1 试剂灵敏度的复核
鲎试剂灵敏度复核记录
文件名称File Name Record of Review for LimulusReagent SensitivityFile NumberREC-SOP-C003059-01-02生效日期Effective Date 2018-10-18有效期至Expiry Date2021-10-17审批及颁发/APPROV AL & ISSUANCE部门签名日期起草质量控制部审核质量控制部质量保证部批准质量负责人颁发质量保证部会审/COLLECTIVE REVIEW部门签名日期部门签名日期/ / /分发/DISTRIBUTIONCopy-1 Copy-2/质量保证部质量控制部/文件名称File Name Record of Review for LimulusReagent SensitivityFile NumberREC-SOP-C003059-01-02生效日期Effective Date 2018-10-18有效期至Expiry Date2021-10-17变更历史/CHANGES版本号修改简述提出人生效日期01 由原文件RE-C003060《鲎试剂灵敏度复核记录》变更而来；文件编码改变。
魏永红2017-06-0102 增加所使用仪器及试剂的信息汪华2018-10-18 附：记录样张REC-SOP-C003059-01-02鲎试剂灵敏度复核记录Record of Review for Limulus Reagent Sensitivity 起草人/日期审核人/日期批准人/日期执行日期2018-10-18 制订依据SOP-C003059 《细菌内毒素检查法标准操作规程》1 试剂鲎试剂批号：；规格： ml×支；生产厂家：□湛江安度斯生物有限公司；□福州新北生化工业有限公司；细菌内毒素检查用水批号：；规格： ml×支；内毒素含量： EU/ml；生产厂家：□湛江安度斯生物有限公司；□福州新北生化工业有限公司；细菌内毒素标准品批号：；规格：支/盒；效价：______EU/支；生产厂家：□中国药品生物制品检定所；□；2 仪器试管恒温仪型号：TAL-40D 编号：□QC-187 □QC-216 □QC-2173 操作根据鲎试剂灵敏度标示值（λ）将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器混匀15分钟，然后制成2.0λ、1.0λ、0.5λ、和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液。
鲎试剂灵敏度实验记录检查记录(01版)
检验编号：
一、鲎试剂
批号
标示灵敏度
EU/ml
供样单位
规格
生产单位
检验数量
检验目的
灵敏度复核
检验日期
年月日
检验依据
《中华人民共和国药典》（2005年版）二部
二、标准品
WSE批号
效价
EU
来源
BET水批号
规格
ml/支
来源
内毒素标准品复溶时的体积为ml；稀释方法为：取0.1ml内毒素标准溶液，加入0.9mlBET水，即为1→10稀释液，取1→10稀释液0.5ml，加入BET水0.5ml，即为0.5EU/ml内毒素标准溶液。
三、反应结果（温度：℃时间：分钟）
内毒素浓度
2.0λ
1.0λ
0.5λ
0.25λ
阴性对照
反应终点浓度
重
复
管
数
1பைடு நூலகம்
2
3
4
结果是否有效
计算结果
结果判断
检验员
复核员
凝胶法检查细菌内毒素应注意的问题
凝胶法检查细菌内毒素应注意的问题为了确保凝胶法测定细菌内毒素的准确性，我们通过对凝胶法准确性干扰因素的分析(包括鲎试剂本身、操作条件、原料及其他)，指出了应用凝胶法测定细菌内毒素时应注意的问题。
最后认为只要克服了检查中的干扰因素，凝胶法是最简单、经济、应用最广泛检查细菌内毒素的方法。
此外此种方法对干扰不敏感，为《中国药典》的“仲裁”方法。
标签：凝胶法；热原；注意事项《中国药典》2005年版二部将细菌内毒素检查法分为凝胶法和光度测定法。
因凝胶法具有最简单、经济，应用最广泛，对干扰不敏感的优点，因此为《中国药典》的“仲裁”检查方法，而广泛用于注射剂药品细菌内毒素的检查。
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
中国药典1995年版已收载细菌内毒素检查法(简称鲎试验)，但只用于几种输液的检查。
根据现有的实验证明，凡不干扰细菌内毒素检查或虽有干扰，但可以克服的药品注射剂，将能够以凝胶法代替家兔热原检查法。
多年以来的实践证明，进行细菌内毒素检查前必须具备的条件是：①实验所用器具“无细菌内毒素”；②鲎试剂灵敏度的确证；③无干扰因素。
这3条也是检验细菌内毒素试验是否有效的重要标准。
用凝胶法做细菌内毒素的检查时应注意以下问题：1 鲎试剂本身1.1 鲎试剂灵敏度为了保证检查细菌内毒素结果的准确性，用于试验的鲎试剂应首先核对灵敏度。
当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验对结果的改变时，需进行灵敏度复核试验。
因为在我们的实际工作中，发现鲎试剂均符合药典规定标准前提下，由于生产厂家不同，批号不同，部分鲎试剂的实测灵敏度与标示值有差异而导致检测同一检品时，用相同标示值的鲎试剂，出现不同结果。
因而先核对灵敏度可避免因鲎试剂本身造成的判断失误。
建议到省、市、县药检所购入鲎试剂。
1.2 供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶质中浸提制成供试品溶液。
首先确定供试品的内毒素限值(EU/ml)，公式为L=K/M，L为供试品内毒素限值，然后计算出供试品最大有效稀释倍数（MVD）MVD=cL/λ，其中c为供试品溶液的浓度，λ为在凝胶法中鲎试剂灵敏度(EU/ml)。
生物药物分析第三章作业答案
单选题1、家兔对热原的反应与人基本相似，因而本法中将一定剂量的供试品溶液注入家兔体内的方式是A.静脉注射B.动脉注射C.腹腔注射D.灌胃正确答案：A试题解析：家兔对热原的反应与人基本相似，因而本法系将一定剂量的供试品溶液，以静脉注射的方式注入家兔体内，在规定的时间内，对家兔体温升高情况进行观察，通过观察结果判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
所以答案为A。
2、用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，若再想供热原检查用，则至少应休息A.12小时B.24小时C.36小时D.48小时正确答案：D试题解析：用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再供热原检查用。
所以答案为D。
3、细菌霉内素检查法系通过鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量由（）产生的细菌内毒素，以判断供试品中的细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
A.革兰阳性菌B.革兰阴性菌C.金黄色葡萄球菌D.大肠埃希菌正确答案：B试题解析：本法系通过鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中的细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
所以答案为B。
4、下列有关细菌内毒素检查法的叙述哪一项是错的A.每批鲎试剂的灵敏度须用细菌内毒素工作标准品复核B.凝胶法的原理是鲎试剂与内毒素产生凝集反应C.抗生素类药物因具有抗菌活性，不能用凝胶法检查细菌内毒素D.凝集反应的温度规定为37℃±1℃E.凝集反应的时间规定为60分钟±2分钟正确答案：C试题解析：抗生素类药物可以用凝胶法检查细菌内毒素。
所以答案为C。
5、细菌内毒素检查法又称为A.鲎试验法B.临床检查法C.生物效应法D.家兔热原试验法E.放射性检验法正确答案：A试题解析：细菌内毒素检查法又称为鲎试验法。
本法系通过鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中的细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
试剂灵敏度 国标要求
试剂灵敏度国标要求试剂的灵敏度是衡量其性能的重要指标，它直接影响到检测结果的准确性和可靠性。
根据国标要求，试剂的灵敏度应该达到一定的标准，以确保检测的准确性和可靠性。
一般来说，试剂的灵敏度是指其能够检测出微小浓度变化的敏感性。
对于化学试剂来说，灵敏度越高，意味着能够检测出更小的浓度变化，从而能够更准确地反映物质的真实情况。
对于生物试剂来说，灵敏度则是指能够检测出微量的病毒、细菌、抗体等物质的敏感性。
根据国标要求，试剂的灵敏度应该达到一定的标准。
具体来说，对于化学试剂，一般要求试剂的检测限达到一定的数值，例如在一定的浓度范围内能够达到线性响应，即随着浓度的增加，检测信号能够线性增加。
对于生物试剂来说，则要求试剂能够准确地检测出微量的病毒、细菌、抗体等物质，并且具有较高的特异性、灵敏度和稳定性。
为了达到国标要求的灵敏度标准，试剂生产厂家需要采取一系列措施。
首先，需要选择高质量的原材料，确保试剂的质量和稳定性。
其次，需要采用先进的生产工艺和技术，提高试剂的生产效率和质量控制水平。
此外，还需要对试剂进行严格的检测和质量控制，确保试剂的质量和性能符合国标要求。
在实际应用中，试剂的灵敏度对于检测结果的准确性和可靠性具有至关重要的影响。
如果试剂的灵敏度不够高，就难以准确地检测出微小的浓度变化，从而导致误诊或漏诊等情况的发生。
因此，在实际应用中，需要选择具有较高灵敏度的试剂，以确保检测结果的准确性和可靠性。
总之，根据国标要求，试剂的灵敏度应该达到一定的标准，以确保检测结果的准确性和可靠性。
为了达到这一标准，需要选择高质量的原材料、采用先进的生产工艺和技术、对试剂进行严格的检测和质量控制等措施。
在实际应用中，需要选择具有较高灵敏度的试剂，以确保检测结果的准确性和可靠性。
细菌内毒素检查标准操作规程
细菌内毒素检查标准操作规程细菌内毒素检查标准操作规程1 简述1.1 本规范适用于中国药典2005年版附录中细菌内毒素检查法一凝胶法和光度测定法。
后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
1.2 供试品细菌毒素限值的确定。
（一）药典中有规定的，按供试品各论中规定限值；（二）尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值：L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg、EU/U表示。
K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/kg/h表示。
其中注射剂，K=5EU/kg/h；放射性药品注射剂，K=2.5EU/kg/h；鞘内用注射剂，K=0.2EU/kg/h。
M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以ml/kg/h、ml/kg/h、U/kg/h表示。
药品人用最大剂量可参阅国家批准的药品说明书和《临床用药须知》等权威著作，中国人均体重按60kg计算，注射时间小于1小时的按1小时计。
按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用实际情况做必要调整，但需说明理由。
1.3 供试品最大有效稀释倍数的确定供试品的最大有效稀释倍数（MV D）按下式计算：MV D=C?L/λL为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度。
当L以EU/ml表示时，C等于1.0ml/ml；当L的单位以EU/mg或EU/U表示时，C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg/ml或U/ml。
如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MV D取1，可计算供试品的最小有效稀释浓度C: λ/L。
λ在凝胶法中为鲎试剂的标示灵敏度，在光度测定法中为所使用的标准曲线中的最低内毒素浓度。
1.4 在使用新一批号的鲎试剂前，必须进行鲎试剂灵敏度复核实验。
1.5 药典中已有规定的品种或有其他内毒素检验标准的品种，可直接进行内毒素检查，如在检验中出现干扰的情况需再进行干扰实验的验证；其他未建立内毒素检查的品种需先进行干扰实验，确定不干扰浓度后再进行内毒素检查。
清开灵注射液细菌内毒素检查法的建立
清开灵注射液细菌内毒素检查法的建立目的建立清开灵注射液的细菌内毒素检查方法。
方法采用《中华人民共和国药典》（2010年版）附录细菌内毒素检查法，考察清开灵注射液对细菌内毒素检查的干扰作用，确定其最大不干扰浓度。
结果清开灵注射液稀释至60倍后可消除干扰作用，使用灵敏度为0.125 EU/mL的鲎试剂进行细菌内毒素检查，无干扰因素的影响。
结论使用鲎试剂检查清开灵注射液的细菌内毒素是可行的，可以用细菌内毒素检查法取代热原检查法。
[Abstract] Objective To establish the bacterial endotoxin test method for Qingkailing injection. Methods The bacterial endotoxins test of appendix in China Pharmacopoeia (2010 version) was used to investigate the interference effect of Qingkailing injection in the bacterial endotoxin test method, and the maximum noninterference concentration was confirmed. Results The interference effect could be eliminated when Qingkailing injection was diluted 60 times. When the sensitive of tachypleus amebocyte lysate with 0.125 EU/mL to do the bacterial endotoxins test, the results were no interference. Conclusion It is feasible to check the bacterial enolotoxin in Qingkailing injection by using tachypleus amebocyte lysate, and the bacterial enolotoxin test method can replaced the pyrogen test method.[Key words] Qingkailing injection; Bacterial endotoxin test; Tachypleus amebocyte lysate; Interference test清開灵注射液是由中药复方制备而成的供静脉滴注的注射剂，具有清热解毒，化痰通络，醒神开窍之功效，已被广泛应用于多种不同临床适应症。
细菌内毒素检查规程
细菌内毒素检查规程一、目的：阐述细菌内毒素检查规程。
二、适用范围：适用于细菌内毒素的检查规程。
三、责任者：品控部。
四、正文：1 简述1.1 本规程适用于2005年版附录中细菌内毒素检查法——凝胶法1.2 鲎试剂灵敏度复核试验的目的不仅是考查鲎试剂和细菌内毒素工作标准品的效价是否准确，也是考查检验人员操作方法是否正确和实验条件是否符合规定。
因此要求每个实验室在将一批新的鲎试剂用于干扰试验或供试品细菌内毒素检查前应进行鲎试剂灵敏度复核试验。
1.3 供试品干扰试验项用于建立新品种细菌内毒素检查方法以及供试品的配方和工艺是否有变化，鲎试剂来源于不同或供试品阳性对照结果呈阴性时确定供试品是否存在抑制或增强作用。
1.4 检查法项为供试品细菌内毒素检查方法。
阴性对照、阳性对照和供试品阳性对照必须同时进行，否则试验结果无效。
2 实验材料及用具2.1 天平供试品称量用，感量为0.1mg以下。
2.2 电热干燥箱除外源性内毒用，温度应能维护250℃以上至少一小时。
2.3 恒温水浴箱或适宜的恒温器，应能在37°±1℃保持一小时。
2.4 水银温度计或酒精温度计，精度在1℃以下。
2.5 旋涡混合器2.6 鲎试剂，应具有国家主管部门的批准文号2.7 细菌内毒素国家标准品（NSE），细菌内毒素工作标准品（WSE），除另有规定外应由中国药品生物制品检定所统一发放。
2.8 细菌内毒素检查用水（BET水）系指与灵敏度为0.03Eu/ml或更高灵敏度的鲎试剂在37±1℃条件下不产生凝集反应的灭菌注射用水。
2.9 实验用具移液管（或刻度吸管，定量移液器）、凝集管（10³75mm）、三角瓶、小试管（16³100mm）、试管架、洗耳球、封口膜或金属试管架、时钟、脱脂棉、吸水纸、剪刀、砂轮。
所用玻璃器皿经过250℃干烤至少1小时。
塑料用具应使用其它适宜的除细菌内毒素方法。
2.10 试剂75%乙醇、蒸馏水、铬酸洗液3 操作方法3.1 试验准备3.1.1 洗液的配制配制铬酸洗液或其他适宜的细菌内毒素灭活剂。
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1 试剂灵敏度的复核
细菌内毒素检查法至药典收载以来，每版都有明确规定：每使用新批量的鲎试剂或试验
条件发生了任何可能影响检验结果改变时，应进行鲎试剂灵敏度的复核试验。在例行的药品
制剂检查验收中发现，有些单位的检验人员在常规进行的细菌内毒素检查时，对所使用的鲎
试剂从未进行过灵敏度复核，部分检验人员对此项工作不甚明了，完全忽视了复核鲎试剂灵
敏度的重要性。
鲎试剂的灵敏度，即鲎试剂在本试验法规定的条件下能检测出的细菌内毒素标准液或供
试品溶液中的最低内毒素浓度（用 Eu/ml 表示），而灵敏度的测定即为鲎试剂在制备过程
中受到各种因素影响，各批鲎试剂与内毒素形成凝胶反应的活力不一样，必须规定一种标准
的内毒素按规定的方法测定。鲎试剂灵敏度复核的意义在于：(1)考查操作技能；(2)考查实
验条件；(3)验证鲎试剂灵敏度是否准确，鲎试剂在生产、销售、运输、储存过程中易受诸
如温度、光线、时间等外界因素的影响，使促凝活力降低；(4)验证细菌内毒素标准品的效
价是否准确。因此为了保证细菌内毒素检查法的准确可靠性，检验者应对每批新购入的鲎试
剂进行灵敏度的复核。
2 干扰试验
干扰试验目的是要确定出供试品在什么样的有效浓度内进行细菌内毒素检查时即可以
克服的干扰因素，又能客观反映其所含内毒素是否符合根值。如氧氟沙星氯化钠注射液的细
菌内毒素检查（2005版新收载，其限值为 1ml 中含内毒素量应小于 0.5Eu ）初次接触，
笔者用不同灵敏度鲎试剂对该样品进行了干扰抑制试验，见表1。表1 氧氟沙星氯化钠注
射液的浓度干扰试验 结果说明，干扰抑制作用与药物浓度有关。药物原液或药物稀释两倍
均存在干扰， PPC 不产生凝集，需再换高灵敏度鲎试剂，对供试品进行 4 倍稀释，
样才能有效地排除氧氟沙星的干扰作用。所以当初次接触到一个样品时，必须对其做干扰试
验，制定其检测方法。
3 检查法中的供试品阳性对照
在进行常规细菌内毒素检查时，规定了阳性对照（PC）、阴性对照（NC）及样品阳性
对照（ PPC ）等必备项目，阳性对照的目的是证明在实验条件下所用鲎试剂灵敏度符合
规定，阴性对照的目的是证明所用的超纯水（ BET ）中不存在可被检验到的内毒素，供试
品阳性对照的目的是证明在试验条件下被检验的供试品溶液不存在抑制因素。这就是通常所
说的干扰试验。进行干扰试验所用鲎试剂的批次及供试品的批量必定是有限的，在进行该药
品常规细菌内毒素检验时鲎试剂的批量及供试品的批量和进行干扰试验时的情况不可能完
全相同，这就不能保证此时的供试品对检查结果不出现异常。为此，我国药典从2000版起
增定了供试品阳性对照是非常必要的。
4 其他事项
还应注意：(1)检查法整个过程应防止用移液管吸取溶液时禁用口吸。(2)保温防止震动，
观察结果应该缓慢倒转。(3)在进行鲎试剂灵敏度的复核、供试品的干扰试验和细菌内毒素
检查时，各试验所要求的对照管应同时进行，在认可试验有效的条件下才能进行计算和制定
检验方法。(4)不同批号不同厂家生产的鲎试剂，灵敏度标示值一样，但有时同一批号的供
试品得出不同的试验结果，不能只选用让供试品符合规定的鲎试剂，需进一步考察这种现象
的原因，一切以用药安全来从严要求。
作者单位： 433100 湖北潜江，潜江市药品检验所
(编辑：汪 洋)