HPLC_MS_MS法测定中药材枳壳中展青霉素_王少敏
LC_MS_MS法同时测定大鼠血浆中贝母素甲_贝母素乙的浓度及其在药代动力学中的
LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中贝母素甲、贝母素乙的浓度及其在药代动力学中的应用陈丽华1, 刘丽丽2, 刘红宁1, 朱卫丰1*, 衣文娇1, 赵益1 (江西中医学院 1. 现代中药制剂教育部重点实验室, 江西南昌 330004; 2. 科技学院, 江西南昌 330025)摘要: 建立同时测定大鼠灌胃及静注给予浙贝母提取物后血浆中贝母素甲及贝母素乙含量的HPLC-MS/MS 分析方法, 并计算2种生物碱在大鼠体内的药代动力学参数。
血浆样品经乙酸乙酯液-液萃取后, 以乙腈-10 mmol·L−1甲酸铵水溶液 (35∶65) 为流动相, Luna C18色谱柱(150 mm × 2 mm ID, 3 µm) 分离, 采用电喷雾离子化源 (ESI) 三重四极杆串联质谱, 以多反应监测模式 (MRM) 进行检测, 检测离子对分别为m/z 432.4 → 414.4 (贝母素甲)、m/z 430.4 → 412.4 (贝母素乙) 和m/z 237.1 → 194.2 (内标, 卡马西平)。
贝母素甲及贝母素乙均在0.8～800 ng·mL−1内呈良好线性关系, 提取回收率分别为94.1%～105.3%和85.8%～98.6%。
方法的精密度、准确度和稳定性均符合要求。
结果显示, 该法选择性强、灵敏度高、操作简便, 适用于贝母素甲、贝母素乙的大鼠药代动力学研究。
关键词: 贝母素甲; 贝母素乙; 浙贝母提取物; 药代动力学; LC-MS/MS; 血浆中图分类号: R917 文献标识码:A 文章编号: 0513-4870 (2010) 07-0891-04Simultaneous determination of peimine and peiminine in rat plasma by LC-MS/MS and its application in the pharmacokinetic studyCHEN Li-hua1, LIU Li-li2, LIU Hong-ning1, ZHU Wei-feng1*, YI Wen-jiao1, ZHAO Yi1(1. Key Laboratory of Modern Preparation of Traditional Chinese Medicine, Ministry of Education, Jiangxi University of TCM,Nanchang 330004, China; 2. Science and Technology College, Jiangxi University of TCM, Nanchang 330025, China)Abstract: To establish an LC-MS/MS method for simultaneous determination of peimine and peiminine in rat plasma after oral and intravenous administration of Fritillaria thunbergii Miq. extract, the pharmacokinetic parameters were calculated as well. Peimine, peiminine and internal standard carbamazepine were extracted from plasma with liquid-liquid extraction by ethyl acetate, then separated on a Luna C l8 column by using acetonitrile- water containing 10 mmol·L−1 ammonium formate (35∶65), as mobile phase. The electrospray ionization (ESI) source was applied and operated in positive ion mode. Peimine was detected at m/z 432.4 → 414.4, peiminine at m/z 430.4 → 412.4 and carbamazepine (IS) at 237.1 → 194.2. The linear calibration curves were obtained at the concentration range of 0.8 − 800 ng·mL−1 for peimine and peiminine. The extraction recoveries were94.1%−105.3% and 85.8%−98.6%, respectively. The precisions, accuracy and stability of the analytes meet therequirements. The method was shown to be effective, convenient, and suitable for simultaneous pharmacokinetic study of peimine and peiminine in rat.Key words: peimine; peiminine; Fritillaria thunbergii Miq.extract; pharmacokinetics; LC-MS/MS; plasma收稿日期: 2009-12-25.基金项目: 江西省自然科学基金资助项目 (2008GZY0115); 江西省教育厅项目 (GJJ09544).*通讯作者 Tel: 86-791-7119011, Fax: 86-791-7118658, E-mail: zwflady@浙贝母为百合科植物浙贝母(Fritillaria thunbergii Miq.)的干燥鳞茎, 具有止咳祛痰、镇痛抗炎等功效[1]。
陈皮青皮和枳壳中黄酮类成分的指纹图谱研究进展
陈皮青皮和枳壳中黄酮类成分的指纹图谱研究进展
邵红霞;代云桃;秦雪梅;张丽增
【期刊名称】《山西医药杂志》
【年(卷),期】2007(036)019
【总页数】3页(P898-900)
【作者】邵红霞;代云桃;秦雪梅;张丽增
【作者单位】山西大学化学化工学院,030006;山西大学化学化工学院,030006;山西大学化学化工学院,030006;山西大学化学化工学院,030006
【正文语种】中文
【相关文献】
1.青皮不同炮制品中黄酮类成分的试验比较 [J], 郑青山
2.不同产地枳实与枳壳中黄酮类成分的含量测定 [J], 王青;袁丹
3.SPE-HPLC-DAD法同时检测柑橘药用资源中黄烷酮类和川陈皮素成分 [J], 谢辉; 陈亚; 雷爱玲; 朱春燕; 李杨梅; 白玉婷; 孙鹏; 李贵节
4.不同年份陈皮指纹图谱及黄酮类成分含量测定 [J], 周洁;黄海龙;余虹;高慧;李晶;叶喜德
5.不同方法提取陈皮中黄酮类有效成分含量比较 [J], 张婷婷;梁燕;彭灿
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HPLC-PDA法测定枳术颗粒中柚皮苷的含量
４￣。柚 皮苷 峰理论 塔板 数不 低 于 ３ ０ ， 相邻 峰 的分 离度 大 于 ０ Ｃ ０ ０与
１５。 ．
表 ４ 柚皮苷的加样回收率（＝ ｎ ５ Ｊ
３ 溶液 的配备
３１ 照品溶液 的制备 ： 密称 取柚 皮苷 对 照 品适量 ， 流动 相 制 ．对 精 加 成 每 ｌｌ ７ １ 的溶 液 ， ｍ含 ０ｇ ｘ 即得 。 ３ ． 品溶 液制 备 ： 枳 术颗 粒 粉 末 约 １ ｇ过 ４ 目 ）精 密称 ２样 取 ．（ Ｏ 筛 ， ０ 定 ， 于 １０ Ｌ锥 形 瓶 中 ， 置 ５ｍ 精密 加 入 ５ｍ ０ Ｌ流 动 相 ， 塞 ， 定 重 密 称 量， 超声处 理 （ 功率 ２０ ， 率 ５ Ｋ ｚ３ ５Ｗ 频 ０ Ｈ ）０分钟 ， 出 ， 冷 ， 取 放 再称 定 重量 ， 流动相 补足减 失 的重量 ， 匀 ， 过 ， 滤液 ， 。 用 摇 滤 取续 即得 ７ 样品 含量侧 定 ４ 干扰 性试 验 取枳 术颗 粒 粉末 （ 号 为 ２ １０ １、０ １０ １、０ １０ １） 批 ００ ３ １２０ ０３３ ２０ ０３５ ， 按处方比例及样品制备方法，制备不含炒枳实的阴性样品 ， 约 １ ｇ ３份 ， ． 各 ｏ 精密 称 定 ， “．” 按 ３ 方法 提 取测 定 ， 果见 表 ５ 图 ２ 结 ， 按 “． 项 下 的方法 制 备 阴性 样 品溶 液 ， 果 见 （ １ ｃ ， 明 阴 见 图 １ ｂ ３” ２ 结 图 一 ）表 －。 性无 干扰 。 表 ５ 样 品 含 量 测 定 结 果 （ ｇ袋 ｎ ３） ｍ／ ＝ ５ 线性关 系考察 精 密称取 柚皮 苷对 照 品 ８ ５ ｇ置 ２ ｍ 容 量瓶 中 ， 甲醇溶 ． ｍ ， ５ｌ ７ 加 解并 稀释 至刻 度 ，得对 照 品贮 备 液 ；分 别 精 密 吸 取上 述 贮备 液 ０ 、． ５ … ５ １． ｌ于 ２ Ｉ 容 量 瓶 中 ， 流 动相 稀 释至刻 度 ， ． ２ 、． ７ ０ ｍ ， ５ ｌ ５ ５ ０ ０ ｎ 加 摇匀 ， 制得标 准溶液 系列 ， １１ 进样 ， 取 ０ｌ ｘ 测定 。 谱 图见附 图 ｌａ 色 —。 以对 照 品浓度 对 峰面 积平 均 值 作 图 ， 果 经 回归 分 析 ， 皮苷 在 结 柚 ７ １０ ｇ ｌ 围 内 有 良 好 的 线 性 关 系 ， 回 归 方 程 为 Ｙ＝ ～４ １／ 范 ｘｍ
LC_MS_MS法同时测定不同产地半枝莲中野黄芩苷和芹菜素含量
标准曲线 , 计算得野黄芩苷、 芹菜素回归方程分别为 : Y = 3 567 X + 54 96! r = 0 9953 Y = 4 469 X + 34 54! r = 0 9951 结果表明 , 野黄 芩苷进样 浓度在 2 6 ~ 72 7 m g - 1 -1 L , 芹菜素进样浓度在 2 3~ 63 8 m g L 范围内 线性关系良好。
药 物分析杂志 Ch in J Phar m Ana l 2009, 29( 9)
1451
LC- M S/M S法同时测定不同产地半枝莲中野黄芩苷和芹菜素含量
焦燕, 王英锋 , 刘锁兰
( 首都师范大学分析测试中心 , 北京 100048) 摘要 目的 : 采用液相色谱 - 二级质谱联用 法 ( LC- M S /M S) 对不同 产地半 枝莲药 材中的野 黄芩苷 和芹菜 素进行 含量测 定。 4 6 mm, 5 m ) , 流动相为乙腈 - 0 1 % 醋酸 , 梯度洗脱 , 流速 1 mL m in- 1 , 测定 波长 335 L- 1范围内线性关系良好 ; 所测 12 个产地半枝 莲中 , 野 黄芩苷和
*
方法 : 采用 D iscov ery C18 柱 ( 250 mm 苷浓度在 2 6~ 72 7 mg
nm, 采用电喷雾负模式电离 ( ES I ) , 选定的母离子和子离子分别为野黄芩 苷 m / z 461 /285, 芹菜素 m /z 269/117。 结果 : 野黄芩
L- 1, 芹菜素浓度在 2 3~ 63 8 mg
芹菜素的含量范围分 别为 0 03 % ~ 0 39% 和 0 02 % ~ 0 30% ; 平均回收率 ( n = 5) 分别为 99 1% 和 97 3% , RSD 分别为 1 4 % 和 0 7% 。 结论 : 本方法简单准确 , 适合于半枝莲中野黄芩苷和芹菜素的含量测定。 关键词 : 半枝莲 ; 野黄芩苷 ; 芹菜素 ; 液相 色谱 - 二级质谱联用法 中图分类号 : R 917 文献标识码 : A 文章编号 : 0254- 1793( 2009) 09- 1451- 03
江枳壳不同采收期活性成分HPLC含量测定_李正红
苷、水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏、川陈皮素、桔 皮素和葡萄内酯对照品（ 自制，1 H-NMR、13 C-NMR 、
ESI-MS 鉴定，质量分数采用 HPLC 峰面积归一化法
计算不低于 98. 0% ） 。聚酰胺（ 60 ～ 90 目，浙江省
台州市路桥四甲生化塑料厂） ，乙腈（ Tedia 产，色谱
鉴别［J］. 中药材，2010，33（ 10） ： 1556-1560. ［4］ 任朝琴，袁玮，刘圆 . 5 种千斤拔不同药用部位及 3 种不
同产地中浸出物的含量测定［J］. 中国实验方 剂 学 杂 志，2009，15（ 3） ： 6-7. ［5］ 管燕红，李海涛，马洁，等． 宽叶千斤拔生药学初步研究 ［J］. 时珍国医国药，2010，21（ 12） ： 3269-3270. ［6］ 梅全喜 . 广东地产药材研究［M］. 广州： 广东科技出版 社，2011： 104-106. ［7］ 严辉，段金廒，钱大玮，等 . 不同产地当归药材及其土壤 无机元素的关联分析与探讨［J］. 中药材，2011，34（ 4） ： 512-516. ［8］ 蒋海峰，欧阳臻，宿树兰，等 . 基于主成分分析和相似度 分析的乳 香 药 材 质 量 评 价 研 究［J］. 中 药 材，2011，34 （ 6） ： 904-911.
纯） ，甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分
析纯。枳壳药材分别采集于江西省新干县三湖镇和
江西省樟树市吴城乡，2011 年夏季采集，采集日期
见表 1，经江西中医学院杨武亮教授鉴定为芸香科
植物酸橙 Citrus aurantium L. 的干燥未成熟果实。
表1
江西新干和樟树枳壳采收日期
编号 产地 采收日期 产地 采收日期
图 1 枳壳中黄酮苷类含量测定 HPLC 图 A. 对照品 B. 枳壳样品 1. 柚皮苷 2. 新橙皮苷
HPLC法测定枳术颗粒中枳实的5种黄酮类物质
柚皮苷（ 批号 ： １ １ ０ ７ ０ ３ — ２ ０ ０ ７ ２ ６ ） 、 橙皮 苷 （ 批号 ： １ １ ０ ７ ０ ４ — ２ ０ ０ ９ ２ １ ） 、 新橙皮苷对照品 （ 批号 ： １ １ ０ ７ ４ ５ — ２ ０ ０ ６ １ ７ ） 均 由中 国药 品生 物 制 品 检 定 所 提 供 ； 柚 皮
ｒ ２ ＝０ ９ ９ ９ ４ ：柚 皮 素 在
．
３ ． ０ １ ５ ￣ ７ ２ ． ３ ７ ８ Ｉ ｘ ｇ范 围 内呈 良好 线性 关 系 ，相 关 系数 ， ２ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ７ ；橙 皮 素 在
２ ． ８ ６ ８ ￣ ６ ８ ． ８ ５ ｇ范 围 内呈 良好 线 性 关 系 ，相 关 系数 ｒ ２ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ０ ； ５个 成 分 的 平 均 回 收 率 分 别 为
１ 材
料
１ ． １ 仪器
类成 分 ， 此类 成 分具 有 抑制 肠平 滑 肌 收缩 等药 理作
用［ ２ １ ． 是 与 枳 术 颗 粒 治疗 病 症 相 对 应 的 、 功 效 相 适 应 的有效 成 分 ， 可作 为 枳术 颗 粒含 量控 制 成分 。本 文 在 同一 色谱 条件 下测 定 枳术 颗 粒 中的柚 皮 苷 、 橙 皮苷 、 新橙皮苷 、 柚 皮 素 和橙 皮 素 含 量 ， 能 够 较 全
ＡＢ ＳＴＲＡＣＴ Ｅ ｌ ｅ ｖ ｅ ｎ ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｕ ｎ ｄ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｔ ｈ ｅ ７ ５ ％ ｅ ｔ ｈ ａ ｍｏ ｌ ａ ｌ ｃ ｏ ｈ ｏ ｌ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｗｈ ｏ ｌ ｅ ｐ ｌ ａ ｎ ｔ ｏ ｆ
中图分类 号 Ｒ ９ ２ ７ ． ２ 文献标 志码 Ａ 文章 编号 １ ６ ７ ３ — ７ ８ ０ ６ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ３ — ２ ３ ２ — ０ ３
枳壳药材挥发油的GC—MS指纹图谱研究
枳壳药材挥发油的GC—MS指纹图谱研究目的：建立枳壳药材挥发油的气相色谱-质谱（GC-MS）指纹图谱。
方法：采用GC-MS法，色谱柱为RTX-5MS毛细管柱，进样口温度为250 ℃，载气为高纯氦气（≥99.999%），流速为1.0 mL/min，分流比为10 ∶1，进样量为1 μL （程序升温）；采用电子轰击离子源，离子源温度为230 ℃，检测器温度为250 ℃，溶剂延迟时间为3 min，扫描范围为m/z 35～550。
以月桂烯为参照，测定21批药材挥发油样品的GC-MS图谱，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2004 A版）进行相似度评价，确定共有峰，采用LC Solution 2质谱库（NIST05.LIB和NIST05s.LIB）确定共有峰成分，并采用面积归一化法测定共有峰的相对含量。
结果：21批药材挥发油样品的GC-MS图谱有20个共有峰，相似度均>0.90；经验证，21批药材挥发油样品GC-MS图谱与对照指纹图谱具有较好的一致性。
枳壳药材挥发油主要成分为柠檬烯、萜品烯、月桂烯和D-Cadinene。
结论：所建指纹图谱可为枳壳药材挥发油的真伪鉴别和质量评价提供参考。
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish GC-MS fingerprint of volatile oil from Citrus aurantium. METHODS：GC-MS method was adopted. The determination was performed on RTX-5MS capillary column with injector temperature of 250 ℃，high pure helium as carrier gas（≥99.999%），flow rate of 1.0 mL/min，split ratio of 10 ∶1，and sample size of 1 μL （temperature programming）. Mass spectrum condition included electron bombardment ion source，ion source temperature of 230 ℃，detector temperature of 250 ℃，3 min solvent delay，scanning range of m/z 35-550. GC-MS chromatograms of 21 batches of volatile oil samples were determined using Laurene as reference. The similarity of them was evaluated by using TCM Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System （2004 A edition），and common peak was determined. The components of common peak were determined by LC Solution 2 mass database （NIST05.LIB and NIST05s.LIB）. Relative content of common peak was determined with area normalization. RESULTS：There were 20 common peaks in GC-MS chromatograms of 21 batches of volatile oil samples，and the similarity was higher than 0.90. After validation，GC-MS chromatograms of 21 batches of volatile oil samples were in good agreement with control fingerprint. The main constituents of the volatile oil of C. aurantium were Limonene，Terpinene，Laurene and D-Cadinene. CONCLUSIONS：Established fingerprint can provide reference for identification and quality evaluation of volatile oil of C. aurantium.KEYWORDS Citrus aurantium；V olatile oil；GC-MS fingerprint；Genuine regional drug枳殼为芸香科植物酸橙（Citrus aurantium L.）及其栽培变种的干燥未成熟果实[1]，有理气宽中之功效，多用于食积不化、脘腹胀满等症状[2]。
反相高效液相法测定枳实、枳壳中橙皮甙和柚皮甙的含量
#"% 样品含量的测定 实验还测定了一些实际样品，结果见表?和图
?。由表?可看出，不同产地的炒枳壳中橙皮甙和柚 皮甙的含量是不同的，其中柚皮甙的含量差异很大；
同一产地的炒枳实和炒枳壳中橙皮甙含量相近，但
是柚皮甙的含量相差比较大。由图?可看出橙皮甙 和柚皮甙已达到基线分离。
表 ! 枳壳和枳实中橙皮甙和柚皮甙的含量（"MK）
图 ! 标准品（’）和江西生枳壳样品（(）的色谱图 723"! 8+1-9’/-31’95-05/’.4’14（’）’.4:2’.3;2
!"#$%#&’#"()%**（(） ?X>:0,>8,>；’X@1C.10,F,>X
参考文献：
［?］ Y6&D 4@/>8G@/W，$Z [W>G0WX #0:F,Q,/>:- 4@,>1C1 !1F,P,>:-4@19,CQ0BX7@:>8@:,：7@:>8@:,7P,1>P1:>F #1P@>/-/8B301CC，?<<)X?) 肖崇厚，陆蕴 如X中 药 化 学X上 海：上 海 科 学 技 术 出 版社，?<<)X?)
精密 称 取 已 测 知 含 量 的 江 西 炒 枳 壳 样 品 各 + 份，每份 ?;)8，精 密 添 加 柚 皮 甙 和 橙 皮 甙 标 准 品 ?+;)98和’;+98于样品的粉末中，按照前述样品 处 理 方 法 进 行 处 理 并 测 定，计 算 回 收 率 分 别 为
<I;?=（%75M’;<=）和<+;K=（%75MK;+=）。
［K］ [&O^7@WGS,>，_&O^ ‘,，a2&O^ 5,:>G0W,，56O^ _:>8X4@,>:*/W0>:-/\4@,>1C1!:Q10,:!1F,P:，?<<(， ?<（A）：K+< 杨书斌，王 琦，张 典 瑞，丁 旺X中 国 中 药 杂 志X ?<<(，?<（A）：K+<
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药材 枳壳
表 1 线性关系考察、精密l）
r
精密度
（ RSD / % ）
Y = 2． 17 × 103 X － 222 5． 08 ～ 254． 0 0． 9977 3． 8
2． 4． 2 方法专属性 取经预先测定，不含展青霉素的枳壳样 品，按照“2． 3”项下操作，制备空白供试品溶液； 同时在枳壳中 添加“2． 4． 1”项下贮备液 5 μl，按照“2． 3”项下操作，制备枳壳 加标供试品溶液。 试 验 结 果 表 明，枳 壳 中 其 它 成 分 不 干 扰 展 青霉素的测定 （ 色谱图见图 1） 。 2． 4． 3 加样回收率试验 取枳壳粉末（ 未检出展青霉素，过 二号筛） 各 2 g，分别一式 9 份，以 3 份为一组，分别精密加入每 1 ml 含 10 μg 展青霉素的对照品溶液 25 μl、50 μl、250 μl，分 别加水 40 ml，按“2． 4”项下制备加标高中低浓度的供试品溶 液，摇匀，进样分析，计算回收率，结果见表 2。
中国卫生检验杂志 2011 年 7 月 第 21 卷 第 7 期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology，Jul 2011； Vol 21 No 7
1593
【论著】
HPLC － MS /MS 法测定中药材枳壳中展青霉素
王少敏，郑荣，俞灵，陈静，季申，王柯*
目前展青霉素的方法多采用薄层色谱法［3］和高效液相色 谱法［4］，其中薄层色谱法准确性较差，高效液相色谱法易受到 糠醛类物质的干扰。由于中药材的基质复杂，90% 为固态物 质，更易受到杂质干扰，故采用专属性强的液相色谱 － 串联质 谱测定法对酸性果实类中药枳壳中展青霉素的展青霉素进行了 检测，并考察了方法学。结果表明，本法操作简单易行，灵敏度 高，专属性强，适用于测定酸性果实类中药材中展青霉素。
［Key words］ Patulin； HPLC － MS / MS； Zhike； Chinese herb
展青霉素（ Patulin） ，化学名 4 － 羟基 － 4 氢 － 吡喃 － 2 － 酮，是由展青霉、扩展霉、棒曲霉等霉菌产生的有害代谢产物， 具神经毒性，并 有 致 突 变 和 致 畸 作 用。 展 青 霉 素 主 要 存 在 于 水果及其制品中，因展青霉素分子小，易溶于水，热稳定性高， 在酸性溶液中较稳定，一般的加热，晾晒等中药加工炮制工艺 无法去除该霉素。中药中亦有许多水果或酸性果实类药材， 但目前展青霉素的检测主要集中在果汁等食品中［ 1 ～ 4］，中药 中相应检测未见 报 道。 为 了 保 证 中 药 安 全，我 们 急 需 建 立 中 药材中展青霉素的检测方法。
3 讨论 采用液相色谱法进行展青霉素的检测易受 5 － 羟甲基糠
醛的干扰，采用液 相 质 谱 联 用 检 测 法，利 用 分 子 量 不 同，采 用 MRM 技术，避免了 5 － 羟甲基糠醛的干扰，专属性强，灵敏度 高。
（ 上海市食品药品检验所，上海 201203）
［摘要］ 目的： 建立中药材枳壳中展青霉素的 HPLC － MS / MS 测定方法。方法： 样品经果胶酶酶解，用水提取、经过展青
霉素免疫亲和柱 净 化 后，用 高 效 液 相 色 谱 － 三 重 四 级 杆 串 联 质 谱 进 行 分 析 测 定。结 果： 展 青 霉 素 在 5． 08 ng / ml ～ 254． 0 ng / ml范围内与峰面积呈良好的 线 性 关 系，线 形 方 程 为 Y = 2． 17 × 103 X － 222，r = 0． 9977，回 收 率 在 80． 0% ～
2． 4． 4 重复性试验 因样品未检出展青霉素，采用加样方法 进行重复性试验。按“2． 4． 3 加样回收率试验”项下制备中浓 度加样枳壳供试品溶液，一式 6 份，进样分析，记录峰面积， RSD 为 6． 5% 。 2． 4． 5 稳定性试验 精密量取同一份高浓度回收率枳壳供 试品溶液，分别与 0 h、3 h、20 h、22 h 进样，测定峰面积，RSD 3． 5% 。试验结果表明，供试品溶液在 22 h 内稳定。 2． 4． 6 检出限 取枳壳低浓度加标供试品溶液进行分析，测 定信噪比，分别以信噪比为 3 与 10 时的量作为检出限与定量 限，结果检出限为 0． 02 μg·kg － 1 、0． 03 μg·kg － 1 ，定量限为 0． 1 μg·kg － 1 。 2． 4． 7 样品测定 按拟订方法测定枳壳中药材样品，结果未 检出展青霉素。
离子源为 ESI 源； 负离子模式检测； 扫描方式为多反应监
1594
中国卫生检验杂志 2011 年 7 月 第 21 卷 第 7 期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology，Jul 2011； Vol 21 No 7
测（ MRM） ； 电喷雾电压： 5500V； 离子源温度为 550℃ ，去簇电 压： － 45 伏。离子选择通道： m / z 153． 1 →109． 0 （ 定量） ，m / z 153． 1→80． 9（ 定性） ，两对离子对的碰撞能量分别为 － 11． 0v 和 － 15． 4v，离子流图见图 1。
由于展青霉 素 主 要 存 在 于 水 果 或 酸 性 果 实 中 ，因 此 选 择
［基金项目］ 国家科技重大专项课题项目（ 2009ZX0 9502 － 024） ［作者简介］ 王少敏（ 1978 － ） ，女，生药学硕士，主管药师，主要
从事中药质量控制研究。 * 通讯联系人，E － mail： wangke1994@ yahoo． com． cn
表 2 回收率试验
编号
加标值（ ng） 测得值（ ng） 回收率（ % ） 平均（ % ） RSD（ % ）
低添加水平 － 1 低添加水平 － 2 低添加水平 － 3 中添加水平 － 1 中添加水平 － 2 中添加水平 － 3 高添加水平 － 1 高添加水平 － 2 高添加水平 － 3
250 250 250 500 500 500 2500 2500 2500
中药材枳壳进行了试验。
1 材料与方法 1． 1 仪器与试剂 1． 1． 1 仪器 Agilent 1200 液相色谱 － API5500 三重四极杆 串联质谱 仪，高 速 均 质 器 （ 德 国 IKA，T25 digital ULTRA － TURRAX，转 速 采 用 12500 r / min ） ； 氮 气 吹 干 仪 （ N － EVAPTM112 型，美国 Organomation Associates，Inc 公司） 。 1． 1． 2 试剂 甲醇、乙腈（ 色谱纯） ； 展青/ 黄曲霉素多功能净化柱 （ Mycrosep228AlaPat，美国 VICAM 公司） ； 果胶酶（ 批号： 107K0671， SIGMA 公司） ； 枳壳（ 批号： y － 091020 产地： 浙江） ； 展青霉素标准 品（ 批号 34127，Fluka 公司） 。试验用水为超纯水。
101． 1% 之间。在枳壳中最低检测限为 0． 02 μg / kg。结论： 本法灵敏、快速、准确、专属性强，可用于中药枳壳中展青霉素
的测定。
［关键词］ 展青霉素； 高效液相色谱 － 串联三重四极杆质谱； 枳壳； 中药材
［中图分类号］ O657． 63
［文献标识码］ A
［文章编号］ 1004 － 8685（ 2011） 07 － 1593 － 02
2 方法和结果 2． 1 液相色谱条件
色谱柱： Phenomenex SB － C18，4 μm × 2． 0 × 5 cm。流动 相： A 为 乙 腈，B 为 5 mmol · L － 1 醋 酸 铵 水 溶 液，流 速： 0． 3 ml·min －1 ，梯度洗脱： 0 min ～ 3． 5 min，10% A →10% A； 3． 5 min ～ 3． 6 min，10% A→40% A； 3． 6 min ～ 4． 5 min，40% A→ 70% A； 4． 5 min ～ 4． 6 min，70% A→10% A。 2． 2 质谱条件
［Abstract］ Objective： To establish a HPLC － MS / MS method for determination of Patulin in zhike of Chinese herb． Methods： After being enzyme － hydrolyzed by pectinase，extracted by water，and purified by patulin immune affinity column，Patulin were analyzed by HPLC － triple quadrupole MS． Results： There is a good linear relationship within the range of 5． 08 ng·ml －1 ～ 254． 0 ng·ml －1 for Patulin，with the linear equation Y = 2． 17x103 X － 222，r = 0． 9977． The recovery was between 80． 0% ～ 101． 1% ． The LOD in Zhike was 0． 02 μg ·kg －1 in minimum． Conclusion： The method is sensitive，rapid，accurate and specific enough to determine Patulin in Zhike．
229． 87 252． 80 244． 53 424． 00 408． 00 418． 67 2055． 49 2001． 17 2055． 97
91． 9 101． 1 97． 8 84． 8 81． 6 83． 7 82． 2 80． 0 82． 2
96． 9 4． 8 83． 4 2． 0 81． 5 1． 6