水稻转基因实验方法与步骤
水稻转基因组织培养步骤
农杆菌介导的转化一．试剂1 6-BA (6-BenzylaminoPurine) Sigma Cat No. B-58982 KT (Kinetin) Sigma Cat No. K-07533 NAA (Napthalene acetic acid) Sigma Cat N-06404 IAA (Indole-3-acetic acid) Sigma Cat No. I-51485 2,4-D (2,4-Dichlorophenoxyacetic acid) Sigma Cat No. D-84076 Kanamycin USB Cat No. 179247 CH (Casein Enzymatic Hydrolysate) Sigma Cat No. C-72908 Hn (hygromycin B) GiBco BRL Cat No. 10687-0109 Cn (Carbenicillin) 国产分装10 Nicotinic acid Sigma Cat No. N-076511 Pyridoxine HCl Sigma Cat No. P-866612 Thiamine HCl Sigma Cat No. T-390213 Inositol Sigma Cat No. I-301114 Phytagel Sigma Cat No. P-816915 Dimethyl Sulfoxide-DMSO Sigma Cat No. D-587916 X-gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactoside) Sigma Cat No. B-378317 AS (Acetosringone) Aldrich chem., CO 01531 EG二．溶液1.MS maxNH4NO316.5gKNO319.0gKH2PO4 1.7gMgSO4∙7H2O 3.7gCaCl2∙2H2O 4.4g 或CaCl2 3.32g逐一溶解药品后，加dH2O定容到1000ml。
转基因水稻培育实验报告
一、实验目的本实验旨在通过基因工程技术，将具有特定功能的基因导入水稻中，培育出具有抗病、抗虫、抗逆等优良性状的转基因水稻，为我国水稻育种提供新的途径。
二、实验原理转基因技术是指将外源基因导入目标生物体基因组中，使目标生物体获得新的性状或功能。
本实验采用农杆菌介导法将目的基因导入水稻中，通过基因重组，使水稻获得抗病、抗虫、抗逆等优良性状。
三、实验材料1. 水稻品种：Oryza sativa L.（籼稻）2. 抗病基因：Xa213. 抗虫基因：Bt蛋白基因4. 抗逆基因：海藻糖合成酶基因5. 农杆菌：Agrobacterium tumefaciens EHA1056. 实验试剂：限制酶、DNA连接酶、质粒、抗生素等四、实验方法1. 目的基因的克隆与构建（1）从基因库中获取抗病基因Xa21、抗虫基因Bt蛋白基因和抗逆基因海藻糖合成酶基因的DNA序列。
（2）利用PCR技术扩增目的基因。
（3）将扩增的目的基因与载体质粒连接，构建重组质粒。
2. 农杆菌转化（1）将重组质粒转化农杆菌EHA105。
（2）将转化后的农杆菌接种于含有抗生素的培养基中，筛选阳性克隆。
3. 转化水稻（1）将阳性农杆菌接种于含有抗生素的培养基中，培养至对数生长期。
（2）将农杆菌与水稻叶片接触，进行转化。
4. 筛选转基因植株（1）将转化后的水稻苗移栽至田间，进行抗性鉴定。
（2）根据抗性表现，筛选出转基因植株。
5. 分子鉴定（1）提取转基因植株的DNA。
（2）利用PCR技术检测目的基因是否整合到水稻基因组中。
五、实验结果1. 成功构建了含有抗病基因Xa21、抗虫基因Bt蛋白基因和抗逆基因海藻糖合成酶基因的重组质粒。
2. 转化后的农杆菌能够将目的基因导入水稻中。
3. 通过抗性鉴定，筛选出具有抗病、抗虫、抗逆等优良性状的转基因水稻。
4. 分子鉴定结果显示，目的基因已整合到水稻基因组中。
六、实验结论本实验成功培育出具有抗病、抗虫、抗逆等优良性状的转基因水稻，为我国水稻育种提供了新的途径。
转基因水稻中间试验要求
转基因水稻中间试验要求
1.实验目的和设计：中间试验应明确实验目的，并且在试验设
计中包括转基因水稻的基因转导方法、检测方法、结果分析等。
2.样本获取和处理：中间试验应使用符合转基因水稻要求的样本，包括转基因水稻种子、培养细胞等。
在样本处理过程中，应按照转基因水稻的特点，采取适当的处理方法。
3.环境监测和管理：在中间试验过程中，应监测和管理试验环境，包括温度、湿度、光照等条件的控制，以及病虫害防治等。
4.基因检测和分析：中间试验应使用准确的基因检测方法，确
认转基因水稻中是否成功转导了目标基因。
此外，还需要对转基因水稻的性状、产量、抗病虫性等进行分析。
5.安全评估和风险评估：中间试验还需要对转基因水稻的安全
性和风险进行评估，包括对人类、动物和环境等方面的影响评估。
6.试验记录和数据分析：中间试验应详细记录试验过程中的各
项数据，并进行统计和分析，以验证试验结果的有效性和可靠性。
7.伦理审查和法律合规：中间试验应符合伦理审查和法律法规
的要求，确保试验过程符合科学伦理和法律要求。
以上是转基因水稻中间试验的一些基本要求，具体要求还可以根据实验具体情况和法律法规的要求进行确定。
转基因水稻的原理
转基因水稻的原理
转基因水稻的原理是通过将具有特定基因的外源DNA导入到水稻细胞中，并使其正常表达，在水稻中产生所需的特定性状。
转基因水稻的原理主要包括以下几个步骤：
1. 基因选择：选择具有所需特性的基因，这些基因可以来自同一物种或其他物种。
例如，选择具有抗虫性、抗草木得、耐盐碱等性状的基因。
2. 基因克隆：将选定的基因从其原始来源中克隆出来，通常使用PCR等分子生物学技术来扩增目标基因序列。
3. 插入载体：将目标基因插入携带基因转移所需的DNA片段的载体中。
常用的载体是冠状病毒、细菌或酵母等。
4. 基因转移：将插入载体的基因导入到水稻细胞中。
目前常用的方法有农杆菌介导转化和基因枪转化等。
转化过程中，目标基因被导入水稻细胞的染色体中。
5. 基因整合和表达：插入的基因在水稻细胞中整合到染色体上，并在细胞的遗传物质DNA中被正常复制和遗传。
转基因水稻的这些细胞和后代可以继续表达改良后的特性。
6. 选育和鉴定：基于获得的转基因水稻植株，进行纯系选育和鉴定，确保其稳
定性和所需特性的遗传传递。
通过这些步骤，转基因水稻可以获得具有所需特性的水稻品种，以提高水稻的抗病虫害、抗逆性、增加产量等特性，进而提高农作物的生产效益。
水稻转基因步骤
在植物转基因过程中，为了有效地识别和筛选转化子，常将目的基因和标记基因构建在同一表达载体中。
这种载体结构导致转基因植物中目的基因和标记基因始终共存，而标记基因（尤其是抗生素抗性基因）的存在可能给转基因植物的生物安全带来隐患。
目前已研发了多种方法剔除转基因植物中的标记基因，其中最常见的是共转化法(Komari 1996，McCormac 等2001)。
共转化系统是采用2个质粒或1个含有两套T—DNA表达盒的表达载体共同转化植物，其中一套表达盒含有抗性选择标记基因，另一套表达盒含有目的基因，它们转化植物时可能整合到植物基因组的不同位置。
转基因植株在减数分裂过程中，标记基因和目的基因发生分离，从而可在转基因后代中筛选到只含目的基因而不含选择标记基因的个体。
共转化从根本上排除了转基因植物中的选择标记，是保证人畜和环境安全的重要措施，因此受到了广泛的重视。
Zhou 等（2003）认为，用分别含一个T-DNA区的两个载体共转化的效率低于双T-DNA区表达载体的共转化效率。
目前关于利用双T-DNA区表达载体，获得无选择标记转基因阳性株系的研究已有不少报道（唐俐等2006，张秀春等2006，于恒秀等2005）。
花药培养与遗传转化技术相结合，可以快速获得纯合转基因植株（斯华敏等，1999，付亚萍等，2001），但是应用花药培养快速获得只含目的基因而无选择标记的转基因研究尚未见报告。
水稻是最主要的粮食作物，转基因水稻的安全显得尤为重要。
本实验室通过农杆菌介导的水稻转化体系，将包含人乳铁蛋白(hLF)、高赖氨酸(SB401)、高甲硫氨酸(RZ10)基因的表达载体p13HSR成功转化脆茎稻，由于该表达载体采用双T-DNA结构，将检测出含选择标记潮霉素磷酸转移酶基因（hpt）和目的基因的转基因阳性T0植株按单株直接进行花药培养。
在189株二倍体花培植株中检出23株有目的基因没有选择标记hpt的转基因纯合植株，得率为9.87％。
水稻转基因实验技术手册
水稻转基因实验技术手册遗传工程实验室Genetic Engineering Laboratory Discipline of Crop Genetics and BreedingFujian agricultural and Forestry University目录第一章DNA提取与纯化第二章引物设计与PCR第三章感受态细胞制备与转化（E. coli & 农杆菌）第四章电泳技术、琼脂糖凝胶DNA回收第五章质粒回收第六章RT-PCR第七章构建载体互补实验过量表达GFPGUSRNAi第八章水稻组织培养第九章原位杂交第十章石蜡切片技术第十一章扫描电子显微镜附录：第一章SDS-DNA微量提取法1、取新鲜叶片5cm 左右于1.5ml 离心管中，加入液氮研磨（电钻）。
2、加入700μl 预热至65℃的SDS 抽提液，迅速搅匀后置于65℃水浴30min 。
3、加入200μl 5M KAc ，颠倒混匀，-20℃冰浴30min 后，10,000rpm 离心5min ，将上清夜倒入另一新的1.5ml 离心管中。
注：若溶液中仍有植物组织，可进行二次离心。
4、加入等体积的异丙醇（700 μl ），-20℃冰浴30min ，11,000rpm 离心5min 。
5、弃上清，加入70%乙醇清洗液晾干。
6、将风干的DNA 溶于100 μl TE 溶液中，55℃水浴溶解1h ，再室温放置1d 。
实验准备：溶液配制：SDS-抽提液：1M Tris-HCl ：100ml 5M NaCl ：100ml 0.5M EDTA ：100ml 10% SDS ：125mlTE （pH8.0）：1M Tris-HCl （pH8.0）：5ml 0.5M EDTA （pH8.0）：1ml第二章 PCR定容至1000ml定容至500mlPrimeSTAR HS DNA Polymerase with GC Buffer & TaKaRa LA Taq with GC BufferPCR体系和程序第四章琼脂糖凝胶DNA回收*第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇1、在长波紫外下，用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽力切除不含DNA的凝胶，得到凝胶体积越小越好。
水稻转基因实验方法与步骤
水稻转基因实验操作方法步骤一、水稻愈伤组织的诱导（一）以水稻幼胚为试材诱导愈伤组织1．消毒：取水稻未成熟种子（灌浆期），按以下步骤消毒：1）用自来水冲洗种子，去掉浮起的瘪谷；2）将种子放入250ml无菌烧杯中（种子数量约占1/3体积），用200ml70%酒精消毒2分钟；（在操净工作台上进行无菌操作）3）加入250ml25%次氯酸钠（NaClO）溶液，同时加数滴吐温-20，浸泡90分钟；4）倒去NaClO溶液，用无菌蒸馏水清洗种子4-5遍。
2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）用镊子夹住种子，在无菌滤纸上用钢钩挤出幼胚，置入诱导培养基中；2）操作完毕后封好培养皿（一般保鲜膜），在暗处适温下（25-28℃）培养5天；3）继代培养。
用镊子剥下胚性愈伤组织（去掉芽及膜状物），置入继代培养基中（凸起面向上），暗处适温下（25-28℃）培养3天。
（二）以水稻成熟胚为试材诱导愈伤组织1．消毒：取水稻成熟种子，人工或者机械脱壳，挑选饱满光洁无菌斑的种子，按以下步骤消毒：1）将适量种子放入10ml离心管中（100颗左右），倒入75%酒精消毒2分钟；2）倒去酒精，加入一定量的0.1%升汞溶液，浸泡10分钟；3）倒去次氯酸钠溶液，用无菌蒸馏水清洗种子5-6遍，最后一遍浸泡30分钟。
2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）种子放在无菌滤纸上吸干，置入成就胚诱导培养基中，每皿12－14颗；2）操作完毕用封口膜（MicroporeTMSurgicalTape）封好培养皿，在28℃光照培养箱，暗培养培养3周；3）在超净工作台上打开培养皿，用镊子挑取自然分裂的胚性愈伤组织（淡黄色，致密呈球状，去除种子和芽），置入继代培养基中，在28℃光照培养箱，继代培养1周（2周愈伤组织更为松散）。
（如不马上用，需转移至暗处，于22℃继续培养1周）二、农杆菌培养挑取农杆菌单克隆或吸取所保藏的农杆菌菌液100国于4mlYEP（含50mg/lKan和50mg/lStr）培养液中，28℃,250rpm振荡培养20-36h至菌液OD600为0.8-1.0（颜色接近橙黄色）。
水稻转基因技术的研究与应用
水稻转基因技术的研究与应用水稻是我国的主要粮食作物之一，也是全球最重要的粮食作物之一。
随着社会和经济的不断发展，人们对水稻品质和产量的要求也不断提高。
而转基因技术作为一种创新性技术，为水稻的改良提供了新的途径。
本篇文章将探讨水稻转基因技术的研究与应用。
一、水稻转基因技术的研究1.背景水稻转基因技术是将外源基因导入水稻细胞中，使水稻获得某些特定基因的性状。
这样可以通过调整水稻的生长和发育，使其在抗病、耐旱、提高产量等方面得到改善。
2.研究方法水稻转基因技术主要包括以下三种方法：(1) 农杆菌介导转化：将所需基因导入农杆菌载体，经过处理后将其导入水稻细胞中，使细胞产生抗病、提高产量等性状。
(2) 基因枪法转化：将所需基因载入金属小粒子上，压缩空气将粒子“射”入水稻细胞中。
(3) 电穿孔法转化：利用电场作用使水稻细胞短暂性开放，使基因能够有效导入细胞中。
3.研究进展目前，水稻转基因技术已取得了一些重要的进展，主要体现在以下几个方面：(1) 抗虫基因的成功导入：2007年，我国科学家成功将抗虫基因导入水稻，并以此培育了多个抗虫水稻品种。
(2) 抗病基因的成功导入：我国科学家通过细胞融合技术，将米瘟抗病基因导入一种水稻品种中，并获得了抵御米瘟病的水稻品种。
(3) 抗旱基因的成功导入：我国科学家成功将抗旱基因导入水稻，良种生长在干旱条件下的产量大大提高。
二、水稻转基因技术的应用1. 抗虫作物的生产目前，我国已经培育了多个抗虫作物品种。
这些品种通过导入相关基因并与优良品种杂交，产生出的基因工程作物比传统种植方法的作物更加耐虫。
2. 抗病作物的生产目前，我国已经获得了多个抗病作物品种。
这些品种通过导入相关基因并与优良品种杂交，产生出的基因工程作物比传统种植方法的作物更加耐病。
3. 提高产量基因工程水稻的生产方式与传统水稻生产方式相比，具有很大的优势。
通过导入相关基因，可以提高水稻的产量，并缩短生长周期。
4. 改善品质基因工程水稻的应用还可以改善水稻品质，如改良失酬水稻的品质和味道等。
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水稻转基因实验操作方法步骤一、水稻愈伤组织的诱导（一）以水稻幼胚为试材诱导愈伤组织1．消毒：取水稻未成熟种子（灌浆期），按以下步骤消毒：1）用自来水冲洗种子，去掉浮起的瘪谷；2）将种子放入250ml无菌烧杯中(种子数量约占1/3体积)，用200ml 70%酒精消毒2分钟；（在操净工作台上进行无菌操作）3）加入250ml 25%次氯酸钠（NaClO）溶液，同时加数滴吐温-20，浸泡90分钟；4）倒去NaClO溶液，用无菌蒸馏水清洗种子4-5遍。
2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）用镊子夹住种子，在无菌滤纸上用钢钩挤出幼胚，置入诱导培养基中；2）操作完毕后封好培养皿(一般保鲜膜)，在暗处适温下（25-28℃）培养5天；3）继代培养。
用镊子剥下胚性愈伤组织（去掉芽及膜状物），置入继代培养基中（凸起面向上），暗处适温下（25-28℃）培养3天。
（二）以水稻成熟胚为试材诱导愈伤组织1．消毒：取水稻成熟种子，人工或者机械脱壳，挑选饱满光洁无菌斑的种子，按以下步骤消毒：1）将适量种子放入10ml离心管中（100颗左右），倒入75%酒精消毒2分钟；2）倒去酒精，加入一定量的0.1%升汞溶液，浸泡10分钟；3) 倒去次氯酸钠溶液，用无菌蒸馏水清洗种子5-6遍，最后一遍浸泡30分钟。
2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）种子放在无菌滤纸上吸干，置入成就胚诱导培养基中，每皿12－14颗；2）操作完毕用封口膜（Micropore TM Surgical Tape）封好培养皿，在28℃光照培养箱，暗培养培养3周；3）在超净工作台上打开培养皿，用镊子挑取自然分裂的胚性愈伤组织（淡黄色，致密呈球状，去除种子和芽），置入继代培养基中，在28℃光照培养箱，继代培养1周（2周愈伤组织更为松散）。
（如不马上用，需转移至暗处，于22℃继续培养1周）二、农杆菌培养挑取农杆菌单克隆或吸取所保藏的农杆菌菌液100µl于4ml YEP（含50mg/lKan和50mg/l Str）培养液中，28℃，250rpm振荡培养20-36h至菌液OD600为0.8-1.0（颜色接近橙黄色）。
三、共培养和抗性愈伤组织的选择1．感菌与共培养：1）取培养好的菌液500µl于1.5ml离心管中，4℃，4000rmp，离心2min，去上清。
用含200umol/l As的30ml AAM感菌液制成悬浮液，使菌液OD600的终浓度为0.01（0.08-0.1）；2）将长到一定大小的水稻愈伤组织挑出，放入农杆菌悬浮液侵染5分钟；3）将愈伤组织取出，置于无菌的滤纸上沥干30-40分钟；4）将愈伤组织置于共培养基上。
25℃暗培养2-3天（表面会长有薄薄的一层农杆菌）。
2．选择：1）将愈伤组织取出，用无菌水清洗5-6次（多次洗会更好），其间需不停的振荡。
再用含250mg/l羧苄青霉素钠的无菌水清洗1~2遍。
最后置于无菌滤纸上沥干2小时；2）将晾干的愈伤转入含250mg/l Carbenicillin（羧苄青霉素钠）和50mg/l潮霉素的选择培养基上进行第一轮选择，28℃，光照培养14天（若农杆菌无法抑制，可加大抗生素浓度，最大用过500mg/l）；3）将长有抗性愈伤的初始愈伤转到含250mg/l Carbenicillin和50mg/l潮霉素的培养基上进行第二轮选择，28℃，光照培养，直到颗粒性的抗性愈伤组织长出。
四、抗性愈伤组织的预分化（可选）将新长出的抗性愈伤组织转入预分化培养基中，25℃，光照培养7天。
五、抗性愈伤组织的诱导分化和生根挑取从同一愈伤来的颜色鲜黄的抗性愈伤3-4颗，移入装有分化培养基的培养皿或塑料广口瓶中（每皿或每瓶放置5-7颗），用封口膜封好，放入恒温培养室中，28℃，光照培养(16h光/8h暗)，等待分化成苗（15-30天）。
待苗长至1cm左右，放入生根培养基中壮苗注：以上一至五的操作步骤皆在无菌条件下进行。
六、转基因苗的锻炼和移栽转基因苗从分化到移栽最短时间为两个月左右。
将苗根部和茎叶分化得较完好的试管挑出（苗长至试管顶部，就要及时开盖），打开封口膜，加入适量蒸馏水或无菌水（防止培养基长菌），炼苗3天至一周左右，然后洗去琼脂，移栽到温室的土钵中生长，检测。
附录：各种母液及培养基的配制方法 一、溶液配制0.1%升汞：小心称取1克HgCl ，用少量蒸馏水溶解后，定容至1000ml 。
25%次氯酸钠溶液：量取250mlNaClO ，用蒸馏水定容至1000ml 。
激素溶液配制方法： KT 加少量稀碱（1M NaOH ）溶解，再用蒸馏水定容 1 mg/ml 6-BA 加稀碱(同上)或盐酸溶解，再用蒸馏水定容 1 mg/ml NAA 加碱溶解（1M NaOH ），再用蒸馏水定容 1 mg/ml 2，4-D 加少量稀碱或酒精溶解，再用蒸馏水定容 1 mg/ml ABA 先用乙醇溶解，再用蒸馏水定容1 mg/ml水稻培养液配方（贮备液）：试 剂每10升溶液中的克数1．NH 4NO 3 914 2．NaH 2PO 4·2H 2O 403 3．K 2SO 4 714 4．CaCl 2 886 5．MgSO 4·7H 2O 32406．MnCl 2·4H 2O 15.0 分别溶解后加500ml 浓硫酸，然后再加蒸馏水到10L 。
（NH 4）6·Mo 7O 24·4H 2O0.74 H 3BO 3 9.34 ZnSO 4·7H 2O 0.35 CuSO 4·5H 2O 0.31 FeCl 3·6H 2O 77.0 柠檬酸（-水合物）119*使用时，每4L 培养液中加1号~6号贮备液，各5ml 。
为使水稻生长健壮，可另加SiO 2，50ppm~100ppm 。
调节pH 值至5.0~5.1。
二、培养基的配制：1．培养基母液配方：1）N6培养基母液（20倍）：每升含：KNO356.6gMgSO4·7H2O 2.7gKH2PO48g(NH4)2SO49.26gCaCl· 2H2O 3.32g2）B5微量母液(100倍)：每升含：KI 0.0750gH3BO30.30gMnSO4·H2O 1.0gZnSO4·7H2O 0.2gNa2MoO4·2H2O 0.025gCuSO4·5H2O 0.0025gCoCl2·6H2O 0.0025g3）B5有机母液：烟酸(VB3) 1mg/ml盐酸吡哆醇(VB6)1mg/ml盐酸硫胺素(VB1)10 mg/ml肌醇10 mg/ml4）MS培养基大量元素（20倍）：每升含：NH4NO333.0gKNO338.0gCaCl2·2H2O 8.8g（相当于CaCl2 6.644g）MgSO4·7H2O 7.4gKH2PO4 3.4g5)铁盐(100倍)：FeSO4·7H2O 2.78gNa2EDTA·2H2O 3.73g注：FeSO4·7H2O和Na2EDTA·2H2O分别溶解混合后，需加热煮沸使Fe2＋螯合，最终溶液颜色为深黄色。
7）AA大量元素母液（每升含量）：KCl 2.95gCaCl2·2H2O 0.15gMgSO4·7H2O 0.25gNaH2PO4·2H2O0.15g2．培养基配方1）粳稻幼胚、成熟胚愈伤组织诱导培养基（每升含量）：N6大量元素：50ml B5微量：10ml铁盐：10ml烟酸： 1 ml盐酸吡哆醇： 1 ml盐酸硫胺素： 1 ml肌醇：10ml L-Glu：0.5 g L-pro: 0.5 g(2.8g) CH : 0.3g2,4-D : 2.5ml（2ml）蔗糖：30gAgar 8g PH值：5．8注：括号中为成熟胚愈伤组织诱导培养基成份及用量，其它与幼胚配方相同。
以下同2）粳稻幼胚、成熟胚愈伤组织继代培养基（每升含量）：N6大量元素：50ml B5微量：10ml铁盐：10ml烟酸： 1 ml盐酸吡哆醇： 1 ml盐酸硫胺素： 1 ml肌醇：10ml L-Glu：0.5 g L-pro: 0.5 g(2.8g) CH : 0.3g6-BA（2,4-D）0.5ml(2ml)NAA(不加) 0.5ml蔗糖30g Agar 8g PH值：5．83）籼稻幼胚、成熟胚愈伤组织诱导培养基（每升含量）：烟酸： 1 ml盐酸吡哆醇： 1 ml盐酸硫胺素： 1 ml肌醇：10ml L-Glu：0.5 g L-pro: 0.5 g CH : 0.3g2,4-D : 2.5ml麦芽糖：30g Phytagel: 4.0g PH值：5．84）粳（籼）稻共培养培养基（每升含量）：N6（MS）大量元素：50ml B5微量：10ml铁盐：10ml 烟酸： 1 ml盐酸吡哆醇： 1 ml盐酸硫胺素： 1 ml 肌醇： 2 g MES 3.9g蔗糖（麦芽糖）：30g CH : 0.5g Phytagel: 4.0gPH值：5．555℃时加As 至终浓度为200μM5）选择培养基（MCH/NCH，籼稻/粳稻）每升含量：MS/N6大量元素：50ml B5微量：10ml铁盐：10ml 烟酸： 1 ml盐酸吡哆醇： 1 ml盐酸硫胺素： 1 ml 肌醇：10ml L-Glu：0.5 g L-pro: 0.5 g CH : 0.3g2,4-D : 2ml麦芽糖/蔗糖：30g Phytagel: 4.0g PH值：5．8灭菌后再加：Hyg（潮霉素）50 mg/LHyg（潮霉素）50 mg/L6）粳稻预分化培养基配方（每升含量）：烟酸： 1 ml盐酸吡哆醇： 1 ml盐酸硫胺素： 1 ml肌醇：10ml L-Glu：0.5 g L-pro: 0.5 g CH : 0.3g6-BA: 2 ml NAA 0.1 ml ABA 5ml 蔗糖：30g Phtagel 4.0g PH值 5.8灭菌后再加Carbenicillin250mg/lHyg（潮霉素）50 mg/L7）粳稻分化培养基配方（每升含量）：N6大量元素：50ml B5微量：10ml铁盐：10ml 烟酸： 1 ml盐酸吡哆醇： 1 ml盐酸硫胺素： 1 ml 肌醇：10ml L-Glu：0.5 g L-pro: 0.5 g CH : 0.3g6-BA: 3 ml NAA 0.5 ml 蔗糖：30g Agar8 gPH值：5．88）粳稻生根培养基配方（每升含量）：N6大量元素：25ml B5微量：5ml铁盐：5ml烟酸：0.5ml盐酸吡哆醇：0.5 ml盐酸硫胺素：0.5 ml 肌醇：5ml蔗糖：20g agar:7 g9）籼稻分化培养基配方（每升含量）：MS大量元素：50ml B5微量：10ml铁盐：10ml 烟酸： 1 ml盐酸吡哆醇： 1 ml盐酸硫胺素： 1 ml 肌醇：10ml L-Glu：0.5 g L-pro: 0.5 g CH : 0.3g KT: 2.5 ml NAA 0.5 ml 麦芽糖：30g agar:8 gPH值：5．810）农杆菌生长的YEP液体培养基配方（每升含量）：酵母提取物10g蛋白胨10gNaCl 5gpH 7.0链霉素(Str) 50mg 卡那霉素(Kan)或其它抗生素50mg11）农杆菌生长的YM固体培养基配方（每升含量）：244NaCl 0.2g Agar 12gPH 7.0链霉素(Str) 50mg 卡那霉素(Kan)或其它抗生素50mg12）悬浮农杆菌感染愈伤组织团的培养基配方（AAM）每升含量：AA大量元素：100ml B5微量：10ml铁盐：10ml 烟酸： 1 ml盐酸吡哆醇： 1 ml盐酸硫胺素： 1 ml 肌醇：10ml MES： 3.9 g CH : 0.5g 麦芽糖：30g PH值：5．555℃时加As至终浓度为200μM。