大鼠胰岛细胞原代培养
大鼠皮层神经元细胞原代培养 ppt课件
Hale Waihona Puke ppt课件11实验步骤
5 剪碎：
将大脑皮层转移到另一装有PBS的平皿中，用 手术剪将其剪成小块（1mm3），用PBS液洗 三次，转移至离心管中离心1000 rpm 5min 。
6 消化：
加入0.25%胰蛋白酶，放入37℃培养箱消化 20min,中间翻转振荡一次。使细胞分离。
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实验步骤
布局
器械
PBS 剪碎组织块
取脑，分离皮层神经 元
剥离血管及筋膜
PBS
冰盒
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酒精
PBS
断头
清洗血液
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实验步骤
3 断头取脑： 超净台内，断头取脑，置于盛有PBS的培养皿
内，洗涤3次，弃除表面残余血迹，迅速置于无 菌的生理盐水冰浴上。
4 剥离软脑膜： 剥离大脑皮层至预冷的PBS中，用两把无齿弯
培养基
材料
包被
剥膜
消化
低温操作
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影响因素
材料选择
胎鼠就要胎鼠，新 生鼠就要新生鼠， 不能混淆
★易于操作 ★有一些受体，在 培养的工作中失去 功能，会不能再生
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影响因素
培养基选择
不建议血清培养
1 血清刺激胶质细胞和杂细胞分裂，影响神经元产量； 2 抑制胶质生长，往往要加入阿糖孢苷。严重的毒性会影响许多灵敏实验； 3血清培养的细胞状态很不均一，从正常到凋亡都有，严重影响试验准确，
皮层神经元细胞原代培养
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☞ 主要内容 :
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实验原理
大鼠视网膜神经细胞的原代培养(译文)
大鼠视网膜神经细胞的原代培养摘要目的:在前人建立的方法上优化SD 大鼠视网膜神经细胞体外培养的技术和方法，为后续研究提供实验基础。
方法:使用胰酶消化法分离新生1 ～ 3d SD 大鼠视网膜神经细胞，以DMEM/F12 为培养基体外培养，免疫组织化学染色的方法进行鉴定。
结果:观察光镜下培养的细胞贴壁生长，部分细胞伸出突起，且有些突起相互连接。
免疫细胞化学染色显示，培养的细胞大多数抗神经元特异性烯醇化酶(NSE) 抗体反应阳性。
结论:视网膜神经细胞体外培养成功为进一步进行视网膜疾病的研究创造了条件。
关键词:细胞培养; 视网膜神经元; 胰蛋白酶消化法; 神经元特异性烯醇化酶引言一个世纪前，从青蛙身上剥离的神经管片段仍能在生理液中维持几天的活性，使得越来越多的神经纤维得到的实时观测以来，体外培养技术已经广泛的应用于生物技术领域。
【1】在没有了完整动物的复杂性，体外培养的方法可以大大提高对视网膜的基本属性和环境的适应性的了解。
在体外系统中，这个界定的实验条件可以很容易设定和维持。
这提供了一个稳定的辅助药理学和分子操纵的平衡，同时保持了完整的组织复杂表型特征。
在这里我们根据一些成功方法报告探讨一下大鼠视网膜神经细胞的原代培养技术。
【2-3】材料与方法动物：实验中使用的所有SD大鼠幼崽均是从青岛实验动物中心根据眼科和视觉研究中动物的ARVO声明，同时保留了出生后1-3SD大鼠的相对温度和湿度条件下获得的SD大鼠幼崽材料：DMEM/F12培养液和胎牛血清购自Gibco公司（美国），兔抗大鼠神经元特异性烯醇化酶（NSE）单克隆抗体，兔抗大鼠神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）多克隆抗体，羊抗兔IgG 和HRP-链霉亲和素购自中山Goldbridge生物技术有限公司（北京，中国）。
所有其他试剂均为Sigma公司（圣路易斯，密苏里州，美国）。
方法：预涂层的聚-D-赖氨酸组织培养皿为了使视网膜神经细胞，紧贴组织培养皿，聚-D-赖氨酸添加到被预先放置盖玻片的24孔板的孔中。
大鼠肝星状细胞原代培养实验具体步骤及方法
大鼠肝星状细胞原代培养实验具体步骤及方法将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。
步骤一、实验材料准备1. 动物：雄性SD大鼠(体重250-450 g)。
2. 试剂：戊巴比妥钠，小牛血清(或胎牛血清，则更好)，DMEM，酶消化液I、Ⅱ(以HBSS配)，18% Nycodenz(以GBSS配)，D-Hanks' 液(KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06g/L，NaCl 8.0 g/L，NaHCO3 0.35 g/L，Na2HPO4·7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 0.053 g/L，可加酚红0.02 g/L)，HBSS，台盼兰等。
3. 器械：手术器械，200目尼龙网，相差显微镜，荧光显微镜。
二、原代培养方法1. 大鼠腹腔麻醉后在超净台上剖腹，进行门静脉插管，以D-Hanks'液灌注，同时剪开下腔静脉，冲掉血液后，改灌以100 ml酶消化液I(0.05% IV型胶原酶)。
2. 待肝脏变软后，离体肝脏并剪碎，继续以酶消化液II(含20 U/ml DNase I的0.05% IV型胶原酶)消化15 min，尼龙网过滤后以450 g 离心5 min(4℃，下同)。
3. 以HBSS重悬沉淀至10 ml，再混以20 ml Nycodenz液，分置于离心管中，并分别覆以2-3 ml HBSS，1450 g离心16 min后取界面细胞。
4. 以HBSS重悬后再次离心收集细胞，以DMEM重悬后进行细胞计数，并判断存活率和产量，最后按照常规方法接种(105细胞/cm2)，次日换液，以后每2-3天换液一次。
三、传代方法弃去培液后以D-Hanks'液洗两次，加0.125%胰酶(原代最好加0.05% EDTA)消化，镜下观察细胞突起回缩(2-5 min左右)，以完全培液(DMEM+10% NBS)终止反应(若不用EDTA，可以不需离心)，充分吹打后以1:2-1:3接种，然后继续培养(5%CO2，37℃)。
大鼠心肌细胞的分离鉴定以及培养
大鼠心肌细胞的分离鉴定以及培养
大鼠心肌细胞是心肌细胞的主要来源之一，在心脏疾病的研究中具有非常重要的作用。
为了开展相关研究，需要对大鼠心肌细胞进行分离鉴定以及培养，以下是一份详细的操作
步骤。
1. 器材准备
（1）无菌试剂：试剂瓶/管、离心管、移液器、细胞培养基等。
（2）消毒器材：无菌吸管、离心机、高压灭菌器、悬浮液制备仪等。
（3）实验器材：显微镜、培养箱、细胞计数板、细胞离心机等。
2. 心肌细胞的分离
（1）准备新鲜的大鼠心脏组织。
（2）将心脏组织放入离心管中，加入PBS洗涤1-2次。
（3）将心脏组织切成小块，加入预先调配好的组织消化液（如DMEM/F12加入胰蛋白酶），37℃放入恒温水浴中消化2-3次。
（4）将消化的样本离心，去除上清液，加入预备的培养基，悬浮细胞。
（5）进行筛选，并将心肌细胞分离，最终得到心肌细胞。
（1）将分离好的心肌细胞放置在显微镜下观察其形态。
（2）进行免疫荧光染色，使用特定的心肌细胞抗体进行染色，观察细胞核及膜表达，判断其是否为心肌细胞。
（1）将鉴定好的心肌细胞放入预备好的细胞培养基中。
（2）放置于37℃恒温培养箱中，维持培养基液位。
（3）每2-3天更换一次新的培养基。
以上就是大鼠心肌细胞的分离鉴定以及培养的操作步骤，具体操作时应注意操作规范
和实验安全，保证实验结果的准确性和可靠性。
大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法
大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法将大鼠的肺成纤维细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的生长培养基培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。
一、实验材料准备1. 动物出生后1-4天的Wistar乳鼠1只。
2. 试剂PBS、培养液(Hyclone的低糖DMEM，含Hyclone的10%新生牛血清、100 U/ml 青链霉素、1%明胶PBS、0.25%胰酶(含EDTA，GIBCO)，碘酒和酒精绵球。
3. 器械眼科直剪2把、眼科弯剪2把、眼科直镊2把、眼科弯镊2把、玻璃平皿3套，25 cm2塑料培养瓶(Costar)。
二、具体操作1. 明胶包被培养瓶过夜(准备2-3个)，取出明胶，用2 ml培养液冲洗培养瓶一遍，置于超净台中。
2. 解剖取肺：将乳鼠在酒精中浸泡后取出，转移至超净台上的玻璃培养皿中，用碘酒消毒胸部皮肤，再用酒精棉球脱碘。
左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部，右手以眼科直剪剪开皮肤，充分撕拉开，再用酒精棉球消毒，继而以另一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋骨，然后在切口中间横剪胸骨。
用眼科镊取出肺，置于盛有PBS(含有200U/ml青链霉素)的玻璃平皿中，冲洗去血。
3. 用眼科剪将肺分成几个肺叶，用镊子去除周边的血凝块及纤维组织，用眼科剪剪去肺门处的支气管和血管，再用含有双抗的PBS冲洗1遍。
4. 用眼科弯剪将肺组织剪碎成1 mm3大小，加入含有双抗的PBS，将肺组织块吹打开，静置15 min后，更换新的PBS。
5. 用200 ul微量加样器(最好是超净台中专用的，临用时用酒精绵球好好擦拭枪柄)取200 ul加样枪头一个，剪去尖，在酒精灯上用火焰烧弯。
用枪头吸取组织块接种于培养瓶中，每瓶20-25块左右，每小块间距0.5 cm左右。
组织块放置好后，轻轻将培养瓶翻转，让瓶底朝上，向瓶内加入2 ml左右的培养液，盖好瓶盖，将培养瓶倾斜放置在温箱中，干贴壁2-4 h后，将培养瓶慢慢翻转平放，继续静置培养。
孜亚比提片(HZT)对大鼠胰岛细胞功能的影响
孜亚比提片(HZT)对大鼠胰岛细胞功能的影响发表时间：2011-08-29T11:11:44.513Z 来源：《中外健康文摘》2011年第19期供稿作者：张晓春周燕萍[导读] 降糖孜亚比提片能显著促进胰岛细胞生长和胰岛素分泌，并具有一定保护胰岛细胞功能的作用。
张晓春周燕萍（宜宾市第二人民医院药剂科四川宜宾 644000）【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）19-0031-03【摘要】目的通过胶原酶消化法对大鼠胰腺组织经过短时消化，以获得大量纯度高和功能良好的大鼠胰岛单层细胞，以此为材料研究了孜亚比提片对大鼠胰岛细胞生长和胰岛素释放的影响。
方法胰岛细胞分为正常对照组、不同浓度HZT组（20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml）、高糖组、高糖+不同浓度HZT组（20g/ml，40g/ml，80g/ml）、棕榈酸组、棕榈酸+HZT组（80g/ml）、油酸组、油酸+HZT组（80g/ml）。
将正常对照组，高糖组（33.3mmol/L），高糖+HZT组（80g/ml）；棕榈酸组(0.25mmol/L)，棕榈酸+HZT组（80g/ml），油酸组(0.25mmol/L)，油酸+HZT组（80g/ml）分别在37℃,5%CO2分别培养72h和36h，进行葡萄糖负荷试验，放射免疫法检测培养液中胰岛素水平。
结果高糖+HZT组（80g/ml），棕榈酸+HZT组（80g/ml）和油酸+HZT组（80g/ml）胰岛素分泌量分别显著高于高糖组，棕榈酸组和油酸组（P<0.01），但均低于正常对照组(P<0.01)。
结论降糖孜亚比提片能显著促进胰岛细胞生长和胰岛素分泌，并具有一定保护胰岛细胞功能的作用。
【关键词】胰岛胰岛素细胞培养脂肪酸葡萄糖本实验对新疆地方中药孜亚比提片模拟在高浓度葡萄糖和高浓度游离脂肪酸环境下对体外原代培养大鼠胰岛细胞分泌胰岛素作用，研究孜亚比提片对胰岛细胞功能的影响，从而为新型抗糖尿病药物研发进行初步探索。
原代大鼠肝细胞的分离和培养_蒋永生
中华中医药学刊原代大鼠肝细胞的分离和培养蒋永生1，程向东2，刘文洪1，项海1，姚立1（1．浙江中医药大学，浙江杭州310053；2．浙江省肿瘤医院，浙江杭州310022）摘要：目的:探讨原代大鼠肝细胞分离及培养的简易方法，建立稳定简便的大鼠原代肝细胞分离培养方法。
方法:采用改良原位两步循环灌流法及低速离心法分离原代大鼠肝细胞，常规DMEM :高糖培养基培养原代大鼠肝细胞，测定1周内生长情况，倒置显微镜及扫描电镜观察肝细胞形态变化。
结果:倒置显微镜下观察肝细胞在接种后3h 基本完成贴壁，贴壁的细胞呈卵圆形，24h 后胞体变大变平，随后细胞相互靠拢呈岛状或条索状连接，3d 后扫描电镜下细胞呈现良好形态。
结论:用改良原位两步循环灌注法及低速离心法成功分离并培养原代大鼠肝细胞，可操作性强，可在具备基本细胞培养条件的实验室推广。
关键词：大鼠;原代肝细胞;分离;培养中图分类号：R －332文献标志码：A 文章编号：1673－7717(2013)05－1111－02Isolation and Culture of Primary Rats HepatocytesJIANG Yongsheng 1，CHENG Xiangdong 2，LIU Wenhong 1，XIANG Hai 1，YAO Li 1（1．Zhejiang Chinese Medical University ，Hangzhou 310053，Zhejiang ，China ；2．Zhejiang Cancer Hospital ，Hangzhou 310022，Zhejiang ，China ）Abstract ：Objective ：To investigate a simple and feasible method for primary rats hepatocytes isolation and culture ，and to establish a stable and easy methods of isolation and culture of primary rats hepatocytes．Methods ：Hepatocytes were isolated by using a modified two －step in －situ －circulating perfusion method followed by low －speed centrifugation．The hepatocytes were cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medium with high level of glucose．The viabilities of cells were evaluated within one week．Cellular morphological changes were observed by using an inverted microscope and scanning electron microscope （SEM ）．Results ：The elementary adherence completion of the hepatic cells had been posted inoculation after 3h under inverted microscope ，the cells of adherence offerred ovate．The hepatocytes enlarged and flattened round ，attached to the surface of collagen －coated dishes 24h after seeding and then connected with surrounding cells ，forming islands or trabs．After 3days ，cells were well under the SEM．Conclusions ：Primary rats hepatocytes can be successfully i-solated and cultured using a modified two －step in －situ －circulating perfusion method ，which is highly feasible．This method is available to perform in labs with basic cell culture conditions．Key words ：rat ；hepatocytes ；isolation ；culture 收稿日期：2012－12－20基金项目：浙江省钱江人才计划资助项目（Q1770802006）；浙江省自然科学基金资助项目（Y2101290）作者简介：蒋永生（1987－），男，硕士研究生，研究方向：中药治疗心脑血管研究。
大鼠心肌细胞原代培养
实验二大鼠CM的体外分离、培养及鉴定1、材料与方法1.1 材料1.1.1实验动物新生3天清洁级Wistar大鼠乳鼠（中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心，动物许可证号：scxk2005-0001）。
1.1.2主要仪器与试剂 5％CO2恒温培养箱（model TC2323 CO2incubator）；倒置相差显微镜（XD-101 98010）；PH计（mettler toledo320-s）；立式自动电热压力蒸汽灭菌器（LDZX-40BI），上海申安医疗器械厂；SW-CJ-2FD型单人双面净化工作台；微量移液枪（法国Gilson）；血球记数板（上海市沪江医疗器材经营部）；HH-6数显恒温水浴锅；离心机（LDZ5-2）；75cm2培养瓶、50ml离心管（美国corning公司）；无菌手术器械；磁力搅拌器；电子天平板（BS1101S 德国）；一次性滤器（22μm, GILSON）；DMEM/F12培养基 (美国GIBCO)；特级胎牛血清（FBS， Hyclone）；青、链霉素（Hyclone）；D-Hank’s液（NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4、NaOH、NaHCO3，苯酚红,南京化学试剂厂）；心肌肌钙蛋白T(Santa cruz) ;FITC连接的兔抗山羊IgG(Santa cruz);Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶(Sigma)；Triton-X-100(AMRESCO);BrdU(solarbio)。
1.2方法于无菌操作下开胸取出心脏，仔细去除心脏相连大血管和心房组织（留心尖部），于4℃的D-Hank’S液中漂洗3～4次，以去除残存血液，眼科剪将心尖部组织剪成1 mm3碎块后，加入4 ml的0.0625%胰蛋白酶液，于37℃恒温水浴箱中消化3 min，然后弃上清。
于剩余沉淀中加入混合消化液5 ml（0.0625％胰蛋白酶+0.1％Ⅱ型胶原酶），置37℃水浴消化8～10 min，其间振荡2～3次，静置后将上清液移入离心管中，加含10％胎牛血清预冷的DMEM/F12培养液终止消化。
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大鼠戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,无菌取出胰腺,置于4℃Ｈａｎｋｓ液中,用眼科小剪刀将胰腺剪成1ｍｍ3大小的组织块,加入0.5ｇ·Ｌ-1胶原酶,37℃恒温水浴振荡消化15ｍｉｎ,将已消化至细颗粒状组织吸出,并用大量4℃Ｈａｎｋｓ液终止消化,余下未消化完全的组织加入少量37℃Ｈａｎｋｓ液,用粗口径吸管轻轻吹打,直至大部分组织被消化成细颗粒状,用大量4℃Ｈａｎｋｓ液终止消化。
混合前后两部分的消化产物,用Ｈａｎｋｓ液低速离心洗涤3次后,将组织置于含100Ｕ·ｍｌ-1青霉素,100ｍｇ·Ｌ-1链霉素,11.1ｍｍｏｌ·Ｌ-1葡萄糖,10ｍｍｏｌ·Ｌ-1Ｈｅｐｅｓ和7%的胎牛血清的完全ＲＰＭＩ1640培养液中,用150目(108μｍ)尼龙筛网过滤,以除去未被消化的组织和结缔组织。
将已分离好的胰岛细胞和细胞团,置于含上述培养液内的培养瓶内培养。
24ｈ后,吸出未贴壁的细胞悬液,低速离心以收集细胞,显微镜下计数后,以每孔一定数量胰岛细胞团接种于24孔细胞培养板内,继续培养48ｈ后用于实验。
我分离胰岛细胞后,用DTZ染色,发现溶液中含有许多小颗粒,放入温箱中也未发生变化,镜下观察没有看到文献中所说的红染细胞。
我是将100mg双硫腙粉末溶于10mlDMSO中，用滤纸过滤，用时用KRBB缓冲液稀释100倍。
胰岛细胞分离是将成年大鼠胰腺用胶原Ⅴ酶消化后，过150目网取滤过液，再过400目网取网上细胞，加入L-DMEM培养。
方法是我根据文献稍作改动后实施的。
胰岛细胞分离和染色对于我都是第一次做，请高手指点一下。
溶液中如果有紫黑色小颗粒，那就是DTZ，过滤除的不净。
没有红染的细胞就是没有胰岛啊。
还有，我总觉得150目太密了，很多胰岛都滤不过去吧
大鼠胰岛细胞原代培养
一周龄Wistar大鼠，断颈处死，于75%乙醇浸泡15分钟，无菌取出胰脏，于冰冷无菌D-Hanks液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等胰外组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks 液反复清洗8~10次，加入10倍体积无菌消化酶液[胰蛋白酶-胶原酶消化液：0.05g胰蛋白酶(Sigma)，0.025g Ⅴ型胶原酶(Sigma，663U/mg)，0.05g葡萄糖，溶于100 mL无Ca2+、Mg2+的0.01mol/LPBS （pH值为7.4）溶液，用0.22μm微孔滤膜滤菌]，38℃±1℃消化，消化过程中不断震荡，10分钟后吸出上面酶液弃去，用无菌D-Hanks液将组织块清洗2~3次，加入新鲜酶液继续消化，重复上述步骤。
此时组织块边缘模糊，再将组织块浸入消化酶液中，38℃±1℃消化10分钟，将消化酶液与组织块分开，组织块重新加入新鲜消化酶液进行消化；而原消化酶液1500rpm离心10分钟，取沉淀即为消化下的细胞，重新用无菌D-Hanks悬浮，离心，重复1~2次，再用培养基洗2~3次，用培养基悬浮即得细胞悬液；将消化过的组织块重复消化5~6次至组织块消化完全，重复以上操作，合并几次所得细胞悬液，计数，调整细胞浓度为2×105个细胞/mL，将细胞悬液接种于24孔塑料培养板中，每孔1mL，置于37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养。
由于成纤维细胞贴壁要比胰岛细胞迅速，接种15小时后，轻轻振荡培养板，将上面未贴壁的细胞接入新的培养板中，可除去部分成纤维细胞。
将新培养板中细胞培养48小时后，换新鲜配置的含有2.5ng/mL的碘乙酸的培养基培养5小时，可除去绝大部分成纤维细胞，而胰岛细胞不受伤害，换不含碘乙酸的培养基洗2次，并换不含碘乙酸的培养基在37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养，每隔3天换培养液，获得单层胰岛细胞，
胰岛细胞移植的研究进展
人类至今已有100多年用移植方法治疗糖尿病的历史，胰岛细胞移植治疗糖尿病存在两个障碍：组织来源不足和免疫排斥反应。
一．胰岛细胞的来源
1．同种的成人及胎儿胰岛成人胰岛一般取自新死亡的健康尸体，抗缺氧的能力较弱，且慢存在外分泌活性组织，死亡之后即迅速自溶，故应用较为困难。
而胎儿胰岛对低温缺氧的耐受能力较强、免疫原性弱、胰岛组织丰富、含有干细胞、移植后可保持正常的生长增殖能力，因此成为较为理想的供体组织。
2．异种胰岛猪的组织来源广泛，血糖调定点与人相似，猪胰岛素与人胰岛素排列极为接近，且能在新鲜的人血清组织中存活增生，猪胰岛成为最有可能的异种供体。
3．胰腺导管细胞胰腺导管细胞具有极强的扩增和分化能力，可在适宜的外部刺激下通过快速增殖丧失其导管细胞表现型，从而还原成多潜能细胞并进一步分化成为胰岛细胞。
4．干细胞根据来源分为胚胎干细胞和成体干细胞。
5．基因技术产生的具有胰岛素代谢特征的新型细胞运用基因从组技术和转基因技术，将胰岛素基因直接或间接转入靶细胞，从而构建具有胰岛素代谢特征的新型细胞用于胰岛细胞移植。
二．胰岛细胞体外增殖及其影响因素
对人胎胰岛细胞培养条件的研究显示：RPMI1640培养基，11.1mmol/l葡萄糖,增加6倍氨基酸,PH7.2,以人/胎血清代替小牛血清,与某些细胞共同培养,这些因素均有利于人胎胰岛组织的生长和B细胞功能的维护。
三．胰岛细胞移植技术
1．胰岛细胞的分离和纯化分为机械分离消化法和胶原酶消化法。
2．胰岛细胞的保存组织培养是胰岛细胞保存的有效方法。
胰岛在组织培养中至少可保存7 天，数周后仍能合成胰岛素，对葡萄糖刺激产生胰岛素分泌反应。
3．胰岛细胞移植的部位理想的移植部位应安全、血供丰富、植入细胞易于存活并发挥功能，可逃避免疫反应。
按移植部位将胰岛细胞移植分为原位移植和异位移植。
原位移植是基于胰岛素经门静脉进入肝脏这一生理基础来确定的，包括门静脉内、肝内、脾内、大网膜及腹腔内等部位的的移植。
异位移植则指皮下，肌肉内、睾丸内、胸腔内、肾包膜下及脑内等部位的移植。
目前多采用肝内门静脉注入的方法进行胰岛细胞移植。
4．胰岛的移植量一般认为胰岛的移植量至少要达到10—20%，才能维持正常血糖和糖基化血红蛋白水平。
5．胰岛细胞移植的适应征
①.胰岛素依赖型糖尿病(IDDM,I型)和严重的非胰岛素依赖型糖尿病：为防止慢性并发症的产生，有人提倡早期胰岛细胞移植
②上腹部脏器晚期恶性肿瘤如晚期胰腺癌\肝癌.
③.慢性胰腺炎为解决疼痛全或次切除胰腺需行自体胰岛移植。
6．胰岛细胞移植的原则
①从获得供体胰腺到胰岛细胞分离与纯化的冷缺血时间需控制在8小时以内，而胎儿离开母体4小时内应立即取出胎胰进行消化分离
②胰岛分离纯化后应立即移植
③门静脉内移植相对较佳，包括经肠系膜上静脉插管入门静脉、内窥镜门静脉直接注入
④遗址量应大于8000—11000IEQ/Kg
⑤早期免疫抑制剂首选T淋巴细胞抗体
⑥可多次，足量进行移植
四．免疫排斥反应的预防
1．减轻胰岛免疫原性制备高纯度的胰岛能够去处抗原提呈细胞，有效地降低免疫原性。
2．免疫隔离胰岛移植物免疫隔离技术利用人工装置将移植的胰岛和受体的免疫系统隔离开来，能组止受
体的淋巴细胞和抗体对胰岛组织的攻击，而不影响胰岛素和营养物质的自由出入。
3．抑制受体的免疫反应通过调节移植受体的免疫系统，从而达到胰岛细胞免疫耐受
五．胰岛细胞移植展望
随着胰岛细胞来源的扩大和免疫排斥反应的控制，胰岛细胞移植必将成为广大糖尿病患者理想的治疗方法。