内标法定量
定量分析中怎样选择内标法或外标法
定量分析中怎样选择内标法或外标法定量分析中怎样选择内标法或外标法一内标法什么叫内标法?怎样选择内标物?内标法是一种间接或相对的校准方法。
在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。
内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。
使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱拄所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。
采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。
理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。
当然，在色谱分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。
需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化台物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化台物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则。
在使用内标法定量时，有哪些因素会影响内标和被测组分的峰高或峰面积的比值?影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。
由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现。
化学方面的因素包括:1、内标物在样品里混合不好;2、内标物和样品组分之间发生反应，3、内标物纯度可变等。
对于一个比较成熟的方法来说，色谱方面的问题发生的可能性更大一些，色谱上常见的一些问题(如渗漏)对绝对面积的影响比较大，对面积比的影响则要小一些，但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度，那么一定有某个重要的色谱问题存在，比如进样量改变太大，样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别，检测器非线性等。
GCMS内标定量法
安捷伦GCMS内标法定量简介（以5975为例）一、内标法基础回顾（包括外标法的概念）1. 定量响应值不同的物质，由于其物理性质，化学性质（化学结构）的不同，在气相色谱检测器（FID，TCD，FPD，ECD，MSD等）上的响应会不同。
相同量的同种物质对不同检测器响应不同。
相同量的不同物质对于同一种检测器响应不同。
在质量选择检测器（MSD）上，物质的化学结构不同，电离电位不同，需要的电离能量不同，裂解碎片不同，裂解碎片丰度不同，这样得到的质量离子色谱图的峰面积或峰高也不同（当然总离子色谱图的峰面积也不同）。
直接用响应信号定量，必然导致较大误差。
故引入响应因子或校正因子。
定量响应因子或校正因子对检测器产生的信号加以校正，校正后的峰面积可以定量的代表物质的含量。
例如图1中A, B, C 三个化合物的有不同的含量和峰面积。
图 1响应值S，即为某一物质（组分）在检测器所产生的信号强度（电信号，峰高，峰面积等，本篇均采用峰面积为例，包括下面的校正因子计算，内标法计算等），例如一定质量（m）的某一物质通过检测器在工作站或积分仪上产生峰面积为A，则可用下式表示：绝对响应值S’ i = A i / m i(式中：m i -----i组分的量；S’i -----i组分的校正因子；A i----i组分的峰面积)绝对响应值S就是单位量物质通过检测器时产生的信号强度（电信号，峰高，峰面积等），也成为绝对灵敏度。
一个化合物的绝对响应值就是该化合物的含量除分析这个校正混合物时该化合物的峰面积（或峰高）的值。
绝对响应值校正了检测器对不同化合物的响应能力。
当校正样和未知样品在同样的条件下分析时，外标法是基本的定量方法。
未知样品的结果与校正样的结果相比较从而计算出未知物的含量。
外标法使用绝对响应。
响应因子从校正表中得到并可储存。
在分析后面的样品时，响应因子被用于计算化合物的含量。
使用这种计算方法必须注意一点，即每次运行的进样量必须是一致的。
x射线荧光光谱定量方法 内标法
x射线荧光光谱定量方法内标法
答案：
X射线荧光光谱仪的定量分析方法中，内标法是一种重要的技术手段。
内标法在X荧光光谱仪的定量分析中，主要依赖于标准样品的组成与试样组成尽可能相同或相似，以此来最小化基体效应或共存元素的影响，确保测定结果的准确性。
基体效应指的是样品的基本化学组成和物理化学状态的变化对X射线荧光强度的影响。
例如，在测定不锈钢中Fe和Ni等元素时，由于一次X射线的激发，可能会产生NiKα荧光X射线，而NiKα在样品中可能被Fe吸收，导致Fe激发产生FeKα。
这种情况下，如果Ni的测定因为Fe 的吸收效应而结果偏低，而Fe的测定则因为荧光增强效应而结果偏高。
为了克服这个问题，内标法采用基本参数法，即在考虑各元素之间的吸收和增强效应的基础上，用标样或纯物质计算出元素荧光X射线理论强度，并测量其荧光X射线的实际强度。
通过比较实测强度与理论强度，求出该元素的灵敏度系数。
在测定未知样品时，先测定试样的荧光X射线强度，根据实测强度和灵敏度系数设定初始浓度值，再由该浓度值计算理论强度。
将测定强度与理论强度比较，达到某一预定精度，否则要再次修正。
这种方法需要测定和计算试样中所有的元素，并且要考虑这些元素间相互干扰效应，计算非常复杂，因此必须依靠计算机进行计算。
内标法的应用不仅提高了X荧光光谱仪定量分析的准确性，还通过计算机辅助计算，使得复杂的分析过程得以简化，从而提高了工作效率和分析结果的可靠性。
这种方法在材料科学、地质勘探、环境监测等领域有着广泛的应用，为各种材料的成分分析提供了重要的技术支持。
内标定量方法的特点
内标定量方法的特点内标定量法是一种基于内标物的定量分析方法，它可以通过将样品中的目标化合物与已知浓度的内标物进行比较，从而准确地确定目标化合物的浓度。
在实际应用中，内标定量法具有许多优点和特点，下面将详细介绍。
一、内标定量法的基本原理内标定量法是一种比较法，它利用已知浓度的内标物作为参照物质来计算目标化合物的浓度。
在实验过程中，首先需要向样品中添加已知浓度的内标物，并通过色谱、质谱等分析方法对样品进行分析。
然后将样品中目标化合物与内标物之间的响应信号进行比较，并计算出目标化合物的浓度。
二、内标定量法的优点1. 准确性高：由于内标定量法是一种比较法，它可以消除仪器漂移、样品制备误差等因素对结果的影响，从而提高了测试结果的准确性。
2. 稳定性好：由于内标物和目标化合物在同一处理过程中受到相同条件下处理，因此可以减少实验误差和不确定性。
3. 适用范围广：内标定量法可以用于各种类型的样品，包括生物样品、环境样品等。
4. 灵敏度高：内标定量法可以通过调整内标物的浓度来提高测试的灵敏度，从而检测到更低浓度的目标化合物。
5. 重复性好：由于内标定量法具有较高的准确性和稳定性，因此具有较好的重复性和可重复性。
三、内标定量法的注意事项1. 内标物应与目标化合物在分析条件下具有相似的特性，如相同的极性、挥发性等。
2. 内标物应具有良好的稳定性和可溶性，并且不会干扰目标化合物在分析中产生干扰峰。
3. 内标物应具有良好的纯度和已知浓度，并且不受样品基质影响。
4. 在实验过程中应注意避免污染和交叉污染现象，以确保测试结果准确可靠。
四、内标定量法在实际应用中的例子1. 内标定量法在药物代谢研究中的应用：在药物代谢研究中，使用内标定量法可以准确测定药物在体内的代谢产物浓度，从而评估药物的代谢动力学和药效学特性。
2. 内标定量法在环境分析中的应用：在环境分析中，使用内标定量法可以准确测定水、土壤和空气中有机污染物的浓度，从而评估环境污染程度和对生态系统的影响。
内标法使用条件
内标法使用条件一、引言内标法是一种常用的定量分析方法，被广泛应用于各个领域。
该方法通过在样品中加入已知浓度的内标物，利用内标物的浓度和响应值与待测组分的浓度和响应值之间的比例关系，对样品进行定量分析。
本文将对内标法的使用条件进行详细探讨，以期为相关从业者提供有益的参考。
二、内标法的原理内标法是一种相对定量方法，通过在样品中加入已知浓度的内标物，利用内标物的浓度和响应值与待测组分的浓度和响应值之间的比例关系，对样品进行定量分析。
具体来说，内标法的原理是基于以下假设：在样品处理和测定过程中，内标物与待测组分的响应值成正比，并且内标物的浓度与待测组分的浓度保持恒定比例。
通过比较内标物和待测组分的响应值，可以计算出待测组分的浓度。
三、内标法的使用条件1.内标物的选择选择合适的内标物是内标法的关键步骤之一。
内标物应该与待测组分性质相似，能够均匀分布在样品中，且不与待测组分发生化学反应或吸附。
同时，内标物的响应值应该与待测组分的响应值相近，以提高分析的准确度。
常用的内标物包括苯、甲苯、正己烷等。
2.内标物的浓度选择选择合适的内标物浓度也是内标法的重要条件之一。
内标物的浓度应该与待测组分的浓度保持恒定的比例关系。
如果内标物的浓度过高或过低，都会影响分析的准确度。
因此，需要根据实验要求和实际情况选择合适的内标物浓度。
3.样品处理和制备在应用内标法时，需要对待测样品进行适当的处理和制备。
这包括样品的采集、保存、溶解、分离等步骤。
在样品处理和制备过程中，应该注意避免损失和污染，以保证分析的准确度和精密度。
同时，需要根据实际情况选择合适的样品处理和制备方法，以适应不同的实验要求。
4.仪器校正和校准在使用内标法时，需要使用适当的仪器进行测量和分析。
这包括色谱仪、光谱仪、质谱仪等。
在使用仪器之前，需要进行校正和校准，以保证分析的准确度和精密度。
同时，需要根据实际情况选择合适的仪器和方法。
四、内标法在各领域的应用1.化学分析领域内标法在化学分析领域中得到了广泛应用。
安捷伦GCMS内标法定量
安捷伦GCMS内标法定量简介（以5975为例）一、内标法基础回顾（包括外标法的概念）1. 定量响应值不同的物质，由于其物理性质，化学性质（化学结构）的不同，在气相色谱检测器（FID，TCD，FPD，ECD，MSD等）上的响应会不同。
相同量的同种物质对不同检测器响应不同。
相同量的不同物质对于同一种检测器响应不同。
在质量选择检测器（MSD）上，物质的化学结构不同，电离电位不同，需要的电离能量不同，裂解碎片不同，裂解碎片丰度不同，这样得到的质量离子色谱图的峰面积或峰高也不同（当然总离子色谱图的峰面积也不同）。
直接用响应信号定量，必然导致较大误差。
故引入响应因子或校正因子。
定量响应因子或校正因子对检测器产生的信号加以校正，校正后的峰面积可以定量的代表物质的含量。
例如图1中A, B, C三个化合物的有不同的含量和峰面积。
图 1响应值S，即为某一物质（组分）在检测器所产生的信号强度（电信号，峰高，峰面积等，本篇均采用峰面积为例，包括下面的校正因子计算，内标法计算等），例如一定质量（m）的某一物质通过检测器在工作站或积分仪上产生峰面积为A，则可用下式表示：绝对响应值S’ i = A i / m i(式中：m i -----i组分的量；S’i -----i组分的校正因子；A i----i组分的峰面积)绝对响应值S就是单位量物质通过检测器时产生的信号强度（电信号，峰高，峰面积等），也成为绝对灵敏度。
一个化合物的绝对响应值就是该化合物的含量除分析这个校正混合物时该化合物的峰面积（或峰高）的值。
绝对响应值校正了检测器对不同化合物的响应能力。
当校正样和未知样品在同样的条件下分析时，外标法是基本的定量方法。
未知样品的结果与校正样的结果相比较从而计算出未知物的含量。
外标法使用绝对响应。
响应因子从校正表中得到并可储存。
在分析后面的样品时，响应因子被用于计算化合物的含量。
使用这种计算方法必须注意一点，即每次运行的进样量必须是一致的。
安捷伦GCMS内标法定量简介
安捷伦GCMS内标法定量简介（以5975为例）一、内标法基础回顾（包括外标法的概念）1. 定量响应值不同的物质，由于其物理性质，化学性质（化学结构）的不同，在气相色谱检测器（FID，TCD，FPD，ECD，MSD等）上的响应会不同。
相同量的同种物质对不同检测器响应不同。
相同量的不同物质对于同一种检测器响应不同。
在质量选择检测器（MSD）上，物质的化学结构不同，电离电位不同，需要的电离能量不同，裂解碎片不同，裂解碎片丰度不同，这样得到的质量离子色谱图的峰面积或峰高也不同（当然总离子色谱图的峰面积也不同）。
直接用响应信号定量，必然导致较大误差。
故引入响应因子或校正因子。
定量响应因子或校正因子对检测器产生的信号加以校正，校正后的峰面积可以定量的代表物质的含量。
例如图1中A, B, C三个化合物的有不同的含量和峰面积。
图1响应值S，即为某一物质（组分）在检测器所产生的信号强度（电信号，峰高，峰面积等，本篇均采用峰面积为例，包括下面的校正因子计算，内标法计算等），例如一定质量（m）的某一物质通过检测器在工作站或积分仪上产生峰面积为A，则可用下式表示：绝对响应值S’ i = A i / m i(式中：m i -----i组分的量；S’i -----i组分的校正因子；A i----i组分的峰面积)绝对响应值S就是单位量物质通过检测器时产生的信号强度（电信号，峰高，峰面积等），也成为绝对灵敏度。
一个化合物的绝对响应值就是该化合物的含量除分析这个校正混合物时该化合物的峰面积（或峰高）的值。
绝对响应值校正了检测器对不同化合物的响应能力。
当校正样和未知样品在同样的条件下分析时，外标法是基本的定量方法。
未知样品的结果与校正样的结果相比较从而计算出未知物的含量。
外标法使用绝对响应。
响应因子从校正表中得到并可储存。
在分析后面的样品时，响应因子被用于计算化合物的含量。
使用这种计算方法必须注意一点，即每次运行的进样量必须是一致的。
内标法
内标法内标法internal st andard met hod 是色谱分析中一种比较准确的定量方法，尤其在没有标准物对照时，此方法更显其优越性。
内标法是将一定重量的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中，然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定内标物和待测组分的峰面积（或峰高）及相对校正因子，按下列公式和方法即可求出被测组分在样品中的百分含量：按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。
取一定量进样，记录色谱图。
用含对照品和内标物的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式算出校正因子（f）：f= (As/m s)/(Ar/mr)其中As和Ar分别为内标物和对照品的峰面积或峰高，ms和mr分别为加入内标物和对照品的量。
再取各品种项下含有内标物的待测组分溶液进样，记录色谱图，再根据含内标物的待测组分溶液色谱峰响应值，计算含量（mi）：m i=f×Ai/(As/ms)其中Ai和As分别为供试品和内标物的峰面积或峰高，ms为加入内标物的量。
必要时，再根据稀释倍数、取样量和标示量折算成为标示量的百分含量，或根据稀释倍数和取样量折算成百分含量。
当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的待测组分溶液使用同一份内标物质溶液时，则配制内标物质溶液不必精密称（量）取采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。
理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。
当然，在色谱分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。
需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化合物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化合物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则。
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检测灵敏 Range：1/10/100/1000 度设置 (灵敏度S依次降10倍)
Range：1/10/100/1000 (灵敏度S依次降10倍)
测定过程常见问题讨论2
甲苯的定量问题：本项目的测定采用“内标法”进行定量。
演示测定全过程1
打开载气（N2）钢瓶总阀，调节输出压力为0.4MPa。 打开载气净化气开关，调节载气合适柱前压，如0.14MPa，稳流阀控 制为4.4圈，控制载气流量为约30mL/min。
打开气相色谱仪电源开关。 设置柱温为85℃、气化温度为160℃和检测温度为140℃。
演示测定全过程2
待柱温、气化温度和检测温度达到设定值并稳定后，打开空气钢瓶， 调节输出压力为0.4MPa； 打开氢气钢瓶，调节输出压力为0.2MPa。打开空气净化气开关，调 节空气稳流阀为5.0圈，控制其流量为约200mL/min。 打开氢气净化气开关，调节氢气稳流阀为4.5圈，控制其流量为约 30mL/min。
气相色谱分析法模块之
任务5：内标法定量
能力目标
使用气相色谱法，定性定量分析“甲苯 试剂的纯度”（同系物定性、内标法定 量）
课程引入
问题：已知某甲苯试剂，今欲测其纯度，但其中杂质较多，且部分 杂质FID检测器无响应，现欲用气相色谱法FID检测器对其纯度进行检 测，你能设计一可行的分析方案吗？ ➢各小组各派一名同学讲解事先准备好的测量方法。
项目 丁醇异构体混合物的测定
甲苯试剂纯度的测定
定量方法 归一化法
内标法
要求
1、样品中各组分均出峰，完全分离， 1、无须样品中各组分均出峰且完全
且均有响应；
分离，要求待测组分能出峰，且与相
2、进样量无须准确。
邻组分完全分离。
2、进样量无须准确。
相对校正 因子
计算公式
须用标准物质测量相对校正因子，否
则无法准确测量
缺点是必须在所有样品中加入内标物 ，选择合适的内标物比较困难，内标 物的称量要准确，操作较复杂。
测定过程常见问题讨论3
其它注意事项： 本项目的测定使用危险的H2作载气，在操作时一定要注意通风、H2的 排出、严格禁止学生在实验室吸烟。 如遇H2泄漏，应怎么办？ 灭火器的使用 本项目系高温操作，注意烫伤。 若烫伤，应如何处理？ 本项目使用有机溶剂，注意其毒性。 若有机溶剂进入眼睛或皮肤，应如何处理？
点击“停开止始”按键， 色谱工作站停开止始采样， 并处理采集数据
色谱峰 分析结果
演示测定全过程5
在相同色谱操作条件下分别以苯、甲苯（GC级）标样 进样分析，以各标样出峰时间（即保留时间）确定甲苯测 试标样与甲苯测试试样中各色谱峰所代表的组分名称。 实训完毕后先关闭氢气钢瓶总阀，待压力表回零后，关 闭仪器上氢气稳压阀。 关闭空气钢瓶总阀，待压力表回零后，关闭仪器上空气 稳压阀。 设置气化室温度、柱温在室温以上约10℃、检测室温度 120℃。 待柱温达到设定值时关闭气相色谱仪电源开关。 关闭载气钢瓶和减压阀，关闭载气净化器开关。
wi
fi' Ai fi' Ai
100%
须用标准物质测量相对校正因子，否 则无法准确测量
wi
f i' A i mS
f
' S
AS
m样
100%
方法特点
优点：简便、精确，进样量的多少与 优点是：进样量的变化、色谱条件的 测定结果无关，操作条件（如流速， 微小变化对内标法定量结果的影响不 柱温）的变化对定量结果的影响较小。 大。只对感兴趣的色谱峰做校的单位。
溶剂峰 苯(内标和物)
甲苯
学生完成定性定量操作实训
学生完成丙酮试剂中微量水分的定性定量操作实训 实训过程中要求每位学生
➢独立完成 ➢独立处理数据 ➢合理安排时间 ➢实训过程中注意安全 ➢节约样品 ➢合理处理废液等。
数据处理计算公式
对甲苯测试标样所绘制色谱图，计算甲苯的相对校正因子(以苯为基
准物质) 。
取两支10μL微量注射器，以溶剂（如无水乙醇）清洗完毕后，备用。
演示测定全过程4
打开色谱工作站（FL9500），观察基线是否稳定。
基线稳定后，将其中一支微量注射器用甲苯测试标样润洗后，准确吸取
1μL该标样按规范进样，启动色谱工作站，绘制色谱图，完毕后停止数据
采集。
按相同方法再测2次
甲苯测试标样与3次甲 苯测试试样，记录各主 要色谱峰的峰面积。
参数的设置：
项目 丁醇异构体混合物的测定
甲苯试剂纯度的测定
载气种类 N2、Ar 载气流量 约30ml/min
N2、Ar 约30ml/min
空气 300ml/min
300ml/min
H2
作燃气，约30ml/min
检测器
氢火焰离子化检测器（flame ionization detector,FID）
作燃气，约30ml/min
揿“点火”键点燃氢火焰。
让气相色谱仪走基线，待基 线稳定。
揿“点火”键
演示测定全过程3
取一个干燥洁净称量瓶，加入3mL正已烷。加入100μL甲苯（GC级），称 其准确重量，记为mS1，加入100μL苯（GC级，内标物），称其准确重量， 记为mS2。摇匀备用，此为每位同学所配制甲苯测试标样。 另取一个干燥洁净的称量瓶，加入3mL正已烷。加入100μL所测甲苯试剂， 称其准确重量，记为m样，加入100μL苯（GC级，内标物），称其准确重量， 记为mS3。摇匀备用，此为每位同学所配制甲苯测试试样。
fi'
fi fS
mS1 AS (苯) A m i（甲苯） S 2（苯）
对甲苯试样所绘制色谱图，按公式
wi
fi'
mS3(苯) A i（甲苯）100% m样 AS（苯）
计算甲苯试剂中甲苯的质量分数（%），并计算其平均值与相对
平均偏差（%）。
测定过程常见问题讨论1
甲苯的定性问题：一般可采用同系物按沸点高低顺序出峰进定性。
➢甲苯试剂中除含主成份甲苯外，还含有硫化合物、噻吩、不饱和化合物、 水分等多种杂质？其中部分杂质在FID检测器上无响应。 ➢本项目的检测难度主要是待测试剂中杂质多，部分物质不出峰，因此无法 用“归一化法”进行分析。 ➢可适当采用“标准加入法”测定，让学生上台讲述相当测定过程。
日前常采用的方法是使用气相色谱仪，采用内标法。