珠子参DNA不同提取方法
磁珠纯化dna步骤
磁珠纯化dna步骤
磁珠纯化DNA是一种常见的DNA提取和纯化方法。
以下是通用的磁珠纯化DNA的步骤：
1. 样品准备：将DNA样品稀释到合适的浓度，通常用Tris-EDTA缓冲液（TE缓冲液）稀释。
2. 磁珠制备：将磁珠固定在磁板上，并加入磁珠结合缓冲液，使磁珠悬浮在缓冲液中。
3. 靶标捕获：将DNA样品加入磁珠结合缓冲液中，使DNA 与磁珠结合。
4. 磁珠分离：将磁板放在磁力板上，吸附磁珠到磁板上，使用磁力将磁珠分离至磁力板内壁，将上清液丢弃。
5. 洗涤：将洗涤缓冲液加入到分离后的磁珠上，重复磁珠分离步骤，以去除杂质。
6. DNA洗脱：将洗脱缓冲液加入到磁珠上，使磁珠中的DNA 与洗脱缓冲液中的物质交换，并离开磁板。
7. 验证DNA纯化：使用DNA定量方法（如紫外吸收光谱或荧光定量）检查纯化后的DNA浓度和质量。
注意：具体步骤可能会因不同厂商提供的试剂盒和设备而有所不同。
请根据所使用的具体试剂盒和设备的说明进行操作。
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项基础操作，它是获取DNA样本的过程。
DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. 高盐法高盐法是一种简单且常用的DNA提取方法。
其原理是利用高盐溶液中DNA与其他细胞组分（如蛋白质）之间的亲和性差异。
在高盐环境下，DNA更容易溶解而不与蛋白质结合，从而实现DNA的提取。
具体步骤包括细胞破碎、加入高盐溶液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异，将DNA从细胞中分离出来。
具体步骤包括细胞破碎、加入酚/氯仿混合液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性差异。
DNA样本在经过一系列处理后，通过硅胶柱，DNA能够与硅胶颗粒结合，而杂质则被洗脱。
最后，通过洗脱DNA，即可获得高纯度的DNA。
硅胶柱法的优点是提取纯度高、操作简单，适用于分子生物学研究和临床诊断。
4. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的DNA提取方法。
其原理是利用带有亲和基团的磁珠与DNA之间的亲和性，实现DNA的选择性吸附和洗脱。
具体步骤包括磁珠悬浮液制备、样本加入、磁珠与DNA结合、磁珠分离、洗脱DNA等。
除了上述常用的DNA提取方法外，还有其他一些特殊的DNA提取方法，如酶解法、离心法、凝胶切割法等。
这些方法在不同的实验和应用中具有各自的特点和优势。
总结起来，DNA提取的方法多种多样，选择适合的方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验操作，以确保提取到高质量的DNA样本。
DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此在进行DNA提取时，需要注意样本的保存、细胞破碎的方式、溶解液的选择等因素，以获得可靠且高纯度的DNA。
磁珠法提取dna原理
磁珠法提取dna原理
磁珠法提取DNA原理是利用磁性珠子及其表面修饰的特定分子与DNA之间的亲和性来实现DNA的富集和分离。
具体原理如下：
1. 磁性珠子的选择：选择具有一定磁性的微米级珠子作为DNA富集的固相载体。
这些磁性珠子通常由磁性材料（如Fe3O4）制成，可以通过磁力来进行分离和收集。
2. 磁性珠子表面修饰：在磁性珠子表面修饰特定的分子，通常是寡核苷酸（如单链DNA、RNA或寡聚核苷酸）或核酸结合蛋白，使其具有与目标DNA相互作用的能力。
修饰的分子上还可以加入亲和标记物（如亲和素或抗体），以便进一步增强富集效果。
3. DNA结合：将修饰后的磁性珠子与DNA样品混合，通过与DNA靶标相互作用，使目标DNA与磁性珠子表面的修饰分子结合，并形成稳定的DNA-珠子复合物。
4. 分离和富集：在结合后，应用外加的磁场或磁力来分离磁性珠子及其结合的DNA-珠子复合物。
由于磁性珠子的磁性，可以迅速将其吸附到反应容器的侧壁上，然后将上清液排除，实现DNA的富集和纯化。
5. 磁珠洗脱：在磁性珠子上吸附的DNA可以通过改变离心管内磁场或洗涤条件来洗脱，得到纯化的DNA产物，然后可以进一步进行下游分析，如PCR扩增、测序等。
总之，磁珠法通过磁性珠子的特性以及表面修饰分子与DNA之间的亲和性，实现了对DNA的高效富集和纯化，成为DNA提取和纯化领域中常用的方法。
DNA提取方法及注意事项
DNA提取方法及注意事项DNA提取是生物学研究中的一个重要的组成部分，它有助于发现和分析基因组结构，通过分析不同生物物种之间的差异，来研究生物的特性、发育和进化历史。
抽取DNA也可以用于鉴定物种、界定雌雄和比较个体之间的联系。
DNA提取一般用以下几种方法之一进行：模板/组织/细胞。
模板提取的DNA大部分来源于液相或固体血清和血清，这种类型的DNA提取能够最快地从样品中获得DNA。
而组织和细胞提取则专注于对特定组织或细胞的研究，这种方法会受到某些条件的影响，比如其他生物学因素和样本形式，它们可能需要进行一系列复杂的操作才能被成功提取。
在使用DNA提取方法时需要注意以下几点：1. 选择正确的样本以进行DNA提取。
样本是DNA提取的基础，必须认真选择有效的样本用于DNA提取，否则将无法从样本中获得有效的DNA。
2. 谨慎操作。
在添加和混合试剂、清洗矿物油和离心时，需要特别注意安全和清洁，以避免污染样本和样品中的DNA。
3. 避免外源污染。
一定要使用消毒的空气枪和无菌工具，以防止外源物质污染提取到的DNA。
4. 正确储存DNA样品。
提取到的DNA样品需要在低温（-20℃）环境中储存，以防止样品中的DNA被非特异性酶所降解。
5. 了解DNA信息的损坏。
因为DNA是非常脆弱的，在操作过程中需要尽量避免RNA降解，低pH和温度过高，空气中的氧气也会导致DNA损坏，可能会失去DNA信息的混合物或单一的DNA分子。
在DNA提取方法的选择和使用上，应特别注意上述注意事项，以避免DNA样品的污染和损坏，从而确保研究的准确性和可靠性。
dna提取的各种方法介绍
１、二苯胺试剂：使用前称取 0.8g 二苯胺（需在70% 乙醇试 剂中重结晶 2 次 ) ，溶于 180 ml 冰乙酸中，再加入 8ml 过氯酸 （60%以上），混匀待用，临用前加入0.8ml 1.6%乙醛溶液，所 配试剂应为无色。 每组需56ml 共需2800ml ２、DNA标准溶液：（须经定磷法确定其浓度）取标准DNA 以0.01N NAOH配成200微克／毫升的标准液。 每组需12ml 共需600ml ３、1.6% 乙醛：取 47% 乙醛 3.4ml，加重蒸水定容至 100ml （放于冰箱中，一周之内可以使用）。 共需70ml ４、 ( 测样品液：准确称取猪脾 DNA 或用紫外分光法中剩下 的DNA液配成10微克／毫升的溶液。 每组需4ml 共需200ml
DNA的提取方法简介
为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常 需要从不同的生物材料中提取DNA.由于DNA 分子在生物体内的分布及含量不同，要选择适 当的材料提取DNA。 动植物中，小牛胸腺۰动物肝脏۰鱼类精子，植 物种子的胚中都含有丰富的DNA。 微生物中，谷氨酸菌体含7%~10%，面包酵母 含4%，啤酒酵母含6%，大肠肝菌含9%~10%。
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以 1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于 蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对 DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子 的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取 DNA.
1、核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则 为白色类似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有 鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。 DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于 水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离 酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA 在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中， DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
脱蛋白法和脱色法纯化珠子参多糖的工艺研究
脱蛋白法和脱色法纯化珠子参多糖的工艺研究刘小琴，陈 涛，巩仔鹏*，唐金毅（三峡大学医学院，湖北 宜昌 443002）摘要：目的 优化珠子参粗多糖的纯化工艺。
方法 主要对珠子参多糖提取中脱蛋白和脱色方法进行优化，从而得到最佳纯化工艺。
结果 在30 ℃加入链酶蛋白酶和三氯乙酸于冰箱放置过夜，再采用Sevage 法共同除蛋白的方法效果最好；脱色则在30 ℃用7.5%~8%H 2O 2溶液最好。
结论 本方法用于脱色及去除珠子参粗多糖中蛋白质成分切实可行，可作为纯化珠子参粗多糖的纯化手段之一。
关键词：珠子参粗多糖；脱蛋白；纯化中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2009)05-0050-04Studies on the Puri fi cation Technology of Rhizoma Panzcis Majoris Polysaccharide by Deproteinization and Decolorization MethodsLIU Xiao-qin, CHEN Tao, GONG Zi-peng, TANG Jin-yi( Medical College, Three Gorges University, Yichang 443002, China )Abstract: Objective To optimize the purification technology of Rhizoma Panzcis Majoris crude polysaccharide. Methods The main purpose is to optimize the way of deproteinization and decolorization.Chiefly, we compares two methods which are Sevage and TCA, in order to find out the best way to optimize removing proteins. Secondly, we control one variable to get the best usage amount. Then, in order to fi nd the best technology of decolorization we compare three decolored approachs as follows resin, hydrogen peroxide and absorbite. Conclusion Using Sevage and TCA together with pronase to remove proteins and using 7.5%~8% hydrogen peroxide to decolor is the best way to optimize puri fi cation technology of Rhizoma Panzcis Majoris polysaccharide. Results The method can be used effectively to decolor and remove proteins from Rhizoma Panacis Majoris crude polysaccharide as well as an effective puri fi cation method.Key words: Rhizoma Panzcis Majoris crude polysaccharide; deproteinization; puri fi cation收稿日期：2008-12-31基金项目：湖北省自然科学基金资助项目，（NO. 2006ABA200）作者简介：刘小琴（1956-）女，副教授，主要从事天然产物的研究。
DNA提取
几种DNA提取方法的优缺点比较文章来源：洛阳吉恩特生物科技有限公司自然界中无论是植物、动物还是病毒，DNA作为大部分生物的遗传物质，在遗传中起着不可替代的作用，为了研究生物的基因，就需要将DNA从细胞中提取出来，这个过程有很多方法可以实现，目前比较常用的有苯酚氯仿抽提法、离心柱法和磁珠法，吉恩特实验室就这三种提取方法进行了梳理和比较，总结出各方法的优缺点供广大科研工作者参考。
1.苯酚氯仿抽提法苯酚氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶KEDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，变性降解核蛋白，使DNA从核蛋白中游离出来。
而DNA易溶于水，却不溶于有机溶剂。
蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。
当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。
离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。
利用萃取原理，根据蛋白核酸溶于不同的试剂层，将枪头伸入不同液层内抽取所需的成分，经多次洗涤后获得纯化核酸。
该方法的缺点是由于使用了苯酚、氯仿等试剂，毒性较大，长时间操作对人员健康有较大影响，而且核酸的回收率较低，损失量较大，由于操作体系大，不同实验人员操作重复性差，不利于保护RNA，很难进行微量化的操作。
优点是采用了实验室常见的试剂和药品，做起来成本比较低廉。
2.离心柱法吉恩特生物离心柱法主要原理是将对核酸有吸附作用的官能基团固定在离心柱模上，通过加入不同的裂解试剂、洗涤试剂并反复离心，以达到核酸与杂质分离的目的，获得纯化的核酸。
离心柱法DNA提取它的优点是比传统的酚氯法提取的纯度高，有利于RNA保护，而且能进行微量操作，以其低廉的价格和相对便捷的操作，渐逐取代了传统DNA提取方法，被高校科研所等市场普遍接受。
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA是生物体中的遗传物质，它携带着生物体的遗传信息。
提取DNA是研究基因组学、遗传学等领域的重要基础工作。
本文将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. CTAB法CTAB法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）与DNA结合形成离子对，然后通过盐溶液的浓度差异，使DNA从溶液中沉淀出来。
该方法适用于提取植物细胞中的DNA。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种常用的DNA提取方法。
其原理是利用DNA在酚相中溶解，而其他细胞组分则在氯仿相中溶解，通过酚/氯仿两相的分离，从而将DNA分离出来。
该方法适用于提取动物细胞和细菌等样品中的DNA。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高效、纯化度较高的DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性，将DNA吸附在硅胶颗粒上，然后通过洗涤、离心等步骤，将DNA从硅胶颗粒上洗脱下来。
该方法适用于提取各种样品中的DNA。
4. 磁珠法磁珠法是一种基于磁性颗粒的DNA提取方法。
其原理是将带有亲和基团的磁性颗粒与DNA结合，然后通过磁力的作用，将颗粒和DNA一起沉淀下来，最后通过洗涤等步骤，将DNA从颗粒上洗脱下来。
该方法具有快速、高效的特点，适用于高通量的DNA提取。
以上是几种常用的DNA提取方法及其原理。
不同的方法适用于不同类型的样品和实验需求。
在实际操作中，可以根据具体情况选择合适的方法进行DNA提取。
同时，为了保证提取到的DNA质量和纯度，还需要注意提取过程中的一些关键步骤，如细胞破碎、蛋白质酶处理、DNA沉淀等。
DNA的提取是基因研究和遗传学研究的重要步骤，通过合适的提取方法可以获取到高质量的DNA样品，为后续的实验和分析提供可靠的基础。
随着技术的不断进步，提取方法也在不断改进和优化，为科学研究提供更多的可能性。
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珠子参DNA的不同提取方法的研究摘要：目的：探讨适合ssr标记的dna不同提取方法。
方法：用经典catb法,改良catb法， sds法，高盐低ph法，提取新鲜珠子参根部中总dna，并对dna进行电泳得出最佳提取方法。
结论：最佳提取方法为改良catb法。
关键词：珠子参； dna提取；ssr分析； catb法；sds法；高盐低ph法beads and dna from different methodsyangshen(yuxi teachers college, resources and environment college, biological science)abstract: objective: to study the different extraction methods of the ssr markers for the dna. methods: using classical catb method, advanced catb method, sds method, high salt low ph method, fresh and root extract beads of total dna, and through electrophoresis obtains the best extraction method. conclusion: the best extraction method for improvement catb method.keywords: beads; dna extracted; ssr analysis; catb method; sds method; high salt low ph method珠子参(panacismajirisrhizama)属于五加科、串珠状根茎植物，别称钮子七、珠儿参、扣子七。
分布于我国的四川、陕西、云南等省。
具有活络、止血的功效 [1-2]。
现代药理学研究显示, 珠子参具有较广泛的药理作用, 对心血管系统、血液及造血系统、免疫系统、肿瘤等均有作用[2]。
因此珠子参具有极高的研究价值，所以本实验用珠子参作为材料进行实验。
珠子参根部次生代谢产物较多，其中酚类多糖类物质会影响珠子参总dna的提取及srr分析。
本实验主要为了选取适合ssr分析的dna不同提取方法的最佳方法，以便更加有效地提取珠子参总dna。
1材料与实验方法及操作1.1材料1.1.1实验材料实验材料取自大理市鹤庆县草海镇马厂的珠子参。
该实验需要用到不同的提取方法及不同的保存方法，所以将各类方法和保存方法做如下标记：a、经典ctab法，b、改良ctab，c、sds法，d、高盐低ph值法。
1.1.2仪器离心机，水浴锅，冰箱，电泳仪，移液枪，rcp扩增仪，凝胶成像仪1.1.3试剂ctab提取缓冲液：(10.00gctab，50.0ml 1mol/ltris-hcl(ph8.0)，20.0ml 0.5mol/l edta，41.00g nacl，定容至500ml）；3%sds提取缓冲液：(0.1mol/l tris-hcl（ph8.0），0.05mol/ledta-na2， sds，定容至250ml)；去多糖buffer：(100ml tris-hcl(1mol/l)，50mledta(0.5mol/l），nacl7.305g，定容至500ml)；高盐低ph值提取缓冲液：(0.1mol/l、ph=4.8 naac,0.05mol/l、ph8.0 edta-na2，0.5mol/l nacl，2%pvp，2%sds，ph=5.5)；te：(5ml 1mol/l tris-hcl，1ml 0.5mol edta, 定容至500ml)；3%琼脂糖凝胶：(0.6g琼脂糖,20ml 1%tbe缓冲液)；10x的tbe：（tris碱108.00g，edta7.44g，硼酸55g,定容至1000ml）；40%的聚丙烯酰胺凝胶：（双丙烯酰胺2.00g，丙烯酰胺38.00g，定容至100ml）；6%的聚丙烯酰胺凝胶：（10xtbe 12ml，40%聚丙烯酰胺凝胶18ml，90ml h2o）；银染所需试剂：（0.1%agno3溶液，3%na2co3溶液,10%hac溶液,1%na2s2o3溶液）；0.5mol/l edta，β-巯基乙醇，聚乙烯吡咯烷酮(pvp)，tris饱和酚，氯仿/异戊醇(v/v=24:1)，异丙醇，75%乙醇，琼脂糖，无水乙醇，5mol/l kac，1x的tbe，temed，aps，硝酸，二甲苯氰，溴酚蓝1.2实验方法及操作1.2.1 经典catb法[3] (有改动)(1)取3份新鲜珠子参每份0.5g分别放入3个研磨中加入1200μl 65℃预热的ctab提取缓冲液混匀；(2)迅速将1.5ml离心管置于65℃水浴中，保温60min,每隔15min温和颠倒混匀； (3)待冷至室温后，取出1.5ml离心管，取上清液于另一离心管，每管加入等体积的氯仿/异戊醇(24：1)溶液，混匀后至溶液呈乳浊状，10000r/min离心10min；(4)小心将上清液相转移至另一个1.5ml离心管中，标号a1，a2，a3，在上清液中加入600μl预冷-20℃的异丙醇，轻轻混匀，至有白色絮状沉淀出现，-20℃静置保存1小时。
(5)离心管从冰箱取出后10000r/min离心10min弃上清液，沉淀dna；(6)用400μl 75%的乙醇洗2次， 7000r/min离心3min弃上清液；(7)然后再用400μl 无水乙醇洗，7000r/min离心3min弃上清液，然后置于空气中干燥；(8)沉淀干燥后溶于加有100μl 的te溶解，待溶解后放入冰箱保存备用。
1.2.2改良catb法[3-4] (有改动)(1) 取3份新鲜珠子参每份0.5g分别放入3个研磨中加入少许石英砂和pvp，加入1.2ml的buffer去多糖和24μlβ-巯基乙醇充分研磨成粉末，迅速将研磨好的珠子参粉末装入1.5ml离心管中；(2)10000r/min离心10min 弃上清液；(3)向3个1.5ml离心管中加入600μl 65℃预热的ctab提取缓冲液同时加入24μlβ-巯基乙醇，用毛细玻璃管搅拌充分；(4)迅速将1.5ml离心管置于65℃水浴中保温60min，每隔15min温和颠倒混匀；(5)待冷至室温后，取出1.5ml离心管，每管加入240μlkac，放入冰箱-20℃60min；然后10000r/min离心10min (6)小心将上清液相转移至一干净的1.5ml离心管中，同时加入等体积的氯仿/异戊醇(24：1)溶液，放入垂直振荡器中充分混匀10分钟，然后10000r/min离心10min；(7)取上清液且分别标号b1，b2，b3干净的1.5ml离心管中，然后加入640μl -20冰浴的异丙醇，放入-20℃冰箱冷冻60min；(8)取出后在10000r/min离心10min沉淀dna，弃上清液用75%的乙醇洗2次，7000r/min离心3min弃上清液；然后再用400μl无水乙醇清洗，洗后7000r/min离心3min，弃上清液，沉淀放置空气中干燥过夜；(9)沉淀干燥后溶于加有100μl的te溶解，待溶解后放入冰箱保存备用。
1.2.3sds法[5-6] (有改动)(1) 取3份新鲜珠子参每份0.5g分别放入3个研磨中加入1200μl sds提取缓冲液，并加入240μlβ-巯基乙醇充分研磨成粉末，迅速将研磨好的珠子参粉末装入1.5ml离心管中；(2)65℃水浴保温60min，每15min轻摇一次；(3)待冷却后加入230μl 5mol/l kac,混合后冰浴60min；(5)取出后10000r/min离心10min，将上清液转移至另一1.5ml离心管中，每管加入等体积的氯仿/异戊醇(24：1)溶液，然后放入垂直振荡器中充分混匀10分钟；(4)取出后10000r/min离心10min；(5) 取上清液于分别标号c1，c2，c3干净的1.5ml离心管中，每管加入600μl预冷的异丙醇溶液混匀，放入-20℃冰箱冷冻60min；(6)取出后在10000r/min离心10min沉淀dna；(7)弃上清液用75%的乙醇洗2次，7000r/min离心3min弃上清液；(8)然后再用400μl无水乙醇清洗，洗后7000r/min离心3min，弃上清液，沉淀放置空气中干燥过夜；(9)沉淀干燥后溶于加有100μl的te溶解，待溶解后放入冰箱保存备用。
1.2.4高盐低ph值法[7-8] （有改动）(1) 取3份新鲜珠子参每份0.5g分别放入3个研磨中分别加入1200μl 高盐低ph值提取缓冲液，充分研磨成粉末，迅速将研磨好的珠子参粉末装入1.5ml离心管中；(2)65℃水浴保温60min，每15min轻摇一次； (3)取出后10000r/min离心10min，将上清液转移至另一1.5ml离心管中，每管加入600μl kac溶液，然后混匀，放入-20℃冰箱冷冻60min ；(4)取出后10000r/min离心10min；(5) 取上清液于分别标号d1，d2，d3干净的1.5ml离心管中，每管加入600μl预冷的异丙醇溶液混匀，放入-20℃冰箱冷冻60min；(6)取出后在10000r/min离心10min沉淀dna；(7)弃上清液用75%的乙醇洗2次，7000r/min离心3min弃上清液；(8)然后再用400μl无水乙醇清洗，洗后7000r/min离心3min，弃上清液，沉淀放置空气中干燥过夜；(9)沉淀干燥后溶于加有100μl的te溶解，待溶解后放入冰箱保存备用。
1.3 pcr扩增[9] （有改动）将4种提取方法所提取的总dna于nyc technik inc生产的atc201 pcr扩增仪用ssr分析[10]进行扩增。
反应体积25μl，引物：5’-tagtagcgacgatcaccacg-3’。
pcr扩增反应体系如下（1μl tap酶,1μl dntp(10mm),5μl 10xbuffer(mg2+ 20mm),1μl primerf, 1μl primerr, 1μl dna模板（约50ng）,15μl h2o）。
pcr扩增体系如下（94℃5min,(94℃45s,53℃1min,72℃1min30s进行36次循环)，72℃7min, 4℃保存）。
1.4琼脂糖凝胶电泳用3%的琼脂糖凝胶对4种提取总dna进行电泳。
然后用凝胶成像仪拍照。
1.5聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染[11-12]（有改动）先用6%的聚丙烯酰胺凝胶与促凝剂temed和aps混合制作胶版，然后用pcr扩增出来的样品与溴酚蓝混合后进行点样，250v电泳150min。