两株羌活内生菌的化学成分研究
药对桂枝——羌活挥发油成分分析
药对桂枝——羌活挥发油成分分析摘要：目的：分析药对桂枝-羌活、单味药桂枝和羌活的挥发油成分。
方法：采用气相色谱-质谱（GC-MS）检测。
通过化学计量学解析法对二维色谱/质谱数据进行解析，从而实现对药对桂枝-羌活、单味药桂枝和羌活的挥发油成分的分析。
结果：药对桂枝-羌活、单味药桂枝和羌活分辨出的色谱峰，通过质谱库对其进行定性，分别得到45、35和36个定性结果，占总含量的96.34%、95.76%和93.94%。
结论：药对挥发油成分主要来自于单味药羌活，而化学成分种类基本上为2个单味药的加和。
关键词：药对桂枝-羌活；挥发油；气相色谱-质谱；化学计量学解析法配伍理论是中药复方的核心问题。
药对是中医临床上常用的、相对固定的两个单味药的配伍形式，是复方的最小组成单位。
分析药对中两药配伍后发生的化学变化和物理作用，可以阐明复方中药物的配伍机理，剖析和理解复方，使之更好的应用于临床。
桂枝-羌活为常用解表药对［1］。
桂枝散寒解表、温经通脉、通阳化气；羌活辛能发散、温能祛寒、苦能燥湿，既能发表散寒，又能除湿止痛［2］。
二药伍用，辛温发散，同气相求，共奏通阳散寒解表之功。
挥发油是解表药对的有效成分［3］，药对桂枝-羌活的挥发油成分尚未见报道。
本文采用GC/MS法分离检测药对桂枝-羌活、单味药桂枝和羌活的挥发油成分，利用化学计量学解析法（ Chemometrics resolution method ，CRM）［4~8］对重叠峰进行分辨，再凭质谱库对分辨的纯组分进行定性，用总体积积分法进行定量，并比较了单味药与药对的挥发油成分，讨论了单味药配伍后挥发油成分的变化。
1 材料与方法1.1 仪器与药品仪器为QP2010型气相色谱仪—质谱仪（日本岛津公司）。
药材桂枝和羌活均购自湖南中医药研究院，经该院中药研究所鉴定，分别为樟科植物肉桂( Cinnamomum cassia Presl )的干燥嫩枝﹑伞形科植物羌活( Notopterygium incisum Ting ex H.T.Chang )的干燥根茎及根。
四川栽培羌活表型性状与品质相关性分析
核农学报2023，37（12）：2469~2477Journal of Nuclear Agricultural Sciences四川栽培羌活表型性状与品质相关性分析袁宏1， 2王红兰2朱文涛2刘腾2邹远2王京城1， 2蒋舜媛1， 2， *（1成都中医药大学药学院，四川成都610075；2四川省中医药科学院，四川成都610041）摘要：为了探究川产高海拔地区栽培羌活（Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang）的植物表型性状与品质性状（羌活醇、异欧前胡素）的相关性，提高良种选育效率，本研究选取3个羌活栽培基地的四年生羌活植株183份，统计13个表型性状，并测定地下部分的羌活醇与异欧前胡素含量，通过聚类分析、冗余分析和方差分析法解析表型性状与品质性状的内在关联，筛选高品质羌活的定向选育表型性状。
结果表明，基生叶片数变异系数和多样性指数在所有调查性状中最高，基生叶片表型性状以绿色、纸质、深裂、锯齿状为主，基生叶柄和花茎表型性状表现为绿色、紫色、绿色带紫纹均有分布，基生叶柄绿色和花茎浅紫色最多。
聚类分析和冗余分析结果表明，地下部分羌活醇和异欧前胡素含量与基生叶片及基生叶柄颜色显著相关（P<0.05）。
方差分析结果表明，以基生叶片深绿色、叶柄紫色为主要特征的羌活植株地下部分羌活醇、异欧前胡素含量及其总含量均最高。
综上，羌活植株基生叶片颜色和叶柄颜色可作为羌活药材指标成分羌活醇及异欧前胡素高含量品种的定向选育表型性状。
本研究结果为解决人工栽培羌活药源危机提供了有效途径，为优良种质的定向选育提供了参考依据。
关键词：羌活；表型性状；指标性成分；相关性分析；方差分析DOI：10.11869/j.issn.1000‑8551.2023.12.2469羌活（Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang）是主产于青藏高原东南缘高海拔地区的伞形科羌活属多年生草本植物，是传统大宗药材羌活的重要基原，以根茎及根入药，具解表散寒、祛风除湿解痛之功效，主治风寒感冒、头痛项强、风湿痹痛、肩背酸痛等症［1］，是诸多中医名方和成药的组方药物。
金刚纂内生真菌Irpex_sp._的次生代谢产物研究
第45卷第1期Vol.45 No.12024年3月Mar. 2024宁夏大学学报（自然科学版）Journal of Ningxia University（Natural Science Edition）金刚纂内生真菌Irpex sp.的次生代谢产物研究黄磊，邱仕瑜，鲁松梅，陈世伟，韦霁芮，周敏*（云南民族大学民族药资源化学教育部重点实验室，云南昆明650500）摘要：通过硅胶柱层析和半制备型高效液相色谱等分析方法对金刚纂（Euphorbia neriifolia L.）内生真菌Irpex sp.的液体发酵产物进行提取与分离，共得到9个化合物，分别为IrpexIacte C （1）、IrpexIacte D （2）、5-（4-Oxopentyl）furan-2-carbaldehyde （3）、22-tetraen-3-one （4）、Irlactin L （5）、Irlactin K （6）、Irlactin I （7）、Davotremulane B （8）、（+）-（1R，6S，7S）-Tremul-2-ene-12（11）-lactone （9），其中，3个为呋喃衍生物，5个为倍半萜化合物，1个为甾醇类化合物；化合物3，4，8，9 为首次从耙齿菌属Irpex sp.中分离得到.关键词：金刚纂；内生真菌；Irpex sp.；倍半萜分类号：（中图）TQ041；O65 文献标志码：A植物内生真菌是指在整个生活史或者某一阶段共生或寄生在植物的根、茎、叶、花和果实等组织中，且不会对植物组织产生危害的一类微生物群［1］.植物中的次生代谢产物繁多，有萜类、生物碱和甾体类等化合物，有些对植物自身生长有调节及抗虫害作用等，有些具有抗菌性、抗肿瘤活性及抗疟活性等药理活性［2-3］.大众所熟悉的青蒿素和紫杉醇就是植物的次生代谢产物，但产量非常有限，所以寻求提高植物次生代谢产物产量的途径有重要意义.内生真菌存在于绝大多数植物体中，它们的产物有相当一部分与宿主植物的产物相似甚至相同.研究表明［4-5］，在一些植物内生真菌的次生代谢产物中，存在一定活性成分，因而内生真菌有促进植物有效活性成分合成的作用.金刚纂（Euphorbia neriifolia L.）是大戟属植物，具有止痛消肿、驱虫、清热解毒及泻下通便等药理作用［6-7］.学者从金刚纂的乳汁、根及茎中分离出多种萜类成分［8］.由于植物内生菌与宿主相互依存及互惠，从植物内生真菌中寻找与宿主相似的天然化合物成分，可以促进具有药用价值资源的开发与利用.有关金刚纂内生真菌的次生代谢产物报道很少，将金刚纂内生真菌分离并对其发酵的次生代谢产物进行研究有一定的意义.笔者对大戟属金刚纂中的内生真菌耙齿菌Irpex sp.进行发酵，对其液体发酵次生代谢产物进行提取分离，共得到9个化合物，即IrpexIacte C （1）、IrpexIacte D （2）、5‐（4‐Oxopentyl）furan‐2‐carbaldehyd e （3）、22‐tetraen‐3‐one （4）、Irlactin L （5）、Irlactin K （6）、Irlactin I （7）、Davotre mulane B （8）、（+）‐（1R，6S，7S）‐Tremul‐2‐ene‐12（11）‐lactone （9），其中，3个为呋喃衍生物，5个为倍半萜化合物，1个为甾醇类化合物；化合物3，4，8，9 为首次从耙齿菌属Irpex sp.中分离得到.1 仪器与材料DHP-9162电热恒温培养箱（上海一恒科技有限公司）；SHZ-D （Ⅲ）低温冷却液循环泵（河南巩义瑞德仪器设备仪器有限公司）；DRX-400核磁共振波谱仪（德国Bruker 公司）；Hei-VAP-Value Digital 旋转蒸发仪（德国Heidolph 公司）；Agilent-1260 高效液相色谱仪、Eclipse XDB C18半制备色谱柱（美国 Agilent 公司，250 mm × 9.4 mm， 5 μm）.甲醇（分析纯，云南新蓝景化学工业有限公司）；乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇（工业级，云南利妍科技有限公司）、GF254薄层层析硅胶文章编号：0253‐2328（2024）01‐0055‐05收稿日期：2022‐11‐23基金项目：国家自然科学基金资助项目 (31860099)；云南省自然科学基金资助项目 (202001AW07002)作者简介：黄磊（1996—），男，硕士研究生，主要从事天然产物化学研究，（电子信箱）*****************.*通信联系人：周敏（1984—），男，教授，博士，主要从事天然产物化学研究，（电子信箱）*******************.引用格式：黄磊，邱仕瑜，鲁松梅，等.金刚纂内生真菌Irpex sp.的次生代谢产物研究［J］.宁夏大学学报（自然科学版），2024，45（1）：55-59，68.第 45 卷宁夏大学学报（自然科学版）（100 mm × 100 mm，烟台维启化工产品有限公司）；100~200 目柱层析硅胶（上海皓鸿生物医药科技有限公司）.野生金刚纂采自云南省西双版纳傣族自治州，经云南民族大学周敏教授鉴定为大戟科大戟属植物金刚纂（Euphorbia antiquorun）.1‐J6‐4菌株从新鲜的大戟科植物金刚纂的茎部分离得到，由北京擎科生物科技有限公司进行 DNA 分子鉴定，经过基因序列对比鉴定为耙齿属白囊耙齿菌Irpex sp.，其ITS NCBI登记号为MF 101391.该菌株保存在云南民族大学民族药资源化学教育部重点实验室.2 内生真菌的发酵、提取与分离2.1 菌株液体的发酵挑出纯化的1‐J6‐4菌体，置于马铃薯、葡萄糖、琼脂（PDA）培养基中，在28 ℃恒温箱中培养4 d.待菌体长出一定量的菌丝后，挑取菌丝，分别置于盛有200 mL液体马铃薯、葡萄糖（PDB）培养基的500 mL试剂瓶（共计90瓶）中.在28 ℃，160 r/min条件下发酵7 d，待菌体长满瓶底.配制液体PDB培养基（w（马铃薯）=20%，w（葡萄糖）=2%），90瓶培养基共18 L.然后，经120 ℃高温灭菌20 min，冷却.将菌种按接种比例1∶10接种到液体PDB培养基.最后，在28 ℃，160 r/min条件下发酵15 d.2.2 提取与分离取出金刚纂内生真菌液体发酵物，用三层滤网过滤菌体与发酵液，使用φ=95%乙醇超声提取4次，每次超声1 h.浓缩，用V（乙酸乙酯）∶V（水）= 1∶1对菌液进行萃取.将萃取物合并浓缩后得到浸膏11.1 g.最后通过硅胶柱（100~200目）对浸膏进行分离，分别用V（二氯甲烷）∶V（乙酸乙酯）= 1∶0，20∶1，10∶1，5∶1，1∶1，0∶1及V（乙酸乙酯）∶V（甲醇）=10∶1，5∶1，1∶1，0∶1进行梯度洗脱，得到A-J 10个组分：A（0.4 g），B（0.1 g），C（1.8 g）， D （2.5 g）， E（4.0 g），F（0.7 g）， G（0.1 g），H（0.2 g）， I （0.2 g）， J（0.5 g）.分别取少量A-J样品，用甲醇溶解，在12 000 r/min条件下离心分离10 min.取上层清液进行HPLC分析.综合考虑各组分的质量、化学成分的丰富程度、化合物极性的大小以及分离难易等因素，选择对 C，D，E这3个组分进行分离纯化.对 D（2.5 g）通过硅胶柱（100~200目）进行分离，分别使用V（二氯甲烷）∶V（乙酸乙酯）= 1∶0，20∶1，0∶1和纯甲醇进行洗脱，得到D1-D4共4个组分.D1 （506 mg）经半制备高效液相色谱（流动相为80%甲醇、流速为3 mL/min）通过等度洗脱方式纯化得到化合物1（3.3 mg）和化合物2（6 mg）. D2 （324 mg）经半制备高效液相色谱（流动相为65%甲醇、流速为3 mL/min）通过等度洗脱方式纯化得到化合物3 （9.0 mg）.对C（1.8 g）通过硅胶柱（100~200目）进行分离，分别使用V（二氯甲烷）∶V（甲醇）=1∶0，50∶1，30∶1，0∶1进行洗脱，得到 C1-C4共4个组分.C2 （109 mg）经半制备高效液相色谱（流动相为90%甲醇、流速为3 mL/min）通过等度洗脱方式纯化得到化合物4（10.0 mg）.对E（4.0 g）通过硅胶柱（100~200目）进行分离，分别使用V（二氯甲烷）∶V（乙酸乙酯）=1∶0，50∶1，10∶1和纯甲醇进行洗脱，得到E1-E5共5个组分.E2 （604 mg）经半制备高效液相色谱（流动相为75%甲醇，流速为3 mL/min）通过等度洗脱方式纯化得到化合物5（25.3 mg）、化合物6（16.0 mg）.E3 （571 mg）经半制备高效液相色谱（流动相为70%甲醇，流速为3 mL/min）通过等度洗脱方式纯化得到化合物7 （5.0 mg）、化合物8 （2.0 mg）、化合物9 （4.0 mg）.3 结构鉴定化合物1为淡黄色油状物（图1），分子式为C10H14O3.经HR‐ESI‐MS分析得出m/z= 183.200 4 ［M‐H］+，1H‐NMR （CDCl3， 400 MHz，δH）：9.58 （1H，s，H‐6），7.21 （1H，d，J= 3.6 Hz，H‐4），6.47 （1H，d，J= 3.5 Hz，H‐3），6.24 （3H，q，J = 8 Hz， H‐8）， 4.77 （1H， dd，J = 7.5， 5.8 Hz，H‐1′），1.85 （2H，m，H‐2′），1.38 （2H，m，H‐3′）， 1.33 （2H， m， H‐4′）， 0.91 （3H， t，J = 7.0 Hz， H‐2′）；13C‐NMR （100 MHz， CDCl3，δC）：152.1 （C‐2）， 108.5 （C‐3）， 125.2 （C‐4）， 164.9 （C‐5）， 177.6 （C‐6）， 66.1 （C‐1′）， 35.5 （C‐2′），27.4 （C‐3′）， 22.4 （C‐4′）， 14.0 （C‐5′）.以上数据与文献［9］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物1为IrpexIacte C.化合物2为淡黄色油状物，分子式为C12H16O4.经HR‐ESI‐MS分析得出m/z=225.186 2 ［M‐H］+，1H‐NMR （CDCl3，400 MHz，δH）：7.23 （1H，d，J= 3.5 Hz，H‐3′），6.24 （1H，d，J= 3.6 Hz，H‐4″），4.84 （1H，q，J= 6.9 Hz，H‐2），2.74 （2H，t，J= 7.6 Hz，H‐1″），2.50 （2H，t，J= 7.2 Hz， H‐3″）， 2.14 （3H， s， H‐5″）， 2.02~1.9356第 1 期黄磊等：金刚纂内生真菌Irpex sp.的次生代谢产物研究（2H ， m ， H‐2″）， 1.47 （3H ， d ， J = 6.9 Hz ， H‐3）；13C ‐NMR （100 MHz ， CDCl 3，δC ）： 191.3 （C ‐1），69.8 （C ‐2）， 22.3 （C ‐3）， 149.9 （C ‐2′）， 122.9 （C ‐3′）， 109.1 （C ‐4′）， 163.0 （C ‐5′）， 27.6 （C‐1″），22.7 （C‐2″）， 42.5 （C‐3″）， 209.8 （C‐4″）， 30.2 （C‐5″）.以上数据与文献［9］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物2为IrpexIacte D.化合物3为无色油状物，分子式为C 10H 12O 3. 经HR ‐ESI‐MS 分析得出m /z=181.157 6 ［M ‐H ］+， 1H ‐NMR （CDCl 3， 400 MHz ，δH ）： 9.52 （1H ， s ，H ‐1）， 7.17 （1H ， d ， J = 3.5 Hz ， H ‐3）， 6.26 （1H ， d ， J = 3.5 Hz ， H‐4）， 2.75 （2H ， t ， J = 7.5 Hz ， H‐6）， 2.50 （2H ， t ， J = 7.2 Hz ， H‐8）， 2.14 （3H ， s ， H ‐10）， 1.99 （2H ， m ， H ‐7）； 13C ‐NMR （100 MHz ， CDCl 3， δC ）： 177.2 （C ‐1）， 152.1 （C‐2）， 123.6 （C‐3）， 109.2 （C‐4）， 163.0 （C‐5）， 27.7 （C ‐6）， 21.7 （C ‐7），42.5 （C ‐8）， 208.0 （C‐9）， 30.2 （C‐10）.以上数据与文献［10］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物3为5‐（4‐Oxopentyl ）furan‐2‐carbaldehyde.化合物4为无色油状物，分子式为C 29H 42O. 经HR‐ESI‐MS 分析得出 m /z =407.134 2 ［M ‐H ］+， 1H ‐NMR （CDCl 3， 400 MHz ，δH ）： 6.60 （1H ， d ，J = 9.5 Hz ， H ‐6）， 6.02 （1H ， d ， J = 9.5 Hz ， H ‐7）， 5.73 （1H ， s ， H ‐4）， 5.26 （1H ， dd ， J = 15.1， 7.0 Hz ， H ‐23）， 5.19 （1H ， dd ， J = 15.3， 7.7 Hz ， H ‐22）， 2.54 （2H ， m ， H ‐2）， 2.37 （2H ， m ， H ‐15）， 2.13 （1H ， m ， H ‐9）， 2.09 （1H ， m ， H‐20）， 2.03 （2H ， m ， H‐1）， 1.77 （H ， m ， H‐24），1.72 （1H ， m ， H ‐11A ）， 1.65 （1H ， m ，H ‐11B ）， 1.69 （1H ， m ， H ‐12A ）， 1.25 （1H ， m ， H ‐12B ）， 1.76 （1H ， m ， H ‐16A ）， 1.53 （1H ， m ， H ‐16B ）， 1.48（1H ， m ， H ‐25）， 1.24 （1H ， m ， H ‐17）， 1.22 （2H ， m ， H ‐28）， 1.07 （3H ， d ， J = 6.2 Hz ， H‐21）， 0.98 （3H ， s ， H‐19）， 0.95 （3H ， s ， H‐18）， 0.93 （3H ， d ， J = 6.9 Hz ， H ‐26）， 0.92 （3H ， d ， J = 7.3 Hz ， H ‐27）， 0.83 （3H ， t ， J = 6.2 Hz ， H ‐29）； 13C ‐NMR （100 MHz ， CDCl 3，δC ）： 34.3 （C ‐1）， 19.0 （C ‐2）， 199.8 （C ‐3）， 123.0 （C ‐4）， 164.7 （C ‐5）， 124.5 （C ‐6）， 134.2 （C ‐7）， 124.6 （C ‐8）， 44.5 （C ‐9）， 36.9 （C ‐10）， 25.5 （C ‐11）， 34.2 （C ‐12）， 44.1 （C ‐13）， 156.3 （C ‐14）， 35.7 （C‐15）， 27.8 （C‐16）， 55.9 （C‐17）， 16.8 （C‐18）， 19.1 （C ‐19）， 39.4 （C ‐20）， 21.4 （C ‐21）， 132.7 （C ‐22）， 135.1 （C ‐23）， 43.0 （C ‐24）， 33.2 （C‐25）， 19.8 （C‐26）， 20.1 （C‐27）， 29.8 （C‐28）， 17.8 （C‐29）.以上数据与文献［11］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物4为22‐tetraen‐3‐one.化合物5为淡黄色油状物，分子式为C 15H 20O 4.经HR‐ESI‐MS 分析得出 m /z=265.160 9 ［M‐H ］+， 1H ‐NMR （CDCl 3， 400 MHz ，δH ）： 4.68 （1H ， d ，J = 17.9 Hz ， H ‐11A ）， 4.38 （1H ， d ， J = 17.9 Hz ， H ‐11B ）， 4.58 （1H ， d ， J = 9.0 Hz ， H ‐4）， 3.28 （1H ， s ， H ‐10）， 2.60 （1H ， m ， H ‐7）， 1.90 （1H ， m ， H ‐6）， 1.83 （2H ， m ， H ‐5）， 1.80 （1H ， m ， H ‐8A ）， 1.66 （1H ， dd ， J = 13.8， 9.1 Hz ， H ‐8B ）， 1.17 （3H ， s ， H ‐15）， 1.09 （3H ， s ， H ‐14）， 0.95 （3H ， d ， J = 6.7 Hz ， H ‐13） ；7894561O OHO 1234562'5'3'4'1'2O 1234'5'2'2''5''3''4''1''OHO 1'O 3'3OO 12345698710O图 1 金刚纂内生真菌Irpex sp. 次生代谢产物的化学结构57第 45 卷宁夏大学学报（自然科学版）13C‐NMR （100 MHz，CDCl3，δC）：67.6 （C‐1），156.3 （C‐2），129.3 （C‐3），66.5 （C‐4），36.0 （C‐5）， 29.1 （C‐6）， 47.7 （C‐7），43.8 （C‐8）， 38.3 （C‐9）， 77.9 （C‐10）， 70.1 （C‐11）， 174.6 （C‐12），19.9 （C‐13）， 24.7 （C‐14）， 27.1 （C‐15）.以上数据与文献［12］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物5为Irlactin L.化合物6为淡黄色油状物，分子式为C15H20O3.经HR‐ESI‐MS分析得出m/z=249.024 4 ［M‐H］+，1H‐NMR （CDCl3，400 MHz，δH）：5.91 （1H，s，H‐10）， 4.95 （1H， d，J = 15.9 Hz， H‐11A）， 4.77 （1H，m，H‐11B），4.79 （1H，m，H‐4），3.14 （1H， dd，J = 7.5， 7.6 Hz， H‐7）， 2.22 （1H， m，H‐5A），1.99 （1H，m，H‐5B），2.02 （1H，m，H‐6）， 1.85 （1H， dd，J = 7.8， 12.6 Hz， H‐8A），1.59 （1H， dd，J = 10.0， 12.5 Hz， H‐8B）， 1.15 （3H， s， H‐15）， 1.07 （3H， s， H‐14）， 0.98 （3H，d，J= 7.3 Hz，H‐13）；13C‐NMR （100 MHz，CDCl3，δC）：134.2 （C‐1），151.5 （C‐2），126.0 （C‐3），65.6 （C‐4），39.6 （C‐5），32.0 （C‐6），51.8 （C‐7），43.8 （C‐8），44.6 （C‐9），147.5 （C‐10），70.0 （C‐11），175.7 （C‐12），13.7 （C‐13）， 27.0 （C‐14）， 28.8 （C‐15）.以上数据与文献［13］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物6为Irlactin K.化合物7为淡黄色油状物，分子式为C15H22O3.经HR‐ESI‐MS分析得出m/z=251.102 2 ［M‐H］+，1H‐NMR （CDCl3，400 MHz，δH ）：4.76 （1H，m，H‐4），4.69 （2H，s，H‐11），2.92 （1H，dd，J= 9.7，19.4 Hz，H‐1），2.23 （1H，m，H‐7），2.16 （1H， m， H‐6）， 2.09 （1H， m， H‐5A）， 1.69 （1H，m， H‐5B）， 1.73 （1H， m， H‐10A）， 1.43 （1H， m，H‐10B），1.48 （2H，m，H‐8），1.04 （3H，s，H‐14）， 1.03 （3H， s， H‐15）， 0.96 （3H， d，J = 6.6 Hz，H‐13）；13C‐NMR （100 MHz，CDCl3，δC）：37.5 （C‐1），167.1 （C‐2），128.8 （C‐3），65.8 （C‐4）， 42.8 （C‐5）， 29.4 （C‐6）， 48.0 （C‐7）， 43.2 （C‐8）， 37.8 （C‐9）， 44.2 （C‐10）， 71.2 （C‐11），175.2 （C‐12）， 15.5 （C‐13）， 31.0 （C‐14）， 30.4 （C‐15）.以上数据与文献［14］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物7为Irlactin I.化合物8为淡黄色油状物，分子式为C15H22O4.经HR‐ESI‐MS分析得出m/z=267.121 1 ［M‐H］+，1H‐NMR （CDCl3，400 MHz，δH）：2.81 （1H，dd，J=9.3，19.7Hz，H‐1），2.73 （1H，dd，J=3.8，16.4，H‐4a），2.44 （1H，dd，J=5.8，13.6 Hz，H‐4b）， 3.83 （1H，s， H‐5）， 2.10 （1H， s， H‐6），2.43 （1H， m， H‐7）， 1.36 （1H， m， H‐8a）， 1.60 （1H，t，J=9.7 Hz，H‐8b），1.74 （2H，dd，J= 7.9， 13.1 Hz， H‐9），4.61 （2H， m， H‐11）， 1.01 （1H， d，J =7.0 Hz， H‐13）， 1.06 （3H， s， H‐14），3.41 （2H， s， H‐15）；13C‐NMR （100 MHz， CDCl3，δC）：37.7 （C‐1），164.0 （C‐2），122.9 （C‐3），28.6 （C‐4），72.9 （C‐5），40.0 （C‐6），40.7 （C‐7），40.1 （C‐8），41.6 （C‐9），38.8 （C‐10），70.6 （C‐11）， 175.1 （C‐12）， 11.7 （C‐13）， 26.3 （C‐14）， 71.6 （C‐15）.以上数据与文献［15］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物8为Davotremulane B.化合物9为淡黄色油状物，分子式为C15H22O3.经HR‐ESI‐MS分析得出m/z=251.098 5 ［M‐H］+，1H‐NMR （CDCl3，400 MHz，δH）：2.33 （1H，m，H‐4A），2.61 （1H，m，H‐4B），1.51 （1H，m，H‐5A）， 1.49 （1H， m， H‐5B）， 2.16 （1H， m， H‐6），2.33 （1H，m，H‐7），1.59 （2H，m，H‐8），1.73 （1H，d，J= 6.5 Hz，H‐10A），1.78 （1H，m，H‐10B）， 4.82 （1H， tt，J = 9.2， 18.3 Hz， H‐11A），4.63 （1H， ddd，J = 1.3， 2.6， 17.0 Hz， H‐11B），0.93 （3H，d，J= 7.2 Hz，H‐13），1.14 （3H，s，H‐14）， 1.00 （3H， s， H‐15）；13C‐NMR （100 MHz，CDCl3，δC）：81.4 （C‐1），167.6 （C‐2），124.2 （C‐3）， 23.2 （C‐4）， 27.8 （C‐5）， 32.9 （C‐6）， 57.6 （C‐7）， 40.3 （C‐8）， 36.9 （C‐9）， 54.7 （C‐10）， 72.3 （C‐11）， 177.0 （C‐12）， 22.8 （C‐13）， 31.0 （C‐14），30.4 （C‐15）.以上数据与文献［16］中的比较，发现两者基本一致，因此鉴定化合物9为（+）‐（1R，6S，7S）‐Tremul‐2‐ene‐12（11）‐lactone.4 抑菌活性的测定以氨苄青霉素钠为阳性对照品，测定化合物1-化合物9对金黄色葡萄球菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）的抑菌活性.以叶枯唑为阳性对照品，测定化合物1-化合物9对烟草野火病菌（Pseudomonas syringae pv.Tabaci）、烟草青枯菌（Ralstonia solanacearum）的抑菌活性.阴性对照均为LB液体培养基.将上述4种供试菌株进行活化，选择对数生长期的实验菌种，并稀释至质量浓度为1×108 CFU/mL.取一定质量的化合物1-化合物9（质量分别为2.5，2.5，3.0，1.5，15.0，7.0，1.0，1.0，1.0 mg），用1 mL58第 1 期黄磊等：金刚纂内生真菌Irpex sp.的次生代谢产物研究氘代DMSO溶解.采用二倍稀释法，用LB液体培养基将上述溶液稀释成6个梯度，每个梯度设3个复孔（50 μL菌液-50 μL化合物溶液），加于96孔板.金黄色葡萄球菌和大肠杆菌在37 ℃培养，烟草野火病菌和烟草青枯菌在28 ℃培养，培养时间均为12~24 h.用酶标仪在595 nm处测量各混合溶液的光密度D，每个实验平行测定3次.化合物的抑菌活性强弱用最小抑菌质量浓度（ρ），即100%抑制细菌生长时的质量浓度表示（表1）.5 讨论对金刚纂（Euphorbia neriifolia L.）内生真菌Irpex sp.液体发酵次生代谢产物进行提取与分离，共得到9个化合物：IrpexIacte C （1）、IrpexIacte D （2）、5‐（4‐Oxopentyl）furan‐2‐carbaldehyde （3）、22‐tetraen‐3‐one （4）、Irlactin L （5）、Irlactin K （6）、Irlactin I （7）、Davotremulane B （8）、（+）‐（1R，6S，7S）‐Tremul‐2‐ene‐12（11）‐lactone （9），其中，3个为呋喃衍生物、1个为甾醇类化合物、5个为倍半萜化合物；化合物3，4，8，9 为首次从耙齿菌属Irpex sp.中分离得到.对分离得到的化合物进行体外抗菌活性测定，结果显示，除了化合物6外，其他8个化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、烟草野火病菌和烟草青枯菌均有一定的抑制作用，这为药用植物内生菌的研究及耙齿属Irpex sp.的研究提供了参考.参考文献：［1］ZHAO J， SHAN T， MOU Y， et al. Plant-derived bio‐active compounds produced by endophytic fungi［J］.Mini Rev Med Chem， 2011， 11（2）： 159-168.［2］WEI Guangfei，DONG Linlin，YANG Juan，et al.Integrated metabolomic and transcriptomic analysesrevealed the distribution of saponins in Panax notogin⁃seng［J］.Acta Pharm Sin B， 2018，8（3）： 458-465.［3］解举民，刘雅然，陈梦迪，等.青蒿素药理功能研究进展［J］.中医药学报，2022，50（8）：96-100.［4］杜慧娟，王伯初，米鹏程，等.药用植物内生真菌的分离及抗菌活性的初步研究［J］.氨基酸和生物资源，2008，30（1）： 61-64.［5］张祺玲，杨宇红，谭周进，等.植物内生菌的功能研究进展［J］.生物技术通报，2010（7）： 28-34.［6］桑已曙，史海明，贾靓，等.金刚纂的化学成分［J］.中国天然药物，2005，3（1）： 31-33.［7］李云芳，田学军，杨光忠，等.金刚纂化学成分研究［J］.华东师范大学学报（自然科学版），2008，42（3）：396-399.［8］陈玉，田学军，李云芳，等.金刚纂萜类成分研究［J］.药学学报，2009，44（10）： 1118-1122.［9］DUAN Xiaoxiang，QIN Dan，SONG Hongchuan，et al.Irpexlacte A-D，four new bioactive metabolites ofendophytic fungus Irpexlacteus DR10-1 from the water‐logging tolerant plant Distylium chinense［J］.Phytoch‐mistry Letters， 2019， 32： 151-156.［10］HE Dongbing，BAI Xue，MA Yuhan，et al.One new nucleoside and three furanpentanone derivativesfrom the aerial part of Rubia cordifolia L［J］. Phyto‐chmistry Letters， 2021， 41： 125-128.［11］IBRAHIM S R M， ELKHAYAT E S， MOHAMEDG A，et al.Aspernolides F and G，new butyrolac‐tones from the endophytic fungus Aspergillus terreus［J］. Phytochemistry Letters， 2015， 14： 84-90.［12］DING Jianhai，LI Zhenghui，FENG Tao，et al.Two new sesquiterpenes from cultures of the fungusIrpex lacteus［J］.Journal of Asian Natural Prod‐ucts Research，2020.https：///10.1080/10286020.2020.1737857.［13］DING Jianhai，LI Zhenghui，FENG Tao，et al. A Sesquiterpene Lactone from Irpex lacteus［J］.Chem‐istry of Natural Compounds， 2020， 56：403-405.［14］DING Jianhai，LI Zhenghui，FENG Tao，et al.Tremulane sesquiterpenes from cultures of the basidio‐mycete Irpex lacteus［J］.Fitoterapia，2018，125：245-248.［15］GUO Zhiyong， LI Xueshuang， ZHANG Liang， et al.Cytotoxic tremulanes and 5，6-secotremulanes，fournew sesquiterpenoids from a plant-associated fungusX1-2［J］.Natural Product Research，2016，30（22）：2582-2589.［16］WU Xiuli， LIN Sheng， ZHU Chenggen， et al. Homo-and heptanor-sterols and tremulane sesquiterpenesfrom cultures of Phellinus igniarius［J］. Journal of Natu‐ral Products， 2010， 73（7）：1294-1300.表1 化合物1-化合物9的抑菌活性样品化合物1化合物2化合物3化合物4化合物5化合物6化合物7化合物8化合物9ρ/（mg·mL-1）烟草野火病菌1.25>1.25>1.50>0.75>7.50>3.50>0.50>0.50>0.50烟草青枯菌1.251.251.50> 0.75> 7.50> 3.50> 0.50> 0.50> 0.50金黄色葡萄球菌0.625~1.250.625~1.250.750~1.50>0.757.50>3.500.25~0.500.25~0.500.50大肠杆菌>1.251.251.500.753.75~7.50>3.50>0.500.500.50（下转第68页）59第 45 卷宁夏大学学报（自然科学版）Gene Cloning and Sequence Analysis of P80 Lipoprotein from Four Strains of Mycoplasma synoviaeTian Xingmiao 1， Guo Lei 2， Wang Jianlin 1， Dai Shasha 1， Si Duoduo 1， Gong Zhenxing 1， Li Jidong 1*（1. School of Agriculture ， Ningxia University ， Yinchuan 750021， China ；2. Ningxia Xiaoming Agriculture and Animal Husbandry Co.， Ltd.， Yinchuan 750011， China ）Abstract: To investigate the function and diversity within the P80 lipoprotein family of Mycoplasma synoviae （MS ）， genes encoding P80-1， P80-2， and P80-3 proteins were amplified from four MS isolates using PCR and sequenced. Bioinformatics methods were applied to analyze the protein sequences of the P80 family lipopro‐teins ， identify their conserved structural domains and antigenic epitopes ， and predict their functions. The results indicated that the P80 family lipoproteins were basic ， hydrophilic ， stable proteins ， with a strong hydro‐phobic region at the N -terminus ； only the P80-2 protein had a transmembrane helix region. The positions of the signal peptides and hydrophobic regions of the P80 family lipoproteins are consistent ； the three P80 proteins share 12 conserved structural domains and have 2 to 4 distinct structural domains ； there are 31 to 32 antigenic epitope sites ； their secondary structures are primarily composed of α-helices and random coils ； and the tertiary structure predictions show that the P80-1 protein may function as an ABC transporter ， the P80-2 protein as a periplasmic binding protein type II ， and the P80-3 protein is associated with cell adhesion functions. These find‐ings provide a reference for further research into the function of the MS P80 family lipoproteins ， as well as insights into MS pathogenic mechanisms ， pathogen diagnosis ， and vaccine development.Key words: Mycoplasma synoviae ； P80 family lipoproteins ； gene cloning ； sequence analysis（责任编辑、校对 高继红）Study on the Secondary Metabolites of Endophytic Fungus Irpex sp. fromEuphorbia neriifolia L.Huang Lei ， Qiu Shiyu ， Lu Songmei ， Chen Shiwei ， Wei Jirui ， Zhou Min *（Key Laboratory of Chemistry in Ethnic Medicinal Resource ， State Ethnic Affairs Commission and Ministry of Education ，Yunnan Minzu University ， Kunming 650500， China ）Abstract: Through analytical methods such as silica gel column chromatography and semi -preparative high performance liquid chromatography ， the liquid fermentation products of the endophytic fungus Irpex sp. from Euphorbia neriifolia L. were extracted and separated ， yielding nine compounds. These were identified as Irpexlacte C （1）， Irpexlacte D （2）， 5-（4-Oxopentyl ）furan -2-carbaldehyde （3）， 22-tetraen -3-one （4）， Irlactin L （5）， Irlactin K （6）， Irlactin I （7）， Davotremulane B （8）， and （+）-（1R ，6S ，7S ）-Tremul -2-ene -12（11）-lactone （9）， among which three were furan derivatives ， five were sesquiterpenes ， and one was a sterol compound. Compounds 3， 4， 8， and 9 were isolated from the genus Irpex sp. for the first time.Key words: Euphorbia neriifolia L .； Irpex sp.； sesquiterpenoids（责任编辑、校对 高继红）（上接第59页）68。
四株楝科药用植物内生真菌化学成分及生物活性研究
四株楝科药用植物内生真菌化学成分及生物活性研究从植物内生真菌的次生代谢产物中寻找和发现具有新颖结构和独特生物活性的化合物是天然产物研究者的关注热点。
因此,本文以三株分离自苦楝和一株分离自香椿的楝科药用植物内生真菌作为研究对象,对它们的化学成分进行了提取分离、结构鉴定以及生物活性的研究。
通过多种色谱技术(正相与反向硅胶、Sephadex LH-20、PTLC以及HPLC等)以及多种现代波谱分析手段(1H-NMR、13C-NMR、HSQC、1H-1H COSY、HMBC、NOESY、MS和X-ray等)分离鉴定了 58个化合物的结构,包括6个新化合物和3个新天然产物,并对大部分化合物进行了生物活性评价。
主要的研究结果如下:1.从苦楝内生葡萄座腔菌KJ-1的大米固体发酵物中共分离鉴定了 24个化合物:3-hydroxy-2-methoxy-5-methylpyridin-2(1H)-one(1-1),3-hydroxy-N-(1-hydroxy-3-methylpentan-2-yl)-5-oxohexanamide(1-2),3-hydroxy-N-(1-hydr oxy-4-methylpentan-2-yl)-5-oxohexanamide(1-3),pycnophorin(1-4),stemph yperylenol(1-5),altenuene(1-6),chaetoglobosin C(1-7),chaetoglobosin F(1-8),altenusin(1-9),alternariol methylether(1-10),altemariol(1-11),5’-methoxy-6-methyl-biphenyl-3,4,3’-triol(1-12),7-hydroxy-1-isochromanone(1-13),过氧麦角甾醇(1-14),β-胡萝卜甾醇(1-15),5-(hydroxymethyl)-1H-pyrrole-2-carbaldehyde(1-16),5-hydroxymet hylfuran-2-carbaldehyde(1-17),cerebroside C(1-18),3-O-β-D-glucopyranosyl-spinasterol(1-19),methyloctadca-8,12-dienoate(1-20),亚油酸甘油酯(1-21),对羟基苯乙醇(1-22),3-methylpentane-1,2-diol(1-23)和丁二酸(1-24)。
中药内生菌的研究进展
中药内生菌的研究进展边军昌 冯永辉 杨 静 丁郁文 靖 会 西安医学院药学系(西安710021)摘要:目的 综述植物内生菌在中药领域的研究进展。
方法 查阅了近几年来相关的文献,并进行分析总结。
结果 中药内生菌中活性物质结构类型很多,几乎涵盖天然药物化学中所有的有效成分,如生物碱类、蒽醌类、黄酮类、苯丙素类、甾体及萜类、苷类、多肽类等等。
结论 中药内生菌资源丰富,应用前景广阔,是新药研发的宝贵资源。
关键词:内生菌;中药;次生代谢产物;综述do:i10.3969/.j issn.1003 8914.2010.01.113 文章编号:1003 8914(2010) 01 0164 02内生菌是指在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织、器官、细胞间隙或细胞内,对植物组织没有引起明显病害症状的微生物,它包括细菌、真菌、放线菌,也包括那些生活史中某一阶段表面生的腐生菌,对宿主暂时没有伤害的潜伏性病原菌和菌根及腐生菌等。
近年来,植物内生菌的研究已取得一定进展,发现了很多有药用价值的菌株和化合物,在农业、工业、医药卫生、生物学及生态学等领域有着巨大的应用潜力。
本文只对中药内生菌及其活性物质的类型、研究的内容、存在的问题及前景等几个方面进行综述,并对今后的发展前景进行展望。
1 内生菌、药用植物与环境三者的关系简介依据茎叶化石分析,内生菌在高等植物形成初期就已普遍存在于植物中,只是每种植物所含内生菌的种类、基因型和数量不同,有的内生菌只存在某些或某个植物中,生物活性物质也不同,因而作用不同。
这就是内生菌的普遍性、专一性和生物多样性[1,3,5]。
内生菌与宿主植物间的关系[1,9]比较复杂,归纳为:相互作用、互利共生。
内生菌对宿主植物的作用主要有:调节植物生长、抗虫害、抗菌性、抗逆性、促进植物次生代谢产物的合成等[3]。
从生态学看,内生菌、药用植物二者与环境关系密切,从内环境看,植物体内的内环境包括生命因子和非生命因子,其中生命因子主要是指植物及其体内的内生菌。
羌活根际土壤微生物群落结构特征及其对次生代谢产物的影响
生长发育［１２］ 和有效成分的合成积累［１３］ ，对提高药用植物的
抗病虫害能力［１４］ 、缓解连作障碍［８］ 和拮抗病原微生物［１５－１６］
等具有重要的作用。 因此，该研究以川西北羌活产区根际土
壤为研究对象，采用 ＰａｃＢｉｏ 单分子测序技术，结合 １６Ｓ ｒＤＮＡ
ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ａｎｄ Ｈｕｍｉｃｏｌａ （ Ｐ＜０．０５） ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． ［ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｃａｎ ｐｒｏｖｉｄｅ ｄａｔａ ｓｕｐｐｏｒｔ ｆｏｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆ⁃
ｉｃ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｉｌ ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ⁃Ｎ． ｉｎｃｉｓｕｍ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｉｎ Ｎ． ｉｎｃｉｓｕｍ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｒｅａ．
２．中国科学院成都山地灾害与环境研究所，四川成都 ６１０２９９；３．四川大学环境科学与工程系，四川成都 ６１００４１）
摘要 ［目的］科学评估羌活主产区土壤生态系统健康状况，揭示土壤微生物与羌活的互作关系。 ［ 方法］ 以羌活根际土壤为研究对象，
分别采用高通量测序技术和高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定土壤微生物群落结构组成和羌活次生代谢产物含量，进一步采用冗余分析和
羌活（Ｎｏｔｏｐｔｅｒｙｇｉｕｍ ｉｎｃｉｓｕｍ Ｔｉｎｇ ｅｘ Ｈ．Ｔ．Ｃｈａｎｇ）是伞形科
品质［７］ 等方面，对密切影响羌活药材产量和品质的根际微生
植物，是传统中藏羌医药体系常用大宗药材羌活（ Ｎｏｔｏｐｔｅｒｙ⁃
最活跃的界面之一，也是植物－微生物－土壤三者相互作用密
西藏2种乌头属药用植物茎内内生菌的分离与鉴定
安徽农学通报，Anhui Agri，Sci，Bull，2020，26（23）西藏2种乌头属药用植物茎内内生菌的分离与鉴定马红梅王璐璐段双全*（西藏大学理学院，西藏拉萨850000）摘要：目的：探究西藏工布乌头和露蕊乌头2种药用植物植株茎内内生菌。
方法：采用培养基培养法和载玻片法对分离得到的菌株进行形态学分析，并利用分子生物学技术提取菌株DNA进行测定。
结果：从2种西藏乌头属药用植物中获得的2株菌株，均属于半知菌亚门曲霉属环绕亚属黑色组的真菌。
关键词：西藏；药用植物；内生菌；DNA；乌头属中图分类号Q944.54文献标识码A文章编号1007-7731（2020）23-0026-03Isolation and Identification of Endophytes in the Stem of Two Medicinal Plants of Aconitum in Tibet MA Hongmei et al.（College of Science，Tibet Univercity，Lahasa850000，China）Abstract：Objective：This paper mainly explores the Isolation and identification of endophyte in medicinal plant of Aconitum in Tibet.Methods：The strains of endophyte were isolated and analyzed morphologically by medium cul⁃ture method and slide method.DNA of each strain was extracted by molecular biology technology for determination. Results：The two strains obtained belonged to the black fungus group of Aspergillus，Monilia-ceous，Hyphomyceta⁃les，Hyphomycetes，Deuteromycotina.Key words：Tibet；Medicinal plants；Endophytes；DNA；Aconitum内生菌（Endophyte）一词最早是由德国科学家de Bary首先提出的，早期定义是指生活在植物组织内的微生物。
中国红豆杉内生细菌的分离鉴定及活性研究
中国红豆杉内生细菌的分离鉴定及活性研究丁小维;刘开辉;邓百万;陈文强【期刊名称】《微生物学通报》【年(卷),期】2008(35)10【摘要】从中国红豆杉的茎中分离得到两株内生细菌G18、F19,通过生物学特性和16S rDNA序列分析,初步鉴定这两株菌分别为假单胞菌属(Psudomonas)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)细菌.活性研究表明,G18、F19发酵液均对3种病原细菌有抑制作用,分剐对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)和柑橘炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)有较强的抑制作用.G18和F19分别能降解水杨酸和敌敌畏.【总页数】4页(P1577-1580)【作者】丁小维;刘开辉;邓百万;陈文强【作者单位】陕西理工学院生物科学与工程学院,汉中,723001;陕西理工学院生物科学与工程学院,汉中,723001;陕西理工学院生物科学与工程学院,汉中,723001;陕西理工学院生物科学与工程学院,汉中,723001【正文语种】中文【中图分类】Q93【相关文献】1.七叶树内生细菌的分离鉴定及生物活性研究 [J], 王娇;解修超;邓百万;罗阳兰;刘军生2.中国红豆杉内生真菌的分离鉴定及其产紫杉醇的特性 [J], 丁小维;邓百万;陈文强;刘开辉3.泽兰实蝇幼虫内生细菌的分离鉴定及除草活性研究 [J], 兰明先;张某;李建一;鲁武锋;李召波;夏涛;李丽芳;吴国星;高熹4.2株中国红豆杉内生细菌代谢产抑菌活性物质的研究 [J], 赵赟鑫;刘开辉;邓百万;陈文强;耿直;李娟花5.一株蓝麻黄内生细菌的分离鉴定和抑菌活性研究 [J], 古力山·买买提;赵国玉;吾甫尔·米吉提因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
植物内生真菌分离培养的研究方法
王利娟等： 植物内生真菌分离培养的研究方法
: 8
水冲洗表面残留的消毒剂。家庭用的 ! " # $ %漂 白剂用水稀释至& ’! ( ) ’ 就是最常用的表面消
［ ］ & 毒剂 ， 由于商业次氯酸盐溶液浓度、 可用有效
有时将表面活性剂 （如 ; ） 和消毒剂结合 < 2 2 . = > ) 使用， 消毒后将组织在无菌水或 8 ) ’! 9 : ’ 的乙 醇中浸泡(? 6 .以除去残留的消毒剂。其他的消 毒剂在内生菌研究中并不常用， 包括硝酸银、 氯化 汞 （升汞） 、 福尔马林 （甲醛水溶液） 、 乙醇或丙烯氧 化物。由于升汞的毒性残留以及对自然环境的破 坏作用， 现在国外很少使用， 而是使用一些具有相
高等植物是复杂多样的， 它为各种各样的微 生物提供生存环境。这些微生物中主要是真菌， 有的生活在叶和嫩枝等的表面 （称为表生菌） ， 有 的生活在叶内部组织中 （称为叶内生菌） ， 有的则 生活在树皮中 （称为树皮内生菌） ， 还有的生活在 木材中 （如木质部内生菌和木材腐生菌） 。健康植 物内部组织的内生菌引起越来越多科学家的兴 趣， 从目前己经研究过的植物来看， 可以推断内生 真菌在植物体内是普遍存在的。通过对内生真菌 和宿主专一性分析， 平均每种宿主有! * 种专性 内生真菌， 按地球上有 " 内生真 * 万种植物计算， 菌总数可能超过 # $ $
［ ］ ’ 根菌和假菌根菌） 应属于内生菌 。目前， 关于内
等植物很可能是隐匿着未知真菌的宝库。本文主 要从! 个方面对内生真菌的研究方法进行了简要 综述。
> 植物内生真菌的定义
要弄清内生真菌的定义， 首先要明白内生菌
生菌的概念范畴仍有很大的争议， R = A @ 2 7 2提出的 ［ ］ ’ 内生菌概念被广泛接受 。 植物内生菌包括内生细菌、 内生放线菌和内 生真 菌 。 然而， 过 去’ $ 6中 ， = 7 F G < A =和= 7 F G 3 J K
内生菌与药用植物活性成分相关性研究进展
综述与编译050 内生菌与药用植物活性成分相关性研究进展陈雪英1 都晓伟1Ξ 李 滨2(11黑龙江中医药大学药学院 黑龙江哈尔滨150040;21黑龙江中医药大学教学实验中心 黑龙江哈尔滨150040)摘 要 从药用植物中提取分离出的内生菌的数量和种类不断增多,内生菌不仅自身能够产生活性成分,而且可以促进药用植物产生活性成分。
就近年来药用植物内生菌与活性成分相关性研究进展及存在的问题做一综述。
关键词 药用植物 内生菌 内生真菌 内生细菌 生物组合化学 内生菌(endop hyte)是指一类在其部分或全部生活史中存活于健康植物组织内部、不引发宿主植物表现出明显感染症状的微生物。
植物内生菌包括内生真菌和内生细菌(内生细菌包括内生放线菌),可从经过严格表面消毒的植物组织或植物组织内部分离得到[1]。
内生菌在植物体内广泛存在,从藻类、苔藓、蕨类、裸子植物和被子植物中均已分离得到了内生菌,其分布于植物的根、茎、叶、花、果实和种子等器官组织的细胞或细胞间隙[2]。
1993年美国蒙大拿州立大学的Strobel小组首次从短叶红豆杉T ax us brev if olian N u tt.中分离得到一株能合成抗癌物质紫杉醇的内生真菌,证明内生菌具有合成与宿主植物相同或相似的活性成分的功能[3]。
这一发现掀起了一场从药用植物中分离内生菌的热潮,并利用植物内生菌进行发酵生产得到了某些重要的天然药物,为解决某些药用植物生长缓慢、资源紧缺等引起的药源匮乏和生态破坏问题提供了新思路。
近年来,科学工作者先后从数十种药用植物中分离得到了多种内生菌,并从这些内生菌的培养物中得到了与宿主植物相同或相似的活性成分。
概括起来,植物内生菌影响活性成分产生和积累的途径主要有两种,一是内生菌自身产生药用植物活性成分,二是内生菌促进药用植物产生活性成分。
1 内生菌自身产生活性成分从药用植物中分离得到的内生菌,经过人工培养,能够在培养物中产生某些植物活性成分。
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两株羌活内生菌的化学成分研究
中药内生菌能产生大量的结构新颖,活性优异的次生代谢产物,而且有些中
药内生菌能产生与宿主植物相同或相近的代谢产物。由此,中药内生菌已成为中
药化学研究的热点。
羌活为我国中药常用品种,具有解表散寒,祛风除湿,止痛的功效。为了寻找
结构新颖、活性优异的次生代谢产物,我们对羌活内生菌的化学成分进行研究。
课题研究内容主要分为两部分,第一部分为一株羌活内生菌Myrothecium
verrucaria的正丁醇部分次生代谢产物化学成分研究,第二部分为一株羌活内
生菌Aspergillus fumigatus经表观修饰后次生代谢产物的化学成分研究。从新
鲜羌活Notopterygium inchum Ting ex H.T.Chang的根中分离得到一株内生真
菌Myrothecium verrucaria。
课题组前期从Myrothecium verrucaria代谢产物乙酸乙酯提取物分离得到
14个化合物。本文进一步对Myrothecium verrucaria代谢产物的正丁醇提取物
进行化学成分研究,从中分离并鉴定了14个化合物,分别为:1环(脯氨酸-苯丙氨
酸)(cyclo-(Pro-Phe))、2环(4-OH-脯氨酸-苯丙氨酸)(cyclo-(4-OH-Pro-Phe))、
3环(4-OH-脯氨酸-亮氨酸)(cyclo-(4-OH-Pro-Leu))、4环(脯氨酸-丙氨
酸)(cyclo-(Pro-Ala))、5环(脯氨酸-亮氨酸)(cyclo-(Pro-Leu))、6环(脯氨酸
-甘氨酸)(cyclo-(Pro-Gly))、7环(苯丙氨酸-甘氨酸)(cyclo-(Phe-Gly))、8
环(亮氨酸-亮氨酸)(cyclo-(Leu-Leu))、化合物9 N-乙酰色胺(N-acetyl
tryptamine)、10 N-苯乙基乙酰胺(N-phenylethyl-acetamide)、11 N-(2-羟基
苯乙基)乙酰胺(N-(2-hydroxyphenethyl)acetamide)、12 N-(4-羟基苯乙基)乙
酰胺(N-(4-hydroxyphenethyl)acetamide)、13尿嘧啶(uracil)、14胸腺嘧啶
(thymine)。
化合物1~14均为首次从Myrothecium verrucaria真菌中分离得到。中药内
生菌携带的能产生次生代谢产物的基因非常丰富。
而在常规实验室培养条件下,许多基因处于沉默状态,或表达水平很低。为了
刺激内生真菌沉默基因的表达,寻找新型的生物活性成分,我们采用在培养基中
添加表观遗传修饰剂5-氮杂胞苷(5-AC)和伏立诺他(SAHA)的策略,并对乙酸乙
酯提取物进行HPLC化学成分分析。
最终选择了一株羌活内生菌Aspergillus fumigatus,并通过在培养基中加
入SAHA的培养方式,对其代谢产物的乙酸乙酯提取物进行化学成分研究,最终分
离并鉴定了8个化合物,为:1 5a,6-脱氢-3-脱羟甲基二硫代-3,10a-双(甲硫基)
胶霉毒素
(5a,6-dehydro-3-dehydroxymethylbisdethio-3,10a-bis(methylthio)gliotox
in)、2双硫双-(甲硫基)胶霉毒素(bis(dethio)bis-(methylthio)gliotoxin)、
3胶霉毒素(gliotoxin)、4疣孢青霉原(verruculogen)、5 12,13-二羟基烟曲霉
毒素C(12,13-dihydroxyfumitremorgin C)、6乙酰苯胺(acetanilide)、7
AM6898A、8 pseurotin A。其中化合物1为首次分离得到的天然产物,化合物6、
7为首次从Aspergillus fumigatus中分离得到。