【精品】细胞生物学实验指导讲义
细胞生物学讲义
细胞生物学实验室规则与操作要求为获得较好的实验结果，避免发生差错与意外事故，特制定以下规则与要求，希望实验者能严格遵守。
（一）显微镜的使用及保护①显微镜是细胞生物学实验的主要观察工具，使用时必须注意保持外观整洁、防湿、防高温、防药品侵蚀，使用时勿使染液或其它溶液沾污镜头，一旦沾污，及时用擦镜纸蘸上镜头清洗液（无水乙醚：无水乙醇＝7：3）轻轻擦拭干净。
②带光源的显微镜待电压稳定后，将电源的光亮度调节器调至最小，再打开显微镜的电源，缓慢调节光亮度适当进行量度观察，观察完毕后，则先将光亮度调节器调至最小，然后再关闭显微镜电源开关。
③镜头的清洗：实验完毕后，镜头的清洗很重要。
用擦镜纸蘸取少量镜头清洗液，先从镜头的中央开始清洗，轻轻旋转擦至镜头的边缘部分，如此重复2－3次。
④载物台必须保持清洁，必要时亦可用擦镜纸蘸少量清洗液擦试载物台。
聚光器上的污物的去除亦可采用类似的方法。
⑤使用完毕后，玻片一律取下，套上布袋.放回原处。
本桌的显微镜一律不准搬离本实验桌。
若需使用者，可到该桌使用，使用后务必保持该显微镜的清洁。
如若发现违章使用情况，必追究使用者责任，本次实验作零分计。
（二）实验时，实验室内，一律不准高声喧哗整洁，保持室内安静，认真操作，仔细做好各项观察与记录。
（三）实验室内的一切仪器、物品必须爱护。
节约材料、药品，取用时不要过量。
公用物品不得独自占用，用后归还原处。
（四）注意安全。
使用有毒物品、强酸、强碱等，应严格按照操作规程。
易燃物品远离火源。
禁止湿手拿取电源开关或接触电源。
如发生触电等事故，及时报告。
（五）取用各种试剂，要用及时盖上瓶盖。
按献宝取出所需之药品或溶液后，不得将原液倒回瓶内。
滴管、玻棒、吸管不可混用。
（六）实验中如有丢失、损坏仪器设备及用具，及时登记并报告，凡违反操作规程造成不应有的损失者，视其情节轻重，态度好坏，按有关规定处理。
（七）本实验室欢迎各位实验者对每一实验本身提出新的看法与做法，至于能否采用，视具体情况而定。
细胞生物学实验指导
细胞⽣物学实验指导实验⼀动物细胞的传代培养⼀、实验⽬的1、熟悉细胞培养过程中的⽆菌操作技术。
2、了解细胞传代培养的基本⽅法和主要操作步骤⼆、实验原理细胞培养(cell culture)是指从机体内取出某种组织或细胞，模拟机体内的⽣理条件使其在体外⽣存、⽣长和繁殖的过程。
细胞的体外培养在细胞⽣物学和医学研究领域有着极为⼴泛的⽤途，这⼀技术已成为研究细胞⽣理、细胞增殖、细胞遗传、细胞癌变和细胞⼯程等课题的⼀项不可缺少的⼿段。
细胞培养技术的突出优点在于能为研究者提供⼤量的⽣物性状相同的细胞作为研究对象，便于⼈们在体外利⽤各种不同的⽅法从不同的⾓度研究细胞⽣命活动的规律。
另外，利⽤细胞培养技术还可使⼈们较为⽅便地研究各种物理、化学和⽣物因素对细胞结构和功能的影响。
细胞培养可分为原代培养和传代培养2种情况。
所谓原代培养(primary culture)是指直接从机体取出组织或细胞后所进⾏的⾸次培养。
⽽传代培养(subculture)是指当原代培养的细胞增殖到⼀定密度后，将其从原培养容器中取出，以1：2或其他⽐例转移到另⼀个或⼏个容器中所进⾏的再培养。
传代培养可简称传代。
在体外培养过程中，要使细胞能正常地⽣长、繁殖，需经常对其进⾏传代。
传代的累积次数就是细胞的代数。
在从事细胞培养⼯作时常常会接触到细胞系(cell line)和细胞株(cell strain)这两个容易混淆的概念。
⼀般认为，细胞系指通过原代培养并经传代后所形成的细胞群体，由于细胞系来源于原代培养，⽽原代培养物中所含的细胞种类较多，故⼀个细胞系往往由多个⽣物学性状不同的细胞群体所组成，⽽细胞株是利⽤单细胞分离培养法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中选择出的细胞群体，⼀个细胞株往往具有特殊的⽣物学性状或标记并可持续存在。
细胞培养是⼀种程序复杂、条件较多且要求严格的实验性⼯作。
由于细胞在体外的⽣长、繁殖会受到温度、营养物质、酸碱度、渗透压及微⽣物等多种因素的显著影响，故细胞培养⼯作的各个环节如培养器⽫清洗消毒、营养液配制和除菌、pH值调整、温度调节等操作都有严格的要求和规定，特别要注意⽆菌操作，这是细胞体外培养成败的关键。
细胞生物学实验指导
实验一相差显微镜的使用一、实验目的掌握相差显微镜的原理、构造及其使用方法。
二、实验用品试剂：蒸馏水或生理盐水。
器材：相差显微镜（相差物镜、转盘聚光器、调中合轴望远镜、绿色滤色镜）、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸条、指甲油。
三、实验原理光波有振幅（亮度）、波长（颜色）及相位（指在某一时间上光的波动所能达到的位置）的不同。
当光通过物体时，如波长和振幅发生变化，人们的眼睛才能观察到，这就是普通显微镜下能够观察到染色标本的道理。
而活细胞和未经染色的生物标本，因细胞各部微细结构的折射率和厚度略有不同，光波通过时，波长和振幅并不发生变化，仅相位有变化（相应发生的差异即相差），而这种微小的变化，人眼是无法加以鉴别的，故在普通显微镜下难以观察到。
相差显微镜能够改变直射光或衍射光的相位，并且利用光的衍射和干涉现象，把相差变成振幅差（明暗差），同时它还吸收部分直射光线，以增大其明暗的反差。
因此可用以观察活细胞或未染色标本。
相差显微镜与普通显微镜的主要不同之处是：用环状光阑代替可变光阑，用带相板的物镜（通常标有PH的标记）代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。
环状光阑是由大小不同的环状孔形成的光阑，它们的直径和孔宽是与不同的物镜相匹配的。
其作用是将直射光所形成的像从一些衍射旁像中分出来。
相板安装在物镜的后焦面处，相板装有吸收光线的吸收膜和推迟相位的相位膜。
它除能推迟直射光线或衍射光的相位以外，还有吸收光使亮度发生变化的作用。
调轴望远镜是用来进行合轴调节的。
相差显微镜在使用时，聚光镜下面环状光阑的中心与物镜光轴要完全在一直线上，必需调节光阑的亮环和相板的环状圈重合对齐，才能发挥相差显微镜的效能。
否则直射光或衍射光的光路紊乱，应被吸收的光不能吸收，该推迟相位的光波不能推迟，就失去了相差显微镜的作用。
1.相差同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。
相位是在某一时间上，光的波动所达到的位置。
一般由于被检物体（如不染色的细胞）所能产生的相差太小，我们的眼睛很难分辨出这种差别的，只有变相差为振幅差（明暗之差），才能被分辨。
本科《细胞生物学实验》讲义
（3）载物台：戴物台为方形（多数）和圆形的平台，中央有一光孔，孔的两侧各装1个夹片，载物台上还有移动器（其上有刻度标尺），可纵向和横向移动，移动器的作用是夹住和移动标本用。
（4）镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。镜臂有固定式和活动式 （可改变倾斜度）两种。
（5）滤光片：自然光由各种波长的光组成，如只需某一波长的光线，可选用合适的滤光片，以提高分辨率，增加反差和清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等颜色。根据标本颜色，在聚光器下加相应的滤光片。
图1.普通光学显微镜
五、实验步骤及内容
1．低倍镜的操作
（1）置显微镜于固定的桌上。窗外不宜有障碍视线之物。
2．高倍镜的操作
（1）使用高倍镜前，先用低倍镜观察，发现目的物后将它移到视野正中处。
（2）旋动转换器换高倍镜，如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动，说明原来低倍镜就没有调准焦距，目的物并没有找到，要用低倍镜重调。如果调对了，换高倍镜时基本可以看到目的物。若有点模糊，用细调节器调就清晰可见。
3．油镜的操作
4．用铅笔分别绘出各种细菌的形态图。
六、数据整理
七、实验过程中应注意事项及心得
1.取、送显微镜时要轻拿轻放，一定要一手握住弯臂，另一手托住底座。显微镜不能倾斜，以免目镜从镜筒上端滑出。不可把显微镜放在实验台的边缘，以免碰翻落地。取拿显微镜罩子的时候也一定轻取，以免将目镜从镜筒上带出摔坏。
2.显微镜的光学部分只能用特殊的擦镜纸擦拭，切忌乱用他物擦拭，更不能用手触摸透镜，以免汗液玷污透镜。
实验一、光学显微镜的基本使用方法
一、实验目的
1. 了解光学显微镜的结构、原理和保养方法；
细胞生物学实验指导
《细胞生物学实验》指导一、实验课名称：细胞生物学实验Experiment of Cell Biology二、实验课性质：独立设课三、适用专业：生物技术和水产养殖四、采用教材及参考书：教材：安利国主编．细胞生物学实验教程．北京：科学出版社，2004参考书：1. 杨汉民主编．细胞生物学实验（第二版）．北京：高等教育出版社，1997.72. 徐承水，党本元主编．现代细胞生物学技术．青岛：青岛海洋大学出版社，19953. 王金发主编．细胞生物学实验教程．北京：科学出版社，2003五、学时学分：课程总学时：36；课程总学分：1七、实验课考核方式：1.实验课考核成绩确定：本课程考核成绩由平时成绩（占30%）、实验报告成绩（占30%）和终期考核成绩（占40%）三部分构成。
2.平时成绩确定：由任课教师根据实验操作、问题回答和出勤情况确定，按A（优）、B （良）、C（及格）、D（不及格）四个等级评分。
3.实验报告成绩：本课程要求学生实验报告应包括以下内容：①实验目的及原理：简明；②方法与步骤：具体操作步骤、注意事项等；③结果：详细每一步的结果以及计算方法和计算结果；④分析与讨论：根据所学知识对结果进行分析讨论，阐明所得结果说明了什么问题；如果结果与理论不符，应说明可能的原因。
实验报告成绩由任课教师根据学生实验报告写作是否符合规范要求、试验结果及分析的具体情况给出。
每次报告均按A（优）、B（良）、C（及格）、D（不及格）四个等级评分，实验报告成绩为各次报告成绩的平均值。
4.终期考核成绩：实验课结束后进行笔试、口试或现场操作考核，按A（优）、B（良）、C（及格）、D（不及格）四个等级评分。
实验项目实验一、显微镜的技术参数及特殊光镜的演示实验一、要求：了解普通光镜及各种特殊光镜的构造、成像原理及应用；掌握正确的使用方法；理解显微镜的技术参数和特殊光镜的结构特点；掌握实验报告的写法。
二、实验内容：普通光学显微镜的结构及技术参数：由光学和机械两大系统构成。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导实验一、显微镜的结构与使用方法一、实验目的1.认识显微镜的构造2.学会独立操作显微镜二、仪器和材料显微镜、擦镜纸、装片三、实验内容1.学生按编号把自己的显微镜取出，放在试验台上，在教师的指导下熟悉显微镜各部分的构造及用途，然后进行操作练习。
先用低倍镜进行对光联系，使视野明亮而均匀。
如果使用双筒目镜，还应学习目镜间距的调节。
在转换高倍物镜观察，此时应注意它的视野亮度与低倍物镜有无区别？并思考通过哪几种方法调节使得高倍物镜的视野达到要求的亮度。
2.取已制备好的装片进行观察：按低倍镜使用步骤和方法进行操作练习。
注意要使观察到的像向前移动时，玻片标本应向那个方向移动？欲使观察到的像向右移动时，拨片标本应向那个方向移动？3.观察制备好切片：细胞核、中心体、胞间连丝、有丝分裂、减数分裂、高尔基体等。
4.观察完毕后，按正规要求取下玻片，把显微镜收好。
四、作业绘制2-3中细胞结构实验二、Feulgen反应显示DNA（一）实验目的1．掌握临时制片法。
2．熟悉Feulgen反应的原理及操作步骤。
3．观察细胞中DNA的分布。
（二）实验原理Feulgen在1924年发明一种对DNA特异的组织化学染色反应，故称Feulgen反应。
DNA经酸（1mol/L HCl）水解后，DNA分子中的嘌呤和脱氧核糖连接的配糖键被打开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反应形成特异性的紫红色产物。
该产物能特异地吸收峰值为550~570nm的光波。
并且在一定的浓度范围内，对550~570nm光波的吸收值与DNA 含量成正比关系，既符合化学计量学关系。
此法既可定位用于细胞或组织化学染色反应，观察DNA的分布，又可用显微分光光度计和图像分析仪对细胞或组织中DNA的含量进行定量分析。
紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜色。
对照组或采取不经盐酸处理，或预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应。
细胞生物学实验指导（12生工）
细胞生物学实验指导（12生工）细胞生物学实验教案实验一：特殊显微镜的使用及显微摄影术一、实验目的：1、掌握暗视野显微镜、相差显微镜的原理、构造及其使用方法。
2、掌握显微摄影装置及其操作技术，独立完成显微摄影全过程。
二、实验原理：暗视野显微镜应用丁达尔现象，装配暗示场聚光器，是入射光从聚光器斜向照明被检样品。
暗视野显微镜利用样品的散射光和放射光进行观察，只能观察物体的存在与运动而不能辨清其细微结构。
暗视场照明是照明光线仅照亮被检样品而不能进入物镜，使视场背景暗黑，样品明亮的照明方法。
相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，通过衍射和干涉现象，将肉眼看不到的相差，变为明暗的振幅差而能看到。
相差显微镜应用于生物学的主要价值，在于对透明的活体进行直接观察，无需采用是细胞致死的固定和染色的方法。
0lympus BH系列的BHS和BHT型显微镜有摄影装置，通过摄影装置，拍摄显微视场中被检样品。
三、实验仪器与试剂1、材料：洋葱鳞茎、人口腔细胞；2、器材：暗视场显微镜、相差显微镜、Olympus显微镜、活体生物样品、擦镜纸、消毒牙签、镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片3、试剂：生理盐水（0.9%）、2%碘液、香柏油、二甲苯。
四、实验步骤与方法（一）口腔上皮细胞的制备及染色1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水；3、用消毒牙签在自己漱净的口腔内壁轻轻地刮几下；4、把牙签上的碎屑放在生理盐水中轻涮几下；5、盖上盖玻片；6、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；7、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（二）洋葱鳞茎内表皮装片制作1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴蒸馏水；3、用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮置于蒸馏水中；4、盖上盖玻片；5、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；6、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（三）分别用暗视场显微镜和相差显微镜观察（四）显微摄影的使用将装片置于显微摄影镜下,选一清晰的视野进行拍摄并打印出来。
细胞生物学实验讲义
程而损坏仪器设备及物品者要按有关规定赔偿。 6．在实验过程中仪器设备发生故障或损坏时，应首先切断电源，并立即报告任课教
师及时处理。 7．使用贵重仪器设备，一定要在老师的指导下操作，使用完毕，要进行登记。 8．实验中使用易燃、易爆、有毒试剂及传染性强的物品时，应严格操作，注意自我
的像再次放大，没有辨析能力。物镜一般有：4×、10×、 图1 显微镜的光路
40×和油镜(100×)，它们各有一定的放大率，不仅可以 放大标本，而且有辨析能力。
2.问：什么是光学显微镜？它的各部名称是什么？ 答：一般的普通光学显微镜如下图 2。它的各部名称如图 3 所示。镜座、镜柱、 镜臂、镜筒、物镜转换器(旋转器)、镜台(载物台)、调节器：粗调节器(粗螺 旋)和细调节器(细螺旋)、反光镜、集光器、显微镜目镜、显微镜物镜、开关、 光源等。
细胞生物学实验讲义
上海大学生命科学学院
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实验须知
一、实验须知 1．每个学生必须遵守实验室规则。 2．实验时不准迟到、早退或无故缺席，有病或有事需向任课教师请假。 3．进入实验室后要保持安静，不得在室内喧哗、打闹；不得抽烟、吃东西、随地吐
痰、乱丢纸屑和其他杂物。 4．不得将与实验无关的物品带入实验室；不得将实验物品带出实验室；不允许在食
1.问：在细胞生物学实验中，为何要使用光学显微镜？ 答：（1）所要观察的对象细胞的个体很微小，绝大多数细胞， 直径一般为 10-100 微米（1 微米＝1 / 1000 毫米），动物 的细胞更小，一般只有 10 微米左右，而细菌只是一个细 胞，这种细胞比动物细胞还小。所以肉眼无法看到这些微 小的生命体。 （2）人眼所能看到的物体的大小和人眼与该物体的距离有 关。视力 1.0（即对数视力表 5.0）的眼睛的分辨率是 1'； 2.0 的眼晴的分辨率是 0.5'。这样你就可以算出在一定距 离下人眼所能看到的物体的最大长度是多少了。一般肉眼 的分辨距离在 0.2mm 左右。 （3）视角过小时需要借助放大镜、显微镜或望远镜等加以 放大，才能看清物体了。光学显微镜：0.2um （4）显微镜有目镜和物镜。目镜一般有：8×、10×、15 ×、16×等种不同的放大倍数的目镜。目镜只能把物镜成
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实验一细胞的基本形态结构的观察实验原理与目的（1）通过观察动、植物细胞，了解细胞形态的多样性并掌握光镜下细胞的基本形态结构。
（2）初步掌握临时制片技术和显微绘图的方法。
实验原理细胞是生命活动的基本结构单位和功能单位。
构成人体或其他高等动物或植物的细胞种类繁多，形态各异。
细胞的形态都与它们的功能相适应。
如具有运输O2和CO2功能的红细胞为双凹盘状；具有感受刺激与传导功能的神经细胞呈星芒形，附有长短不等的树枝状突起；上皮细胞是柱形或扁平形；巨噬细胞则呈不规则形状，并能伸出伪足，以利于为执行吞噬和消灭外源的病原微生物的功能。
虽然细胞在形态上多种多样、大小不同，但却具有共同的基本结构特点，即都是由细胞膜（cellmembrane）、细胞质(cytoplasm)和细胞核(nucleus)组成。
实验用品1．器具：显微镜、载玻片、盖玻片、推片、吸管、镊子、牙签、擦镜纸、吸水纸、小剪刀。
2．材料：洋葱、人口腔上皮细胞、鸡血液、人血细胞涂片、蟾蜍血细胞涂片。
3．试剂：2%碘液、Giemsa染液。
试剂配制1．2%碘液：称取碘片2g，碘化钾5g，蒸馏水100ml混匀溶解即可。
2．吉姆萨(Giemsa)染液：吉姆萨粉(Giemsastain)l.0g甘油(AR)66ml甲醇(AR)66ml将Giemsa粉放入研钵中，先加入少量甘油，研磨至无颗粒为止，然后再将全部甘油倒入，放56℃温箱中2h后，加入甲醇，将配制好的染液密封保存棕色瓶内(最好于0~4℃保存)。
内容与方法一、洋葱鳞茎表皮细胞制片与观察：1.临时制片：取一擦净的载玻片，在玻片中央滴一滴2%的碘液，将洋葱茎用小刀分为几块，取一块肉质鳞叶，用镊子在其表面轻轻撕下一小块膜质表皮，再用剪刀剪成3～4mm2的小块，置于载玻片的染液中铺平，染色2～3分钟，盖上盖玻片，用吸水纸吸去盖玻片周围多余的染液。
2.观察：将标本置于低倍镜下观察，可见许多长柱状排列整齐、彼此相连的细胞，选择其中较典型的细胞移至视野中央，然后换成高倍镜观察以下结构：1）细胞壁：在每两个细胞相连处，可看到二层壁状结构，是相邻细胞各自的细胞壁，有纤维素构成。
细胞膜紧贴在细胞壁内侧，不易看到。
2）细胞核：呈椭圆形，位于中央，被染成黄色，成熟的细胞由于液泡的挤压，核位于质膜边缘。
细胞核一般有1～2个折光较强并染成黄色的核仁。
（3）细胞质：是细胞膜以内，细胞核以外的物质，染色较浅，有1至数个液泡及微细颗粒（图1-1）。
二、人口腔粘膜上皮细胞制片与观察：1.临时制片：在一张擦净的载玻片中央滴一滴2%的碘液，取一根牙签，用其粗端在自己口腔中的脸颊上刮几下，将其刮下的粘膜上皮细胞涂布在碘液中，染色2～3分钟，盖上盖玻片，用吸水纸吸去盖玻片周围多余的染液。
色2～3分钟，盖上盖玻片，用吸水纸吸去盖玻片周围多余的染液。
2.观察：将制好的玻片标本置于低倍镜下观察，可见细胞被染成黄色，成群或分散存在。
由于该细胞体积较小，着色较淡，观察时应稍降低视野中的亮度，选择较分散且轮廓清楚的细胞移至视野中央，换成高倍镜观察以下结构。
1）细胞膜：是包围在细胞最外层的膜状结构，细胞呈扁平不规则的类圆形，细胞膜有些地方出现皱褶。
2）细胞核：圆形或椭圆形的细胞核呈深黄色位于细胞中央，核中有时可见一致密的结构，即为核仁。
3）细胞质：是细胞膜与细胞核之间染色较浅的物质（图1–2；图1-3）。
2.观察：将已经染好的血涂片标本（肉眼可见血膜呈粉红色）放置在低倍镜下，检查整个血涂片，选择细胞均匀分布、较少重叠的区域，然后转换高倍镜下仔细观察，在人的血涂片上红细胞数目多、体积小、呈圆饼状，无细胞核（图1-4），胞质呈粉红色；白细胞比例较小，寻找较困难，但胞体较大，细胞核明显，形态多样，呈兰紫色。
鸡的血细胞、蛙的血细胞的形态与人类有很大不同，在鸡或蛙血的红细胞涂片中，可见红细胞呈卵圆形，并且有椭圆形的细胞核（图1-5）。
图1-4人血红细胞的形态??图1-5鸡血红细胞的形态作业与思考题1.绘制高倍镜下洋葱鳞茎表皮细胞、人口腔黏膜上皮细胞图，并注明各部分结构的名称。
2.生物绘图的基本要求是什么？实验二细胞大小的测量实验目的学习显微测量方法实验原理应用显微镜的成像原理，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，得出细胞的大小。
(目镜测微尺测量倍率比照表)实验材料、用品材料：人口腔上皮细胞,鸡血红细胞、洋葱鳞叶表皮细胞。
仪器(请参看仪器图库)：测微尺、显微镜。
物镜测微尺目镜测微尺实验步骤(一)测微尺的使用操作1.卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上，再旋上目镜的上透镜。
2.将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好，使测微尺刻度位于视野中央。
调焦至看清镜台测微尺的刻度。
3.小心移动镜台测微尺和目镜测微尺(如目镜测微尺刻度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的"0"点一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重复的直线(图1-6)。
4?记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。
按下式计算目镜测微尺每格的长度等于多少μm(二)目镜测微尺每格的长度/μm=镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数(二)花粉细胞的观察测量1．采集刚开放或将要开放的成熟花朵；2.在载玻片滴1~2滴蒸馏水；3.用接种针将花粉分散于蒸馏水上，盖上盖玻片；4.用测微尺测量花粉细胞大小，计算平均值。
附：鸡血细胞的观察测量将已经制备好的鸡血涂片放在染色盘架上，滴数滴瑞氏-吉姆萨染液欲涂片上，静置染色1分钟，滴加等量1/15mol/L磷酸缓冲液，用牙签轻轻搅拌混匀，再静置染色5－10分钟，最后用清水缓缓冲洗1分钟，倾斜放置，凉干后进行观察测量。
实验报告用测微尺测量不同材料各种细胞的大小后，制表格表示测量结果。
注意事项载物台上物镜测微尺刻度是用加拿大树胶和圆形盖玻片封合的。
当除去松柏油时，不宜使用过多的二甲苯，以避免盖玻片下的树胶溶解。
取出目镜测微尺，将目镜放回镜筒，用擦镜纸擦去目镜测微尺上的油腻和手印思考题分别计算不同物镜放大倍数下测微尺的单位。
实验三植物细胞骨架的观察一、实验目的1.掌握考马斯亮蓝R250对植物细胞骨架染色的方法。
2.通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。
二、实验原理细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。
细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。
本试验采用去垢剂TritonX-100的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。
三、实验用品(一)材料洋葱（二）器材显微镜、载玻片、滴管、擦镜纸、PH计（三）试剂1. 0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)0.2mol/LNaHPO-NaHPO缓冲液（PB，P H7.3）50ml0.15mol/LNaCl双蒸馏水加至1000ml2.PB0.2mol/LNaHPO77ml0.2mol/LNaHPO23ml3.M-缓冲液咪唑(H6.7)50mmol/LKCl50mmol/LMgC10.5mmol/LEGTA1mmol/LEDTA0.1mmol/L巯基乙醇1mmol/L甘油4mmol/L用1mol/LHCl调pH至7.2。
4.1%的TritonX-100/M-缓冲液5. 0.2%考马斯亮蓝R250染液甲醇46.5ml冰醋酸7ml蒸馏水46.5ml6.3%戊二醛-PB溶液（PH7.3）四、实验操作见图4-4取洋葱内皮1cm左右置于含PBS液的载玻片上湿润后，吸去PBS加2滴1%TritonX-100/M-缓冲液，5min吸去缓冲液，加3%戊二醛-PB溶液，固定30min加PBS洗2次，共3min加0.2%考马斯亮蓝R250染色30min用PBS洗2次，共2min，吸干镜检并绘图图4-4细胞骨架标本制作过程五、实验建议1.用去垢剂TritonX-100的缓冲液处理材料时，应控制在30min左右。
2.每一次加液或染色后，应用PBS洗2次，并用滤纸吸干。
六、实验报告及作业1.画出实验所观察到的细胞骨架图，并注明放大倍数。
2.为什么用TritonX-100的缓冲液处理材料？实验四细胞中多糖和过氧化物酶的定位【实验目的】掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法。
【实验原理】高碘酸—雪夫试剂反应，简称PAS反应。
主要是利用高碘酸作为强氧化剂，这种强氧化剂能打开C-C键，使多糖分子中的乙二醇变成乙二醛，氧化所得到的醛基与Schiff试剂反应形成紫红色化合物。
颜色的深浅与糖类的多少有关。
细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色或棕色络合物，根据蓝色或棕色的出现来表示过氧化物酶的存在。
PAS反应过程如下：过氧化物酶联苯胺反应过程如下：【实验仪器、材料和试剂】（一）仪器显微镜、镊子、染色钵、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸等（二）材料马铃薯块茎、洋葱根尖或洋葱鳞茎（三）试剂1．高碘酸溶液：高碘酸（HIO4·2H2O）0.4g，95%乙醇35ml，M/5醋酸钠溶液（2.72g醋酸钠溶于100mlH2O）5ml，蒸馏水10ml2．Schiff试剂（配法见Feulgen反应）3．亚硫酸水溶液（配法见Feulgen反应）4．70%乙醇5．联苯胺溶液：在0.85%盐水内加入联苯胺至饱和为止，临用前加入20%体积的H2O2，每2ml加一滴。
6．0.1%钼酸铵溶液：称取0.1g钼酸铵溶于100ml0.85%盐水.【方法与步骤】.（一）细胞中多糖的测定：高碘酸—雪夫（PAS）反应1．把马铃薯块茎用刀片徒手切成薄片。
2．浸于高碘酸溶液5～15min。
3．移入70%乙醇中浸片刻。
4．Schiff试剂染色15min。
5．亚硫酸溶液洗三次，每次1min。
6．蒸馏水洗片刻。
7．装片镜检。
镜检结果：细胞中多糖部位呈现紫红色。
（二）细胞中过氧化物酶的测定：联苯胺反应1．把洋葱根尖徒手切成20～40μm厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块。
2．浸在溶有0.1%钼酸铵的0.85%盐水溶液中5min（钼酸铵的作用是催化剂）。
3．浸在联苯胺溶液内2min至切片出现蓝色。
结果：细胞中有蓝色沉淀出现【作业】1．简述PAS反应及联苯胺反应的原理。
2．绘图示细胞中多糖及过氧化物酶的分布。
实验五细胞核与线粒体的分级分离【实验原理与目的】（1）了解细胞器分级分离的原理。
（2）初步掌握细胞核与线粒体的分级分离。
（3）熟悉离心机、匀浆器的使用方法。
【实验原理】细胞组分的分级分离是研究亚细胞组分的化学组成、理化特性及其功能的基本方法。