纯化藻蓝蛋白的测定
盐生隐杆藻藻蓝蛋白的分离纯化及理化性质
盐生隐杆藻藻蓝蛋白的分离纯化及理化性质李稳山;门潇;李朋富;陈丽;刘志礼【期刊名称】《盐业与化工》【年(卷),期】2008(037)003【摘要】文章确立了简便的一步法纯化盐生隐杆藻藻蓝蛋白.经过磷酸缓冲液提取、硫酸铵分步沉淀和DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析,分离纯化得到盐生隐杆藻藻蓝蛋白,其纯度(A620/A280)达到4.58,最终得率为52.65%.纯化的藻蓝蛋白最大吸收峰为620nm,其室温荧光发射峰为646nm,SDS-PAGE电泳显示其α和β亚基的分子量分别为17218Da和20844Da,分子排阻HPLC 测得其分子量为76158Da,表明其在pH 7.2下是以(αβ)2二聚体状态存在于溶液中.稳定性实验表明,黑暗、pH 5～8以及0M～2M NaCl等条件下AH-PC是稳定的.这些实验结果将为开发利用盐生隐杆藻藻蓝蛋白提供参考.【总页数】6页(P27-32)【作者】李稳山;门潇;李朋富;陈丽;刘志礼【作者单位】南京大学生命科学学院,南京,210093;南京大学生命科学学院,南京,210093;南京大学生命科学学院,南京,210093;南京大学生命科学学院,南京,210093;南京大学生命科学学院,南京,210093【正文语种】中文【中图分类】Q949.22【相关文献】1.盐生隐杆藻胞外多糖(EPAH)抗肿瘤作用的实验研究 [J], 程启平;周守标;郑维发2.盐度胁迫下盐生隐杆藻抗氧化防御系统的变化 [J], 周亚维;焉婷婷;李朋富;刘志礼3.盐生隐杆藻胞外多糖(EPAH)抗衰老的实验研究 [J], 程启平;周守标;郑维发4.盐生隐杆藻胞外多糖的粘度特性 [J], 欧瑜;刘志礼5.一种有开发前景的微藻—盐生隐杆藻 [J], 刘志礼; 林辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
藻蓝素测定方法
进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白、叶绿素含量的测定方法Method for determination of phycocyanin and chlorophyiis in spirulina powder for import and exportSN／T 1113—2002 前言本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准由中华人民共和国海南出入境检验检疫局负责起草。
本标准主要起草人：张薇君、郝纯彦、李高兰、云昌浩。
本标准系首次发布的检验检疫行业标准。
1 范围本标准规定了进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白及叶绿素含量检验的抽样、制样和分光光度测定方法。
本标准适用于进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白及叶绿素含量的测定。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB／T 16919食用螺旋藻粉3 抽样和制样按GB／T 16919规定的方法执行。
4 测定方法4.1 藻蓝蛋白含量测定4.1.1 方法原理样品用磷酸盐缓冲液溶解，置冰箱中冷冻、融解，使色素蛋白析出，分离后的提取液用分光光度法测定。
4.1.2 试剂磷酸盐缓冲溶液：将0.1 mol／L磷酸二氢钾溶液与0.1 mol／L磷酸氢二钾溶液(45+55，V／V)混合，溶液pH值为7.0。
4.1.3 仪器设备4.1.3.1 分光光度计。
4.1.3.2 超声波振荡器。
4.1.3.3 离心机：3 000 r／min。
4.1.3.4 低温冰箱：-20℃。
4.1.3.5 离心管：50 mL。
4.1.4 样品测定称取试样0.25 g～0.5 g(精确至0.000 1 g)，用缓冲液(4.1.2)溶解，超声振荡5 min，定容于250 mL容量瓶中，摇匀。
一步柱层析纯化螺旋藻藻蓝蛋白
一
步柱层 析纯化螺旋藻藻蓝蛋 白
楠 ， 李勇勇 ， 谷洋洋 ，刘兆普 ， 秦 松 ４
邵 明飞 一， 赵
（ １ ．南京农 业 大 学 资 源与 环境 科 学 学院 江 苏省海 洋 生物 学重点 实验 室 ，南京 ２ １ ０ ０ ９ ５ ； ２ ．曲阜 师 范 大学 化 学与４ ｔ ５ ＿ ｖ ＿ ． 学 院 ，曲阜 ２ ７ ３ １ ６ ５ ； ３ ．汕 头大 学 理 学 院生物 系，汕头 ５ １ ５ ０ ４ １ ；
第 ３ ０卷 第 ５期
２ ０ １ ３年 １ ０月
生 物 学 杂 志
Ｊ ０ＵＲＮＡＬ ＯＦ ＢＩ ＯＬＯＧＹ
Ｖ０ １ ＿ ３ ０ Ｎｏ ． ５ ０ｃ ｔ ．２０１ ３
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． ２ ０ ９ ５—１ ７ ３ ６ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ５ ． ０ ５ ９
Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ ２ １ ０ ０ ９ ５；２ ．Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ａ ｎ ｄ Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ ， Ｑ ｕ ｆ ｕ Ｎｏ ｒ ｍａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｑｕ ｆ ｕ ２ ７ ３ １ ６ ５ ；３ ．Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ，Ｓ ｈ ａ ｎ ｔ ｏ ｕ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｓ ｈ ａ ｎ ｔ ｏ ｕ ５ １ ５ ０ ４ １ ；
４ ．中国科 学院烟 台海岸 带研 究所 生物 资源 实验Байду номын сангаас室 ， 烟台２ ６ ４ ０ ０ ３ ）
藻蓝蛋白
功效
藻蓝蛋白可以帮助调节、合成人体代谢所需要的多种重要的酶，对抑制癌细胞的生长和促进人体细胞再生、 保养卵巢、促进人体内合成弹力蛋白具有重要作用，同时藻蓝蛋白调节人体免疫系统，增强免疫系统功能，提高 人体对疾病的抵抗力。因此，藻蓝蛋白被食品专家形象地誉为“食物钻石”。它在以下方面具有很好的效果。
FPC用于荧光探针具有以下优点： （1）在较宽光谱范围内有较高吸收系数； （2）在较宽的PH范围内有较高的荧光产率； （3）它们的荧光不因其它生物分子的存在而消失； （4）有较好的水溶性； （5）液体或固体状态存在时都极为稳定，且能保存较长时间。 FPC作为标记物，与生物素、亲和素、DNA分子和各种单克隆抗体结合制成荧光探针，其应用领域主要包括荧 光显微检测、荧光激活细胞分类、流式细胞荧光测定、荧光免疫检测、双色或多色荧光分析以及单分子检测等。
性状
蓝色颗粒或粉末，属蛋白质结合色素，因此具有与蛋白质相同的性质，等电点为3.4。溶于水不溶于醇和油 脂。对热、光、酸不稳定。在弱酸性和中性下稳定（pH4.5~8），酸性时（pH4.2）发生沉淀，强碱可至脱色 。
应用
藻蓝蛋白的应用研究很广泛，可归纳以下几方面：
(1)天然食用色素：藻蓝蛋白是水溶性色素，无毒，纯蓝，清亮可爱，可作为食品着色剂、化妆品的添加剂。
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1、抗癌细胞、抗肿瘤。
藻蓝蛋白已被证明能抑制癌症细胞扩展。科学家研究发现，藻蓝蛋白有明显抑制癌细胞的功能。可以制成抗 肿瘤的辅助治疗药物，用以化疗的辅助治疗可增强机体的免疫力。在一项科学实验中，用提取的藻蓝蛋白喂养有 肝癌的大鼠发现：经过藻蓝蛋白喂养的大鼠成活率比对照组高得多，在5星期后，治疗组大鼠有90%活下来，而未 治疗组只成活25%，8星期后，治疗组有25%的大鼠活下来，未治疗组的大鼠都死了。这说明口服藻蓝蛋白可以提 高患有癌症的生物的成活率。
从一种富含藻胆蛋白的螺旋藻中大量提取和纯化藻蓝蛋白的研究
从一种富含藻胆蛋白的螺旋藻中大量提取和纯化藻蓝蛋白的研
究
胡一兵;胡鸿钧;李夜光;耿亚红
【期刊名称】《植物科学学报》
【年(卷),期】2002(020)004
【摘要】采用新鲜藻丝为原料和分段梯度盐析分离纯化钝顶螺旋藻Sp(NS)-90020的藻蓝蛋白(PC),经羟基磷灰石一次层析,能使提取的PC的纯度大于普遍认可的标准.由于该工艺流程较为简单,适合藻蓝蛋白的大量生产.藻胆蛋白经Sephadex凝胶过滤后的可达电泳纯度标准.经SDS-PAGE测得PC, APC的分子量分别约为38,33 kD.
【总页数】4页(P299-302)
【作者】胡一兵;胡鸿钧;李夜光;耿亚红
【作者单位】中国科学院武汉植物研究所,武汉,430074;湖北民族学院生物科学与技术学院,恩施,445000;中国科学院武汉植物研究所,武汉,430074;中国科学院武汉植物研究所,武汉,430074;中国科学院武汉植物研究所,武汉,430074
【正文语种】中文
【中图分类】Q946;Q949.22
【相关文献】
1.钝顶螺旋藻藻蓝蛋白提取和纯化工艺研究进展 [J], 孟春晓;高政权
2.螺旋藻藻蓝蛋白的规模化提取和色谱纯化技术研究进展 [J], 吴蕾;庞广昌;陈庆森
3.螺旋藻藻胆蛋白的提取和纯化的初步研究 [J], 童晓滨;宋卫军;谢妤
4.螺旋藻藻蓝蛋白提取纯化方法研究进展 [J], 付丽丽;那日;郭久峰;金晶
5.钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白提取纯化新工艺 [J], 林红卫;覃海错;伍正清;黄文榜;梁宏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
柱层析法纯化藻胆蛋白的紫外-可见光谱特征研究与机理分析
光谱学与光谱分析 SpectroscopyandSpectralAnalysis
Vol 40,No. 4,pp1107-1112 April, 2020
柱层析法纯化藻胆蛋白的紫外■可见光谱特征研究与机理分析
武康X汪家权X赵冰冰方艳X张发宇 3
1. 合肥工业大学资源与环境工程学院&安徽合肥230009 2. 合肥工业大学土木与水利工程学院&安徽合肥230009 3. 合肥工业大学电子科学与应用物理学院，安徽合肥230009
1实验部分
1.1样品采集 巢湖新鲜藻泥，采自于合肥市巢湖西湖区水体距表层15
cm处％直接打捞，经四层纱布过滤除去部分水分后，带回实 验室一18 C冷冻保存备用％ 1.2仪器与试剂
紫外-可见分光光度计(TU-1950)，北京普析通用公司; 高速冷冻离心机(KDC-160HR)，安徽中科中佳科学仪器有 限公司；电子天平(FA2004N)，上海民桥精密科学仪器有限 公司；恒温磁力搅拌器(85-2A)，江苏金城国胜仪器厂％
常用试剂：磷酸盐缓冲试剂(PBS)，NaCl，NaOH，ufineA-500, GE公司；羟基磷灰石(CHT-B)，Biocanal公司％ 1.3 工艺流程
蓝藻藻泥&反复冻融提取&过滤&离心分离制备粗提液 &一步盐析&离心收集上清液&二步盐析&透析脱盐&柱层 析(CellufineA-500，羟基磷灰石)分离纯化&收集洗脱组分 &紫外-可见吸收光谱法分析％ 1.4表征方法
关键词 光谱分析；藻胆蛋白；柱层析
中图分类号：X524 文献标识码：A
DOI： 10. 3964/j. issn. 1000-0593（2020）04-1107-06
螺旋藻藻蓝蛋白的分离
螺旋藻藻蓝蛋白的分离摘要: 藻蓝蛋白(Phycocyanin)是一个具有生物活性功能的天然蓝色素蛋白,已被用作优质蛋白源,添加于食品和鱼饵料中, 具有抗氧化、增强人体免疫力等功能, 又可制成荧光探针, 用于免疫学、细胞生物学等领域。
本文主要介绍运用硫酸铵盐析与层析柱结合法从螺旋藻中分离提取藻蓝蛋白。
藻蓝蛋白是一类普遍存在于蓝藻细胞中的光合辅助色素,一种特殊的色素蛋白, 由开链四吡咯化合物和脱辅蛋白通过硫链键结合。
藻蓝蛋白在螺旋藻中的含量高达10%～20% , 是螺旋藻细胞中重要的光合作用的天然色素,在光合作用中能以近乎100% 的高效率把光能优先地传递给光系统。
藻蓝蛋白既可以作为天然色素广泛应用于食品、化妆品、染料等工业。
同时藻蓝蛋白具有强烈荧光可制成荧光试剂、荧光探针、荧光示踪物质等, 用于临床医学诊断、免疫化学及生物工程等研究领域中。
同时藻蓝蛋白还是一种无毒副作用的理想光敏剂。
由于藻蓝蛋白具有良好的开发前景, 在螺旋藻的含量较高, 螺旋藻中藻蓝蛋白的研究成了藻类蛋白研究的热点。
1工艺流程弃去下层墨绿色沉淀↗螺旋藻（加入提取液）→冻融→离心（10000r/min,15min）→取亮蓝色上清液→加入↗弃去蓝色沉淀(NH4)2SO4固体粉末（在溶液浓度达到20%）→离心（10000r/min,15min）→取亮蓝色上清液→加入(NH4)2SO4固体粉末（在浓度达到50％）→离心（10000r/min,15min）→取得深蓝色沉淀→加入蒸馏水→装入层析袋→蒸馏水中层析（4℃）→过柱纯化→结果检测↘弃去黄绿色上清液2分离纯化具体方法2.1取螺旋藻粉颗粒倒入塑料瓶中，加提取液。
2.2.将塑料瓶用滤纸封住瓶口置低温（－20℃）下冰冻一定时间，然后取出置室温下（或40℃左右）迅速融化。
如此反复冻融多次（实验中此步骤我们只做了一次，其余由老师帮做）,细胞可在形成冰粒和增高剩余胞盐浓度的同时,发生溶胀破碎。
实验现象:解冻前:墨绿色固状(略带紫色)解冻后:墨绿色溶液2.3.冻融所得溶液分两次在10000rpm下高速离心15min，得到亮蓝色上清液，用小烧杯收集，弃去下层墨绿色沉淀。
双水相萃取藻蓝蛋白的机理
双水相萃取藻蓝蛋白的机理邵琳琳1，张烜1，宋佳玉1，崔正刚1，王峰1，2【摘要】摘要：采用荧光光谱的方法对双水相萃取藻蓝蛋白（PC）的机理进行了研究。
不同分子量的聚乙二醇（PEG）对PC均有荧光猝灭作用。
PEG与PC 相互作用的热力学研究结果表明，PEG1000与PC的结合常数大于PEG2000和PEG4000，两者是熵驱动下的疏水作用力结合。
不同的无机盐对PEG1000与PC结合的影响不同，其中Na2SO4使PEG1000-PC体系熵增效果最显著。
同步荧光光谱的研究表明，PEG1000使PC色氨酸残基微环境的疏水性增强；Na2SO4通过促进PEG1000与PC的结合而使色氨酸残基微环境的疏水性进一步增强。
单因素扫描实验的结果表明，PEG1000/Na2SO4体系双水相萃取纯化藻蓝蛋白（PC）的能力最强，符合PEG1000与PC分子相互作用的热力学规律。
【期刊名称】化工进展【年(卷),期】2015(034)009【总页数】9【关键词】双水相萃取；藻蓝蛋白；热力学；纯化藻蓝蛋白（又称藻蓝素，简称PC）是从螺旋藻中分离出来的一种深蓝色粉末，色泽美观。
它是一类稀有的光合作用色素蛋白，氨基酸组成齐全，是藻类中特有的捕光色素蛋白[1]。
PC具有抗辐射、抗氧化、抗肿瘤以及无毒副作用等优势，在食品保健、药物治疗、化妆品以及荧光探针方面具有广泛的应用[2]。
双水相萃取是生物物质分离纯化中一种有效且有价值的方法，近年来得到了人们广泛的关注，已经应用于蛋白质、酶、天然物质等的纯化过程中[3]，常用的是PEG/无机盐体系。
其体系含水量高、温和且无毒，可以有效地保证生物分子的活性[4]。
与其他分离方法（如离子交换层析、凝胶过滤层析等）相比，双水相萃取具有分离时间短、萃取效率高、污染少等优势[5]。
荧光光谱分析法[6]具有灵敏度高、选择性强、试样量少和方法简单等特点，通过荧光参数的测定，不但可以做一般的定量分析，还可以通过热力学分析推断蛋白质与客体分子间相互作用和作用力类型。
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纯化藻蓝蛋白的测定
一、目的
1掌握藻蓝蛋白色价指标。
2掌握藻蓝蛋白色价的测定方法。
3 熟练分光光度计测定光密度操作。
二、实验原理
藻蓝蛋白在620nｍ处有最大吸收值，普通蛋白在280nm处有最大吸收值，目前国内和出口螺旋藻藻蓝蛋白都是以A620/A280（色价）作为判定藻蓝蛋白纯度的指标。
根据硫酸铵分级沉淀纯化藻蓝蛋白的色价和提取液的色价比值可以计算出纯化比，表征沉淀沉淀的效果。
三、实验器材及试剂
1、实验仪器及工具：
紫外可见光分光光度计、量筒、透析袋、移液枪等。
2、实验原料及试剂
超纯水、稀酸、稀碱等。
四、实验方法及步骤
1 硫酸铵沉淀溶解：将获得的硫酸铵沉淀蛋白用适量水溶解。
2、分光光度计调零：用空白对照调节分光光度计吸光值为零。
3、藻蓝蛋白浓度测定：分别测定藻蓝蛋白的A620和A280，计算出它们的比值，表征藻蓝蛋白的纯度。
5、纯化度计算：用硫酸铵分级沉淀后的A620/A280除以提取液的A620/A280所得值即为纯化度。
五、实验结果记录
记录纯化后所得的藻蓝蛋白质量、纯化后藻蓝蛋白的色价，计算出纯化比和纯化收率。
六、实验结果分析及讨论
分析硫酸铵饱和度和藻蓝蛋白纯化之间的关联性。