三七总皂苷对氧糖剥夺的皮质神经元损伤的保护作用

暗室曝光 ， 影 ， 影后拍照 。 显 定
讨
论
Ｎ， ２一乙磺 酸 （ Ｅ － Ｈ Ｐ—Ｅ ） Ｎ Ｓ 、 Ｆ抗体 、
缺 血缺 氧 性 脑 损 伤 与 神 经 元 凋 亡 及 其 有 关 基 因 调 控 的 研 究 日益 受 到 重 视 。
脑 缺 血 缺 氧 后 有 多种 基 因被 诱 导 表 达 ， 它 们 有 的起 促 进 凋 亡 作 用 ， 的 则 起 抑 制 凋 有
白含 量 增加 。 结 论 ： Ｎ Ｐ Ｓ对 缺 氧 缺 糖 条 件
相对 存活 率 （ ）＝（ ％ 实验 组 Ｏ Ｄ值／ 照 对
组Ｏ Ｄ值 ）Ｘ１０ 。 ％ ０
予 ２ 、 ０ ／ 浓 度 的 Ｐ Ｓ明 显 降 低 ５ ５ ｍｇＬ Ｎ
ＭＤ Ａ。 与 Ｏ Ｄ 组 相 比 ， ０ ０ 。而 各 浓 Ｇ Ｐ＜ ．５ 度 的 Ｐ Ｓ 单 独 与 细 胞 温 孵 ２ 小 时 后 Ｎ ４
１ 张拥波 ， 董为伟． 氧糖剥夺 离体神 经元缺血
模 型 的 建 立 ． 庆 医 科 大 学 学 报 ，０ １ ２ 重 ２０ ，６
（ ） １ ６—１ ８ ２ ：１ １．
影响 ： Ｉ’ Ｍｒ 检测 的结果 表 明 ， 外培 养 的 Ｔ Ｉ 体
大 鼠皮 质 神 经 元 ， 过 氧 糖 剥 夺 Ｏ Ｄ 处 经 Ｇ
使 Ｏ Ｄ处 理 的 皮 质 神 经 元 的 Ｏ Ｇ Ｄ值 升
高 ， Ｏ Ｄ 组 相 比 Ｐ ＜００ 。 结 果 提 示 与 Ｇ ．５ ２ ５ ｍｇ Ｌ浓 度 的 Ｐ Ｓ对 于 经 Ｏ Ｄ处 理 ５、０ ／ Ｎ Ｇ 的大 鼠 大 脑 皮 质 神 经 元 的 损 伤 具 有 一 定
２ 王 天 佑 ， 军 ， 亮 ． 外 培 养 的 中 枢 神 经 阎 彭 体 细 胞 的 “ 血 ” 损 害 ． 国病 理 生 理 杂 志 ， 缺 性 中
下 的 大 鼠 皮 层神 经 细 胞 有 保 护 作 用 ． 保 其 护作用可能与其 抑制神 经 细胞脂质 过氧 化反 应 、 高 Ｂ ｌ ２蛋 白表 达 有 关 。 提 ｃ一 关 键 词 三七 总 皂 苷 神 经 元 氧 糖 剥 夺（ Ｇ Ｏ Ｄ）
ｄ ｉ １ ． ９ ９ ｊ ｉ ｎ ０ ７ —６ ４ ． ０ ０ ｏ ： ０ ３ ６ ／ ． ｓ ．１０ ｓ １ｘ ２１．
经 元 以 ５Ｘ１。 ／ 的 密 度 接 种 于 ９ ０ 个 孔 ６孔
４ ００ ５ ００河 南 中 医学 院 一 附 院
摘 要 目的 ： 究三 七 总 皂 苷 （ Ｎ ） 研 Ｐ Ｓ对
氧 糖 剥 夺 的皮 质 神 经元 损 伤 的保 护作 用 。 方 法 ： 用 原 代 培 养 的 大 鼠 大 脑 皮 层 神 经 采
胞 温孵 ２ ４小 时 后 Ｍ Ｔ 测得 的 Ｏ １ｒ Ｄ值 与对 照 组 比较无 明 显 差 异 。 Ｐ Ｓ对 氧 糖 剥 夺 后 神 经 细 胞 Ｓ Ｄ活 Ｎ Ｏ 性 的影 响 ： 外 培 养 的 大 鼠 皮 质 神 经 元 ， 体 经 过氧 糖 剥 夺 Ｏ Ｄ处 理 后 ， Ｏ 的 活 性 Ｇ ＳＤ 则 显 著 性 的 下 降 ， 对 照 组 相 比 Ｐ＜ 与 ０Ｏ 。 给 予 ２ 、０ ｇ Ｌ浓 度 的 Ｐ Ｓ增 加 ．１ ５５ ｍ ／ Ｎ 抗 氧 化 酶 的活 性 ， Ｏ Ｄ组 相 比 Ｐ＜ 与 Ｇ ０ ０ 。 而 各 浓 度 的 Ｐ Ｓ单 独 与 细 胞 温 孵 ．５ Ｎ ２ ４小 时 后 Ｍ Ｔ测 得 的 ０ １ ｒ Ｄ值 与对 照 组 比 较 无 明显 差 异 。
Ｃ Ｈ ｝ Ｅ Ｃ ｏ Ｍ Ｍ ＵＮ ｌ Ｄ ０ Ｃ Ｔ ＲＳ Ｎ ＳＥ ＴＹ ０
三 七 总 皂 苷 对 氧 糖 剥 夺 的 皮 质 神 经 元 损 伤 的 保 护 作 用
中， 放至正 常 Ｃ ： 养箱 中继 续培 养 ２ Ｏ 培 ４
吕继 红
的保护作用 。而各浓 度 的 Ｐ Ｓ单 独与细 Ｎ
Ｏ９ （ ４ ） ０
细胞 内 Ｓ Ｄ 和 ＭＤ 的 测 定 ： 验 结 Ｏ Ａ 实
束后 ， 按文献 的方法 ， 参照试剂盒说明 ， 超 声裂解 细 胞后 ， 心取 上 清液 测 定 各组 离
Ｓ Ｄ 和 Ｍ Ａ 的 含 量 。各 样 本 吸 光 度 值 Ｏ Ｄ 应 用 可 见 光 一紫 外 光 分 光 光 度 计 测 定 。 细 胞 蛋 白定 量 应 用 考 马 斯 亮 兰 标 准 定 量
件 下 分 离 ｌ～ ３天 Ｓ 大 脑 皮 层 置 于 含 ２ Ｄ ． ５／ ｇＬ胰 蛋 白酶 的 Ｄ —Ｈ ｎ ’ 液 中 ，７ ａｋ Ｓ ３ ℃ 消化 １ ５分 ， 入 含 ｌＯ ｌＬ 牛 血 清 的 加 Ｏ ｍ／ Ｄ Ｍ Ｆ ２培 养 液 中 止 胰 酶 的 作 用 ， ＭＥ ／ １ 移 液管 轻 轻 吹 打 为单 细 胞 悬 液 ， 整 细 胞 密 调 度 为（ １～２ ）×１ 个／ ｌ接 种 于 预 先 经 ０ ｍ， 多 聚赖 氨酸 覆 盖 的 ９ ６孔 板 中 。 接 种 的第 ５ ～７ 天 加 入 阿 糖 胞 苷 （ 浓 度 为 终 ｌＩ ｏ Ｌ 处 理 ２ ＯＬ ］ ） ． ／ ｍ ４小 时 以抑 制 胶 质 细 胞 的增 殖 。
超 氧 化 物 歧 化 酶 （ Ｏ ） 丙 二 醛 （ Ａ） ＳＤ 、 ＭＤ 及 考 马 斯 亮 蓝 法 蛋 白检 测 试 剂 盒 。
实 验 动 物 ： ３天 Ｓ １～ Ｄ大 鼠 。 大 鼠大 脑 皮 层 神 经 细 胞 培 养 ： 菌 条 无
亡 的作 用 。在 抗 凋 亡 基 因 中 ， ｃ 一 Ｂ ｌ ２家 族
ｌ０ ｌ Ｄ Ｏ溶 解 剂 ， 荡 使 结 晶物 充 Ｏ １ 的 ＭＳ ｘ 震 分 溶 解 后 ， 酶 标 仪 上 比色 ， 在 以不 含 细 胞 的 培 养 液 为 空 白组 调 零 ， 定 波 长 ５ Ｏ ｍ 测 ７ｈ
量 变 化 的影 响 ： 外 培养 的 大 鼠皮 质 神 经 体 元 ， 过 氧 糖 剥 夺 Ｏ Ｄ 处 理 后 ， Ａ 含 经 Ｇ ＭＤ 量 明显 升 高 ， 与对 照 组相 比 ， ０ Ｏ 。 给 Ｐ＜ ． １
的重要作用 已得 到公认 。它在 抑制 中枢 神经系统细胞 的死亡 中起重要作用 ， 在神
经 元 细 胞 受 到 外 界 刺 激 时 能 保 护 细 胞 免 于 凋 亡 。本 研 究 发 现 缺 血 再 灌 流 后 神 经
统 计 学 方 法 ： 有 描 述 性 数 据 用 所 ｍ ａ Ｓ Ｅ Ｍ （ ±Ｓ 表 示 ， 计 学 分 析 ｅｎ４ ． ． Ｘ － ） 统 应用 ｔ 验 。 检
Ｓ Ｄ 活性 下 降 ， Ａ 含 量 升 高。 Ｐ Ｓ２ 、 Ｏ ＭＤ Ｎ ５ ５ ｍｇＬ能 明 显 提 高 细 胞 的 存 活 率 ， Ｏ ０ ／ ＳＤ
处的 Ｏ Ｄ值 ， 分析细胞 的活性。各组取 平
均值 后 按 下式 计 算 细 胞 相 对 存 活 率 ： 胞 细
活 性 回 升 ， Ａ含 量 趋 向 正 常 ， ｃ 一 ＭＤ Ｂｌ ２蛋
理后 ， Ｏ 其 Ｄ值 明显 下 降 ， 与对 照 组相 比
Ｐ ＜００ 。 给 予 ２ 、０ ／ ．５ ５ ５ ｍｇＬ浓 度 的 Ｐ Ｓ Ｎ
细胞 氧糖 剥 夺 （ Ｇ 模 型 的建 立 ： Ｏ Ｄ）
参 照 文 献 方 法 并 改 进 。培 养 细 胞 采 用无糖无血清培养液 ， 于含 Ｃ Ｎ （ ： 置 Ｏ ： ５ ９） ５ 的恒 温 密 闭 容 器 内造 成 缺 氧 。 细 胞 缺 氧 １０分 种 后 ， 液 为 无 血 清 培 养 液 ２ 换
方法 。
Ｍ Ｔ 测得 的 Ｏ １Ｉ １ Ｄ值 与对照组 比较 无明显
差 异。
Ｐ Ｓ对 氧 糖 剥 夺 后 神 经 细 胞 Ｂ ｌ Ｎ ｅ 一２ 蛋 白表 达 的 影 响 ： 外 培 养 的大 鼠皮 质 神 体 经 元 ， 过 氧 糖 剥 夺 Ｏ Ｄ处 理 后 ， ｅ —ｘ 经 Ｇ Ｂｌ ｌ 的 蛋 白 表 达 受 抑 。给 予 ２ 、０ ／ ５ ５ ｍｇＬ浓 度 的 Ｐ Ｓ使 Ｏ Ｄ处 理 后 受 抑 制 的 Ｂ ｌ ｌ Ｎ Ｇ ｃ —ｘ
一
取蛋 白， 行浓 度测定 ， 调整 为相 同浓 进 并 度 ， １． ５ 的 聚 丙 酰 胺 凝 胶 上 电 泳 ４ 在 ２１％ ５ 分 种 后 ， 下凝 胶 ， 角 标 记 ， ４ 恒 压 取 切 在 ℃ １ Ｖ 电转 过 夜 后 ， 下 硝 酸 纤 维 膜 ， ４ 取 用 Ｔ Ｓ洗 ２次 ， ５ 脱 脂 奶 封 闭 ２小 时 ， Ｂ 用 ％ 加 入 一 抗 于 ４Ｃ振 荡 过 夜 ， Ｂ Ｔ洗 后 加 入 ￣ ＴＳ 二 抗 ， 温 振 荡 １小 时 ， 用 Ｔ Ｓ 室 再 Ｂ Ｔ洗 膜 以除 去 未 结 合 的 二 抗 ， 显 色 液 Ａ、 将 Ｂ在 用前混合 ， Ｎ 将 Ｃ膜 置 入 摇 床 ， 应 １份 ， 反
细胞 ， 不 同浓 度 的 Ｐ Ｓ预 处 理 后 ， 立 经 Ｎ 建
板 上 ， 养 ５天 后 ， 验 组 给 予 不 同 浓 度 培 实 的 Ｐ Ｓ 培养 ２ Ｎ ， ４小 时 后 按 上 述 方 法 进 行
氧糖 剥夺 （ Ｇ 模 型 ， Ｏ Ｄ） ２小 时后 复 氧 复
糖 ， 拟 再 灌 注 模 型 。通 过 Ｍ１ 模 Ｔ 较 神 ｒ比 经 元 的 存 活 情 况 ， 测 定超 氧化 物歧 化 酶 并
Ｐ Ｓ 氧糖 剥夺 后神 经 细胞 ＭＤ 含 Ｎ 对 Ａ
小时 。给药 组 在氧 糖 剥夺 处 理 前 ２ ４小
时 、 糖 剥 夺 处 理 过 程 中及 以后 ， 在 培 氧 均 养 液 中加 入 不 同 浓 度 的 Ｐ Ｓ Ｎ。 ＭＩ 检 测 ： 胞 活 力 检 测 ， 皮 质 神 ｒ１ Ｔ Ｉ 细 将
１ ８ ５ ５） ２ ３—２ ８ ９ ９． （ ：９ ９．
中 国社 区 医师 － 医学专业 ２ １ 年 第 ９期 （ ２ ００ 第１ 卷总 第 ２４ ） ７ ３期
（Ｏ 、 Ｓ Ｄ） 丙二 醛 （ Ａ） 活 性 变 化 ， 及 ＭＤ 的 以 Ｂ ｌ ２蛋 白表 达 的 变 化 。 结 果 ： Ｇ 作 ｅ一 Ｏ Ｄ