革兰阴性菌脂多糖质控品产品技术要求金山川
lps配制方法
lps配制方法
LPS是一种常见的生物学试剂，用于细胞培养、细胞分离等实验中。
LPS全称为脂多糖（Lipopolysaccharide），是一种存在于革兰阴性菌的细胞壁中的生化物质。
LPS配制方法如下：
1.准备所需试剂和器材
LPS的制备主要涉及到革兰阴性菌的培养和提取，以及一些化学试剂的使用。
所以，在开始配制LPS之前，需要准备好以下试剂和器材：
- 革兰阴性菌培养基（如大肠杆菌培养基）
- 培养基对应的革兰阴性菌（如E. coli）
- 表面活性剂（如聚丙烯酰胺）
- 洗涤剂（如聚山梨酸酯20）
- 氯仿
- 水浴
- 离心机
- 超声波清洗器
2.革兰阴性菌的培养
首先，需要将革兰阴性菌在培养基中培养至最适生长温度（通常为37℃），直到细菌在培养基中生长至稳定期。
革兰阴性菌的培养时间
和培养基的配方因实验情况而异，一般需要自行选择。
培养完成后，
将培养液放置于离心机中离心，用洗涤剂和蒸馏水进行清洗。
3.脂多糖的提取
将经过清洗的细胞组织加入氯仿中，并放入水浴进行振荡，以破坏细
胞壁，使细胞内的LPS分离出来。
分离后的LPS含有大量的污物，需要经过相关的处理才能得到纯度较高的产物。
处理方法包括洗涤、离心、超声波清洗等。
4.LPS的定量
将提取后的LPS制备成一定浓度的溶液，使用光谱法测量其吸收率，
进而确定LPS的浓度。
综上所述，LPS配制方法比较复杂，需要结合实际实验情况进行调整
和改进。
在实验过程中，注意保持清洁卫生，减少污染和异物的进入，以尽量减少误差和影响实验结果。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂盒 (化学发光免疫分析法)产品技术要求金山川
1.1包装规格：12人份/盒1.2主要组成成分：校准曲线：二维码。
质控范围批特异，详见标签。
2.1外观试剂盒完整无破损，试剂盒内各组分齐全、无破损、渗透；盒上印刷的标识以及瓶签、盒签上的字迹清晰完整，易识别。
2.2装量试剂盒的液体试剂净含量应不低于标示量。
2.3溯源性根据GB/T21415规定了校准曲线的溯源过程，溯源至企业工作校准品。
2.4准确度回收率应在80%～120%的范围内。
2.5检出限检出限应不高于40pg/mL。
2.6线性试剂盒在浓度为[50,50000]pg/mL的线性范围内，相关系数（r）应不低于0.9900。
2.7重复性测定高、低两个浓度水平的样本，测定结果的变异系数CV（％）值应不大于10%。
2.8特异性与浓度分别为50ng/mL的曲霉菌半乳甘露聚糖、念珠菌甘露聚糖、革兰阴性菌脂多糖均无交叉反应，检测结果均应不超过检出限。
2.9批间差用3个不同批号的试剂盒分别检测两个浓度水平的样本，3个批次试剂盒之间的批间变异系数CV（％）应不大于15％。
2.10质控品赋值有效性重复测定试剂盒内质控品各3次，每次测定结果均应在质控品测定值允许的范围内。
2.11质控品批内瓶间差取同一批号10支质控冻干品进行检测，所有瓶内重复性检测结果的变异系数CV（%）值应不大于10%。
2.12稳定性2.12.1效期稳定性试剂盒按要求在2℃～8℃放置，有效期12个月，取效期末的试剂盒进行检测，各项指标仍符合2.4～2.8的要求。
2.12.2质控品复溶稳定性质控品溶解后置2℃～8℃保存14天后，取质控品进行检测，结果应符合2.10、2.11的要求。
脂多糖和（1，3）-β-D 葡聚糖与克罗恩病疾病活动度的关系
脂多糖和（1，3）-β-D 葡聚糖与克罗恩病疾病活动度的关系郭艳敏;刘占举【摘要】背景：脂多糖（LPS）和（1，3）-β-D 葡聚糖（BG）可激活肠道内免疫细胞产生炎性介质，可能参与克罗恩病（CD）的发生过程。
目的：探讨 LPS 和BG 与 CD 疾病活动度的关系。
方法：纳入2013年4月-2014年7月上海市第十人民医院收治的 CD 患者68例，其中活动期 CD（A-CD 组）41例，缓解期 CD （R-CD 组）27例。
同时纳入20名健康志愿者作为对照组。
采用克罗恩病活动指数（CDAI）和克罗恩病简化内镜活动度评分（SES-CD）分别判定 CD 疾病严重程度和内镜下疾病活动度。
检测入选者血清 LPS、BG、ESR、CRP 水平，并进行相关性分析。
结果：A-CD 组患者血清 LPS 和 BG 水平显著高于 R-CD 组和对照组（P 均<0.05）。
R-CD 组血清 LPS 和 BG 水平与对照组相比差异无统计学意义（P 均>0.05）。
LPS 和 BG 水平与 CDAI、SES-CD、ESR 呈正相关（ P 均<0.05），与 CRP 无相关性（ P均>0.05）。
结论：血清 LPS 和 BG 可作为评判CD 疾病活动度和内镜下黏膜病变程度的指标。
%Background:Lipopolysaccharide( LPS)and(1,3)-β-D glucan( BG)are involved in the process of Crohn’s disease(CD)by activating immune cells in gut to produce inflammatory cytokines. Aims:To investigate the relationship between LPS,BG and disease activity of CD. Methods:Sixty-eight patients with CD from April 2013 to July 2014 at Shanghai Tenth People’s Hospital were enrolled,of them 41 cases were active-CD( A-CD group)and 27 cases were remission-CD(R-CD group). Twenty healthy subjects were served as normal controls. Crohn’s disease activity index (CDAI)and simple endoscopic score for Crohn’s disease(SES-CD)wereused to assess the disease activity and severity. Serum levels of LPS,BG,ESR and CRP were determined,and their relationships were analyzed. Results:Serum levels of LPS and BG in A-CD group were significantly higher than those in R-CD and control groups(P all < 0. 05). No significant differences in serum levels of LPS and BG were found between R-CD and control groups(P all > 0. 05). Levels of LPS and BG were positively correlated with CDAI,SES-CD and ESR(P all < 0. 05),but was not correlated with CRP(P all >0. 05). Conclusions:Serum levels of LPS and BG can be used to assess the disease activity and severity of endoscopic mucosal lesions in CD.【期刊名称】《胃肠病学》【年(卷),期】2015(000)007【总页数】4页(P407-410)【关键词】Crohn病;内毒素类;β葡聚糖类;疾病活动度【作者】郭艳敏;刘占举【作者单位】上海市第十人民医院消化内科 200072;上海市第十人民医院消化内科 200072【正文语种】中文炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)是一种慢性复发性非特异性肠道炎性疾病，包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn’sdisease，CD)，其病因和发病机制目前尚未明确，可能与肠黏膜免疫调节异常、肠道持续感染、肠黏膜屏障破坏、遗传和环境因素等密切相关［1-2］。
脂多糖——针对革兰阴性菌的药物靶标
脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是所有革兰阴性细菌外膜的主要组成部分,维持了细菌的结构完整性,并保护细菌膜免受某些化学物质的攻击。
LPS被称为内毒素,是革兰阴性菌主要致病成分,可引起强烈免疫反应,导致几乎所有的真核细胞发生形态、代谢和基因表达变化,刺激宿主细胞因子失控性表达,发生严重感染。
败血症就是由LPS引发的重要疾病之一,败血症发作时,患者体内LPS浓度将极大提高,以至于身体出现灾难性的炎症反应。
大量实验证实,LPS、LPS结合蛋白(lipopo-lysaccharide-bindingprotein,LBP)和LPS受体系统参与了炎症反应的病理生理过,且LBP/LPS受体是体内增敏LPS细胞效应的重要系统。
本文将LPS 及LPS介导的信号通路中主要相关蛋白及受体的研究现状作一概述。
革兰阴性细菌LPS由三部分组成,是O-特异多糖(O-Antigen),由长度特定的重复单位首尾相连形成不同聚合度的聚合物,因细菌不同而存在差异,且通常具有良好的抗原性,又称之为“O-抗原”；是核心多糖,由庚糖、半乳糖、２-酮基-3-脱氧辛酸(KDO)组成,所有革兰阴性菌都含有这种(在细菌种间略有差异)组分；是类脂A(lipidA),所有革兰阴性菌的类脂A 结构基本相似,也是其产生“毒性”的物质基础。
对缺乏O-特异多糖仅由类脂A 与核心多糖组成的LPS称为粗糙型LPS,即Rough-LPS(R-LPS),相反含有一定数量O-特异多糖的LPS 称为光滑型LPS,即Smooth-LPS(Ｓ-LPS)。
e.colilll来源的LPS对人巨噬细胞会产生不同的效应,表现在R-LPS和Ｓ-LPS具有不同的生物学活性；在体外,R-LPS激活人巨噬细胞先天性免疫应答更占优势。
类脂A 是LPS的疏水性基团,可以将亲水性的核心多糖和O-抗原黏附在革兰阴性细菌外表面构成完整的细胞外膜。
另外,类脂A 也是LPS的活性成分,其结构在同一细菌的不同菌株之间比较保守。
脂多糖小鼠实验报告
一、实验背景脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁的一种成分，能够诱导宿主免疫系统产生炎症反应。
在动物实验中，LPS常被用作模拟感染性炎症反应的诱导剂。
本研究旨在探讨LPS对小鼠的影响，并通过观察小鼠的生理和病理变化，分析LPS诱导的炎症反应及其潜在机制。
二、实验材料与方法1. 实验动物选用健康、清洁级昆明小鼠36只，体重18-22g，雌雄各半，随机分为3组：对照组、LPS处理组和LPS+抗生素处理组。
2. 实验方法（1）LPS处理：将LPS溶于生理盐水中，以10mg/kg剂量对小鼠进行腹腔注射。
（2）抗生素处理：LPS处理24小时后，对LPS+抗生素处理组小鼠进行抗生素（如头孢曲松）腹腔注射，以抑制细菌感染。
（3）观察指标：① 生理指标：记录小鼠注射LPS后24小时、48小时和72小时的体重、体温和心率。
② 病理指标：处死小鼠后，取肝脏、脾脏、肺脏和肾脏等组织，观察组织病理学变化。
③ 免疫学指标：检测小鼠血清中炎症因子（如IL-6、TNF-α）和免疫球蛋白（如IgG、IgM、IgA）水平。
三、实验结果1. 生理指标与对照组相比，LPS处理组小鼠注射LPS后24小时、48小时和72小时的体重、体温和心率均显著升高（P<0.05），表明LPS诱导的小鼠出现明显的炎症反应。
LPS+抗生素处理组小鼠的生理指标与LPS处理组相比，差异无显著性（P>0.05）。
2. 病理指标LPS处理组小鼠肝脏、脾脏、肺脏和肾脏组织出现明显的炎症反应，表现为组织充血、水肿和炎症细胞浸润。
LPS+抗生素处理组小鼠的组织病理学变化与LPS处理组相比，差异无显著性（P>0.05）。
3. 免疫学指标LPS处理组小鼠血清中IL-6、TNF-α、IgG、IgM和IgA水平均显著升高（P<0.05），表明LPS诱导的小鼠出现明显的炎症反应和免疫激活。
LPS+抗生素处理组小鼠的免疫学指标与LPS处理组相比，差异无显著性（P>0.05）。
内毒素去除试剂盒说明书
内毒素去除试剂盒说明书I. DESCRIPTION细菌内毒素(脂多糖，LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。
人们在研究革兰氏阴性菌血症和内毒素血症的过程中，发现细菌内毒素在其中起着关键的作用，内毒素使机体免疫功能严重受损，进一步的发展可能引发脓毒性休克，弥散性血管内凝血，急性呼吸窘迫综合症，全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭。
因此，内毒素的去除对于人类疾病治疗的注射型药品、生物制品等都是必须的，尤其对于基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、治疗性疫苗、小分子化学药物等生物制品的下游纯化处理来说就显得非常重要。
本试剂盒使用的是一类高效内毒素去除树脂，它以修饰过的多粘菌素B（PMB）为配体，进行特异性的内毒素去除。
经此亲和树脂纯化，样品最终的内毒素水平可低于0.1 EU/ml。
亲和树脂的主要特性如下表：规格 1.5 ml预装柱结合能力高达2,000,000 EU/ml 树脂配基修饰的多粘菌素B (PMB)pH 范围pH 5-10基质4% 交联的琼脂糖凝胶颗粒大小90 µm保存温度2°C-8°C使用寿命18个月平衡缓冲液磷酸盐缓冲液，pH 8.0适合纯化对象蛋白，多肽，抗体，多糖等离子条件0.1-0.5 M NaCl可耐受试剂20% DMSO, 20% 乙醇, 20% 甘油;1 M 尿素, 300 mM 咪唑; 0.05% 吐温-20, 10 mM DTT 等II. KEY FEATURES·高稳定性，高去除效率·高结合力：> 2, 000, 000 EU / ml (CV)·无需恒流泵即可调节流速·重复使用5次不会改变柱子效果·使用方便，试剂盒中提供无热源缓冲液，无热源收集管，无热源枪头等III. CONTENTS试剂盒内容 3 – 5个测试亲和树脂 1.5 ml 预装柱再生缓冲液125 ml平衡缓冲液125 ml流速控制器1个无热源接收管 1 包(3个/包)无热源枪头(1 ml) 2包(6个/包) 说明书1份IV. MATERIALS AND EQUIPMENT NEEDED BUT NOT PROVIDED1. 铁架台2. 0.1 M的氢氧化钠和0.1M盐酸, 用于调节样品pH值V. ENDOTOXIN REMOVAL PROTOCOL样品处理：样品的pH值和离子强度在内毒素去除的过程中起着重要作用。
lps检测试剂盒原理
lps检测试剂盒原理LPS检测试剂盒是一种用于检测细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）的试剂盒。
LPS是一种存在于革兰氏阴性细菌细胞外膜上的重要成分，具有很强的内毒素活性，能够引发机体炎症反应。
因此，LPS检测对于食品安全、临床诊断以及生物技术研究等领域具有重要意义。
随着生物技术和基因工程的飞速发展，人们对于LPS的检测需求日益增加。
传统的LPS检测方法包括涂片法、酚-硫酸法、玫瑰洋菜凝胶法等，但这些方法存在操作繁琐、效率低下、需要特殊仪器和试剂等问题。
LPS检测试剂盒则通过一种简便、高效的方法来检测LPS的存在和含量。
其原理主要基于抗原抗体反应的特性。
具体而言，LPS检测试剂盒利用两个抗体：一种被标记的LPS特异性抗体和一种被固定在试剂盒表面的另一种LPS特异性抗体。
首先，待检样品中的LPS与被标记抗体发生特异性结合。
被标记抗体通常会被染色物或荧光标记，以便于后续的检测和测量。
接着，将试剂盒上的LPS特异性抗体与样品中的LPS结合，形成固定相和标记相的LPS结合物。
随后，通过一系列的洗涤步骤，将未结合抗体和其他杂质去除，只留下固定相和标记相的LPS结合物。
最后，通过添加适当的底物，标记相的抗体产生可测量的信号。
这个信号可以是染色物的颜色深浅，或者荧光的强度等。
通过检测信号的强度，可以确定样品中LPS的含量。
LPS检测试剂盒具有快速、高灵敏度、高选择性和高通量等优点。
与传统方法相比，它不需要复杂的仪器和试剂，操作简便，适用于各种细菌样品和复杂矩阵。
同时，由于试剂盒是一次性使用的，避免了交叉污染的风险。
此外，LPS检测试剂盒还可以根据需要进行不同的改进和优化。
例如，可以修改抗体的特异性和亲和力，提高试剂盒的灵敏度。
也可以引入自动化的仪器和处理流程，使LPS检测更加高效和标准化。
总而言之，LPS检测试剂盒通过抗原抗体反应原理，快速且准确地检测样品中的LPS含量。
其简便的操作和高灵敏度使其成为广泛应用于食品安全、临床诊断和生物技术研究等领域的重要工具。
革兰氏阴性菌脂多糖检测操作SOP文件
细菌内毒素脂多糖（LPS）测定规范操作1.目的建立细菌内毒素脂多糖（以下简称内毒素）检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。
2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。
3.实验原理内毒素检测原理：细菌内毒素脂多糖（LPS）激活酶反应主剂中的C因子，活化的C因子再激活B因子后形成凝固蛋白，根据其所引起的浊度变化对脂多糖浓度进行定量测定。
4．产品性能指标4.1 灵敏度5pg/ml4.2 精密度批间CV≤10% 。
4.3 准确性回收率75-125%。
4.4 标准曲线相关系数r绝对值≥0.980。
5．实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪，20~200µl加样器、100~1000µl加样器、旋涡混合器、定时器。
5.2实验耗材：200µl无热原吸头、1000µl无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。
5.3试剂盒组成：革兰阴性菌脂多糖检测试剂盒（光度法）：试剂盒包括反应主剂和样品处理液。
6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。
7．标本采集及保存7. 1检测样本：血液、脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液等。
7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。
常规病人早上用药治疗前采血/取样（血透患者透析前采血）。
7.3样本保存：样本采集后应在3000转/分进行离心，若不能及时检测，应将血浆转移至无热原转移管内，在-20℃冰箱中冷冻保存，一周内使用。
8．操作程序8.1 打开MB-80微生物快速动态检测系统主机、电脑及恒温仪预热30min。
8.2 打开MB-80微生物快速动态检测系统软件，录入病人信息、样本种类及检测项目等信息后点击采集。
8.3 血液前处理过程，无菌操作，用专用无热原真空采血管（肝素类抗凝）抽取静脉血4ml轻轻混匀，按转速3000r/min进行离心1分钟，得到富含血小板血浆。
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革兰阴性菌脂多糖质控品
适用范围：与本公司生产的革兰阴性菌脂多糖检测试剂盒配套使用，用于革兰阴性菌脂多糖检测项目的室内质量控制。
1.1 产品规格：
16测试/盒
1.2 划分说明
本公司产品16测试/盒是根据试剂盒内质控品的数量和可测试的数量而定，每盒共4支质控品，每支质控品复溶后可以测试4次。
1.3 主要组成成分
目标靶点浓度范围：58-152pg/mL；复溶体积和质控范围见外包装盒；不同批号试剂盒中各组分不可以互换。
2.1 外观
包装盒完整无破损，试剂盒内各组分无破损、渗透；盒上印刷的标识以及瓶签、盒签上的字迹清晰完整，易识别；质控冻干品为淡黄色至白色冻干品，质控溶解液为无色透明液体。
2.2 装量
试剂盒的液体试剂净含量应不低于标示值。
2.3 质控品赋值有效性
检测结果应在质控范围内。
2.4 均一性
检测结果的变异系数CV（%）值应不大于15%。
2.5 稳定性
试剂盒2-8℃储存有效期36个月，贮存期末的分析性能应符合2.3-2.4的要求。