紫外分光光度计测定的单位
紫外分光光度计测定的单位
紫外分光光度计是一种常用的实验室仪器，用于测量物质在紫外光区的吸收光谱和定量分析。其测定的单位涉及到一些物理量和计量单位。
1.吸光度（Absorbance）：吸光度是紫外分光光度计测
定的主要物理量之一，它表示物质对紫外光的吸收程度。吸光度的单位通常为“A”，其数值越大表示物质对紫外光的吸收越强。
2.波长（Wavelength）：紫外分光光度计测定的另一个
重要物理量是波长，它表示紫外光的波长范围。波长的单位通常为“nm”（纳米），其数值越小表示紫外光的波长越短。
3.透射率（Transmittance）：透射率是紫外分光光度
计测定的另一个物理量，它表示物质对紫外光的透过程度。
透射率的单位通常为“%”，其数值越大表示物质对紫外光的透过越强。
4.浓度（Concentration）：紫外分光光度计还可以通过
比较样品溶液和标准溶液的吸光度来测定样品溶液的浓度。
浓度的单位通常为“mol/L”（摩尔每升）或“g/L”（克每升）等，其数值越大表示样品溶液中目标物质的浓度越高。
5.吸光系数（Absorption Coefficient）：吸光系数是描
述物质吸光能力的一个常数，它与物质的性质、波长和温度
等因素有关。吸光系数的单位通常为“L/（g·cm）”，其数值越大表示物质在特定波长下的吸光能力越强。
6.摩尔吸光系数（Molar Absorption Coefficient）：
摩尔吸光系数是吸光系数的另一种表示方式，它表示每摩尔物质在特定波长下的吸光能力。摩尔吸光系数的单位通常为“L/(mol·cm)”，其数值越大表示每摩尔物质在特定波长下的吸光能力越强。
7.能量（Energy）：紫外分光光度计测定的另一个相关
物理量是能量，它表示紫外光的能量大小。能量的单位通常为“eV”（电子伏特），其数值越大表示紫外光的能量越强。
这些是紫外分光光度计测定中涉及的主要物理量和计量单位，它们在实验研究和定量分析中具有重要意义。需要注意的是，不同国家和地区的计量单位可能存在差异，因此在国际交流和合作中需进行单位转换和统一。
紫外分光光度计测定的单位
紫外分光光度计测定的单位 紫外分光光度计是一种常用的实验室仪器，用于测量物质在紫外光区的吸收光谱和定量分析。其测定的单位涉及到一些物理量和计量单位。 1.吸光度（Absorbance）：吸光度是紫外分光光度计测 定的主要物理量之一，它表示物质对紫外光的吸收程度。吸光度的单位通常为“A”，其数值越大表示物质对紫外光的吸收越强。 2.波长（Wavelength）：紫外分光光度计测定的另一个 重要物理量是波长，它表示紫外光的波长范围。波长的单位通常为“nm”（纳米），其数值越小表示紫外光的波长越短。 3.透射率（Transmittance）：透射率是紫外分光光度 计测定的另一个物理量，它表示物质对紫外光的透过程度。 透射率的单位通常为“%”，其数值越大表示物质对紫外光的透过越强。 4.浓度（Concentration）：紫外分光光度计还可以通过 比较样品溶液和标准溶液的吸光度来测定样品溶液的浓度。 浓度的单位通常为“mol/L”（摩尔每升）或“g/L”（克每升）等，其数值越大表示样品溶液中目标物质的浓度越高。 5.吸光系数（Absorption Coefficient）：吸光系数是描 述物质吸光能力的一个常数，它与物质的性质、波长和温度
等因素有关。吸光系数的单位通常为“L/（g·cm）”，其数值越大表示物质在特定波长下的吸光能力越强。 6.摩尔吸光系数（Molar Absorption Coefficient）： 摩尔吸光系数是吸光系数的另一种表示方式，它表示每摩尔物质在特定波长下的吸光能力。摩尔吸光系数的单位通常为“L/(mol·cm)”，其数值越大表示每摩尔物质在特定波长下的吸光能力越强。 7.能量（Energy）：紫外分光光度计测定的另一个相关 物理量是能量，它表示紫外光的能量大小。能量的单位通常为“eV”（电子伏特），其数值越大表示紫外光的能量越强。 这些是紫外分光光度计测定中涉及的主要物理量和计量单位，它们在实验研究和定量分析中具有重要意义。需要注意的是，不同国家和地区的计量单位可能存在差异，因此在国际交流和合作中需进行单位转换和统一。
紫外分光光度计
紫外分光光度计： 工作原理： 物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。 又因为许多物质在紫外-可见光区有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法对这些物质分别进行测定（定量分析和定性分析）。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。 利用物质的分子或离子对某一波长范围光的吸收作用，对物质进行定性、定量分析以及结构分析。紫外分光光度法 首先确定实验条件，并在此条件下测得标准物质的吸收峰以及其对应波长值（同时可获得该物质的最大吸收波长）；再在选定的波长范围内（或最大波长值处），分别以（不同浓度）标准溶液的吸光度和溶液浓度为横、纵坐标绘出化合物溶液的标准曲线得到其所对应的数学方程；接着在相同实验条件下配制待测溶液，测得待测溶液的吸光度，最后用已获得的标准曲线方程求出待测溶液中所需测定的化合物的含量。使用范围： 凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。分光光度法只适用于微量组分的定量分析(稀溶液，浓度在线性范围内，（c ＜0.01 mol/L)，浓溶液中光吸收定律将发生偏离，最适宜的吸光度测量范围为0.2-0.8之间（此时误差小）。波长范围： 可见-紫外分光光度计。其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm的可见光区。主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。 光源：在仪器的波长范围内提供足够的、稳定的连续的光。 汞灯：标准光源、最为精确，常用于校准作用。 氘灯、钨灯、氙灯 样品池：在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池也可用石英池。当溶液中含有染料（如考马斯亮兰）时，必须采用一次性的塑料杯，因为染料能让石英和玻璃着色，而且不易清洗干净。 应用： 1 检定物质——根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长虽ax和摩尔吸收系数是检定物质的常用物理参数。这在药物分析上就有着很广泛的应用。在国内外的药典中，已将众多的药物紫外吸收光谱的最大吸收波长和吸收系数载入其中，为药物分析提供了很好的手段。 2 与标准物及标准图谱对照——将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。 3 比较最大吸收波长吸收系数的一致性 4 纯度检验 5 推测化合物的分子结构 6 氢键强度的测定——实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。 7 络合物组成及稳定常数的测定 8 反应动力学研究 9 在有机分析中的应用 单点标定法：测量一个标准样品的吸光度与坐标零点建立工作曲线，测定未知样品浓度 多点标定法：测量已知浓度的一系列标准样品吸光度，建立工作曲线来测定未知浓度
紫外分光光度计操作方法
UV765紫外可见分光光度计操作方法 一、开机 开机前将样品室内的干燥剂取出，确认电源是否连接。打开仪器电源开关，等待仪器自检通过，自检过程中禁止打开样品室。 二、使用 自检结束后（7个项目均出现ok字样），仪器进入主菜单，屏幕显示如下七个功能项：1.光度测量；2.光谱测量；3.定量测量；4.动力学测量；5.数据处理；6.多波长测定；7.系统状态设定。仪器经30min热稳定后，就可以进入正常测量。 1.光度测量测定一定波长下的透光率（t％）或吸光度值(a) 在主菜单中选中[光度测量]项后，按[enter]键进入此功能块→按[goto wl]键进入波长设置用数字键输入你所需的波长值→按[enter]键确认→屏幕提示：请稍等……，仪器自动将波长移动到你所需测定的波长值→按[f1]键，选择测定透光率（t％）或吸光度值(a) →打开样品室盖，将空白溶液和待测样品分布放置比色皿架r位和s1位，关上样品室盖→按[f3]键，仪器自动将比色皿架r位置移动到光路中（即空白溶液），屏幕上显示cell=r →按[auto zero]键，仪器自动对空白溶液调零。屏幕提示：请稍等……→按[f2]键，比色皿架移动到s1位(待测样品),屏幕上显示cell=s1 →按[f4]键测量t％或a值测量完成后 1）打印输出数据，按[start/stop]键 2）返回主菜单，按[mode]键 2. 光谱测量波长扫描或光谱扫描，可直接测定一段波长范围内的光谱图和峰值谷值数据 在主菜单中选中[光谱测量]项后，按[enter]键进入此功能块→根据需要设定测量模式、扫描范围、记录范围、扫描速度、采样间隔、扫描次数、显示模式各参数。按[→]、[←]、[↑]、[↓]方向键到达设定行，进行参数的修改，并按[enter]键确认→打开样品室盖，将空白溶液和待测样品分布放置比色皿架r位和s1位，关上样品室盖→按[f3]键，仪器自动将比色皿架r位置移动到光路中（即空白溶液），屏幕上显示cell=r →按[f1]键进行基线校正。屏幕提示：基线校正……→按[f2]键，比色皿架移动到s1位(待测样品),屏幕上显示cell=s1 →按[start/stop]键开始光谱扫描→屏幕显示扫描图谱 扫描结束后 1）打印结果谱图，按[f4]键 2）直接读取峰谷值，按[f2]键，屏幕显示“请输入峰/谷检测灵敏度”（默认值为3），按
紫外分光光度法原理,使用范围,仪器的校正,测定方法和注意事项
紫外分光光度法原理，使用范围，仪器的校正，测定方法和注意事项 紫外分光光度法 一、原理 可见光、紫外线照射某些物质，主要是由于物质分子中价电子能级跃迁对辐射的吸收，而产生化合物的可见紫外吸收光谱。基于物质对光的选择性吸收的特性而建立分光光度法或称吸收光谱法的分析方法。它是以朗伯──比耳定律为基础。 1 朗伯—比耳定律 A = lg—- = ECL T 式中 A为吸收度； T为透光率； E为吸收系数，采用的表示方法是（E１％１ｃｍ），其物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml），液层厚度为1cm时的吸收度数值； C为100ml溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算），g； L为液层厚度，cm。 二、使用范围 凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。 三、仪器 可见-紫外分光光度计。其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm的可见光区。主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。 本仪器是根据相对测量的原理工作的，即先选定某一溶剂（或空气、试样）作为标准（空白或称参比）溶液，并认为它的透光率为100％（或吸收度为0），而被测的试样透光率（或吸收度）是相对于标准溶液而言，实际上就是由出射狭缝射出的单色光，分别通过被测试样和标准溶液，这两个光能量之比值，就是在一定波长下对于被测试样的透光率（或吸收度）。
本仪器可精密测定具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物、有色物质或在适当条件下能与某些试剂作用生成有色物的物质。 使用前应校正测定波长并按仪器说明书进行操作。 四、仪器的校正 1.波长的准确度试验 以仪器显示的波长数值与单色光的实际波长值之间误差表示，应在±1.0nm 范围内。 可用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正。 2.吸收度的准确度试验 3.杂散光的试验 4.波长重现性试验 5.分辨率试验 五、测定方法 1.对照品比较法 （1）按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的100±10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度后，按下式计算含量，即得。 （2）计算式 A 样×G 对 /稀释倍数×100×1 含量（%）= ————————————-- ×100% A 对×G 样 /稀释倍数×100×1 2.吸收系数法 （1）按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 （2）计算式
紫外分光光度计波长范围
紫外分光光度计波长范围 紫外分光光度计是一种用于测量紫外光谱的仪器，它可以测量物质在紫外波段的吸收和透过性。紫外分光光度计的波长范围通常在190nm至400nm之间。 紫外分光光度计通过测量样品对紫外光的吸收来确定样品的浓度、纯度和反应动力学等参数。紫外光谱是指紫外波段的电磁辐射，它的波长范围通常从10nm到400nm，其中紫外A波段的波长范围为320nm至400nm，紫外B波段的波长范围为280nm至320nm，紫外C 波段的波长范围为200nm至280nm。 紫外分光光度计的波长范围决定了它可以测量的样品种类。在紫外A波段，常用于测量有机化合物、药物、生物分子和有机染料等样品的吸收特性。紫外B波段则更适用于测量无机物质、有机物质和染料的吸收峰。而紫外C波段则可用于测量高度吸收的无机离子和气体。 紫外分光光度计的波长范围对于不同实验和应用有着不同的要求。在生物科学领域，常用于测量DNA和蛋白质等生物分子的吸收谱，以研究它们的结构和功能。而在药学和化学领域，紫外分光光度计被广泛应用于药物分析、质量控制和反应动力学等研究中。 紫外分光光度计的波长范围还决定了它的灵敏度和精度。在波长范围内，光度计的灵敏度通常在0.001至2.0 Abs之间，精度可达到
0.001 Abs。这使得紫外分光光度计能够准确测量样品的光吸收强度，并通过比较不同样品的吸收谱来确定它们的差异和相似性。 紫外分光光度计的波长范围也决定了它的应用领域。除了用于科学研究和实验室分析外，紫外分光光度计还广泛应用于医药、环境保护、食品安全和工业生产等领域。在医药领域，紫外分光光度计可以用于药物含量测定、药物质量控制和药物相容性研究等。在环境保护领域，紫外分光光度计可以用于水质、大气和土壤中有害物质的监测和分析。在食品安全领域，紫外分光光度计可以用于检测食品中的添加剂和残留物。在工业生产中，紫外分光光度计可以用于监测和控制生产过程中的关键参数。 紫外分光光度计的波长范围决定了它的应用领域和性能特点，它是一种非常重要的分析仪器，被广泛应用于科学研究、实验室分析和工业生产等领域。通过测量样品对紫外光的吸收，紫外分光光度计可以提供关于样品的吸收特性和浓度等信息，为科学研究和工业生产提供了重要的支持。
紫外分光光度计的结构
紫外分光光度计的结构 1. 光源系统：紫外分光光度计的光源系统通常采用氘灯和钨灯两种 光源，用来发射在紫外光区域的相对强度稳定的光信号。氘灯产生200- 400 nm的紫外线光谱，而钨灯产生220-800 nm的连续光谱。 2.样品室：样品室是样品放置和测量的地方。它通常由两个凹槽组成，一个用于放置样品，另一个用于作为参比样品或基线扫描。样品室内还配 有温度控制系统，以保持测量过程中样品的恒定温度。 3.光学系统：光学系统用来收集、分离和定量样品的吸收光信号，并 将其转换为电信号。它主要包括准直器、单色器和检测器。准直器用于将 光线聚焦到样品室中，确保较高的光强度。单色器用于分离样品吸收光信 号中的不同波长，以便进行定量测量。检测器通常采用光电二极管或光电 倍增管，将光信号转换为电信号。 4.检测器：检测器是紫外分光光度计用于测量吸收光强度的关键部件。光电二极管和光电倍增管是常用的检测器。它们能够将光信号转换为电信号，并输出到信号处理系统进行处理和记录。 5.信号处理系统：信号处理系统主要由放大器、滤波器和数据处理单 元组成。放大器对检测器输出的微弱电信号进行放大，使其达到适合测量 的范围。滤波器用于去除杂散光和其他干扰信号。数据处理单元将放大的 光信号转换为吸收值，并以显示器形式输出给操作员或存储到计算机中进 行后续分析和处理。 在实际操作中，紫外分光光度计通常还配备了外部控制器、计算机接 口等辅助设备，以实现远程控制、数据记录和分析等功能。此外，紫外分
光光度计还可以通过选择不同的光栅、滤光片或配件，扩展其应用范围，如测量光谱、动力学研究等。 总之，紫外分光光度计的结构主要由光源系统、样品室、光学系统、检测器和信号处理系统构成。这些部件相互配合，实现了对物质在紫外光区域的吸收特性进行精确测量的功能。
紫外分光光度计标准
紫外分光光度计标准 紫外分光光度计是一种常用的分析仪器，用于测定物质在紫外光区域的吸收光谱，广泛应用于化学、生物、医药等领域。为了保证测量结果的准确性和可比性，国际上制定了一系列的标准，下面就对其中的几个进行介绍。 1. ISO 17025标准 ISO 17025是国际标准化组织（ISO）制定的实验室能力认可标准，是全球实验室认证的最高标准。该标准要求实验室必须具备一定的技术能力和管理能力，能够提供可靠的测试结果。对于紫外分光光度计实验室而言，必须建立完善的质量管理体系，包括校准、验证、质量控制等方面的要求。 2. USP标准 USP是美国药典，是美国药品监督管理局（FDA）批准的药品质量标准。USP 对于紫外分光光度计的要求主要包括：仪器必须满足特定的光谱范围、分辨率、波长准确度等要求；必须进行校准和验证，确保测量结果的准确性和可靠性；必须建立质量控制程序，确保测试结果的稳定性和可重复性。 3. EP标准
EP是欧洲药典，是欧洲药品管理局（EMA）批准的药品质量标准。EP对于紫外分光光度计的要求与USP类似，但在一些细节方面有所不同。例如，EP要求仪器必须能够进行自动波长扫描，并能够记录扫描过程中的数据，以便后续分析和验证。 4. ASTM标准 ASTM是美国材料和试验协会，是全球最大的标准制定组织之一。ASTM对于紫外分光光度计的要求主要包括：仪器必须满足特定的光谱范围、分辨率、波长准确度等要求；必须进行校准和验证，确保测量结果的准确性和可靠性；必须建立质量控制程序，确保测试结果的稳定性和可重复性。 总之，紫外分光光度计的标准主要包括ISO 17025、USP、EP和ASTM等，这些标准都要求仪器必须具备一定的技术能力和管理能力，能够提供可靠的测试结果，从而保证测量结果的准确性和可比性。
DNA单位换算（1）
DNA单位换算（1） DNA单位换算 吴乃虎 (中国科学院遗传与发育生物研究所) 黄美娟 (北京大学生命科学学院 ) 1. 重量单位换算 1ｕg = 10-6g 1ng =10-9g 1pg =10-12g 1fg =10-15g 2. 换算系数(核酸碱基对与分子量的换算 ) 1Kb dsDNA (Na+)=6.6×105Da 1Kb ssDNA (Na+)=3.3×105Da 1Kb ssRNA (Na+)=3.4×105Da 脱氧核苷酸的平均分子量=324.5 Da(～330Da) 例：配制1pmol pBR322 DNA溶液 100ml需称取多少DNA？ 解：pBR322 DNA MW=4363×330×2=2.8×106 2.8×106×106ｕg 1pmol=----------------- ＝ 2.8ｕg(1L) 1012 2.8 100ml 1pmol pBR322 DNA ＝ ------ ＝ 0.28ｕg 10 3. DNA和RNA的定量(OD值换算) OD：optical density 光密度 一般是应用紫外分光光度计检测核酸的浓度，它适用于DNA及RNA浓度的测定。核酸(DNA、RNA)、蛋白质以及盐和小分子都有吸收紫外光的性质，其吸收高峰分别为：
核酸 260nm 波长处 蛋白质 280nm 波长处 盐、小分子 230nm 波长处 A260单位(核酸OD值)的换算： 1A260(1 OD)单位的双链DNA＝50ｕg/ml 1A260(1 0D)单位的单链DNA＝40ｕg/ml 1A260(1 OD)单位的单链RNA＝40ｕg/ml 1A260(1 OD)单位的寡核苷酸＝33ｕg/ml 例Ⅰ：取某DNA样品溶液5ｕl，加水至1000ｕl，在UV260nm 时，测得的OD值是0.2，问原溶液中的DNA浓度(ｕg/ｕl)是多少？ 解：0.2×50ｕg/ml＝10ｕg 这表示5ｕl样品溶液共有10ｕg DNA，所以该样品DNA浓度应是： 10ｕg/5ｕl＝2ｕg/ｕl 例Ⅱ..取某质粒DNA溶液3ｕl，加入到300ｕl TE中，测得的OD 值A260＝＝0.134，问其DNA浓度为多少？ 解：0.134×50ｕg×300 ------------------------------ ＝0.6ｕg/ｕl 3×1000 即此质粒DNA浓度为每微升0.6ｕg。 4. DNA溶液纯度测定 一般情况下，应用紫外分光光度计测定DNA溶液在A230、A260和A280下的吸收光值，便可以很好地确定DNA溶液的纯度，通常只测A260和A280两个吸收光度便可满足要求。因为纯的DNA溶液其A260/A280的比值约为1.8-1.9，而其A260/A230的比值则应大于 2.0，所以当： a. A260/A280＞1.8时，表明RNA污染严重 b. A260/A280＜1.6时，表明有明显的蛋白质或苯酚的污染 c A260/A280＜2.0时，表明溶液中有残存的核苷酸、氨基酸、酚、盐等小分子杂质
紫外分光光度法标准操作规程
标准操作规程 目的：建立一个紫外分光光度法标准操作规程，以便正确操作仪器，保护仪器。 范围:适用于所有紫外分光光度计. 责任者：QC主任，QC化验员 规程： 1. 简述：紫外分光光度计是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测定吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收,或杂质的吸收峰处化合物无吸收,则可用本法作杂质检查。物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此紫外吸收主要决定于分子的电子结构,故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区(200—400nm)或可见光区(400—850nm）产生吸收.通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190-900nm，因此又称紫外-可见分光光度计。 紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。朗伯-比尔（Lambert —Beer）定律为光的吸收定律,它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为: 式中A为吸收度； T为透光率 E为吸收系数 标准操作规程
C为溶液浓度 L为光路长度 如溶液的浓度（Ｃ）为1%（g/ml）,光路长度为（Ｌ)为1cm,相应的吸收系数为百分吸收系数，以表示。如溶液的浓度(Ｃ）为摩尔浓度（mol/L),光路长度为1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数,以ε表示。 2. 仪器：紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。 为了满足紫外—可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区,后者用于可见光区. 单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦透镜或反射镜等组成。色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成,对200—400nm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差,棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱.光栅系将反射或透射光经衍射而达到色散作用,故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为匀排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件. 检测器有光电管和光电倍增管二种。 紫外分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同可分为单光束和双光束分光光度计二类。单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸收度,操作比较费时，用于绘制吸收光谱图时很不方便，但适用于单波长的含量测定。双光束分光光度计借扇形镜交替切换光路使分成样品（S）和参比（R）两光束，并先后到达检测器,检测器信号经调制分离成两光路对应信号，信号的比值可直接用记录仪记录，双光束分光光度计操作简单，测量快速，自动化程度高，但作含量测定时,为求准确起见,仍宜用固定波长测量方式. 3。紫外分光光度计的检定 3。1。波长准确度 3.1.1. 波长准确度的允差范围双光束光栅型紫外-可见分光光度计波长准确度允许误差为±0。5nm。单光束棱镜型350nm处±0.7nm，500nm处±2。0nm，700nm处± 4.8nm。 标准操作规程 3。1.2. 波长准确度检定方法
紫外分光光度计工作原理
紫外分光光度计工作原理 紫外分光光度计是一种可以测量物质吸收、透过和反射光线强度 的仪器。它广泛应用于化学、生物、药物、环境科学等领域中，用于 分析和检测样品中的化学成分和浓度。 紫外分光光度计的工作原理是基于贝尔-朗伯定律和兰伯特-比尔 定律。贝尔-朗伯定律指出，在单色光通过物质时，其强度与物质的浓 度成正比，即光线通过物质时，其强度会发生变化。兰伯特-比尔定律 则指出，光通过物质时会发生吸收，其吸光度与物质的浓度和物质对 光的吸收能力有关。 紫外分光光度计主要由光源、选择波长装置、样品室、光学系统 和检测器等组成。 光源通常采用氘灯或钨灯。氘灯主要发射200～400 nm的紫外线，而钨灯则主要发射350～800 nm的可见光和近红外线。选择不同波长 的光源可以满足不同的分析需要。
选择波长装置通常由光栅或棱镜组成，其目的是根据需要选择特 定波长的光。光经过选择波长装置后，只有目标波长的光通过，其他 波长的光被滤除。 样品室是光路中放置样品的部分。样品室的设计使得光通过样品时，尽可能减少其发散和漫反射。样品室还可以调节样品的温度和气氛，以满足不同的实验要求。 光学系统是紫外分光光度计的核心部分，用于使光进入样品、经 过样品和离开样品。光学系统包括透镜、光栅、棱镜等光学元件，它 们将光导向样品室并使光线在样品中传播。在光经过样品的过程中， 样品对光的吸收或透过会导致光强度的减弱。光学系统还包括补偿系统，可以自动补偿光源的强度变化和背景噪声。 检测器是用于测量透过或反射的光强度的设备。常见的检测器有 光电二极管（Photodiode）和光电倍增管（Photomultiplier）等。光 电二极管是一种半导体器件，根据入射光电离中的电子来产生电流。 光电倍增管通过光电效应将光能转化为电能，并通过倍增器放大电流。
紫外分光光度法
紫外分光光度法 1简述 紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长X围内光的吸收 度，对该物质进行定性和定量分析的方法。本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。 定量分析通常选择物质的最大吸收波长测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。 物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物分子结构中如含有共腕体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区(200〜400nm)或可见光区(400〜850nm)产生吸收。通常使用的紫外分光光度计的工作波长X围为190〜900nm,因此又称紫外一 可见分光光度计。 紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为： 1- Alog-ECL 式中A为吸收度； T为透光率； E为吸收系数； C为溶液浓度； L为光路长路。 如溶液的浓度(C)为1%(g/ml),光路长度(L)为1cm,相应的吸收系数为百分吸收系数，以E^^m 表示。如溶液浓度(C)为摩尔浓度(mol/L),光路长度为1cm时,则相应有吸收系数摩尔吸收系数，以表示。 2仪器 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处
理系统等部分组成。 为了满足紫外-可见光区全波长X围的测定，仪器备有二种光源，即瓶灯和碘鸨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。 单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦透镜或反射镜等组成。色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200〜400nm波 长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。光栅系将反射或透射光经衍射而达到色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为匀排光谱，双光束仪器多用光栅为色元件。 检测器有光电管和光电倍增管二种。 紫外分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同可分为单光束和双光束分光光度计二类。单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸收度，操作比较费时，用于绘制制吸收光谱图时很不方便，但适用于单波长的含量测定。双光束分光光度计藉扇形镜交替切换光路使分成样品（S）和参 比（R）两光束，并先后到达检测器，检测器信号经调制分离成两光路对应信号，信号的比值可直接用记录仪记录，双光束分光光 度计操作简单，测量快速，自动化程度高，但作含量测定时，为求准确起见，仍宜用固定波长测量方式。 3紫外分光光度计的检定 3.1波长准确度 3.1.1波长准确度的允差X围双光束光栅型紫外-可见分光光度计波长准确度允许误差为0.5nm。单光束棱镜型350nm处0.7nm,500nm处2.0nm,700nm处 4.8nm。 3.2波长准确度检定方法 3.2.1用低压汞灯检定关闭仪器光源，将汞灯（用笔式汞灯最方便）直接对准进光狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，采用波长扫描方式，抛 描速度慢”（如15nm/min）、响应快”、最小狭缝宽度（如0.1nm）、量程0〜100%,在200〜800nmX围内单方向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值（若仪器无峰检测”功能，必要时可对指定波长进行单峰”扫描）。 单光束仪器以751G型为例，可将选择开关放在0.1位置，透光率读数放在100（或选择开关放在1,透光率放在10）,关小狭缝，打开光闸门，缓缓转动波长盘，寻找汞灯546.07nm峰出现的位置，若与波长读数不符，应调节仪器左侧准直镜的波长调整螺丝，如
紫外分光光度计 控温-概述说明以及解释
紫外分光光度计控温-概述说明以及解释 1.引言 1.1 概述 紫外分光光度计是一种广泛应用于化学、生物、环境等领域的仪器，用于测量样品在紫外光谱区的吸光度。控温是指在实验过程中通过控制温度的方式来确保实验条件的稳定性和可重复性。控温对于紫外分光光度计的应用具有重要意义，可以减小温度变化对实验结果的影响，提高实验数据的准确性和可靠性。在本文中，我们将详细探讨控温技术在紫外分光光度计中的作用和意义，以及未来控温技术的发展前景和研究方向。 1.2 文章结构 文章结构部分主要是对整篇文章的内容进行概述和提纲，帮助读者更好地理解全文的内容和结构。在本文中，文章结构部分的内容可以包括以下几个方面： 1. 引言部分： - 简要介绍紫外分光光度计和控温技术的基本概念 - 概述本文的研究目的和意义 2. 正文部分： - 分析和阐述紫外分光光度计的原理和工作原理 - 探讨控温技术在实验中的影响和作用
- 强调控温技术在实验中的重要性和必要性 3. 结论部分： - 总结紫外分光光度计控温的意义和实验效果 - 探讨控温技术在该领域的发展前景和应用前景 - 提出未来研究方向和展望 通过上述内容，读者可以清晰地了解全文的内容架构，帮助他们更好地理解和阅读整篇文章。 1.3 目的 本文旨在探讨紫外分光光度计控温技术的重要性和影响，深入分析控温对实验结果的影响以及控温技术在化学实验中的意义。通过研究紫外分光光度计的原理和控温技术的应用，旨在为实验室工作者和科研人员提供更加全面的技术指导和实验设计思路，推动实验数据的准确性和可靠性。同时，本文还将探讨控温技术的发展前景和未来研究方向，为相关领域的专家和学者提供一定的参考和启发。希望通过本文的探讨，能够增进对控温技术的了解，推动其在科研领域的应用和发展。 2.正文 2.1 紫外分光光度计的原理
DNA浓度的检测
可以。DNA的碱基在260nm处有吸收。用紫外分光光度计测260nm处DNA 分子的OD值，就能通过朗伯-比尔定律OD=εlc换算出浓度。式子里l是吸收光路的长度；c是浓度，单位一般用μg/ml；ε是吸光系数,双链DNA一般取0.02ml/（μg·cm)，单链DNA因为增色效应,ε要大一些，取0.05ml/(μg·cm)。 如果知道一个DNA片段的碱基数，还可以换算出DNA片段的物质的量浓度. 取1μDNA，用ddH2O水稀释到1ml，以1ml ddH2O为对照，紫外分光光度计测定OD260，OD280,OD260/OD280(都在1。8左右之间，说明DNA样品纯度较高)，concentration。 另，基因组DNA1％的琼脂糖凝胶电泳检测均呈现完整清晰条带没有拖尾,说明DNA 样品的完整性好，也可通过DNA marker 推算出DNA浓度。 目的：了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理，掌握测定方法. 原理：核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm，在波长260nm 时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链 寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值 （OD260/OD280)，估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1。8, RNA 为2。0.若比值高于1。8说明DNA样品中的RNA尚未除 尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。紫外分光光度法只能用于测定浓度 大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。 试剂与仪器：提取的质粒DNA，紫外分光光度仪. 操作步骤: 1）分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。
紫外分光光度法计算
第20章 吸光光度法 思 考 题 1. 什么叫单色光？复色光？哪一种光适用于朗伯－比耳定律？ 答：仅具有单一波长的光叫单色光。由不同波长的光所组成光称为复合光。朗伯--比耳定律应适用于单色光。 2. 什么叫互补色？与物质的颜色有何关系？ 答：如果两种适当的单色光按一定的强度比例混合后形成白光，这两种光称为互补色光。当混合光照射物质分子时，分子选择性地吸收一定波长的光，而其它波长的光则透过，物质呈现透过光的颜色，透过光与吸收光就是互补色光。 3. 何谓透光率和吸光度？ 两者有何关系？ 答：透光率是指透射光强和入射光强之比，用T 表示 T = t I I 吸光度是吸光物质对入射光的吸收程度，用A 表示，A εbc =，其两者的关系 lg =-A T 4. 朗伯-比耳定律的物理意义是什么？ 什么叫吸收曲线？ 什么叫标准曲线？ 答：朗伯--比耳定律是吸光光度法定量分析的理论依据，即吸光物质溶液对光的吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的定量关系。数学表达式为 lg A T εbc =-= 吸收曲线是描述某一吸光物质对不同波长光的吸收能力的曲线，即在不同波长处测得吸光度，波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图即可得到吸收曲线。 标准曲线是描述在一定波长下，某一吸光物质不同浓度的溶液的吸光能力的曲线，吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作图即可得到。 5. 何谓摩尔吸光系数？质量吸光系数？两者有何关系？ 答：吸光系数是吸光物质吸光能力的量度。摩尔吸光系数是指浓度为1.0 mol·L ，液层度为1cm 时，吸光物质的溶液在某一波长下的吸光度。用ε表示，其单位 11cm mol L --⋅⋅。 质量吸光系数是吸光物质的浓度为1g 1L -⋅时的吸光度，用a 表示。其单位 11cm g L --⋅⋅ 两者的关系为 εM a =⨯ M 为被测物的摩尔质量。 6. 分光光度法的误差来源有哪些？ 答：误差来源主要有两方面，一是所用仪器提供的单色光不纯，因为单色光不纯时，朗伯—比耳定律中吸光度和浓度之间的关系偏离线性；二是吸光物质本身的化学反应，其结果同样引起朗伯—比