粗蔗糖中的葡聚糖化学分析方法
粗蔗糖中的葡聚糖
糖及糖产品
Roberts铜测定法
A原理
所有高分子量〔大于10，000道尔顿〕物质经80%的乙醇沉淀与糖分离。沉淀物经过滤，洗涤后重新溶解于水中。将碱性Cu〔Ⅱ〕试剂加入到此液中可从粗蔗糖中的其它高分子量物质中选择性地沉淀出葡聚糖。滤出该沉淀，其中的葡聚糖用比色法进行测定，其原理是酚-
H2SO4试剂将葡聚糖络合物分解为单体葡萄糖分子，并发生显色反应，其强度正比于样品中葡聚糖的总量。样品及反应混合物应保持不受其它糖分，含碳水化合物成分杂质及对酚-H2SO4试剂有显色反应成分的污染。
B仪器
B.a比色计或分光光度计
在485nm测吸光度值A或透光率T。
B.b玻璃砂漏斗
粗号，孔径号C，15ml。
B.c奈氏管
35ml，或平底试管，短到能置于抽滤瓶中。
C试剂
无特殊声明时使用试剂级化学试剂。水为蒸馏水或去离子水。
C.a无水乙醇
使用无水乙醇，不要使用95%乙醇。
C.b80%乙醇
80ml无水乙醇中加20ml水。
C.c助滤剂
分析级，经酸洗处理过。
C.dNaOH试剂溶液
2.5N的NaOH，Na2SO4饱和。将100gNaOH溶解于水中，并稀释至1L。加无水或含结晶水的Na2SO4到有一些结晶不溶解为止。用非玻璃材料的塞子塞住后保存于试剂瓶中。试剂溶液可保存1个月。
C.eCu贮备液
将3.0gCuSO4·5H2O溶解于50ml的水中。将30.0g柠檬酸钠溶解于50ml水中。将这两种溶液混合后用水稀释至1L。溶液可保存2周。
C.fCu试剂溶液
用50ml水稀释50ml铜贮备液。将12.5g无水Na2SO4溶解于此液中。试剂应在使用的当天配制，不能保存。
C.g洗涤液
向50ml水中加入10mlCu试剂溶液及10ml2.5N的NaOH试剂溶液。
C.h5%的酚溶液
将5g纯的苯酚溶解于水中，并稀释到100ml。溶液可保存2周。
C.i葡聚糖
分子量范围不限。
C.j2NH2SO4溶液
将98g硫酸溶于水中，并稀释到1L。溶液可保存1个月。
D标准曲线的制做
对用于做标准曲线的葡聚糖应测其水分的含量，并加以校正。在
称量瓶中称量500mg标准葡聚糖，并于105℃下干燥4h。在无水CaCl2保干器中冷却。称量并按下式计算水分的含量：$$水分%＝[〔原样品
重量－干样品重量〕/原样品重量]×100$$称量500mg葡聚糖〔校正水
分后的重量〕，将其溶解于水中，再稀释至500ml。不要使用预先干燥的葡聚糖，因为它不易溶解。葡聚糖溶液的浓度为1mg/ml。对每一条
标准曲线的测定应新配溶液。$$将100ml1.0mg葡聚糖/ml的标准溶液
稀释到1L(0.1mg葡聚糖/ml)，取该液10，20，30，40，50，60，70，80，90和100ml，分别稀释到100ml来制做标准曲线。每个溶液中葡
聚糖的含量分别为0.01,0.02,0.03,0.04,0.05,0.06,0.07,0.08,0.09
和0.1mg/ml。$$以吸光度A或透光率T为纵坐标，葡聚糖的浓度(mg/ml)为横坐标做标准曲线。
E酚-H2SO4试验
向10支20×150mm的试管中分别加2.0ml上述10种浓度的葡聚糖标准溶液。向第11个管中加2ml水作为空白。每个管中加1ml5%的酚溶液。轻缓地摇动试管使酚与糖溶液混匀。$$向每支管中加10ml浓H2SO4，最好使用塑料的自动取滤器。迅速放入酸以保证溶液能充分混合。不要让取液器接触液面，或让酸处于溶液的表面。在一个漩涡式混合器上使溶液充分混匀。$$将一排试管放入沸水浴中2min，然后冷却30min。$$以空白做参比在比色计或分光光度计上于485nm处读吸光度A或透光率T〔最好读A〕。将空白的A值调到零，然后读样品的A 值，空白和试样应使用相同比色池或相匹配的池子。平行测2次计算平均值。$$为了保证测定的精确度，A值应在0.1－0.6(T>25%)之间。若A大于0.6，则应稀释后再测定。该步骤对做标准曲线时不必要，但对糖样品可能是需要的。为了制备稀溶液，从上述取2.0ml进行酚-
H2SO4试验的溶液〔样品糖测定最后是25ml〕中，移取5ml到25ml容量瓶中，用水稀释至25ml。在酚-H2SO4试验中取2ml该稀释液。在最终计算葡聚糖的ppm数时应考虑一个稀释系数5。
F测定
准确称量40.0g糖到烧杯中，用少量的水溶解后定量转移至100ml 容量瓶，并稀释至刻度。用定性滤纸经漏斗过滤大于等于50ml的溶液以除去粗的悬浮物。$$移取10ml滤液到100ml的烧杯中，加0.3－
0.4g分析级助滤剂，搅拌；加40ml无水乙醇再搅拌。静置5min使形
成沉淀。用玻璃砂漏斗和真空抽滤器滤出沉淀。$$用80%的乙醇洗涤沉淀5次，每次用乙醇充满漏斗，让乙醇通过沉淀吸下去。不要使沉淀
吸干，也不要使乙醇溢出漏斗。这一步骤对于消除仍吸附在沉淀上的
糖对酚-H2SO4试验的干扰至关重要。$$最后一次加的乙醇吸干，然后
将沉淀及助滤剂定量地转移至25ml容量瓶。使用尽可能小的量的水转移。首先，置一个50或60mm的长颈漏斗于空的容量瓶上，将有沉淀
的玻璃砂漏斗倒置于漏斗之上，向玻璃砂漏斗的颈中加水，用空气软
管将沉淀及助滤剂吹入长颈漏斗，用洗瓶将残留物向长颈漏斗中洗两次。将沉淀用刮勺弄散后洗入25ml容量瓶，再用水调至刻度。$$将带
槽纹的Whatman42号，110mm滤纸放入一个60或80mm的漏斗，过滤上述溶液。收集10ml以上的滤液用于分析。$$移取10ml滤液于
20×100mm的玻璃或塑料试管中，加2ml2.5N的NaOH试剂溶液，2mlCu 试剂溶液及0.2g分析级助滤剂。然后将试管〔排在一排〕放入沸水浴
中5min以便将Cu-葡聚糖络合物沉淀于助滤剂上。冷却20min。$$用
玻璃砂漏斗〔粗孔径，5ml〕过滤含络合物沉淀。用洗液淋洗试管两次，每次10ml，洗完的溶液加到玻璃砂漏斗中。弃去滤液。$$将带有沉淀
的玻璃砂漏斗安放在装有短萘氏管(35ml)〔或平底容器〕的真空瓶上。将玻璃砂漏斗的颈伸入到奈氏管中。向玻璃砂漏斗中的沉淀上加2ml2N 的H2SO4溶液；打开抽气系统，将酸液抽过沉淀，重复一次上面的步骤，然后用2ml水淋洗沉淀。$$将含可溶性葡聚糖的滤液定量转移至
25ml容量瓶，并用水稀释至刻度。$$移取2ml上述溶液到20×150mm
的试管中，按酚-H2SO4试验步骤进行实验。
G计算
由标准曲线读出葡聚糖浓度，mg/ml。$$样品中葡聚糖(ppm)＝[〔由标准曲线得葡聚糖浓度，mg/ml〕×〔Cu-葡聚糖络合物溶液最终
体积ml数〕×〔醇沉淀溶液的ml数〕×10^5^]/[〔用于Cu沉淀溶液
的ml数〕×〔用于醇沉淀的溶液的ml数〕×〔稀释到100ml的固体
样品的重量〕]。$$若A＝稀释到100ml的固体样品重量(g)；B＝用于
醇沉淀溶液(ml)；C＝醇沉淀溶液(ml)；D＝用于Cu沉淀的溶液(ml)；
E＝Cu-葡聚糖络合物的最终溶液(ml)；F＝葡聚糖〔由标准曲线所得〕，(mg/ml)则：$$葡聚糖，ppm＝〔F〕×〔E〕
×(C/D)×(1/B)×(1/A)×10^5^$$所以，在上述步骤中：A＝40，B＝10，C＝25，D＝10，E＝25。
粗蔗糖中的葡聚糖
糖及糖产品
酚-H2SO4试验
向10支20×150mm的试管中分别加2.0ml上述10种浓度的葡聚
糖标准溶液。向第11个管中加2ml水作为空白。每个管中加1ml5%的
酚溶液。轻缓地摇动试管使酚与糖溶液混匀。$$向每支管中加10ml浓
H2SO4，最好使用塑料的自动取滤器。迅速放入酸以保证溶液能充分混合。不要让取液器接触液面，或让酸处于溶液的表面。在一个漩涡式
混合器上使溶液充分混匀。$$将一排试管放入沸水浴中2min，然后冷
却30min。$$以空白做参比在比色计或分光光度计上于485nm处读吸光度A或透光率T〔最好读A〕。将空白的A值调到零，然后读样品的A
值，空白和试样应使用相同比色池或相匹配的池子。平行测2次计算平均值。$$为了保证测定的精确度，A值应在0.1－0.6(T>25%)之间。若A大于0.6，则应稀释后再测定。该步骤对做标准曲线时不必要，但对糖样品可能是需要的。为了制备稀溶液，从上述取2.0ml进行酚-
H2SO4试验的溶液〔样品糖测定最后是25ml〕中，移取5ml到25ml容量瓶中，用水稀释至25ml。在酚-H2SO4试验中取2ml该稀释液。在最终计算葡聚糖的ppm数时应考虑一个稀释系数5。
四种糖的测定方法
4种糖的测定方法 总结： 1、直接滴定法。 原理为糖还原天蓝色的氢氧化铜为红色的氧化亚铜。缺点：水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响。 2、高锰酸钾滴定法。 所用原理同直接滴定法。缺点：水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响，过程较为复杂，误差大。 3、硫酸苯酚法。 糖在浓硫酸作用下，脱水形成的糠醛和羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10-100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。 缺点：如果水样呈橙红色（大部分水样为黄色），会对比色法造成较大的干扰。 4、蒽酮法 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛和羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的测定。 缺点：，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅。 综合比较；采用蒽酮法能将最为准确地测定尾水中糖的含量。
（一）直接滴定法（本法是国家标准分析方法） 中华人民共和国行业标准(果汁－总糖的测定－直接滴定法) SB/T 10203-1994 Ⅰ、原理 一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用标液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。根据样液消耗量可计算出还原糖含量。 样品经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝做指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液），根据样品溶液消耗体积计算还原糖量。 Ⅱ、仪器和试剂 1．仪器 酸式滴定管，可调电炉（带石棉板），250ml容量瓶。 2．试剂 1.盐酸。 2.碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及次甲基蓝，溶于水中并稀释至 1000mL。 3.碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠与75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁 氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000 ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。 4.乙酸锌溶液：称取 g乙酸锌，加3ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100ml。 5.亚铁氰化钾溶液：称取亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100ml。 6.葡萄糖标准溶液：准确称取经过96℃±2℃干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5ml盐 酸，并以水稀释至1000L。此溶液相当于1mg/ml葡萄糖（注：加盐酸的目的是防腐，标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制）。 7.果糖标准溶液：按⑹操作，配制每毫升标准溶液相当于1mg的果糖。 8.乳糖标准溶液：按⑹操作，配制每毫升标准溶液相当于1mg的乳糖。 9.转化糖标准溶液：准确称取纯蔗糖，用100ml水溶解，置于具塞三角瓶中加5ml盐酸 （1+1），在68℃~70℃水浴中加热15min，放置至室温定容至1000ml，每ml标准溶液相当于转化糖。 Ⅲ、实验步骤 1．样品处理 ⑴乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约～固体样品（吸取25～50ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。边摇边慢慢加入5ml乙酸锌溶液及5ml亚铁氢化钾溶液，加水至刻度，混匀。静置30 min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。（注意：乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等，使它们形成沉淀，经过滤除去。如果钙离子过多时，易与葡萄糖、
粗蔗糖中的葡聚糖化学分析方法
粗蔗糖中的葡聚糖 糖及糖产品 Roberts铜测定法 A原理 所有高分子量〔大于10，000道尔顿〕物质经80%的乙醇沉淀与糖分离。沉淀物经过滤，洗涤后重新溶解于水中。将碱性Cu〔Ⅱ〕试剂加入到此液中可从粗蔗糖中的其它高分子量物质中选择性地沉淀出葡聚糖。滤出该沉淀，其中的葡聚糖用比色法进行测定，其原理是酚- H2SO4试剂将葡聚糖络合物分解为单体葡萄糖分子，并发生显色反应，其强度正比于样品中葡聚糖的总量。样品及反应混合物应保持不受其它糖分，含碳水化合物成分杂质及对酚-H2SO4试剂有显色反应成分的污染。 B仪器 B.a比色计或分光光度计 在485nm测吸光度值A或透光率T。 B.b玻璃砂漏斗 粗号，孔径号C，15ml。 B.c奈氏管 35ml，或平底试管，短到能置于抽滤瓶中。
C试剂 无特殊声明时使用试剂级化学试剂。水为蒸馏水或去离子水。 C.a无水乙醇 使用无水乙醇，不要使用95%乙醇。 C.b80%乙醇 80ml无水乙醇中加20ml水。 C.c助滤剂 分析级，经酸洗处理过。 C.dNaOH试剂溶液 2.5N的NaOH，Na2SO4饱和。将100gNaOH溶解于水中，并稀释至1L。加无水或含结晶水的Na2SO4到有一些结晶不溶解为止。用非玻璃材料的塞子塞住后保存于试剂瓶中。试剂溶液可保存1个月。 C.eCu贮备液 将3.0gCuSO4·5H2O溶解于50ml的水中。将30.0g柠檬酸钠溶解于50ml水中。将这两种溶液混合后用水稀释至1L。溶液可保存2周。 C.fCu试剂溶液 用50ml水稀释50ml铜贮备液。将12.5g无水Na2SO4溶解于此液中。试剂应在使用的当天配制，不能保存。
蔗糖酶的测定方法
鲜样1g（不同处理天数的第一片真叶或者根系，保存于－80℃冰箱中的） ↓ 加入0.5g pvpP和10mL Hepes冰浴研磨成匀浆（50mMHepes－NaOH pH 7.5缓冲液体系 配制1L。 Hepes：11.9150g NaCl：16.0g KCl：0.74g Na2HPO4·12H2O：0.543g 葡聚糖： 2g EDTA： 0.3722g MgCl2： 2.0330g DTT： 0.3856g Vc： 1.7614g） ↓ 四层纱布过滤 ↓ 12000g，4℃，离心20min，用石英砂配平 ↓ 弃沉淀，留上清液，加5.6g硫酸铵，加入后充分搅动，充分溶解 ↓ 放置15min，用空管加水与离心管配平 ↓ 12000g，4℃，离心20min ↓ 弃上清液，沉淀内加入3mLHepes溶解，移到透析袋内 ↓ 透析袋放到盛有20mL稀释10倍的Hepes ↓ 4℃冰箱内透析20h即为酶液
1.AI活性测定 25mL刻度试管内加入0.6mL Na2HPO4（0.1M）柠檬酸调pH到4.8 ↓ 加0.2mL（0.1M）蔗糖 ↓ 加0.2mL酶提取液 ↓ 37℃孵育30min ↓ 每个试管中加入1mL蒸馏水，空白加2mL蒸馏水 ↓ 在加1.5mL3,5-二硝基水杨酸（DNS） ↓ 520nm比色（比色前混匀） 2.NI活性测定 25mL刻度试管内加入0.6mL Na2HPO4（0.1M）柠檬酸调pH到7.2 ↓ 加0.2mL（0.1M）蔗糖 ↓ 加0.2mL酶提取液 ↓ 37℃孵育30min ↓ 沸水浴5min，流水冷却 ↓ 每管加21.5mL蒸馏水 ↓ 520nm比色（比色前混匀）
粗多糖测定方法的比较
一）苯酚法测定可溶性糖 【实验原理】 植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。 【实验仪器及试剂】 1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。 2．试剂： （1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。 （2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。（3）浓硫酸（比重1.84）。 （4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。 【实验步骤】 1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5－20s。加入5 mL浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。 2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。 3．测定吸取0.5mL样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5mL，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖含量。 式中：C一标准方程求得糖量（ug） α一吸取样品液体积（mL） V－提取液量（mL） n一稀释倍数 W一组织重量（g） 可溶性糖含量（％）＝从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数/[测定用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100
甘蔗生产过程葡聚糖的形成与检测研究进展
甘蔗生产过程葡聚糖的形成与检测研究进展 刘桂云;徐艳芳;梁达奉;蚁细苗;曾练强;常国炜 【摘要】Dextran in sugarcane production process is formed by Leuconostoc mesenteroides. Its levels can be associated with sugar-cane varieties, field condition( planting pattern, temperature, humidity, sunlight, soil, foreign material) , degree of injury ( refrac-tory cane,harvesting methods) , and its content can be rapid and accurate measured by Dextran Immunonephelometric Test Kit. The presence of dextran indicates that sucrose has been lost, so sugarcane dextran is a direct and reliable indicator to measure sugarcane fresh and quality.%甘蔗生产过程出现的葡聚糖主要是甘蔗感染肠膜明串珠菌消耗蔗糖后的代谢产物. 葡聚糖的形成与甘蔗品种、田间环境(种植方式、温度及湿度、日照、土壤条件、夹杂物)、损伤程度(顽性甘蔗、收获方式)等因素有关,其含量可通过特异性葡聚糖单抗试剂盒快速、准确测定. 葡聚糖是评价甘蔗新鲜度直接、可靠的指标. 【期刊名称】《亚热带农业研究》 【年(卷),期】2015(011)004 【总页数】5页(P277-281) 【关键词】甘蔗生产;葡聚糖;甘蔗品种;新鲜度;特异性葡聚糖单抗试剂盒 【作者】刘桂云;徐艳芳;梁达奉;蚁细苗;曾练强;常国炜 【作者单位】广州甘蔗糖业研究所甘蔗改良与生物炼制重点实验室,广东广州510316;广西大学轻工与食品工程学院,广西南宁530004;广州甘蔗糖业研究所甘
葡聚糖酶应用于甘蔗制糖过程的试验研究
葡聚糖酶应用于甘蔗制糖过程的试验研究 钟志才;马步;徐杰荣;邱瑞良;杨汉珉;陶胜国;常国炜;梁达奉 【摘要】In 2013/14 milling season, the production test of dextranase was carried out in some sugar factories in the Guangxi Agricultural Reclamation Group. It is indicated that the dextran of cane juice can be eliminated by dextranase, the elimination ratio can be above 98%. The purity difference between purified juice and mixed juice can be increased to above 2 AP and the boiling house recovery can be raised to above 1%. Dextran content in sugarcane, intermediate products and products can be measured rapidly and accurately by monoclonal antibody kit, so the big problem, dextran measurement in production can be resolved.%2013/14年榨季在广西农垦的多家糖厂进行了葡聚糖酶应用的生产性试验。结果表明葡聚糖酶可有效清除制糖物料中的葡聚糖，除去率达到98%以上，清混汁纯度差达到2 AP以上，煮炼回收率提高1个百分点以上。使用葡聚糖单抗试剂盒能快捷、准确测定甘蔗原料、在制品和产品中的葡聚糖含量，解决制糖生产中葡聚糖测定的大难题。 【期刊名称】《甘蔗糖业》 【年(卷),期】2014(000)003 【总页数】6页(P41-46) 【关键词】甘蔗制糖;葡聚糖酶;葡聚糖单抗试剂盒;澄清;亚硫酸法 【作者】钟志才;马步;徐杰荣;邱瑞良;杨汉珉;陶胜国;常国炜;梁达奉
简述糖厂生产中葡聚糖检验的应用
简述糖厂生产中葡聚糖检验的应用 1 概述 葡聚糖（glucan）是以葡萄糖为单体形成的高分子聚合多糖。制糖工业中出现的葡聚糖主要是右旋糖酐（dextran），它是一种完全由α-D吡喃葡萄糖单体构成的多糖，是由微生物产生的酶引起葡萄糖聚合而成。鲜甘蔗中葡聚糖的含量很少，几乎为零。甘蔗如受到刀伤或压伤、病虫害、火烧、霜冻或在收割后放置长时间，都会受到肠膜明串珠菌、链球菌属等微生物的感染而形成葡聚糖。这些微生物在适宜的温度和湿度下，能够分泌葡聚糖蔗糖酶（dextransucrose），催化蔗糖生成葡聚糖。根据国内专家研究，葡聚糖从甘蔗田间产生开始，品种、砍运、糖厂现场卫生、蔗汁流程、温度、场地湿度、pH值等都会对葡聚糖产生影响。针对蔗汁葡聚糖含量的变化特征，可以通过检验查定而反映生产实际情况和糖分无形损失程度，及时指导生产。下面就以目前在广西农垦糖业广泛使用的检验情况为例，探讨葡聚糖定量分析检验在糖厂生产中的表现。 2 葡聚糖定量分析检验在生产中的表现和指导作用 第一，经多年改善，现普遍采用抗体免疫法来测定蔗汁中葡聚糖含量。该方法设备占用地方小，连带岗位场地仅需0.5m2，操作简便，只用4个步骤，灵敏度高、速度快，熟练工只需2分钟即可，极其适合在要求检验数据反映较快的甘蔗糖厂使用。 第二，从初压汁指标检验可以体现甘蔗新鲜度。与其他指标一样，初压汁葡聚糖含量和甘蔗质量变化具有一致性，具备参考价值和现实指导作用。根据以上查定，可以说，初压汁葡聚糖含量和其他几个传统指标一样，可以成为甘蔗新鲜度的参考。连续几个榨季运行结果的实践证明，初压汁葡聚糖含量的确可以成为反映甘蔗新鲜度的有效指标。通过葡聚糖数据反映出来，不同天气下的甘蔗变化情况，能及时促使制糖工艺调整指标，达到合理、高效生产。 通过几个不同时间段可以看出，葡聚糖的确随着不同气候变化而改变，阴湿天气尤其明显。根据采集数据综合分析，并不考虑砍运、堆放、车间卫生等条件，我们认为，晴天对甘蔗及前段物料的葡聚糖含量影响最大，阴雨天气的影响暂时未能清晰判断。这是因为非晴天气（特别是南风天）砍运，受到空气环境潮湿影响，适宜各类细菌生长，导致转化较快。已变化的甘蔗进厂往往比天气变化较滞
一种制备可控制分子量的α葡聚糖工艺
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利说明书 (10)申请公布号CN 114438050 A (43)申请公布日2022.05.06 (21)申请号CN202210116129.3 (22)申请日2022.02.07 (71)申请人蓓斯蒂(海口)生命科技有限公司 地址570100 海南省海口市秀英区长流镇长滨路81-1时代城二期3栋302房(72)发明人林博李蠡靳梦潇 (74)专利代理机构 代理人 (51)Int.CI C12N9/10 C12N11/00 C12N9/90 C12P19/08 C12P19/18 C12P19/24 C08B37/02 权利要求说明书说明书幅图(54)发明名称 一种制备可控制分子量的α葡聚糖 工艺 (57)摘要 本发明公开了一种制备可控制分子 量的α葡聚糖工艺，包括蔗糖、葡萄糖、
葡聚糖蔗糖酶、果糖异构化酶、水、副产 物阿洛酮糖等，首先将蔗糖加水配置成蔗 糖水溶液。然后将葡聚糖蔗糖酶固定化后 放入蔗糖水溶液，进行酶反应。根据分子 量要求进行控制反应时间，酶添加量，温 度，PH控制，反应终止然后进行树脂脱盐 处理，利用色谱分离或者膜分离的方法分 离果糖，对产物进行进一步的处理，再次 进行脱盐脱色处理、膜分离或色谱分离进 行纯化得到≥90以上纯度的α葡聚糖，将 得到的产物进行浓缩、除菌处理得到水溶 性高纯度α葡聚糖且分子量可以在 1000‑20000道尔顿精准控制；本一种制备 可控制分子量的α葡聚糖工艺具有精准化 控制、聚合反应和提取工艺可调、生产成 本低的优点。 法律状态 法律状态公告日法律状态信息法律状态 2022-05-06公开发明专利申请公布 2023-06-13实质审查的生效IPC(主分 类):C12N 9/10专利申请 号:2022101161293申请 日:20220207 实质审查的生效
粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法 1. 原理 分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。 2. 适用范围 参照AOAC方法。适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。 3.仪器 （1）分光光度计 （2）离心机 （3）旋转混匀器 （4）恒温水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1） 80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。 （2） 2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。 （3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。溶液可贮存2周。 （4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加
入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。 （5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。 （6） 1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。（7） 20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。 （8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至 100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。 （9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。 5. 操作方法 5.1 样品处理 （1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。 （2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。 （3）沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml （V3），
粗多糖检测方法
粗多糖的测定方法（分光光度法） 本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104以上的水溶性粗多糖的测定。 本方法最低检测浓度为5.0mg/L。 1. 方法提要 食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。 2. 主要仪器 （1）分光光度计。 （2）离心机（3000r/min）。 （3）旋转混匀器。 3. 试剂 本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。 （1）乙醇溶液（80%）：20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。 （2）氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。 （3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。 （4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。临用新配。 （5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。 （6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。 （7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。 （9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。此溶液1mL含葡聚糖0.10mg。 4. 测定步骤 （1）样品处理： a．样品提取：称取混合均匀的固体样品2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后，过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。 b．沉淀粗多糖：准确吸取a项终滤液5.0mL或液体样品5.0mL，置于50mL 离心管中，加入无水乙醇20mL，混匀5min后，以3000r/min离心5min，弃去上清液。残渣用80%（体积分数）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复操作3~4次。残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀后，供沉淀葡聚糖。 c．沉淀葡聚糖：准确吸取b项终溶液2mL置于20mL离心管中，加入100g/L 氢氧化钠溶液2.0mL铜试剂溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min 离心5min，弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次，残渣用10%（体积分数）硫酸溶液2.0mL溶解并转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液为样品测定液。 （2）标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相当于葡聚糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg）分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值。以葡聚糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 （3）样品测定：准确吸取样品测定液2.0mL置于25mL比色管中，加入50g/L 苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长
免疫比浊法定量检测葡聚糖的研究
免疫比浊法定量检测葡聚糖的研究 柳颖;蚁细苗;林荣珍;曾练强;黄曾慰;马步;梁达奉 【摘要】葡聚糖影响甘蔗品质及制糖生产，主要表现在糖分损失、糖液粘度增加、过滤困难、结晶异常、糖产品适用性受限等，从而降低提糖率，增加制炼成本，影响糖产品质量。本文对单克隆抗体比浊法测定葡聚糖的方法学进行研究，结果表明，该方法能快速准确测定糖厂蔗汁等在制品及产品中葡聚糖含量，线性范围10～500 mg/L，检测限为10 mg/L，加标回收率98%～102%，RSD<4%，灵敏度1.3 mg/L。%Dextran causes marked harmful impact on sugarcane quality and sugar production, which leads to severe sugar loss, increased viscosity of the flow, elongated crystals, expensive yield loss and declined quality of sugar. Based on the newly-generated monoclonal antibody, a reliable immunoturbidimetric method for quantitative detection of dextran was developed. This article studied the proformance of the method, which was proved to be a rapid, correct and convenient tool for detecting dextran in raw material, by-products and end-products of sugar. Results showed that, the linearity was good in the range of 0.01~0.5 mg/mL; the sensitivity was 1.3 mg/L; RSD was less than 4%; the minimum detectability was 0.01 mg/mL; the standard addition recovery rate of the sugar samples were between 98%~102%. 【期刊名称】《甘蔗糖业》 【年(卷),期】2013(000)005 【总页数】4页(P52-55)
蔗糖合成酶的测定方法
蔗糖合成酶的测定方法 一、仪器设备 冷冻离心机、恒温水浴、分光光度计 二、试剂 HEPES-NaOH（50mmol/L，pH7.5）缓冲液，包括50mmol/L MgCI2；2mmol/LEDTA； 0.2%(W/V)BSA；2%PVP； 0.1%间苯二酚：称取0.1g溶解并定溶于100ml 95%乙醇中。 30%盐酸、2mol/L NaOH、100mmol/L UDPG、100mmol/L6-磷酸果糖、100mmol/L 果糖 三、操作方法 1、粗酶液制备 称取0.5g样品（植物叶片去掉主叶脉），洗净剪碎，置于预冷的研钵中，加3ml Hepes-NaOH 缓冲液，冰浴研磨，10000×g离心10min。 2、酶活性测定 依次加入50μL粗酶液， 50μLHepes-NaOH缓冲液pH7.5， 20μL 50 mmol/LMgCI2， 20μL 100mmol/L UDPG， 20μL 100mmol/L6-磷酸果糖（20μL 100mmol/L果糖）， 30℃中反应30min后，加入200μL 2mol/L NaOH终止反应，沸水煮10min，流水冷却，加入1.5ml 30%盐酸和0.5ml 0.1% 间苯二酚，摇匀后置于80℃水浴保温10min，冷却后置于480nm处，以提前杀死酶活性为空白比色测定蔗糖含量。 同时取50μL粗酶液，加入200μL 2mol/L NaOH，以下同上操作，测定蔗糖含量。 3、蔗糖标线制作： 取0、40、80、120、160、200μg/ml的蔗糖溶液50μL，操作同上，然后以蔗糖浓度为纵坐标，以吸光值为横坐标，得方程。 4、计算 样品中酶活性（μg·g﹣1·h﹣1）= 式中C—反应液催化产生的蔗糖总量（μg）； V1—提取酶液时加入的缓冲液体积（ml）； V2—酶反应时加入的粗酶液体积（ml） 淀粉酶活性的测定 1方法 1.1试剂配制淀粉酶提取缓冲液：0.1mol/L-1柠檬酸溶液(pH 5.6);1%的淀粉溶液：用0.1mol/L-1的柠檬酸缓冲液(pH 5.6)配制；标准麦芽糖溶液(1mg/mL-1);3,5-二硝基水杨酸试剂(DNS试剂):称取6.5 g 3,5-二硝基水杨酸溶于少量水中，移入1000 mL容量瓶中，加入325 mL 2mol·L-1 NaOH溶液，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容到1000 mL。淀粉和麦芽糖为Sigma产品，其余试剂为国产分析纯试剂。 1.2测定方法 1.2.1酶液的提取 将每一个重复的3个果实去皮后切碎混匀，称取其果肉1g，置于预冷的研钵中，加2mL 预冷的0.1mol/L-1柠檬酸溶液(pH5.6)和少量石英砂研磨，将匀浆移入7mL的离心管中，
多糖检测方法
多糖的检测方法 关于多糖含量测定，业内有两种评价方法。 一种是狭义上严格的多糖测定，即水提取多糖后，以凝胶色谱柱分离、洗脱提纯粗多糖得到较单一分子量的多糖，再水解成各种单糖，以HPLC法分离测定各单糖，即可得到比较严格意义上的多糖含量及其组成。这种方法是科研级的多糖测定。 另一种评价方法一般是生产企业用于质控的多糖测定：一般过程是水提醇沉粗多糖后，以葡萄糖作为相比较的物质，加入特定显色剂后比色测定粗多糖的含量。注意，这种方法测得的是以葡萄糖作为折算的多糖含量。但这种评价方法简单实用，能反映一定的质量指标，作为质控之用可以的了。包括中国药典和一些国标、行标都采用此方法评价多糖含量，方法大同小异，如硫酸-苯酚法，硫酸-蒽酮法。但根据不少实际检验人的反映，要想检测结果有很好的重现性，还是有很多细节问题要注意的。 粗多糖测定 多糖的测定方法，目前有碱性酒石酸铜滴定法、比色法（蒽酮比色法、硫酸-苯酚法）。一般说来，比色法的优点是灵敏度高，样品用量少；但缺点是一般做常规检测时使用葡萄糖作标准品，误差较大，应以被测物的纯品作对照品，以求出换算因子，但要制备被测物的纯品并非每个实验室所能做到的，而且保健食品中往往是多种中草药的提取物作为原料而制成，所含多糖是不同相对分子量多糖的混合体，这就给提取纯品增加了难度。所以当成品中多糖含量大于1%（质量浓度）时，最好选用碱性酒石酸铜滴定。 滴定法 1.样品预处理 取本品适量，精密称定，置于250ml磨口烧瓶中，精密加水50ml，称定重量，置沸水 浴回流2小时，放置至室温，用水补足减失重量，混匀，滤过，精密吸取续滤液15ml于100ml 离心管中，加无水乙醇75ml，混匀，以4000r/min离心10min，并小心弃去上清液,再加15ml 热水(温度＞90℃)冲洗离心管中沉淀物,重复一次后再以4000r/min离心30min，弃去上清液，沉淀用乙醇液（水：乙醇=15：75）洗涤两次，离心，弃去洗涤液。 2.样品水解 将离心管中醇析物用50ml热水（温度＞90℃)少量多次转移至250ml磨口三角瓶中，加入15ml浓盐酸，开启冷凝管，在沸水浴中回流2h，冷却，先用40％的氢氧化钠（约15ml）粗调Ph值，后用稀的氢氧化钠溶液细调，再置于PH计上调整pH在6.8～7.2之间。将中和的酸解液移置至100ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀,过滤，滤液供滴定用。 3.碱性酒石酸钾钠铜溶液标定 3.1精密吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5ml于150ml的锥形瓶中，加10ml蒸馏水及2 粒玻璃珠，用滴定管加入9.0ml葡萄糖标准溶液于锥形瓶中。 3.2将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2分钟内至沸，并保持溶液在微沸状态下再用标准葡萄糖溶液滴定，以每2秒1滴的速度滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。同法平行操作三份，取其平均值（V1）。 3.3样品溶液预测和测定。 3.3.1 样品溶液的预测 精密吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5ml于150ml的锥形瓶中，精密加入10ml蒸馏水及2粒玻璃珠，控制在2分钟内加热至沸，保持溶液在微沸状态下以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品水解液液进行滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录葡萄糖标准溶液消耗体积。 3.3.2样品溶液的测定 精密吸取碱性酒石酸铜甲液与乙液各5.0ml，置于150ml锥形瓶中，精密加入蒸馏水10ml 及玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1ml的样品水解液，将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2分钟内至沸，并保持溶液在微沸状态下再用样品水解液滴定，以每2秒1滴的速度滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。同法平行操作三份，得出平均消耗体积（V2）。 最后计算结果乘以0.9，此为葡萄糖换算成粗多糖的细数。
资料多糖含量测定的各类方式优缺点
苯酚-硫酸法测多糖含量 一、原理 多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。 二、试剂 1、浓硫酸：分析纯，% 2、80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期贮存。 3、6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配） 4、标准葡聚糖（Dextran,Pharmacia）或分析纯葡萄糖。 5、15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期贮存。 6、5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期贮存。 7、6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。 8、6mol/L 盐酸 三、操作 1、制作标准曲线 准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，别离吸取、、、、、、及，各以蒸馏水补至，然后加入6%苯酚及浓硫酸，摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以水按一样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。 2、样品含量测定 1）取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少量5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少量5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。最后一次将残渣一路到入离心管。注意：总的溶液不要超出10毫升。（既不要超出离心管的容量）。 2）离心，转速3000转/分钟，共三次。第一次15分钟，取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液维持18毫升左右。 3）水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸以后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。 4）定容取样。水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取 ml的样品液，以蒸馏补至，然后加入6%苯酚及浓硫酸,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。 四、注意 一、此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。
水溶性(1→3)(1→6)-α-D-葡聚糖的酶法合成与结构解析
水溶性(1→3)(1→6)-α-D-葡聚糖的酶法合成与结构解析贾雪;黄超;缪铭;江波 【摘要】以蔗糖为底物,利用葡聚糖蔗糖酶的聚合反应来制备(1 →3)(1→6)-α-D-葡聚糖,通过探讨优化酶促催化条件参数来合成新型葡聚糖,并采用现代分析仪器解析其结构特征.结果表明,葡聚糖蔗糖酶催化反应条件为:反应温度40℃,蔗糖质量浓度160 mg/mL,加酶量10 U/mL,酶反应时间1h,反应pH 5.0.分子量分布曲线显示葡聚糖分子质量分布集中并呈单峰,绝对重均分子质量2.4×107 g/mol,分散系数为1.07,红外与核磁图谱显示糖链中主要由α-1,3和α-1,6连接的D-吡喃葡萄糖单元组成,且两者的比例约为3∶4. 【期刊名称】《食品与发酵工业》 【年(卷),期】2014(040)012 【总页数】5页(P10-14) 【关键词】(1→3)(1→6)-α-D-葡聚糖;水溶性;酶法合成;链结构 【作者】贾雪;黄超;缪铭;江波 【作者单位】江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡,214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡,214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡,214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡,214122 【正文语种】中文
近年来，人们日益关注糖尿病、冠心病等健康问题，水溶性多糖作为一类重要的生物活性物质，由于其潜在的生物活性及加工性能越来越受到人们的重视［1-3］。水溶性多糖可以作为功能性食品配料，如益生元、增稠剂、乳化剂等，开发营养型饮料、乳制品、焙烤制品以及特殊营养膳食［4］。目前，水溶性多糖一般利用热水、碱或酸溶液从植物、真菌等中提取［5］。利用水提取多糖，提取温度高，耗时长且效率低，而利用酸碱提取多糖易破坏多糖的空间结构与活性［6］。与上述方法相比，利用酶法合成水溶性多糖，产物纯度高，反应条件容易控制，是一种理想的生产水溶性多糖的方法。 葡聚糖蔗糖酶(Glucansucrase)，也被称为葡萄糖基转移酶，主要反应为以蔗糖为 底物合成一系列不同的葡聚糖。这些多糖的区别在于连接各个葡萄糖基的糖苷键的不同，例如合成的右旋糖酐主要包含α-(1→6)糖苷键［7］。本实验所采用的酶来自实验室保藏的明串珠菌 SK24.002，是一种新型的葡聚糖蔗糖酶，反应过程中，酶以蔗糖为底物，可以合成含有α-(1→3)，α-(1→6)糖苷键的葡聚糖，通过测定 反应液中的果糖含量可以间接反映葡聚糖的合成量。本研究利用单因素实验考察了底物浓度、反应时间、pH、温度等条件对酶催化产生葡聚糖的影响，并对该葡聚 糖的分子结构进行了测定分析，为酶法合成水溶性多糖提供了新的思路和实验方案。 1 材料和方法 1.1 材料与仪器 葡聚糖蔗糖酶，由实验室保藏的明串珠菌SK24.002发酵制备，酶活力100 U/mL;果糖、葡萄糖、蔗糖、苯酚、吐温80、无水 CaCl2、无水乙醇、3，5-二硝基水 杨酸、酒石酸钾钠、KBr均为分析纯，购于国药集团化学试剂有限公司;D2O(同位素纯度99.990%D)，购于美国 Sigma公司。 Delta 320s型pH计，美国梅特勒-托利多仪器有限公司;Centrifuge 5804R离心