紫外分光光度计标准曲线
紫外分光光度计标准曲线
一、引言
紫外分光光度计是一种常用的实验室仪器，广泛应用于生物、化学、药物等领域。为了保证其准确性和可靠性，必须建立标准曲线，以便进行质量控制和数据比对。本文将详细介绍紫外分光光度计标准曲线的建立方法及其应用。
二、仪器和试剂
仪器：紫外分光光度计
试剂：纯化水、乙醇、盐酸、标准蛋白
三、实验步骤
1.制备标准溶液
将标准蛋白溶解于盐酸中，稀释至一定浓度，用纯化水调节pH值。将溶液转移到紫外分光光度计比色皿中备用。
2.建立标准曲线
分别取10 ml盐酸、10 ml纯化水和10 ml标准蛋白溶液，加入比色皿
中，用紫外分光光度计测定其吸光度值。根据吸光度值绘制标准曲线。重复上述步骤，以确保数据准确性和可重复性。
3.样品测试
将待测试样品溶解在乙醇中，并按照建立的标准曲线测定其吸光度值。根据标准曲线和测试结果计算样品中目标物质的浓度。
四、结果与分析
通过以上实验操作，建立了目标物质的标准曲线，同时也测定了待测
试样品中目标物质的浓度。通过比较标准曲线和样品测定结果，可以
确定样品中目标物质的浓度，从而实现质量控制和数据比对。
五、结论
紫外分光光度计标准曲线的建立是实验室工作中重要的一步。通过采
用本文所述实验步骤，可以准确、快速地建立标准曲线，并用于定量
分析样品中目标物质的浓度。同时，需要注意实验过程中的各项细节，避免误差的产生，以提高实验结果的准确性和可靠性。
紫外可见分光光度计的曲线绘制
一、测定溶液中物质的含量 可见或紫外分光光度法都可用于测定溶液中物质的含量。测定标准溶液（浓度已知的溶液）和未知液（浓度待测定的溶液）的吸光度，进行比较，由于所用吸收池的厚度是一样的。也可以先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线，在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线，然后测定出未知液的吸光度，即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。 含量测定时所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长，这样做有两个好处： ⑴灵敏度大，物质在含量上的稍许变化将引起较大的吸光度差异； ⑵可以避免其它物质的干扰。 二、用紫外光谱鉴定化合物 使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线。方法是用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对每一种单色光的吸光度，然后以波长为横座标，以吸光度为纵座标绘制吸光度──波长曲线，此曲线即吸收光谱曲线。各种物质有它自己一定的吸收光谱曲线，因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。当一种未知物质的吸收光谱曲线和某一已知物质的吸收光谱曲线开关一样时，则很可能它们是同一物质。一定物质在不同浓度时，其吸收光谱曲线中，峰值的大小不同，但形状相似，即吸收高峰和低峰的波长是一定不变的。紫外线吸收是由不饱和的结构造成的，含有双键的化合物表现出吸收峰。紫外吸收光谱比较简单，同一种物质的紫外吸收光谱应完全一致，但具有相同吸收光谱的化合物其结构不一定相同。除了特殊情况外，单独依靠紫外吸收光谱决定一个未知物结构，必须与其它方法配合。紫外吸收光谱分析主要用于已知物质的定量分析和纯度分析。 选几个体积梯度，然后稀释成相同的体积，得到了不同浓度C的几个标准溶液样组，用紫外分光光度计分别测得相应的吸光度A1、A2、A3……，然后要以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制曲线。当然有时候根据实际需要，也会有小小的变动。 配制标准溶液，用紫外可见分光光度计测量，得到浓度与吸光度的曲线，并且利用线性拟合得到回归方程，直接利用Origin的线性拟合功能得到的方程往往截距不等于零，即方程的形式为y=A+Bx。那是否需要强制令A=0，再来进行拟合呢？如果y=A+Bx这样的形式可以，那么A需要多小才是可以接受的？ 答：如果用样品空白溶液做参比，一般可以设置强制过零点；如果用蒸馏水做参比，一般不能强制过零点。 做曲线时一是要带双空白并减去空白A0, 二是应加0回归。减去A0是希望消除试验方法固定偏倚对校准曲线的影响，当用校准曲线来估计未知样的浓度时，要考虑到试样的测量吸光度也会受到固定偏倚的影响，如果校准曲线和试样测定过程中出现的偏倚一样，偏倚是无需校正的，可有时两者的操作往往不是同时同批进行的，如由于时间或批次不同，固定偏倚有所变化，那么两者的吸光度就要做不同的校正。即在每批分析时带空白，并对相应的信号进行校正。试验证明加零回归的校准曲线与不加零回归校准曲线比较，两者的r和b值均无差异，但加零回归校准曲线截距a的绝对值明显变小，因此在作校准曲线的回归计算时必须加零回归，使回归线接近原点。 截距a对低浓度样品计算却影响甚大。尤其是当样品浓度接近空白浓时，用回归方程计算时会出现负值，这是因为校准曲线回归后截距a>空白信号值所致，
用紫外分光光度法测cod方法标准
用紫外分光光度法测cod方法标准 紫外分光光度法测COD（化学需氧量）是一种常用的分析方法，用来快速测定水样中有机物含量的指标。下面是相关的参考内容： 一、方法原理 COD是指水样中被氧化剂（如高锰酸钾）氧化后所需的化学 还原剂的量，反映了水样中有机物的含量。紫外分光光度法通过测定样品溶液在紫外光区域的吸光度变化来间接测定COD。 COD测定步骤如下： 1. 取一定量的水样，在酸性条件下，加入适量的氧化剂（如高锰酸钾溶液）； 2. 加热反应体系，使溶液中有机物与氧化剂快速反应； 3. 通过紫外分光光度计测定反应后溶液的吸光度，与标准曲线对照得出COD浓度。 二、仪器设备 1. 紫外分光光度计：用于测定反应溶液的吸光度变化。根据不同光源的波长范围选择紫外分光光度计。 2. 加热设备：用于加快反应体系中有机物与氧化剂的反应速度，常用的加热设备有恒温水浴器、加热板等。 三、试剂与标准
1. 水样：取要测定COD的水样，必须先进行处理，如滤液、 稀释、中和等处理。 2. 高锰酸钾：常用作氧化剂，用于将水样中的有机物氧化为二价锰离子。 3. 磷酸钾和硫酸：用于调节反应溶液的酸碱度，在酸性条件下有机物与氧化剂反应更容易。 4. 紫外分光光度计校准溶液：用于校准紫外分光光度计，确保测定结果的准确性。 四、操作步骤 1. 取一定量的处理后的水样，加入一定量的硫酸和磷酸钾，将溶液酸化至酸性条件下。 2. 加入适量的高锰酸钾溶液，使溶液中的高锰酸钾浓度控制在一定范围内。 3. 利用加热设备加热反应溶液，使有机物与氧化剂快速反应。 4. 反应结束后，将反应溶液冷却至室温。 5. 使用紫外分光光度计，在紫外光区域测定反应溶液的吸光度。 6. 通过标准曲线，将吸光度值转化为COD浓度。
紫外分光光度计工作原理
紫外分光光度计工作原理 紫外分光光度计（UV-Vis 分光光度计）是一种用于分析和检测物质吸收和传输性质的仪器。它主要应用于化学、生物、环境等领域，通常用于分析溶液、气体和固态样品中的吸收光谱。本文将从紫外分光光度计的工作原理、光学系统、样品处理及数据处理等方面进行全面介绍。 一、紫外分光光度计的工作原理 UV-Vis 分光光度计的工作原理基于比尔-朗伯定律。该定律规定了物质溶液对紫外和可见光的吸收现象，即物质浓度与光线透过溶液所受到的衰减之间存在着对数关系。根据比尔-朗伯定律，溶液中的吸光度（A）与物质浓度（C）、光程（l）以及摩尔吸光系数（ε）之间存在以下关系：A = εcl。 UV-Vis 分光光度计通过测量样品对入射光的吸收，进而确定样品中的物质浓度。其测量原理主要包括以下几个步骤： 1. 光源发射：紫外分光光度计通常采用氙灯或钨灯作为光源，发射宽波长的紫外至可见光光谱范围内的光线。 2. 光线选择：光线通过单色器进行过滤和分解，选择特定波长的光线照射到样品上。 3. 样品吸收：样品吸收特定波长的光线，吸收光强度与样品中的吸收物质浓度成正比。 4. 光线检测：使用光电二极管或光电倍增管检测透过样品的光线强度，从而测定样品对吸收光的强度。 5. 数据处理：根据比尔-朗伯定律，分析检测到的光强度与样品中吸收物质的浓度之间的关系，计算出样品的吸光度。 通过上述步骤，紫外分光光度计可以通过测定样品的吸光度来确定物质的浓度，并且可根据标准曲线或外标法来进行定量分析。 二、光学系统 紫外分光光度计的光学系统主要包括光源、单色器、样品室和光电检测器等部分。这些部分相互协作，完成对样品吸收光谱的测量。
紫外分光光度计
紫外分光光度计： 工作原理： 物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。 又因为许多物质在紫外-可见光区有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法对这些物质分别进行测定（定量分析和定性分析）。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。 利用物质的分子或离子对某一波长范围光的吸收作用，对物质进行定性、定量分析以及结构分析。紫外分光光度法 首先确定实验条件，并在此条件下测得标准物质的吸收峰以及其对应波长值（同时可获得该物质的最大吸收波长）；再在选定的波长范围内（或最大波长值处），分别以（不同浓度）标准溶液的吸光度和溶液浓度为横、纵坐标绘出化合物溶液的标准曲线得到其所对应的数学方程；接着在相同实验条件下配制待测溶液，测得待测溶液的吸光度，最后用已获得的标准曲线方程求出待测溶液中所需测定的化合物的含量。使用范围： 凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。分光光度法只适用于微量组分的定量分析(稀溶液，浓度在线性范围内，（c ＜0.01 mol/L)，浓溶液中光吸收定律将发生偏离，最适宜的吸光度测量范围为0.2-0.8之间（此时误差小）。波长范围： 可见-紫外分光光度计。其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm的可见光区。主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。 光源：在仪器的波长范围内提供足够的、稳定的连续的光。 汞灯：标准光源、最为精确，常用于校准作用。 氘灯、钨灯、氙灯 样品池：在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池也可用石英池。当溶液中含有染料（如考马斯亮兰）时，必须采用一次性的塑料杯，因为染料能让石英和玻璃着色，而且不易清洗干净。 应用： 1 检定物质——根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长虽ax和摩尔吸收系数是检定物质的常用物理参数。这在药物分析上就有着很广泛的应用。在国内外的药典中，已将众多的药物紫外吸收光谱的最大吸收波长和吸收系数载入其中，为药物分析提供了很好的手段。 2 与标准物及标准图谱对照——将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。 3 比较最大吸收波长吸收系数的一致性 4 纯度检验 5 推测化合物的分子结构 6 氢键强度的测定——实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。 7 络合物组成及稳定常数的测定 8 反应动力学研究 9 在有机分析中的应用 单点标定法：测量一个标准样品的吸光度与坐标零点建立工作曲线，测定未知样品浓度 多点标定法：测量已知浓度的一系列标准样品吸光度，建立工作曲线来测定未知浓度
紫外分光光度法标准曲线
紫外分光光度法标准曲线 紫外分光光度法是一种常用的分析化学方法，通过测量样品对紫外光的吸收来确定物质的浓度。在进行紫外分光光度法分析时，我们经常需要使用标准曲线来进行定量分析。标准曲线是通过一系列标准溶液的吸光度和浓度数据绘制而成，用于后续分析中未知样品浓度的测定。本文将介绍紫外分光光度法标准曲线的绘制方法和应用技巧。 首先，我们需要准备一系列不同浓度的标准溶液。这些标准溶液的浓度应当覆盖我们后续分析中未知样品可能的浓度范围。接下来，我们需要使用紫外分光光度计分别测量这些标准溶液的吸光度。在测量时，应当选择适当的波长，并确保仪器的灵敏度和稳定性。测量完成后，我们将吸光度和浓度数据记录下来，然后进行曲线的绘制。 绘制标准曲线时，通常将吸光度作为纵坐标，浓度作为横坐标。我们可以选择线性回归或多项式拟合等方法，来得到吸光度和浓度之间的数学关系。在选择拟合方法时，应当考虑实际数据的分布情况，以及拟合曲线的拟合度和预测能力。一般来说，线性回归适用于浓度较低范围，而多项式拟合则适用于浓度较高范围。 得到标准曲线后，我们就可以用它来测定未知样品的浓度了。首先，我们需要测量未知样品的吸光度，然后利用标准曲线的方程，反推出样品的浓度。在进行测定时，应当注意选择合适的稀释倍数，确保样品吸光度在标准曲线的线性范围内。此外，还应当注意仪器的校准和重复性检验，以确保测量结果的准确性和可靠性。 除了浓度测定，标准曲线还可以用于评价分析方法的灵敏度和线性范围。通过分析标准曲线的斜率和相关系数等参数，我们可以评估分析方法的定量能力和适用范围。这些信息对于方法的优化和改进具有重要的指导意义。 总之，紫外分光光度法标准曲线是定量分析中的重要工具，它不仅可以用于测定未知样品的浓度，还可以用于评价分析方法的性能。因此，在进行紫外分光光度
紫外分光光度法测定维生素c的含量
紫外分光光度法测定维生素c的含量紫外分光光度法是一种常用的定量分析方法，可以用于测定维生素C的含量。维生素C是一种具有还原性的物质，具有吸收紫外光的特性。在一定波长下，其吸光度与浓度呈线性关系，因此可以利用紫外分光光度法测定维生素C的含量。以下是测定维生素C含量的具体步骤： 一、实验准备 1.实验仪器：紫外分光光度计、100mL容量瓶、50mL移液管、30mL比色皿。 2.实验试剂：维生素C标准品、待测样品溶液、超纯水。 3.实验环境：室温、避光环境。 二、实验步骤 1.制作标准曲线：取6个100mL容量瓶，分别加入0mL、0.5mL、1.0mL、 2.0mL、4.0mL和8.0mL的维生素C标准品，用超纯水定容至100mL。在紫外 分光光度计上分别测量这6个容量瓶中溶液的吸光度，绘制吸光度与浓度之间的关系曲线，得到标准曲线。 2.测定待测样品：取30mL比色皿，加入待测样品溶液，用超纯水定容至 30mL。在紫外分光光度计上测量该溶液的吸光度。 3.数据处理：将待测样品溶液的吸光度代入标准曲线中，得出待测样品中维生 素C的含量。 三、实验结果与分析 1.结果记录：将待测样品溶液的吸光度代入标准曲线中，得到待测样品中维生 素C的含量。 2.结果分析：通过比较待测样品中维生素C的含量与标准品中维生素C的含 量，可以得出待测样品的纯度或浓度是否符合要求。如果待测样品中维生素C的含量高于或低于标准品中维生素C的含量，则说明待测样品的纯度或浓度存在问题。
四、实验结论 通过本次实验，我们成功地利用紫外分光光度法测定了维生素C的含量。实验结果表明，待测样品中维生素C的含量符合要求，证明了紫外分光光度法的可行性和准确性。该方法具有操作简便、快速、准确等优点，可以广泛应用于维生素C含量的测定。需要注意的是，实验过程中要保持避光环境，避免阳光直接照射导致维生素C分解。同时，实验操作过程中要注意卫生，避免样品污染导致测定结果不准确。
紫外分光光度计法测定果蔬中维生素C的含量
紫外分光光度计法 测定几种常见果蔬中维生素C的含量 摘要：利用维生素Ｃ对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，用紫外分光光度法测定５种常见果蔬中维生素Ｃ的含量。最大吸收波长为243nm，标准曲线方程为A=0.00537c，相关系数为R^2＝0.99539。9种果蔬中维生素Ｃ含量［ｍｇ·（１００ｇ）－１］分别为：青尖椒111.8、青104.2、韭菜82.5、小白菜78.9、西芹59.70、胡萝卜49.8、西兰花28、茄子26.4、山药14.9。该方法简单、快速，结果令人满意。 1.前言 维生素Ｃ又称抗坏血酸，是一种水溶性维生素。能预防牙龈出血及萎缩、提高人体免疫力，对坏血病、动脉硬化、贫血等有一定疗效。天然存在的抗坏血酸有L型和D型2种，后者无生物活性。维生素C 是呈无色无臭的片状晶体，易溶于水，不溶于有机溶剂。在酸性环境中稳定，遇空气中氧、热、光、碱性物质，特别是由氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时，可促进其氧化破坏。氧化酶一般在蔬菜中含量较多，故蔬菜储存过程中都有不同程度流失。但在某些果实中含有的生物类黄酮，能保护其稳定性。 维生素Ｃ的测定方法主要有紫外分光光度法、红外光谱法、2,6－二氯靛酚滴定法、高效液相色谱法、钼蓝比色法、原子吸收法、碘量法、电位滴定法、荧光光度法、毛细管电泳法、流动注射化学发光法[2-12]等。其中原子吸收法、高效液相色谱法和荧光光度法仪器相对昂贵；碘量法和电位滴定法操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响；紫外分光光度法是根据维生素Ｃ对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度之差，通过标准曲线方程，即可计算样品中维
紫外分光光度法测定未知物
紫外分光光度法测定未知物 1.仪器 1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个 1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个 1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支 1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支 2.试剂 2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。 2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。（其必为给出的五种物质之一） 3.实验操作 3.1比色皿配套性检查 石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。 3.2未知物的定性分析 将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。。。。 3.3未知物定量分析 根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。 推荐方法 3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于
水质石油类的测定紫外分光光度法
水质石油类的测定紫外分光光度法 水质石油类的测定是环境监测的重要内容之一。其中，紫外分光光度法是一种常用且有效的测定方法。本文将详细介绍水质中石油类的测定原理、仪器设备、操作步骤以及应用案例等方面。 一、紫外分光光度法原理 紫外分光光度法是通过测量分析物在紫外光区（190-400nm） 的吸收强度来确定其浓度的方法。在石油类的测定中，各种石油类物质都有明显的紫外吸收特性，通过测量吸光度可以推算出样品中石油类物质的浓度。 二、仪器设备 进行水质石油类的测定需要使用紫外分光光度计。一般来说，紫外分光光度计由光源、单色仪、试样室、检测器和数据显示器等部分组成。 三、操作步骤 1. 样品准备：将水样收集到干净的玻璃容器中，并加入适量的有机溶剂（如正庚烷）进行提取，使得石油类物质充分溶解。 2. 曲线绘制：根据已知不同浓度的石油类标准溶液，利用紫外分光光度计测量它们的吸光度，并绘制出吸光度与浓度之间的标准曲线。曲线的斜率可用于判断各样品中石油类物质的浓度。 3. 测量样品：将样品处理后的溶液放入紫外分光光度计的试样室中，测量其紫外吸光度。 4. 根据标准曲线计算浓度：利用标准曲线中的斜率，计算出待测样品中石油类物质的浓度。
四、应用案例 在工业废水处理过程中，石油类物质是一种常见的污染物。为了保护环境和人民的健康，需要对废水中的石油类物质进行测定。以下是一项应用案例： 某工厂废水中石油类的测定。首先，收集废水样品，并加入适量正庚烷进行提取。利用紫外分光光度计测量了不同浓度的石油类标准溶液的吸光度，并绘制了标准曲线。随后，测量了废水样品的吸光度，并根据标准曲线计算出石油类物质的浓度。结果显示，废水中石油类物质的浓度超过了环境标准。根据测定结果，该工厂对废水处理设施进行了改进，以减少石油类物质的排放。 五、总结 紫外分光光度法是一种常用的水质石油类测定方法。通过测量样品在紫外光区的吸光度，可以推算出样品中石油类物质的浓度。这种方法具有操作简便、准确度高等优点，广泛应用于环境监测和废水处理等领域。然而，在实际应用过程中，需要注意样品的准确提取和处理，以及光路的校准等因素，以确保测试结果的准确性和可靠性。最后，我们希望通过这篇文章的介绍，能够增加人们对水质石油类测定的了解，促进环境保护工作的开展。
紫外分光光度计测蛋白质含量
紫外分光光度法测定蛋白质含量 1仪器与试剂 TU-1 9 01紫外一可见分光光度计，比色管,吸量管 标准蛋白质溶液：5、00 mg、mL-l溶液 0、9% NaCl洛液，待测蛋白质溶液 2实验方法与原理 本实验采用紫外分光光度法测定蛋口质含量。紫外一可见吸收光谱法乂称紫外一可见分光光度法,它就是研究分子吸收19 0 nm〜750nm波长范围内得吸收光谱，就是以溶液中物质分子对光得选择性吸收为基础而建立起来得一类分析方法.紫外-可见吸收光谱得产生就是山于分子得外层价电子跃迁得结果，其吸收光谱为分子光谱，就是带光谱。 蛋口质中酪氨酸与色氨酸残基得苯环含有共轨双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光得性质，其最大吸收峰位于280 nm附近（不同得蛋白质吸收波长略有差别）•在最大吸收波长处，吸光度与蛋口质溶液得浓度得关系服从朗伯一比耳定律。该测定法具有简单灵敬快速高选择性,且稳定性好，干扰易消除不消耗样品，低浓度得 盐类不干扰测定等优点。 3实验步骤 3、1准备工作 3、3、1启动计•算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。 3、3、2在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光度测量,设置测量条件（测量波长等）。 3、3、3将空白放入测量池中，点击START扫描空白，点击ZERO校零。 3、3、4标准曲线得制作。 3、2测量工作 3、2、1吸收曲线得绘制 用吸量管吸取2mL5、00m g/mL标准蛋白质溶液于1 0 mL比色管中，用 0、9% NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1 cm石英比色皿，以0、9% N&C1溶液为参比，在190 nm〜40 0 nm区间，q全波段扫描。
紫外分光光度计测定环境水样中的总磷
紫外分光光度计测定环境水样中的 总磷 紫外分光光度计是一种常用的光学仪器，用于测量样品在紫外、可见光和近红外波段内的吸收光谱及定量分析。在环境监测领域，紫外分光光度计可以用于测定水样中的总磷含量，这是一项非常重要的工作。 总磷是指水体中所有无机磷和有机磷的总和，通常以 PO4-P的形式表示。总磷是评估水体富营养化程度和水质情况的重要指标之一。过多的总磷会导致水体富营养化，引起藻类大量繁殖，造成水体浑浊和水质下降，对水生态系统和人类健康都会产生不良影响。因此，对总磷的准确测定和控制至关重要。 紫外分光光度计是一种利用紫外线或可见光照射样品，测定其吸收光谱的仪器。不同物质在不同波长的光线下有不同的吸收特性，这种吸收特性可以用来定量测定物质的含量。在测定水样中的总磷时，通常采用分光光度法或反应比色法。 分光光度法是一种常用的测定总磷的方法。该方法利用测量样品和标准溶液在特定波长下的吸光度值之比计算出样品中总磷的含量。在实验室中，通常使用紫外分光光度计测定总磷的吸光度值。标准曲线是建立在一系列总磷浓度不同的标准样品吸光值与浓度之间的关系上。通过比较待测水样的吸光度值和标准曲线上的吸光度值，可以计算出水样中总磷的浓度。
在测定水样中的总磷时，还可以使用反应比色法。该方法是将水样中的磷酸盐与钼酸铵在酸性条件下反应生成磷酸钼酸铵，形成黄色的物质。然后通过比较样品和标准溶液在特定波长下的吸光度值之比计算出样品中总磷的含量。该方法也可以利用紫外分光光度计测定吸光值。 总之，紫外分光光度计是一种非常重要的光学仪器，能够用于测定水样中的总磷含量。根据不同的测定方法，可以选择适当的检测波长和吸光度范围。在实验前，需要对仪器进行校准和质量控制，确保测定结果的准确性。在日常的环境监测中，紫外分光光度计能够提供快速、准确和可靠的水质检测方法，对保护水资源和环境健康具有重要意义。
紫外分光光度计基本工作原理
紫外分光光度计基本工作原理： 紫外分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似，利用一定频率的紫外可见光照射被分析的有机物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长,吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析,而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析。 紫外分光光度计特点和主要用途： 紫外可见光谱仪涉及的波长范围是0.2-—0.8微米（对应波数50000—12500厘米—1），它在有机化学研究中得到广泛的应用。通常用作物质鉴定、纯度检查，有机分子结构的研究。在定量方面，可测定结构比较复杂的化合物和混合物中各组分的含量，也可以测定物质的离解常数,络合物的稳定常数,物质分子量鉴别和微量滴定中指示终点以及在高效液相色谱中作检测器等. 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的光吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。 1。基本原理 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度)成正比,即朗伯—比尔定律,这是吸收光谱法定量的理论依据，其关系式如式 3-1 : A = ECL 式（3-1） 式中 A 为吸收度； E 为吸收系数,即单位浓度、单位液层厚度的吸收度数值； C 为溶液浓度; L 为液层厚度. 紫外 - 可见分光光度法是根据物质分子对波长为 200~760nm 这一范围的电磁波的吸收特性所建立的光谱分析方法。《中国药典》 (2005 年版 ) 有 10 种药材用该法进行药材的有效性评价。其主要特点为：灵敏度高，可达 10 —4 g/ml ~10 -7 g/ml ；准确度高，相对误差为2 ％ ~5 ％。中药中有紫外吸收的成分或本身有颜色的成分，在一定的浓度范围内，其溶液的吸收度与浓度符合朗伯 - 比尔定律，均可用此法进行分析。本法适于大类成分的含量测定,如总黄酮、总蒽醌、总生物碱等.
四种紫外吸收法测蛋白质含量
四种紫外吸收法测蛋白质含量 1. 280nm的光吸收法 因蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm处具有最大吸收，且各种蛋白质的这三种氨基酸的含量差别不大，因此测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度值是最常用的紫外吸收法。 测定时，将待测蛋白质溶液倒入石英比色皿中，用配制蛋白质溶液的溶剂（水或缓冲液）作空白对照，在紫外分光度计上直接读取280nm的吸光度值a280。蛋白质浓度可控制在0.1～1.0mg/ml左右。通常用1cm光径的标准石英比色皿，盛有浓度为1mg/ml的蛋白质溶液时，a280约为1.0左右。由此可立即计算出蛋白质的大致浓度。 许多蛋白质在一定浓度和一定波长下的光吸收值（A1％1cm）有文献数据可查，根据此光吸收值可以较准确地计算蛋白质浓度。下式列出了蛋白质浓度与（A1％1cm）值（即蛋白质溶液浓度为1%，光径为1cm时的光吸收值）的关系。文献值A1％1cm，称为百分吸收系数或比吸收系数。 蛋白质浓度= (A280′10 )/ A1％1cm,280nm (mg/ml) (q 1%浓度 10mg/ml) 例：牛血清清蛋白： A1％1cm=6.3 (280nm) 溶菌酶： A1％1cm=22.8 (280nm) 若查不到待测蛋白质的A1％1cm值，则可选用一种与待测蛋白质的酪氨酸和色氨酸含量相近的蛋白质作为标准蛋白质，用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0mg/ml。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白（BSA）。 标准曲线的测定：取6支试管，按下表编号并加入试剂： 用第1管为空白对照，各管溶液混匀后在紫外分光光度计上测定
吸光度A280，以A280为纵座标，各管的蛋白质浓度或蛋白质量（mg）为横座标作图，标准曲线应为直线，利用此标准曲线，根据测出的未知样品的A280值，即可查出未知样品的蛋白质含量，也可以用2至6管A280值与相应的试管中的蛋白质浓度计算出该蛋白质的A1％1cm，280nm 2. 280nm和260nm的吸收差法 核酸对紫外光有很强的吸收，在280nm处的吸收比蛋白质强10倍（每克），但核酸在260nm处的吸收更强，其吸收高峰在260nm 附近。核酸260nm处的消光系数是280nm处的2倍，而蛋白质则相反，280nm紫外吸收值大于260nm的吸收值。通常： 纯蛋白质的光吸收比值：A280/A260 = 1.8 纯核酸的光吸收比值： A280/A260 = 0.5 含有核酸的蛋白质溶液，可分别测定其A280和A260，由此吸收差值，用下面的经验公式，即可算出蛋白质的浓度。 蛋白质浓度(mg/ml)=1.45×A280－0.74×A260 此经验公式是通过一系列已知不同浓度比例的蛋白质（酵母烯醇化酶）和核酸（酵母核酸）的混合液所测定的数据来建立的。 3. 215nm与225nm的吸收差法 蛋白质的稀溶液由于含量低而不能使用280nm的光吸收测定时，可用215nm与225nm吸收值之差，通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。 用已知浓度的标准蛋白质，配制成20～100 mg/ml的一系列5.0ml的蛋白质溶液，分别测定215nm和225nm的吸光度值，并计算出吸收差： 吸收差d= A215 －A225 以吸收差d为纵座标，蛋白质浓度为横座标，绘出标准曲线。再测出未知样品的吸收差，即可由标准曲线上查出未知样品的蛋白质浓度。
第十三章 可见和紫外分光光度法
第十三章 可见和紫外分光光度法 分光光度法(spectrophotometry)是一种现代仪器分析方法，它是利用物质的吸收光谱和光的吸收定律对物质进行定性或定量分析的。根据所用光源波长的不同，分光光度法又可分为：光源波长在380 nm ~ 780 nm 为可见分光光度法；10 nm ~ 380 nm 为紫外分光光度法(常用波长为200 nm ~ 380 nm)；780 nm ~ 3⨯105 nm 为红外分光光度法。 可见-紫外分光光度法通过测定物质对特定波长光的吸收，求出物质的含量或对物质进行定性。它的优点是选择性好，灵敏度高，一般物质可测到10-3 mol •L -1～10-6 mol •L -1；相对误差虽比滴定分析大，但对微量分析而言，绝对误差极小，符合分析准确度好的要求；仪器设备简单，操作便捷，应用广泛，在化工、环保、医药、卫生、生物等领域中常用来分析物质的组成和结构、测定化合物的含量及研究生化过程等。 本章主要学习可见-紫外分光光度法基本原理和方法。 第一节 分光光度法基本原理 ——吸收光谱和朗伯－比耳定律 一、吸收光谱的产生与吸收曲线 （一）原子光谱和分子光谱 当原子中的电子吸收或释放一定能量后将从一个能级(E 1)轨道跃迁到另一个能级(E 2)轨道上，吸收或释放的能量可以是具有一定波长的光。产生的光波波长λ 与跃迁前后两个能级的能量差有关 21 c hc hc hc h E E E λνν====∆- 式中h 为普朗克常量；c 为光速；ν 为频率。 不同能级间电子的跃迁产生的能量差不同，因此吸收或发射的光的波长也就
不同，这便形成了相应的原子的吸收或发射光谱。它们都是不连续的线状光谱。不同元素的原子其电子结构不同，能级结构不同，因而有其特征的光谱线。利用此类性质的分析法称为原子光谱法。 分子是由多个原子结合而成，分子及其内部粒子存在着三种与光的吸收或发射有关的运动形式：价电子在分子轨道上的运动；原子或原子团相对于连接它们的化学键的振动和分子绕着其重心转动。因此，一个分子的与光的吸收或发射有关的能量也包括三部分，即分子的价电子能级的能量E e 、分子振动能级的能量E v 及分子转动能级的能量E r 。在每一电子能级上有许多间距较小的振动能级，每一振动能级上又有许多更小的转动能级。分子中价电子能级间的能量差e E ∆约为1 eV ～ 20 eV ，这恰好是可见光和紫外光的能量。研究物质在可见、紫外光区的分子吸收光谱的分析方法称为可见-紫外分光光度法(visible and ultraviolet spectrophotometry, VIS -UV)。由于可见-紫外吸收光谱主要产生于价电子在电子能级间的跃迁，所以也将其称为电子光谱方法。振动能级间的能量差v E ∆约为0.05 eV ～1eV ，相当于红外光的能量。而转动能级间的能量差r E ∆约为10-4 eV ～0.05eV ，相当于远红外光及微波的能量。红外光谱是分子的振转光谱。分子光谱是带状光谱。 不同物质由于结构上的差异，所需跃迁能量不同，于是呈现出不同的吸收光谱。通过分子的吸收光谱可以研究分子结构并进行定性和定量分析。可见光谱常用于有色物质含量的测定。紫外光谱常用于具有紫外吸收基团的无色物质含量的测定。红外光谱常用于研究有机化合物的结 构。 （二）吸收光谱 将不同波长的单色光依次通过被分析的 物质溶液，分别测得不同波长下的吸收程度， 即吸光度 (absorbance) A 。然后以波长λ 为横 坐标，吸光度A 为纵坐标作图，可得一曲线， 即为吸收光谱(absorption spectrum)。如图13-1 所示KMnO 4的吸收光谱。吸收光谱中，吸光度最大处的波长为最大吸收波长，用λmax 表示（图13-1中λmax 为525nm ）。图 图13-1