乳腺癌患者HER2基因表达状态及临床病理意义探讨

号染色体非整体性的发生情况及与年龄 ， 初潮、 初产 年龄 ， 绝经 ， 怀孕、 生产次数 ， 肿块大小 ， 组织分级 ， 淋 巴结转移 以及雌激素受体（ Ｒ 和孕激素受体（ Ｒ Ｅ） Ｐ）
表 达 的关 系。
１ 材料 与方 法
ＳＣ溶 液 置 于 ４ Ｓ ５±ｌ 水浴 箱 中预热 ３ｍｎ 移 去 盖 ０ ｉ， 玻 片 ， 即将 玻 片 分 别 置 于 盛 有 ５ ％ 甲 酰 胺／ 立 ０ ２× ＳＣ溶 液 的瓶 “ ” “ ” “ ” Ｓ １ 、２ 、 ３ 中晃 动 玻 片 １—３ｓ ０ ，１ ａｎ后取 出将 玻 片 置于 盛有 ２ Ｓ 液 的瓶 中 ， ｒｉ ×ＳＣ溶 晃
５ ） 在 Ｈ Ｒ蛋 白 （ ， １ ，２＋） （ ＋） 例 发 ６， Ｅ 一） （ ＋） （ 和 ３ 病
信号各 ２ 个。Ｈ Ｒ 基因扩增异常细胞 ： Ｅ２ 单个 问期细 胞核 中红色信号大于 ２ 个。Ｒ ｔ 值计算 ：ａｏ ＝ ａｏ ｉ Ｒｔ 值 ｉ ３ 个细胞核 中核 中红色信号总数／０ ０ ３ 个细胞核中绿 色信号总数 ， ａｏ １８ Ｒ ｔ ＜ ． 提示该样本无 Ｈ Ｒ 基因扩 ｉ Ｅ２
表 ２ ６例乳腺癌患者 １ ５ ７号染色体表达情况 （ ％）
为中度扩增 ， ０ ＞１ 为高度扩增 。１ 号染色体非整体 ７
性标 准 ： 个 细 胞 中 １ 每 ７号染 色 体 数 目平 均 １７ ．６—
２２ 为二体性 ， ．５ 大于或等于 ２２ 为多体性 ｌ。 ． ６ ３ Ｊ
１４ 统计 学 方法 ． 分析。
取出， 室温下 复溶 ， 用迷你离心机离心 １ ， —３Ｓ涡旋
混匀 后再 次 短 暂离 心 ， １ Ｄ Ｐ 复 染 剂 滴 加 于 将 ５ ＡＩ 杂交 区域 位置 ， 即盖上 盖玻 片 。暗处 放 置 ２ ｉ。 立 ０ｍｎ 在荧 光显 微镜 下 观 察 ， 成 杂交 的玻 片置 于 一２ ℃ 完 ０
—
ＦＳ 技 术对 结果 进 行确 认 。一 些 研究 认 为 具有 １ ＩＨ） ７
５ 水 浴箱 中 ， 交前 取 出。５℃加 热玻 片 ５—１ ０ 杂 ５ ０

号染色体非整体性的乳腺 癌患者 ， 可能其预后 和对 治疗 的反 应 与 无 该 遗 传 学 特 征 者 明 显 不 同＿２， １ｊ也 ＇ 有一些认为乳腺癌中染色体倍体性与肿瘤细胞分化 程度无关 ， 与存活率及复发率亦无关 ＿。ＦＳ ３ Ｉ Ｊ Ｈ技术
不 仅可用 于检 测 Ｈ Ｒ Ｅ ２基 因扩 增 ， 还具 有 观 察 １ ７号 染色 体 倍 体 性 的优 势 ， 研 究 应 用 ＦＳ 和 ＩＣ技 本 ＩＨ Ｈ 术， 观察乳 腺 癌患者 Ｈ Ｒ Ｅ ２蛋 白表 达和 基 因扩增 ，７ ｌ
ａ ， ｒｎ 将玻 片在 变性 液 中浸 泡 ５ｍｎ依 次 置 于 一２ｑ ｉ ｉ， ０Ｃ 预冷 的 ７ ％ 乙醇 、５ ０ ８ ％乙醇 和 １０ 乙醇 中各 ３ｍｎ ０％ ｉ
荧 光 原 位 杂 交 （ ｕｒ ｃｎ ｅ ｉ ｓｕ ｈｂｉ ｚｔｎ ， ｌ ｓ ｆ ｏｅ ｅｃ ｎ ｉ ｙｒ ｉ ｉ ｔ ｄ ａｏ
浸泡 ， 依次置于 一 ０ ２ 预冷的梯度 乙醇中脱水 ， 室温
浸 入丙 酮溶 液 中 ２ｒｎ 自然 干燥玻 片 。 ｉ， ａ 探 针 混合 物 制 备及 变 性 ： 探针 及 杂 交缓 冲液 将 室温下 复溶 ， ７ 杂交缓 冲液 ， Ｆ 去离 子水 ， 将 １ １ １ ２ 探针加入 到 微量 离 心 管 中 ， 涡旋 ｝ 匀 后 再 次短 暂 离 昆 心 ， 于 ７ 的水 浴 箱 中变 性 ５ｒｎ后 ， 于 ４ 置 ３±１ ｉ ａ 置 ５
增 ； ａｏ ． 示 样 本 中 Ｈ Ｒ Ｒ ｔ ＞２２提 ｉ Ｅ ２基 因 扩 增 ， 两 种 若 信 号 的 比值 ＞２ ０或众 多 信 号 连 接成 簇 时 ， 不 用计 可
生率 分 别 为 ２ ． ％ （／６ ，０ ０ （／０ ，７ ５ ６ ９ ７２ ） ３ ． ％ ３ １ ） ３ ． ％ （／ ）５ ．％ （／２ ， Ｃ 一）（ ＋） （ ＋） ３８ ，８３ ７ １）Ｉ （ ／ １ 与 ３ 比较 ， Ｈ 有显著差异 （ ＝ ２ Ｐ＜００ ） ＩＣ 一）（ ＋） ２， ．１ ； （ ／ １ 与 Ｈ （ 及 ＩＣ ２＋） （ ２＋） Ｈ （ 与 ３＋） 比较 ， 显 著 差 异 （ ＝ 无 ７
的胞膜染色 ，３ ＞ ０ （ ＋） １％细胞有较强 的完整胞膜染
色 。 （ 一（ ＋） 一） １ 为无 或低 表达 ，２＋） （ ＋） 过 （ 和 ３ 为 表达 ０
７ ±１ 烤片 ， ３ ｏ Ｃ 室温下脱蜡 ， 水化 ，０ ３ ％酸性亚硫酸钠
５ ℃处 理 ， 白酶 Ｋ３ ℃消 化 ， ． ｏ Ｈ １ ０ 蛋 ７ ０ １ｔ ｌ Ｃ 中室 温 ｏ
２ 结果
应 用 ＳＳ ３０ 件包 进 行统计 Ｐ Ｓ１． 软
２ １ ＩＥ ２基 因 扩 增 与 蛋 白表 达 的关 系 ． ｔ Ｒ
５ ６例 患
者 ＩＣ 一）６例 ， １ １ ，２ ８ ，３＋）２ Ｉ （ ２ － Ｉ （ ＋）０例 （ ＋） 例 （ １ 例 ，Ｉ Ｆ Ｈ基因扩增 ｌ 例 ， 中 ｍｃ ２ ５ ， Ｃ ３ Ｓ ６ 其 （ ＋） 例 Ｉ （ Ｈ ＋）１ ， Ｃ ２ 病例 高度扩增 占 １．％（／ ） １ 例 １ （ ＋） Ｈ ２ ５ １８ ， 低度 和 中度 扩 增 占 ５ ％ （／ ） ＩＣ（ ０ ４ ８ ，Ｈ ３＋） 主要 为 者
ＦＳ ： １ ４ 倍物镜下观察信号 ， Ｉ 在 ０ ０ Ｈ ／ 选择细胞核
大 小一 致 、 的边界完 整 、 Ａ Ｉ 色均 一 、 胞核 孤 核 Ｄ Ｐ染 细
中国实验诊 断学
２１ 年 ２ ０１ 月 第 １卷 第 ２ ５ 期
一
３ ３１ —
立无重叠 、 绿色着丝粒信号清晰的区域 ， １ 倍物 在 ０ ０
镜下 ， 过特 异 的单通 道 滤光 片随 机计 数 ３ 细胞 通 ０个 内信 号 。正 常 细胞 ： 个 间 期 细胞 核 中 红 色及 绿 色 单
２ ２ １ 染色 倍 体 性 与 Ｉ Ｉ 蛋 白表 达 关 系 本 ． ７号 ｔ ￣ Ｅ
组病 例 中 １ 染 色 体 倍 体 异 常 率 为 ３ ． ％ （０ ７号 ５ ７ ２／
１３ 检测 方 法 ． 采 用独 立盲法 检测 分析 。 １３ １ ＩＣ检ｉ 按 试剂 盒说 明书 操作 。 ．． Ｈ 贝 ０ ＦＳ ＩＨ检测 程 序 如 下 。组 织 切 片 预 处 理 ： 片 ， 切
不 完整 胞膜 染 色 ，２＋） ＞１％细 胞有 较 弱 但 完 整 （ ： ０
邓明凤 王昌富 ， ， 郭华雄 陈登峰 黄 俊 李 ， ， ， 滔
（ 中科 技大学同济医学院附属荆州医院 １ 检验 医学部 ； ． 华 ． ２ 病理科 ； ． ３ 乳腺科 ， 湖北 荆 州 ４４ ２ ） ３０ ０
人类 表皮 生长 因子 受 体 ２ Ｈ Ｒ ） （ Ｅ ２ 定位 于 １ ７号 染 色体 ｑ２—２ ， 具 有 酪 氨 酸 激 酶 活 性 的 跨 膜 生 １ １是 长 因子 受 体 。乳 腺 癌 Ｈ Ｒ Ｅ ２基 因 扩 增 或 蛋 白 过 表 达， 与疾 病进 展 和预 后 相 关 。 目前 临 床 上选 用 免 疫 组织 化 学 （ｍ ｕｏｉｏｈｍｓｙ ， ） 进 行 筛 查 ， ｉｍ ｎｈｓ ｃｅ ｉｒ ｍＣ 法 ｔ ｔ
１１ 组织标本 ．
本 院 ２０ １ 至 ｌ ０８年 月 ２月 ５ 乳 ６例
动玻片 １ ３ ，０ ｉ后取出玻片， — 秒 １ ｒｎ ａ 置于盛有 ０ １ ．％ Ｎ 一４／ Ｐ ０２×ＳＣ溶 液 的 瓶 中 ， 动 玻 片 ｌ一３秒 ， Ｓ 晃 ５
ａ 后取 出玻 片 ， ｒｎ ｉ 室温 浸 泡 在 ７ ％ 乙醇 中 ， ｎ后 ０ ３ｍｉ 取 出玻片 ， 暗处 自然 干 燥 ， Ｄ Ｐ 复染 剂 从 冰 箱 中 将 ＡＩ
进行梯度脱水 ， ｌ ｌ 将 ０ 变性后的探针混合物滴于玻
片 杂交 区域 ， 即加 盖盖 玻 片 ， 橡皮胶 封边 。置 于 立 用 预 热 的湿 盒 中 ，２ ４ 保 温箱 中过 夜杂 交 １ 时 。 ６小 玻片 洗涤 、 复染 和 观 察 ： ３瓶 装 有 ５ ％ 甲酰 将 ０
胺／ Ｓ ２ｘＳ Ｃ溶 液 及 ２×Ｓ Ｃ溶 液 ， ． ％Ｎ Ｓ ０ １ Ｐ一４ ／ ０ ２×
避 光储存 。
１３２ 结果判 断 ．．
ＩＣ 参照《 Ｈ： 乳腺癌 Ｈ Ｒ 检测指南》 ｊ（ ： Ｅ２ ： 一）无
染 色或 少于 １ ％细胞 膜染 色 ， １＋） ＞１ ％ 细胞 有 ０ （ ： ０
北京金菩嘉 医疗科技有 限公 司， Ｌ Ｍ Ｕ Ｘ １ Ｏ Ｙ Ｐ ＳＢ ５ 荧 光显微镜 ， Ｎ Ｐ Ｉ Ｊ Ｏ ＴＫ摄像头以及 ＦＳ Ｅ Ｉ Ｈ分析软件 。
增者 ｌ 号染色体倍体异常率为 ５ ．％（／６ ， ７ ００ ８ １）不扩 增 者 为 ３ ．％（２４ ）二 者 比较 有 显 著差 异 （ ＝ ０Ｏ １／０ ，
１ ．３ Ｐ＜００ ）ＦＳ 阳性 和 阴性病 例 均 有 亚 二倍 ６７ ， ．１ ；ＩＨ
体和多倍 体表达 ， 多倍体 主要分 在 １Ｃ ３ ／ Ｉ Ｈ （ ＋）ＦＳ Ｈ 阳性病例 中（５ ６８ ， ７ ％，／ ） 亚二倍体主要为 ＩＣ 一） Ｈ （ 和（ ＋）Ｆ Ｈ阴性病例 （３ ３ ％， ／ ２ ， 例 ＩＣ １ ／Ｉ Ｓ ８ ．３ １ １） １ Ｈ ０ （ ＋）Ｆ Ｈ阴性者为 ｌ 号染色体多体。 ３ ／Ｉ Ｓ ７
４６ ， ．１ Ｐ＞０ ０ ； ＝５ ０ ， ．５ ．６ Ｐ＞０ ０ ） ｔＲ ．５ 。ｔ ２基 因扩 Ｅ
算， 即视为基因扩增 ； ａｏ １ ８ ２ ２之 间时 ， Ｒｔ 在 ． — ． ｉ 可 以选择增加计数细胞 至 １ ０ ， ０个 或者 重新本次实验
来 判 断最终 结果 ｃ若 遇 到 Ｈ Ｒ 『 Ｅ ２基 因扩 增在 不 同癌 细 胞 中存在 异 质性 时 ， 于 另一 癌 区域再 计 算 ３ 要 ０个 癌 细胞 核 中的 红绿信 号 值 ， 告 其最 大值 ， 加 以注 报 并 释 。ＦＳ ＩＨ扩增标 准 ： 比值 ２—４为 低 度 扩 增 ， ４—１ ０