(仅供参考)结核感染T细胞检测
带你了解结核感染T细胞检测
带你了解结核感染T细胞检测
该检测通过检测受结核分枝杆菌抗原刺激而活化的效应T细胞来诊断结核感染。
该检测适用于所有具有结核潜伏感染风险或怀疑是结核病的人群，无论年龄、性别、种族、治疗还是免疫状况，其诊断结核感染的敏感性为90%-95%，特异性为93%-100%。
对临床诊断或排除结核病具有重要的参考价值。
结果判定:
其中N为本底对照培养管(N)含量值，P为阳性对照培养管(P)含量值，T为测试培养管(T)含量值。
本实验通过测定N.T.P三种培养管培养后血量标本的吸光度并代入相关线性回归方程的出N.T.P的含量值。
如何来看实验结果？
1、患者要想确定自己有没有患有结核感染，要去医院检查身体的T-SPOT.TB的值，要知道结核感染不能只看T细胞来判定，患者也要全面检查，结果如果提示患者体内有结核菌感染，或者是T检查的斑点数高，那就代表患有结核病的几率很高了，当然也不排除只是结核菌潜伏感染的病症。
2、患者检查结果是阳性，要就是小心了，这代表着身体提示着，身体已经出现了结合杆菌感染了，所以才会出现这样的检查结果，不过这个只是检查结果并不全面，结果的准确性有限的。
3、患者医院如果是结核感染T细胞斑点试验，当这个结果呈现结果为阳性的，这就是提示患者可能已经感染了结核感染，但是也不排除肺外结核。
4、必要时患者要进行预防性治疗，也要结合临床症状和其它辅助检查来确定自己的病情，例如x光、结核菌素试验等检测。
发布于 2019-06-28。
结核感染T细胞干扰素释放试验要点
4、TB-IGRA阳性，表明机体曾经患过结核病，不能区分目前是否为活动性结核病；
5、TB-IGRA所用抗原为MTB特异性抗原，阴性检测结果代表目前机体没有MTB特异抗原致敏的T淋巴细胞，即受检者目前未感染MTB。
说明：近期有其它细菌感染、慢性病等可能会造成体内γ-干扰素升高，或者近期接受γ-干扰素治疗也会导致体内γ-干扰素水平过高。
免疫缺陷患者，应用免疫抑制剂、肾上腺皮质激素治疗患者，病危病人和免疫能力极其低下，在接受结核杆菌相关抗原刺激时，γ干扰素的分泌比较低，可能会产生阴性结果。
建议对该类患者检测前参考CD4含量水平或者T淋巴细胞水平。
结核感染T细胞(TB-IGRA)/γ-干扰素释放试验
项目名称
标本类型
临床意义
“结核感染T细胞(TB-IGRA)”(又称“γ-干扰素释放试验”）
肝素锂抗凝血（长绿管），采集静脉血不低于4mL
1、可用于结核病辅助诊断，特别是对于菌阴肺结核和肺外结核的辅助诊断有更大的临床意义；
2、潜伏性结核筛查(不受卡介苗接种和环境分枝杆菌的影响)，主要用于生物制剂/免疫抑制剂使用前后的结核感染筛查；
结核感染T细胞检测
T-SPOT.TB高灵敏度
种类
活动性结核/ 灵敏度
内容摘要
将T-SPOT.TB的检测结果与最后通过涂片和培养确诊的结 果进行比较。包括牛型结核杆菌和非洲型结核杆菌感染的 患者。T-SPOT.TB的灵敏度为97.2%。（CI 90.3-99.7%）
在经培养确诊的活动性结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度 为94%。
87
Lee et al.
ERJ 2006; 28:24–30
30
Clark et al. Clin. Exp.
Imm.
2007; 150(2):238-44
140
Kang et al Chest.
2007 Sep;132(3):959-65
抗原刺激后分泌γ 干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。 检测外周血中受结核特异抗原刺激释放γ 干扰素的T淋巴
细胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统 对斑点进行计数，1个斑点代表一个分泌细胞，计算出抗 原特异性细胞的频率。
空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数 大于20时视为试验有效
Immunol 2008; 15;168-
71
T-SPOT.TB高特异性 检测所用的ESAT-6＆CFP 10抗原均来自结核
分枝杆菌基因组RD1区域，RD1区基因仅存在于结 核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）。 卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失RD1区基因 因此 T-SPOT.TB不会受卡介苗或者非结核分枝杆 菌影响。
32
Kim et al. Arch Intern
Med.
结核感染T细胞检测ppt课件
采血量：6-10ml 采血管：肝素抗凝 样本保存：当天送样，常温运输 注意：PET-CT与输血
*
方法学优点
特异性95%左右，不受卡介苗（BCG）接种与环境分枝杆菌影响 灵敏度95%左右，几乎不受个体免疫功能低下影响 快速，24小时报告结果 国内外指南推荐，多篇文献数据支持 斑点数意义：斑点越多越倾向活动性结核、现症感染、能反应疗效 送样的注意事项
*
——Ribeiro S, Dooley K, et al. BMC Infect Dis, 2009 （IF=3.02）
方法：在肺结核治疗中，用T-SPOT.TB方法评估治疗效果。在治疗开始前，治疗16周和24周后，分别计数ESAT-6和CFP-10刺激产生的斑点数
图1. 所有研究对象ESAT-6, CFP-10和总RD1在治疗前，16周后和24周后的平均斑点数（n=58）
*
方法学缺点
不能够提示临床患者的病变部位，需要结合临床的判断 目前还不能够根据斑点数量的多少来判断患者是活动性结核病或是潜伏感染者
*
内容
结核病基础概念 T-SPOT.TB 产品知识 T-SPOT.TB 临床应用 病例分享
*
肺外结核
结核分枝杆菌能侵染全身大部分器官，其中有20%发生在肺外
100.0% (12/12)
Ferrara et al Lancet 2006 376;1328-34*
83.3% (20/24)
Lee et al Eur Respir J 2006 28;24-30*
96.6% (84/87)
Goletti et al Clin Microbiol Infect 2006 12;6:544-50*
活动性与潜伏性结核感染患者中，T-SPOT.TB斑点数比较
结核感染T细胞(TB-IGRA)检测及意义
88.6%(39/44)
国外mparison of Tuberculin Skin Testing, QuantiFERON-TB Gold and TSPOT.TB in Children
Latent TB检出高
Positive Tuberculin Skin Test or Interferon-Gamma Release Radiographic Lesions Suggesting Old Healed Tuberculosis
临床应用案例
肺外结核辅助诊断：
➢某院感染科，女，75岁 ➢临床症状：发热数日，胸痛，干咳 ➢检测结果：X射线胸腔积液影像，积液涂片（-）、积液培养
（-）、TB-IGRA T-N 350pg/ml，积液单核细胞增多，血沉 快 ➢结果分析：对于肺外结核的诊断，涂片与培养的阳性率极低， TB-IGRA（+），结合其他非特异辅助指标可明确诊断肺外结 核。
A
25
NTM（非结核分枝杆菌）比例增高
2000 年全国流调分离的抗酸杆菌菌株中，NTM 菌株占11. 1% ， 其中90% 为非结核分枝杆菌肺病。
NTM 肺病的临床表现与结核病相似， 既可有全身中毒症状， 亦有局部损害表现。但症状和体征缺乏特异性，20%-50% 的病 人无明显症状，除非做菌型鉴定，凭临床表现难与肺结核病相 鉴别。
A
16
TB-IGRA 产品特性
➢高灵敏度，检出率85%以上
➢高特异性
RD1区编码的ESAT-6和CFP-10两个特异性抗原
该抗原具 有较强的Thl细胞免疫原性，且在所有制备卡介 苗的菌株及环 境中绝大多数非结核分枝杆菌中均不存在该抗原，不受卡介苗和非分
支杆菌影响
IFNg
结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)简介与临床应用
结核菌的特性和临床检测的现状 又是如何？
1、结核病疫情严重
全球 • 20亿人口感染结核 • 现有活动性结核病患者2000万 • 新增活动性结核病人约900万/年 • 每年200-300万患者死亡
我国
结核病高负担国家之一，患者人数仅次于印 度，居全球第二位
• 约5.5亿人口感染过结核菌 • 现有活动性肺结核患者450万 • 新发患者145万/年 • 死亡人数13万/年
- 胸部的 X-光或 CT 扫 描显示异常
- 肺外结核难以诊断 (特别是儿童)
活动性结核
• 新发TB病例来自潜伏性结核感 染人群
• 潜伏性结核感染（latent TB Infection, LTBI）人群数量巨 大——“定时炸弹”
全面性
目前检测方法是否满足临床需求？
• 细菌学 • 免疫学
灵敏度 性能不稳定
结核感染T细胞检测（T-SPOT.TB）简介 与临床应用
什么是结核病
• 结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染 病。结核菌能侵入全身各个器官，但80% 发生在肺部，常称肺结核。
• 结核病又称为“痨病”和“白色瘟疫”， 是一种古老的传染病。
• 人与人之间呼吸道传播是本病传染的主要 方式。传染源是接触排菌的肺结核患者， 而肺外结核病则不具有传染性。
暴露程度不足，结核杆菌被机体免疫力清除
- 没有症状,结核杆菌仍旧 存在而不能被侦测
- X-光/ CT 扫描显示正常
- 没有抗体应答
- 诊断困难
- 传统的结核感染检测只有 TST（PPD）
机体被感染
受机体免疫力抑制 没有临床症状
终身处于感染状态
潜伏感染
5%
5%
再次激活
有临床症状 具有传染性
结核感染T细胞(TB-IGRA)检测及意义
临床应用案例
MTB与NTM的鉴别诊断：
➢ 某院感染科病人，男 ➢ 临床症状：发热1周，咳嗽，少量痰 ➢ 检测结果：两次痰涂片（+），两次TB-IGRA（-），肺部X射线
无异常，后经菌培鉴定为菌培（-） ➢ 结果分析：痰涂片不能区分非结核分枝杆菌，造成假阳性，而
TB-IGRA与菌培结果相符，对结核分枝杆菌有很好的特异性。 ➢ 临床诊断：鸟型分枝杆菌感染
TB-IGRA方法介绍
原理: 机体内被结核菌抗原致敏的效 应T细胞，在体外受到相同抗原的 刺激（在APC辅助下）后，会分泌 大量IFN- γ(细胞因子)。通过IFN- γ 的检测，判断结核感染情况。
IGRAs
APC
IFN-g release assay
细胞 因子
ELISA
细胞 因子
ELISPOT
活化/细 胞因子
便
分子诊断
• 检出率高 （活动结核 和潜伏结核）
• 特异性差 • 误诊肺炎、
肺癌 • 肺外结核难
• 假阳/假阴 多；
（涂阴 45%/35%）
• •操W作H复O建杂议 • 技禁术用要求
高 • 涂阴检出
低34% 11
TB-IGRA
•Tuberculosis（结核TB）
•Interferon（干扰素） •Gamma（ γ） •Release（释放） •Assay（测定）
IGRA阳性者进 行预防性服药
√
×
疫情控制
潜伏性感染、抗结核治疗监控
潜伏性感染监控
一起小规模结核暴发流行的调查与控制
某中学高三年级小规模结核爆发
疫情发展阶 结核病例及
初段始病 例
分布 1例（7班）
第一批 疫情
结核感染T细胞检测方案
32
Kim et al. Arch Intern
Med.
2007; 167;20:2255-2259
186
Kim et al. Am J Med
2009；122, 189-195
58
Janssens et al ERJ
2007；30(4):722-8
32
Dominguez et al Clin
Vacc
结核特异性T细胞，这些淋巴细胞在受到结核特异
抗原刺激后分泌γ 干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。 检测外周血中受结核特异抗原刺激释放γ 干扰素的T淋巴细
胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统 对斑点进行计数，1个斑点代表一个分泌细胞，计算出抗原 特异性细胞的频率。
空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点 数大于20时视为试验有效
Diseases
2009,9:60
6.结论
T-SPOT.TB在诊断结核感染方面具有良好的敏感 性和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今 天， T-SPOT.TB 可以给临床诊断提供参考。
基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点 ， T-SPOT.TB的检测物已不局限于静脉血，支气 管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用 于对肺内及肺外结核的诊断。
受试者数 量
72
文献发表
Meier et al Eur J Microbiol Infect Dis (2005)；24: 529-536
在经培养确诊的活动性结核受试者中，T-SPOT.TB的灵敏 度为96.6%。其中29例免疫力低下患者，T-SPOT.TB的灵 敏度为100%
在确诊病例（涂片或培养阳性）和临床诊断病例（有临床 症状和抗痨治疗有效）中，T-SPOT.TB的灵敏度为90.3% ，并且不受CD4细胞数量影响。
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结核感染T细胞检测
（T-SPOT.TB）
一、背景
结核病是由结核分枝杆菌（MTB）引起的传染性疾病。
全世界每年大约有8，000，000新增的结核病例。
据此估计，三分之一的世界人口已被结核杆菌感染并成为潜在的或活动性结核患者。
亚洲结核发病率约占世界结核病发病率的７０％，我国结核发病率则位居世界第二位。
２０００年第四次全国结核病流行病学抽样调查结果估计，我国活动性结核患者约有４５０万人，占全球结核患者总数的１／４，其中痰菌阳性的结核患者约有２００万人，痰涂片阳性的结核患者约１５０万人。
每年约有１３万人死于结核病。
由于卡介苗的使用，现在结核病的发病率比过去有所下降，但是由于艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的使用，酗酒与贫困，难民迁移等诸多因素的影响，结核及其它分枝杆菌所致的感染发病率又呈上升趋势。
如何能够快速、准确的诊断结核病，有效的控制结核病的继续蔓延，已经成为我们首要重视的问题。
然而，目前结核诊断的标准仍局限于临床检查结核细菌培养和涂片直接镜检再辅以X线检查和结核菌素皮肤测试观察。
这些方法均依赖于病人的临床症状，不能达到早期检测潜在结核感染的目的。
结核感染T细胞检测试剂用于肺结核和肺外结核诊断与鉴别诊断具有独特优势：
（1）具有非常高的灵敏度和特异性
（2）不受环境分枝杆菌感染和卡介苗（BCG）接种影响
（3）基本不受机体免疫抑制影响，适用于HIV感染和免疫抑制剂治疗人群
（4）简单的实验室血液检查，24小时快速报告结果
二、产品的检测原理和方法
结核感染T细胞检测试剂盒（T-SPOT.TB）为英国Oxford Immunotec公司生产，应用的方法学为酶联免疫斑点技术（ELISPOT），产品的检测原理和检测方法如下。
这类反应统称为γ干扰素释放试验（γ Interferon Release Assay, IGRA），目前已经列入美国、欧洲等地结核病诊疗指南，用于结核病辅助诊断。
2．2 产品的检测方法
2．2．2 检测过程
略：见操作说明
三、国内、外已批准上市及应用现状
目前结核感染T细胞检测试剂（T-SPOT.TB）已获得欧盟CE认证、美国FDA认证。
美国CDC、美国胸科学会、英国及欧洲的结核病防治指导原则中，均已将本试剂盒方法列为结核感染诊断的推荐实验室诊断标准，并已经在欧洲（英国、德国、法国、意大利、瑞典、瑞士）、北美洲(加拿大、美国)、非洲（南非）、亚洲（韩国、新加坡）等国家上市销售。
四、T-SPOT.TB目前的主要应用
1、“菌阴”结核的辅助诊断
对于涂片和培养阴性的疑似结核病患者，提供一项可靠的实验室检测指标。
2、肺外结核的鉴别诊断
结脑（儿童）、骨结核、肠结核（与CD鉴别）、结核性胸膜/腹膜炎（胸腹水待查的患者）、淋巴结核等。
3、免疫力低下/受抑制人群的结核筛查
HIV感染者、使用生物制剂/免疫抑制剂治疗人群、肾透析患者。
4、儿童结核病的辅助诊断
5、高结核暴露风险人群的筛查
医护工作者、监狱囚犯、活动性肺结核患者的密切接触家属等。