 （化 学 纯 ）：烟 台 德 信 生 物 科技有限公司；ＴＬＣ 硅胶预 制 板 （规 格：５０ ｍｍ×７５ ｍｍ，厚 度 ：０．２０～０．２３ ｍｍ）：烟 台 市 化 学 工 业 研 究 所 ：点 样 毛 细 管 （规 格 为 ０．５ ｍｍ×１００ ｍｍ）：上 海 欣 鹏玻璃仪器 有 限 公 司；三 氯 甲 烷、甲 醇、丙 酮 （分 析 纯）：上海苏懿化学 试 剂 有 限 公 司；甲 醇、乙 腈 （色 谱 纯 ）：上 海 星 可 生 化 有 限 公 司 。 １．３ 仪 器 层 析 柱：中 国 科 学 技 术 大 学 玻 璃 仪 器 厂；Ｒ－１００１Ｎ 旋 转 蒸 发 仪：郑 州 长 城 科 工 贸 有 限 公 司 ；ＢＧＺ－１４０ 型 电 热 鼓 风 干 燥 箱 ：上 海 博 讯 实 业 有 限
秦 晓 燕 ，龚 菊 梅 ，陈 卫 东
（安徽中医学院药学院，安徽 合肥 ２３００３１） ［摘要］目的 研 究 姜 黄 色 素 （ｃｕｒｃｕｍｉｎｏｉｄｓ，Ｃｕｒ）中 姜 黄 素 （ｃｕｒｃｕｍｉｎ，Ｃｕｒ Ⅰ ）、脱 甲 氧 基 姜 黄 素 （ｄｅｍｅ－ ｔｈｏｘｙｃｕｒｃｕｍｉｎ，Ｃｕｒ Ⅱ ）和 双 脱 甲 氧 基 姜 黄 素 （ｂｉｓｄｅｍｅｔｈｏｘｙｃｕｒｃｕｍｉｎ，Ｃｕｒ Ⅲ ）３ 种 单 体 的 分 离 、纯 化 工 艺 。 方法 采用以氯仿－甲醇溶剂系统进行梯度洗脱的柱层析法分离 Ｃｕｒ中的３种单体，并采用重结晶法对其进 行纯化，通过薄层色谱、熔点测定及 高 效 液 相 色 谱 法 （ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）对 ３ 种姜黄素 单 体 的 进 行 检 测 并 计 算 纯 度。 结 果 可 获 得 ３ 种 高 纯 度 的 姜 黄 素 单 体，ＨＰＬＣ 测 定 结 果 分 别 为 ＣｕｒⅠ纯度９９．４７％、ＣｕｒⅡ纯度９９．６４％、ＣｕｒⅢ纯度 ９８．６４％。 结 论 硅 胶 柱 层 析 法 合 理、科 学，效 率 高， 可为姜黄素单体的进一步研究与开发应用提供实验依据。 ［关 键 词 ］姜 黄 素 ；脱 甲 氧 基 姜 黄 素 ；双 脱 甲 氧 基 姜 黄 素 ；柱 层 析 ［中 图 分 类 号 ］Ｒ２８４．２ ［文 献 标 志 码 ］Ａ ［ＤＯＩ］１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２２１９．２０１２．０１．０２２