Y染色体微缺失检测
Y染色体微缺失
好的解释发病原因，提供遗传咨询和指导临床诊疗。
• 1996年将 AZF区划分为 3个区:AZFa、AZFb、 AZFc。1999 年研究发现在 AZFb 和 AZFc 间存在AZFd。研究发现 ,在 Y染色体 AZFa、 AZFb、 AZFc3个区至少发现 15 个与精子发生相关的基因，AZFd区尚未发现相关基因。
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四 Ｙ 染色体微缺失的检测方法
• 选择位于 Y染色体短臂 ( Y p ) 的睾丸决定基因( S RY ) 和锌 指蛋白基因( Z F X ／ Z F Y ) 为对照。Z F X ／ Z F Y既存在于 x染色体短臂， 也存在于 Y p ， 其与 S R Y一起构成2个 目 前推荐使用 的参照基因。每个 A Z F区域至少设置2个 S T S 位点 才能正确有效.
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二 Y染色体微缺失相关基因
• AZFa缺失的病人 , 主要表现为唯支持细胞综 合征伴睾丸体积缩小 ,无精子生成
• AZFb缺失的病人主要表现为生精过程阻滞 在精母细胞阶段 ,无精子生成
• AZFc区缺失病人表现多样化 ,会出现无精子 症和少精子症的不同临床表现
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二 Y染色体微缺失相关基因
• AZFa缺失患者 33%为严重少精子,67%表现为 无精子
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四 Ｙ 染色体微缺失的检测方法
• 由于不 同实验室采用 P C R方法不 同,导致 实验结果各异。为提高诊断质量， 欧洲男 科协 会( E A A ) 和欧洲分子遗传实验质控网 ( E MQ N) 在 1 9 9 9 、 2 0 0 4年先后颁布了 第 1版和第 2版 Y染色体 微缺失分子诊断指 南， 规范了检测微缺失时的Y 染色体序列 标签点( s e q u e n c e t a r g e t e d s i t e s ， S T S ) 与 所采用的内外对照方法。
Y 染色体微缺失快速检测系统 说明书
Y染色体微缺失快速检测系统说明书 ２５人份／盒z概述本试剂盒用于快速检测人（男性）Y染色体AZF座位（Azoospermia Factor）的缺失。
多项研究发现，AZF基因家族共有AZFa、AZFb、AZFc三个座位（在AZFb与AZFc之间还存在AZFd座位，中等程度的少精和精子数目正常却形态异常多会与该区域的缺失有关），其中任何一个座位的微缺失都可导致生精障碍。
本试剂盒共设计15对引物和一对内控（内部质量控制）引物，利用PCR（Polymerase Chain Reaction）技术可从Y染色体上特异性扩增出15条非多态性短片段的序列标签位点（Sequence Tagged Sites，STS）和一条内控基因片段。
这些引物对分别组合成4套多重PCR系统，在相同条件下，进行4管PCR扩增反应，通过电泳结果判定15个序列标签位点（STS）的存在与否。
主要特点：1.可对15个STS序列标签位点进行检测，这15个位点覆盖了所有的AZF区域，其中AZFa有3个位点，AZFd有2个，AZFb有6个，AZFc 有4个位点；2.高特异引物确保结果的可靠性，并具有内控（内部质量控制）基因片断的检测；3.独特的防污染设计，有效避免假阳性的产生；4.符合并超过欧洲生殖学会推荐的检测标准。
应用：胞质内单精子注射（ICSI）技术辅助生育治疗前的检测、少精症与无精症男性患者遗传学检测、精子库的入库前筛查等。
z试剂盒组成组成成分数量保存条件PCR反应液Ⅰ（紫色） 25管(每管14μL ) -20℃PCR反应液Ⅱ（无色） 25管(每管14μL) -20℃PCR反应液Ⅲ（蓝色） 25管(每管14μL) -20℃PCR反应液Ⅳ（黄色） 25管(每管14μL) -20℃纯水z有效期六个月z需自备的仪器及试剂PCR仪（推荐使用PTC-100或PTC-200, M J Research Co.或其它国际知名品牌PCR仪）DNA电泳系统z操作步骤1.基因组DNA的获取使用本公司全血DNA快速提取试剂盒从抗凝全血中抽提人（男性）基因组DNA，按操作说明进行。
Y染色体微缺失检测指导
Y染色体微缺失检测指导内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）Y染色体微缺失是严重少精子或无精子症的重要原因，是导致男性不育的第二大遗传因素，其发生率仅次于Klinefelter综合征(克氏综合征)。
从1999年开始，欧洲男科学协会和欧洲分子遗传实验质控网(EAA/EMQN)为提高诊断质量，出版了Y 染色体微缺失分子诊断指南，并提供了客观的实验质量评价方法。
最新版的实验室指南是2013年9月EAA/EMQN根据12年的临床积累和专家共识，在1999版和2004版的基础上修订而成。
新指南重点阐明：在少精子症或无精子症男性中发现的Y染色体微缺失区域，主要是无精子因子(azoospermia factor，AZF)区域仅包含AZFa、AZFb、AZFbc、AZFc和AZFabc区，独立的AZFd区并不存在；AZFc区中gr/gr缺失是影响精子生成的一个危险因素，但临床意义尚存争议，不作为常规检查指标；检测位点增加并不能提高检测灵敏度，反而可能使结果复杂化；基于两管多重PCR的检测方法仍适用于整个AZF缺失检测。
EAA/EMQN 12年国际质量评估计划(EQA计划)的实施表明，参与实验室通过规范实验操作，改善报告质量，可有效降低诊断错误率。
Y染色体微缺失在中国不育男性中的发生频率为%，处于较高水平，我们建议将AZF检测作为男性严重少精子或无精子症的常规检测项目，呼吁国内AZF检测实验室加入EQA计划，完善中国Y染色体微缺失检测实验操作规范。
Y染色体微缺失分子检测在中国已开展多年，国内专家对AZF缺失模式、检测序列标签位点(sequence–tagged site, STS)的数量、检测方法和内部质量控制等临床问题未达成共识。
各实验室的诊断操作方法有很大不同，导致不准确或错误诊断时有发生，迫切需要建立Y染色体微缺失诊断标准和质量控制标准。
EAA/EMQN更新的2013版指南对以上问题都给出了明确的专家共识，对我国建立自己的检测指南有重要的指导意义。
多重PCR法检测Y染色体微缺失
婆堕匿望 壁 ２０ ０７年４ 第 ２ 卷 第 ２ 月 ５ 期
・
论 著・
多重 Ｐ Ｒ法检测 Ｙ染色体微缺 失 Ｃ
林美珊 １ 郑宇琼 张伶俐 １ 陈林兴 １ 林广玲 ・ 中图分类号 Ｒ ９ ．３ ３２ ３４Ｑ ４ ． 文献标识码 Ａ 文章编号 １０ － ０ ３２０ ）２ ０ １－ ３ ０ ８ｏ ２（０ ７ － １１ ｏ ０
【 ｂ ｔａ ｔ Ｏｂｅ ｔ ｅ ｏｓ ｄ ｅｄａｎ ｓ ａ ｅｏ ｈｏ ｏｍ ｉ ｏ ｅ ｔ ｎ Ａ ｓｒｃ】 ｊｃｉ Ｔ ｔ ｙｔ ｉｇｏｉ ｖ］ ｎＹ ｃ ｒｍ ｓ ａ ｍ ｃ ｄ ｌ ｉ ｓ ｖ ｕ ｈ ｓ ｕ ｌ ｒ ｅｏ
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Y染色体微缺失检测试剂盒
Y染色体微缺失背景
根据国际卫生组织调查数据，约15%育龄夫妇存在生育障 碍，其中男性因素引起的生育障碍约占一半。
在已知的导致男性不育的遗传学因素中，发病率最高的 两种是Y染色体的微缺失和克氏综合症。
Y染色体微缺失在无精症或少精症患者中发病率在10-15%， 已成为男性不育患者的常规检查项目。
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Y染色体微缺失检测
营销部诊断组
市场容量
本产品目前在国内拥有巨大的市场，是检测数量最多的遗传病之一。 近20年来我国不孕不育人群从育龄人口的3%左右升至12.5%，这一比 例还可能持续扩大，因此对Y微缺失的检测具有重要的应用前景。
我国目前有4000万不孕不育的育龄人口，这其中由于Y微缺失导致的 占100万左右，按每人份试剂价格150元计算，市场总份额1.5亿元。 在实际的医院检测中，相当一部分疑似患者都被推荐做Y微缺失检测， 因此实际市场容量更大。构在维持Y染色体 进化稳定性的同时也使回文结构内部基因易于丢失，进而导致不育。
缺失率最高的三个影响精子发生的区域被命名为 AZFa，AZFb和AZFc， 它们之中任何一个出现缺失都有可能导致育性下降或不育。
应用领域
无精症、少精子症患者病因排查； 男性不育症患者选择体外受精（IVF）或单精子卵泡浆内注射（ICSI）
其他公司检测结果
透景检测结果 亚能检测结果
阅微检测结果
阅微-del检测结果
阅微-easy检测结果
市场合作
合作方式
购买试剂：技术平台建立全程指导，24小时内反应处理技术问题 送样检测：3个工作日内完成检测，高精度结果保障
典型客户
东方医疗集团菁华医院、解放军202医院、安徽省计划生育研究所、黑龙江 省计划生育研究所、解放军海军总医院、聊城市人民医院
Y染色体微缺失检测结果的分析
（ ６ ９ ／ ３ ７ １ ２ ） ， Ａ ｚ Ｆ ｂ ５ ． ２ ８ ％（ １ ９ ６ ／ ３ ７ １ ２ ） ， Ａ ｚ Ｆ ｃ ９ ． ５ ６ ％（ ３ ５ ５ ／ ３ ７ １ ２ ） ， Ａ ｚ Ｆ ｄ ９ ． ８ ６ ％ （ ３ ６ ６ ／ ３ ７ １ ２ ） ．Ａ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ １ ９ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ
（ Ｆ ａ ｍ ｉ ｌ ｙ Ｐ ｌ ａ ｎ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｌ ａ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ 。 Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ５ １ ０ ６ ０ ０， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
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摘要 ： 目的 探讨 Ｙ染色体 微缺失类型及其临床意义。方法 回顾分析我 院门诊 不育症男性 Ｙ染色体微缺 失 （ Ａ Ｚ Ｆ ） １ ５个基 因位 点的检 测结 果。结果 ３ ７ １ ２例 Ａ Ｚ Ｆ基 因检 测 结果 显示 ， Ａ Ｚ Ｆ总的缺 失 率 为 １ ０ ． ９ １ ％， Ａ Ｚ Ｆ ａ 、 Ａ Ｚ Ｆ ｂ 、 Ａ Ｚ Ｆ ｃ 、 Ａ Ｚ Ｆ ｄ的缺 失率分别为 １ ． ８ ６ ％（ ６ ９ ／ ３ ７ １ ２ ） 、 ５ ． ２ ８ ％（ １ ９ ６ ／ ３ ７ １ ２ ） 、 ９ ． ５ ６ ％（ ３ ５ ５ ／ ３ ７ １ ２ ） 、 Ａ Ｚ Ｆ ｄ ９ ． ８ ６ ％（ ３ ６ ６ ／ ３ ７ １ ２ ） 。共发现 １ ９种不 同的缺失类型 ， 最 常见三种缺 失类型所 占全 部缺 失类 型的 ８ ４ ． ２ ０ ％， 它们 分别 为： Ｓ Ｙ １ ５ ２＋ Ａ Ｚ Ｆ ｃ缺失 ， ４ ４ ． ４ ４ ％（ １ ８ ０ ／ ４ ０ ５ ） ； Ａ Ｚ Ｆ ｂ＋Ａ Ｚ Ｆ ｃ ＋Ａ Ｚ Ｆ ｄ缺失， ２ ７ ． ４ １ ％（ １ ｌ １ ／ ４ ０ ５ ） ； １ ５个基 因位点全缺 失， １ ２ ． ３ ５ ％（ ５ ０ ／ ４ ０ ５ ） 。结论 Ａ Ｚ Ｆ各 区缺 失 率从高 到低依 次为 ： Ａ ｚ Ｆ ｃ ＞Ａ Ｚ Ｆ ｂ＞Ａ ｚ Ｆ ａ 。Ａ Ｚ Ｆ缺 失 患者 中， Ｓ Ｙ １ ５ ２＋Ａ ｚ Ｆ ｃ 缺 失 的有 ５ ％表现为少精子症， 其余为无精 子症 ； Ａ Ｚ Ｆ ａ 、 Ａ ｚ Ｆ ｂ 有缺 失 的患者 均表现 为无精 子症。Ａ Ｚ Ｆ ｄ的存在 意义及 Ｓ Ｙ １ ５ ２ 的 归属问题有待进 一步探讨 。 关键词 ： Ｙ染色体 ； 微 缺失； 临床 意义
Y染色体微缺失结果判读表
I管（紫色） 条带 STS SRY 产物 座位 472bp / 条带
II管（白色） STS SRY 产物 座位 条带
III管（蓝色） STS SRY 产物 座位 条带
IV管（黄色） STS SRY 产物 472bp / 座位
472bp /
Y染色体微缺失电泳检测结果判读表
产物座标 （bp) 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0 1、正常男性（阳性对照）Y染色体微缺失电泳结果显示15个STS位点无缺失（即：以上的所有条带都应该有。） 2、SRY是内控，4个管中都有，都应该显带，没有显带说明结果存在问题，操作或试剂质量产生问题的可能性都有。 结果解读： 3、如果某管中的某个STS位点未出现（如sY143和sY242)，说明该位点缺失，结果报相应的座位缺失： 如：AZFb+AZFc联合缺失 sY255 126p AZFc sY152 125bp AZFc
472bp /
sY254 400bp AZFc
sY143 310bp AZFb
sY840bp AZFa
sY134 301bp AZFb sY82 264bp /
sY127 274bp AZFb sY242 233bp AZFc sY293 200bp AZFc
sY128 228bp AZFb sY133 177bp AZFb
Y染色体微缺失检测指导
丫染色体微缺失是严重少精子或无精子症的重要原因，是导致男性不育的第二大遗传因素，其发生率仅次于Klinefelter综合征（克氏综合征）。
从1999年开始，欧洲男科学协会和欧洲分子遗传实验质控网（EAA/EMQN为提高诊断质量，出版了丫染色体微缺失分子诊断指南，并提供了客观的实验质量评价方法。
最新版的实验室指南是2013年9月EAA/EMQN根据12年的临床积累和专家共识，在1999版和2004版的基础上修订而成。
新指南重点阐明：在少精子症或无精子症男性中发现的丫染色体微缺失区域，主要是无精子因子（azoospermia factor，AZF）区域仅包含AZFa AZFb AZFbc AZFc和AZFabc区，独立的AZFd区并不存在；AZFc 区中gr/gr 缺失是影响精子生成的一个危险因素，但临床意义尚存争议，不作为常规检查指标；检测位点增加并不能提高检测灵敏度，反而可能使结果复杂化；基于两管多重PCR的检测方法仍适用于整个AZF缺失检测。
EAA/EMQN 12年国际质量评估计划（EQA计划）的实施表明，参与实验室通过规范实验操作，改善报告质量，可有效降低诊断错误率。
丫染色体微缺失在中国不育男性中的发生频率为11.5%，处于较高水平，我们建议将AZF检测作为男性严重少精子或无精子症的常规检测项目，呼吁国内AZF检测实验室加入EQA计划，完善中国丫染色体微缺失检测实验操作规范。
丫染色体微缺失分子检测在中国已开展多年，国内专家对AZF缺失模式、检测序列标签位点（sequenee- tagged site, STS的数量、检测方法和内部质量控制等临床问题未达成共识。
各实验室的诊断操作方法有很大不同，导致不准确或错误诊断时有发生，迫切需要建立丫染色体微缺失诊断标准和质量控制标准。
EAA/EMQN 更新的2013版指南对以上问题都给出了明确的专家共识，对我国建立自己的检测指南有重要的指导意义。
一、丫染色体微缺失发生频率丫染色体微缺失在健康人群中发生率约为1/4 000，但在不育男性中显着升高，微缺失发生频率为2%〜10%（甚至更高）。
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Y染色体微缺失意义与检测
日期：2016-05-21 主讲人：孔祥东
Y染色体上AZF位置示意图 NhomakorabeaY染色体微缺失与男性不育：
• AZFa主导精母细胞的增生，整个AZFa区域缺失通常表 现为唯支持细胞综合征（sertoli cell only syndrome, SCOS），为绝对的无精症。 • AZFb缺失表现为生精阻滞，精子生成被阻滞在精母细 胞阶段，因此睾丸内可见精原细胞和初级精母细胞， 无精子生成。 • AZFc区域缺失导致生精障碍，有一定的精子生成能力， 可通过辅助生育手段进行治疗，但会将此缺失遗传给 后代。 • AZFd区域缺失会导致轻度少精症，以及精子形态学异 常。
检测方法：PCR-荧光探针法
• • • • • 检测位点包括： AZFa : sY84、sY86 AZFb : sY127、sY134 AZFc : sY254、sY255 AZFd : sY145、sY152
• 目前2016年1月至6月份统计结果：
正常 a+b+c+d缺 失 b+c+d 缺失 sY152+c缺 失 C区 缺失 总计（人）