细菌内毒素干扰试验记录鲎试剂灵敏度复核记录
细菌内毒素测定技术—鲎试剂灵敏度复核和方法验证试验
知识点：鲎试剂灵敏度复核试验
二、鲎试剂灵敏度的复核 在本检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低
知识点：鲎试剂灵敏度复核试验
当λc在0.5λ~2λ（包括0.5λ和2λ）时，方可用于内毒素 检查。但是注意要以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。
知识点：干扰试验
一、干扰试验 是为了确定供试品在多大的稀释倍数或 浓度下对内毒素和鲎试剂的反应不存在干扰作用，为产 品能否用细菌内毒素检查法提供依据，并且验证供试品 的配方和工艺有变化，鲎试剂来源改变或供试品阳性对 照结果呈阴性时，供试品是否存在干扰作用。
编号
内毒素浓度
被加入内毒素的溶液 平行管数
A
无
供试品溶液
至少2
标准曲线的中点（或附近点
B
）的浓度（设为λm）
C
至少3个浓度 （最低一点设定为λ）
供试品溶液 检查用水
至少2 每一浓度至少2
D
无
检查用水
至少2
A 为稀释倍数不超过MVD 的供试品溶液。B 为加入了标准曲线中点或 靠近中点的一个已知浓度内毒素的，且与溶液A 有相同稀释倍数的供 试品溶液。C 为如“标准曲线的可靠性试验”项下描述的，用于制备 标准曲线的标准内毒素溶液。D 为阴性对照。
浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，用EU/ml 表示。当使用新批号的 鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进 行鲎试剂灵敏度复核试验。
复核的目的不仅是考察鲎试剂的灵敏度是否准确，也是考察检 验人员操作方法是否正确及试验条件是否符合规定。
QC-7129B鲎试剂灵敏度复核操作规程
正文规范鲎试剂灵敏度复核的操作过程和要求，确保鲎试剂灵敏度复核结果的可靠性。
适用于质监处药理室对鲎试剂灵敏度的复核。
质监处药理室分析人员负责本规程的实施和完成相关记录。
USP版附录85；CP版附录Ⅺ E 。
细菌内毒素检查法：本法系利用从鲎的变形细胞中提取的试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的含量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。
鲎试剂：是鲎变形细胞的溶出物经提取而成。
鲎试剂灵敏度：在本检查法规定的条件下能检测出内毒素标准溶液或供试品溶液中的最低内毒素浓度，用EU/ml表示。
细菌内毒素检查用水(BET水)：系指与灵敏度为0.03EU/ml 或更高灵敏度的鲎试剂在37 1 C 条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
细菌内毒素标准品：USP细菌内毒素参考标准品(RSE)或已标定的细菌内毒素工作标准品(CSE)。
反应终点浓度：是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈现阳性结果的浓度。
一、试剂、材料与仪器设备试剂：鲎试剂批号、灵敏度、规格、生产商。
细菌内毒素检查用水(BET水) 批号、规格、生产商。
细菌内毒素标准品批号、效价、生产商。
材料及仪器设备：电热恒温水箱型号、设备编号。
电热鼓风干燥箱型号、设备编号。
漩涡混合器型号。
无热原试管规格：1075mm。
正文无热原玻璃瓶规格：25ml。
无热原玻璃吸管规格：1ml、2ml、5ml、10ml。
试管架、无热原封口膜、洗耳球、酒精棉球、砂轮片。
二、试验准备试验所用的容器、用具都必须经过处理，250C以上干烤至少1小时，以去除外源性内毒素。
试验操作过程应避免微生物的污染。
三、内毒素溶液配制细菌内毒素标准品系列溶液配制取RSE或CSE 1瓶，按照使用说明书加入规定量的细菌内毒素检查用水使溶，并用漩涡混合器间歇混匀30分钟，然后用细菌内毒素检查用水进一步稀释至2.0、、 0.5、 0.25四个浓度的内毒素标准溶液，每一步稀释应混匀至少30秒钟。
鲎试剂灵敏度复核记录
结果是否有效
计算结果
结果判断
检验人员
BET水批号：12011305
规格：mL/支来源：福州新北化工业有限公司
内毒素标准品复溶时的体积为mL，稀释方法为：用刻度吸管准确吸取内毒素检查用水1mL制成细菌内毒素标准液0λ1.0λ0.5λ0.25λ
（）（）（）（）
NC
反应终点浓度
重1
复2
管3
鲎试剂灵敏度复核试验记录
一仪器设备
试管恒温仪
二鲎试剂检验日期：年月日
批号：
灵敏度：EU/mL
供养单位：
规格：mL/支（瓶）
生产单位：
有效期：年
检验目的：灵敏度考核
检验数量：支（瓶）
检验依据：中国药典年版
三标准品
NES批号：
效价：EU来源：
WSE批号：150601-201072
效价：EU来源：中国药品生物制品检定所
细菌内毒素检查记录word精品
细菌内毒素检查记录（首页）总 页 分 页 检品编号： 检验日期： 检品名称：实验地点：一、 标准规定的细菌内毒素限度（L ）为： 二、 供试品溶液的制备： 1、 预试验确定的MVD 为 倍。
2、 取本品 ml ，加细菌内毒素检查用水 ml ，摇匀，精密量取 ml ，加细菌内 毒素检查用水 ml ，摇匀，即得。
三、 试验用细菌内毒素溶液的制备： 1、取一支细菌内毒素工作标准品，加入 ml 细菌内毒素检查用水 ml ，使溶解，得EU/ml 的试验用细菌内毒素溶液。
2、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (EU/ml ) 3、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (EU/ml ) 4、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (EU/ml ) 5、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (EU/ml ) 6、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (EU/ml ) 四、 供试品阳性对照溶液的制备：1、取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )2、 取 ml (EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )3、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )4、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )5、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )6、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )检验者： 校对者： 室负责人:细菌内毒素检查记录（附页）检品编号. 检验日期：总分页页检品名称: 实验地点：仪器设备: 恒温箱（型号)保温温度:保温时间: 自至加样量及试验结果:结论：本品按《中国药典》2005年版二部附录XI E检验依据检验，结果检验者: 校对者: 室负责人:。
鲎试剂干扰试验检查记录
鲎试剂干扰试验检查记录
1.0 干扰试验预试验
将内毒素检查阴性的供试品进行一系列倍数的稀释，但最大稀释倍数不得超过MVD= C*L/λ0.03(0.03EU/ml为现今我国市售鲎试剂的最高灵敏度)。
使用鲎试剂对每一稀释倍数进行检验。
每一稀释倍数下做2支供试品管和2支供试品阳性对照管（即用该浓度的供试品稀释液将内毒素标准品制成2λ浓度）。
另取2支加入细菌内毒素检查用水作为阴性对照，2支加入2λ浓度的内毒素标准溶液作为阳性对照。
2.0 干扰试验
检验人：检验日期：复核人：复核日期：。
鲎试剂灵敏度复核计算公式
0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.5 0.25
-0.60205999
-0.60205999 -0.60205999
-0.60205999
-0.60205999
-0.60205999
-0.60205999 -0.30103
-0.52680249
-0.60205999
0.250 0.297
-1.22184875
0.060
供试品限度 （EU/ML)
试验管编号
反应终点浓 度（EU/ML)
反应终点浓 度对数值
反应终点浓 反应终点浓 度对数值算 度几何平均
术平均值 值（Eu/ml）
0.5
第1组 第2组
0.24 0.12
-0.61978876 -0.92081875
-0.77030376
0.170
项目名称
鲎试剂标示 灵敏度
（EU/ML)
试验管编号
反应终点浓 度（EU/ML)
反应终点浓 度对数值
反应终点浓 度对数值算
术平均值
测得鲎试剂 灵敏度
（Eu/ml）
内毒素标准溶液（灵敏度 复核）
0.125
含供试品的内毒素溶液 （正式干扰试验）
/
第1组 第2组 第3组 第4组 第1组 第2组 第3组 第4组
结果判定 符合规定 结果判定 符合规定
结果判定 符合规定 符合规定
项目名称 内毒素标准溶液 供试液稀释倍数
1
凝胶法半定量测定结果
鲎试剂标示 灵敏度
（EU/ML)
试验管编号
反应终点浓 终点浓 度对数值算
术平均值
测得鲎试剂 灵敏度
（Eu/ml）
细菌内毒素检测方法验证方案说明
细菌内毒素检测方法验证方案起草人__________起草日期________审核人__________审核日期________批准人__________批准日期________西安力邦制药有限公司细菌内毒素检测方法验证方案目的范围责任人内容1.实验材料及用具2实验准备3.具体验证步骤3.1.鲎试剂灵敏度复核3.2..干扰实验33供试品细菌内毒素检查4. 验证结附: 表1.鲎试剂灵敏度复核记录表2.干扰试验记录表3.细菌内毒素检查记录细菌内毒素检测方法验证方案目的：为确保盐酸罗哌卡因一水合物细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。
范围：盐酸罗哌卡因一水合物细菌内毒素检测方法责任人：细菌内毒素检验员、QC主管内容：1.实验材料及用具1.1.电子天平12电热干燥箱13恒温水浴箱14水银温度计1.5.旋涡混合器16 鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）1.7.细菌内毒素工作标准品（由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品）1.8.细菌内毒素检查用水1.9.实验用具：移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、剪刀、砂轮。
2实验准备2.1.玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馏水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入烤箱。
2.2.除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置烤箱后，将烤箱调至250C，待烤箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1小时。
达到规定时间后，关断电源，待烤箱温度自然降至室温。
在不打开金属容器的情况下，可在两天内使用；如果玻璃器皿用锡箔纸包装，在不打开包装的情况下可在两周内使用，否则须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素。
3.具体验证步骤3.1.鲎试剂灵敏度复核3.1.1.实验操作3.1.1.1.细菌内毒素标准溶液的制备取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。
鲎试剂灵敏度复核记录
鲎试剂灵敏度复核试验记录
一 仪器设备
试管恒温仪
二 鲎试剂 检验日期： 年 月 日
批号：
灵敏度： EU/mL
供养单位：
规格： mL/支（瓶）
生产单位：
有效期： 年
检验目的：灵敏度考核
检验数量： 支（瓶）
检验依据：中国药典 年版
三 标准品
NES批号：
效价： EU 来源：
WSE 批号：
NC
反应终点浓度
重 1
复 2
管 3
数 4结果是否有效计算结果结果判断检验人员
效价： EU 来源：中国药品生物制品检定所
BET水批号：
规格： mL/支 来源：福州新北化工业有限公司
内毒素标准品复溶时的体积为 mL，稀释方法为：用刻度吸管准确吸取内毒素检查用水1mL制成细菌内毒素标准液。
四 反应结果 （反应起止时间： ～ ） 室温： ℃
内毒素浓度
λ λ λ λ
（ ） （ ） （ ） （ ）
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检验目的
鲎试剂灵敏度复核
室 温
检验依据
《中国药典》2010年版附录
试剂名称
生产单位
批号
灵敏度/效价
规格
鲎试剂
EU/ml
细菌内毒素标用水
标准品稀释：
10EU/ml1 EU/ml()0.0.5EU/ml ()0.25EU/ml( )
0.125 EU/ml()0.0625 EU/ml()
鲎试剂干扰试验记录室 温：
样品名称
样品批号
样品规格
样品包装
样品来源
检验依据
《中国药典》2010年版附录
内毒素限值
试剂名称
生产单位
批号
灵敏度/效价
规格
鲎试剂
EU/ml
细菌内毒素标准品
EU/ml
细菌内毒素检查用水
实验操作
1、标准品稀释：10 EU/ml1 EU/ml0.5 EU/ml
2、供试品的制备：
3、含供试品内毒素溶液的制备：10EU/ml1 EU/ml0.5 EU/ml
保温时间
内毒素浓度
EU/ml
2λ
（）
λ
（）
0.5λ
（）
0.25λ
（）
阴性对照
终点浓度
反应
结果
1
2
3
4
结果计算
标准规定
当λc在0.5λ～2λ（包括0.5λ和2λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。
结果判断
□ 符合规定□ 不符合规定
检验者： 校对者：
日 期： 年 月 日 日 期： 年 月 日
反应结果 保温时间（～）
内毒素浓度
EU/ml
2λ
（）
λ
（）
0.5λ
（）
0.25λ
（）
阴性对照
反应终点浓度
内毒素标准溶液
1
2
3
4
含供试品
的内毒素
溶液
1
2
3
4
结果计算
标准规定
当Es在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，且Et在0.5Es～2.0Es（包括0.5Es和2.0Es）时，则认为供试品在该浓度下不干扰实验，可在该浓度下对此供试品进行细菌内毒素检查。
结果判断
□ 符合规定 □ 不符合规定
检验者：校对者：
日 期： 年 月 日日 期： 年 月 日