PCR purification kit
核酸纯化
Code No. 27104 D6943-01 U0588A DP103-02 9760
Price/Kit (RMB) 964 224 676 152 350
Price/rxn (RMB) 19.28 2.24 13.52 3.04 7
RNaseA 冻干粉/室温 液态/室温 冻干粉/室温 液态/室温 液态/-20℃
Y Y Y Y N
Recovery 70~80% 50~80% 70~90% 70~85% 70-90%
Price/reac (RMB)
18.88 4.48 9.6 4.32 7
Fragment Size
70bp~10k 50bp~40k 50bp~20k 100bp~10k 50bp~50k
TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0 (50)
收率
Conclusion：
1.DNA回收率优于或与其它公司相当。
2.与其它公司相比较，价格合理。
DNA片段长度
11
9762市场竞争情况
Product QIAquick Gel Exteaction Kit (50) Gel Extraction Kit(50) NucleoSpin® Gel and PCR clean up TIANgel Mini Purification Kit(50) Company Qiagen Omega MN Tiangen Takara
8
片段回收纯化-9761、9762
片段直接纯化 切胶回收纯化 回收率计算： 9761 9762 TaKaRa MiniBEST DNA Fragment Purification Kit Ver.4.0 TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0
protocol
ReagentsThe Multiplexing Sample Preparation Oligonucleotide K it 96 samples/kit PE-400-10011. Index PE Adapter Oligo Mix, part # 10057112. PCR Primer InPE 1.0, part # 10057123. PCR Primer InPE 2.0, part # 10057134. PCR Primer Index 1, part # 10057145. PCR Primer Index 2, part # 10057156. PCR Primer Index 3, part # 10057167. PCR Primer Index 4, part # 10057178. PCR Primer Index 5, part # 10057189. PCR Primer Index 6, part # 100571910. PCR Primer Index 7, part # 100572011. PCR Primer Index 8, part # 100572112. PCR Primer Index 9, part # 100572213. PCR Primer Index 10, part # 100572314. PCR Primer Index 11, part # 100572415. PCR Primer Index 12, part # 1005725Paired End DNA Sample Prep Kit 10 sample/kit PE-102-1001 Klenow EnzymeKlenow BufferKlenow FragmentT4 DNA Ligase BufferT4 DNA PolymeraseDNA LigaseDNA Ligase Buffer 2*Phusion DNA PolymeraseTE Buffer10 mM dNTP Mix1 mM dATP, diluted from dATP vialT4 PNKNebulization BufferNebulizersUltra Pure WaterMultiplexing Sequencing Primers and PhiX Control Kit, 100 flow cell lanesIndex sequencing primer 120ul part # 1005726Multiplex Rd2 sequencing primer 120ul part # 1005727Mutiplex PhiX control 15ul part # 1005728NaOH 30ml part # 0801-1005TE buffer 20ml part # 1006425Wash buffer 37ml part # 0801-1002Hyb buffer 12ml part # 1000166Paired-End Cluster Generation Kit, v418- and 36-Cycle Illumina Sequencing Kits v4User-suppliedPurified DNA (1–5 μg, 5 μg recommended)DNA should be as intact as possible, with an OD260/280 ratio of 1.8–2.0 Compressed air of at least 32 psiClamp (1 per nebulizer)PVC tubing• Fisher Scientific, catalog # 14-176-102• Nalgene Labware, catalog # 8007-0060QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN, part # 28704)MinElute PCR Purification Kit (QIAGEN, part # 28004)QIAquick PCR Purification Kit (QIAGEN, part # 28104)Certified low range ultra agarose (BIO-RAD, part # 161-3106)Low molecular weight DNA ladder (NEB, part # N3233L)DNase/RNase-Free distilled water50X TAE bufferEthidium bromideLoading bufferDisposable scalpels 切胶刀片User-SuppliedLens cleaning tissue(4) 125 ml Nalgene bottles (ThermoFisher Scientific, catalog # 2019-0125) (3) 50 ml conical tubesMilliQ water or laboratory grade water (for washing the Paired-End Module)雾化1.取出喷雾器拧开蓝色的盖子2.戴手套取下vinyl tubing，沿着中央的雾化管滑下。
QIAquick-PCR-Purification-Kit中文版
用QIAquick PCR Purification Kit行酶切产物回收或PCR产物回收，具体步骤如下：
①30μl酶切后产物加入150μl Buffer PB中，混合后密切观察颜色变化，若为黄色，则继续下步操作。
②把QIAquick吸附柱（QIAquick column）放入2ml采集管（collection tub）。
③把①中的所得溶液放入QIAquick吸附柱中，13,000rpm 离心1min。
④0.75 ml Buffer PE加入QIAquick吸附柱中漂洗，
13,000rpm离心1min。
弃掉废液，并把QIAquick吸附柱放入2ml 收集管中。
⑤再次以13,000rpm离心1min，尽量除去漂洗液，并再次把QIAquick吸附柱放入2ml收集管中。
⑥取出QIAquick吸附柱，放入一个干净的1.5ml微量离心管中。
⑦在吸附柱的中间部位加50 μl Buffer EB (10 mMTris•Cl, pH
8.5)，温室放置1min，
⑧再次以13,000rpm离心1min后取上清液，-20度保存备用。
pcr材料
pcr材料PCR材料是实验室中进行聚合酶链式反应（PCR）的重要组成部分。
PCR是一种革命性的分子生物学技术，可以扩增特定的DNA片段，并产生大量的目标DNA。
PCR材料主要分为试剂盒、DNA模板、引物、聚合酶和缓冲液等。
1. 试剂盒：PCR试剂盒是用于PCR反应的集成化试剂盒。
它通常包括核苷酸dNTPs（脱氧核苷三磷酸）、聚合酶、缓冲液、镁离子和其他辅助试剂。
这些试剂通过精确的浓度和配比来确保PCR反应能够成功进行。
2. DNA模板：DNA模板是PCR反应中用于扩增的起始材料。
它可以是从细菌、动物、植物或人体组织中提取的DNA。
DNA模板可以是基因、基因组、cDNA或已经扩增并纯化的DNA片段。
3. 引物：引物是PCR反应中用于扩增目标DNA片段的两端序列特异性的短DNA片段。
它们是由设计师根据目标DNA序列设计的，并且它们在PCR过程中特异性地与模板DNA结合，从而指导DNA扩增。
引物分为前向引物和反向引物，通常由从5’到3’方向读取的序列组成。
4. 聚合酶：PCR反应需要一种特殊的酶来合成新的DNA链。
这种酶被称为热稳定DNA聚合酶，最常用的是来自Thermus aquaticus的Taq聚合酶。
热稳定DNA聚合酶可以在PCR反应温度的变化下保持其活性，并引导新的DNA链合成。
5. 缓冲液：PCR反应中的缓冲液可以维持反应的pH值，抵抗反应条件变化而产生的酸碱变化。
它通常包含Tris-HCl缓冲盐和KCl盐，以提供合适的离子强度和有效的碱液中和能力，从而确保PCR反应的正确进行。
此外，还有一些辅助试剂，如镁离子、葡萄糖、BSA（牛血清白蛋白）和二甲基亚砜（DMSO），它们被用于优化PCR反应的特定条件，例如增加酶活性、提高引物与模板的结合亲和力或减少反应中的非特异性产物。
综上所述，PCR材料包括试剂盒、DNA模板、引物、聚合酶和缓冲液等，这些材料的配比和浓度对于PCR反应的成功与否至关重要。
AxyPrep PCR 清洁试剂盒说明书
AxyPrep PCR清洁试剂盒本试剂盒适合从PCR、酶促反应、测序反应的反应液中提取多至8 μg DNA（大于75bp），回收率为70-90%。
纯化的DNA不含引物、酶蛋白及单核苷酸。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性Cat. No. AP-PCR-4 AP-PCR-50 AP-PCR-250制备次数 4 preps 50 preps 250 prepsPCR制备管 4 50 2501.5 ml离心管 4 50 2502 ml离心管 4 50 250Buffer PCR-A 2 ml 20 ml 100 mlBuffer W2 concentrate 2.4 ml 24 ml 2×72 mlEluent 1 ml 5 ml 25 ml说明书 1 1 1Buffer PCR-A：DNA结合溶液。
室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。
使用前，按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%无水乙醇），混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH8.5，室温密闭贮存。
二、注意事项1. Buffer PCR-A含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
2. DNA分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH8.5洗脱液中保存。
三、实验准备1. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
2. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
3. 使用前，检查Buffer PCR-A是否出现沉淀，若出现沉淀，应于65°C温浴加热至沉淀完全溶解并冷却至室温后再使用。
4. 将Eluent或去离子水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。
四、操作步骤用户可以选择负压法或离心法。
QIAquick_PCR_Purification_Kit
QIAquick® PCR Purification KitThe QIAquick PCR Purification Kit (cat. nos. 28104 and 28106) can be stored at room temperature (15–25°C) for up to 12 months.For more information, please refer to the QIAquick Spin Handbook, March 2008, which can be found at: /handbooks.For technical assistance, please call toll-free 00800-22-44-6000, or find regional phone numbers at /contact.Notes before startingAdd ethanol (96–100%) to Buffer PE before use (see bottle label for volume).All centrifugation steps are carried out at 17,900 x g (13,000 rpm) in a conventional table-top microcentrifuge at room temperature.Add 1:250 volume pH indicator I to Buffer PB. The yellow color of Buffer PB with pH indicator I indicates a pH of ≤7.5. If the purified PCR product is to be used in sensitive microarray applications, it may be beneficial to use Buffer PB withoutthe addition of pH indicator I. Do not add pH indicator I to buffer aliquots.1.Add 5 volumes Buffer PB to 1 volume of the PCR reaction and mix. If the color ofthe mixture is orange or violet, add 10 μl 3 M sodium acetate, pH 5.0, and mix.The color of the mixture will turn yellow.2.Place a QIAquick column in S a provided 2 ml collection tube or intoz a vacuum manifold. For details on how to set up a vacuum manifold, refer to the QIAquick Spin Handbook.3.To bind DNA, apply the sample to the QIAquick column and S centrifuge for30–60 s or z apply vacuum to the manifold until all the samples have passedthrough the column. S Discard flow-through and place the QIAquick columnback in the same tube.October 20104.To wash, add 0.75 ml Buffer PE to the QIAquick column S centrifuge for30–60 s or z apply vacuum. S Discard flow-through and place the QIAquick column back in the same tube.5.Centrifuge the QIAquick column once more in the provided 2 ml collection tubefor 1 min to remove residual wash buffer.6.Place each QIAquick column in a clean 1.5 ml microcentrifuge tube.7.To elute DNA, add 50 μl Buffer EB (10 mM Tris·Cl, pH 8.5) or water (pH 7.0–8.5) to the center of the QIAquick membrane and centrifuge the column for1 min. For increased DNA concentration, add 30 μl elution buffer to the centerof the QIAquick membrane, let the column stand for 1 min, and then centrifuge.8.If the purified DNA is to be analyzed on a gel, add 1 volume of Loading Dye to5 volumes of purified DNA. Mix the solution by pipetting up and down beforeloading the gel.For up-to-date licensing information and product-specific Array disclaimers, see the respective QIAGEN kit handbook or usermanual.Trademarks: QIAGEN®, QIAquick® (QIAGEN Group). 1063920 10/2010© 2010 QIAGEN, all rights reserved.。
微生物实验流程及操作介绍
Klenow DNA Polymerase
补平5' 突出端，形成平末端 切除3‘ 突出端，形成平末端 T4 PNK DNA 5‘ 末端的磷酸化，以便进行连接反应 用T4 多聚核苷酸激酶除去3' 磷酸基团
Step 3. 3’端加A
简单的酶促反应 作用：在已修复的DNA 3’端加上A，
为下步TA连接接头做准备
Step 4. 连接接头
接头：Y形 Index 信息
快速连接酶，TA连接 连接产物使用AMPuer XP beads 等体积纯化，去除＜ 100bp的片段
连完接头后，可进行混池
Step 5. 切胶回收
电泳：100v 1.5h 切取目的00-450bp 500bp：600-650bp实验流程
DNA提取
未知序列
DNA检测已知序列制备库检上机测序
各种类型的类型 DNA小片段 PCR-fre0 bp 举例 真菌/细菌框架图、精细图、重 测序；宏基因组测序 真菌/细菌框架图、精细图、重 测序；宏基因组测序
• 原理：DNA分子有一定长度，分子的前端在通过小孔时加速，分子 从前往后速度逐渐变慢从而被拉伸力，一定的加速度会导致分子后 面跟不上前面从而断裂；断裂到片段太小，分子前后速度差不足以 使分子键断裂。最后的片段大小由液体的流动速度和小孔的规格决 定。
HydroShear
• 操作方法：安装上打断头， 打开操作软件，准备好废 液瓶 • 设置打断参数 2K 0.052MPa 40s 5K code6/cycles20 10K code12/cycles20
adaptor，PCR扩增。构建完成PCR产物 RNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌 的基因组中，具有高度的保守性和特异性。 16s rRNA基因序列分析，研究环境微生物群落的多样性。
瘤胃微生物多样性建库流程
微生物多样性建库流程3.1操作流程3.2试剂和仪器PCR的酶：Phusion（NEB)切胶后纯化: MinElute® PCR Purification Kit磁珠纯化：VAHTSTM DNA Clean BeadsQubit检测: Quant-iTTMds DNA HS Reagent and HS Buffer Qubit® assay tubes仪器名称生产厂家型号微型离心机TIANGEN 1795 卧式冷藏冷冻转换柜海尔BC/BD-629HK 4°C冰箱海尔HYC-360振荡器SI G560E96 well PCR 仪AB 990224孔离心机EPPENDORF 5424EQ7667513.3流程3.3.1目标区域PCR(50ul体系)试剂名称用量基因组DNA 40-60 ng*Vn F（10μM) 1.5μl*Vn R（10μM) 1.5 μlQ5 High-Fidelity DNA Polymerase 0.2 μlHigh GC Enhancer 10 μlBμffer10 μldNTP 1 μlddH2O 补至总体系50μl按上表配置反应试剂：因为目前是以检测报告中的PCR预实验结果来判定样品合格标准，所以请建库人员根据反应条件：95℃5min95℃1min50℃1min 15 cycles72℃1min72℃7min4℃∞3.1.2目标区域PCR产物纯化样品与磁珠按照1:1.5混匀后进行磁珠筛选片段，35ul洗脱。
向3.1中的PCR产物中加入60μl的AMPure XP 磁珠，混匀室温5min后，置于磁力架上5min，去上清；加入200μl的80%乙醇清洗磁珠，室温30s后弃上清，重复此步骤一次；置磁力架上干燥3min，用37μl ddH2O重悬磁珠，室温孵育2min，置于磁力架上2min，吸取35μl上清至新的PCR管中。
3.1.3 Solexa PCR试剂名称用量目的区域PCR纯化产物10μl★MPPI-a（10μM) 1μl★MPPI-b（10μM) 1μl2×Phμsion HF MM20μlddH2O 8μlTotal 40μl注：★根据index上机安排进行选择。
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Introduction
The kit provides a simple, rapid and effective method for purification of DNA fragments from PCR or enzymatic reaction. DNA fragments ranging from 60bp to 10kb can be purified. The yield of DNA with size lower than 100bp is 23～ 95%,
Important Notes
Add ethanol (as the volume be marked on bottle label) to wash buffer and mix well.
close the lid after using the binding buffer as soon as possible.
4. And centrifuge for 1min at 6000×g. Discard the flow-through.
5. Repeat step 5th once.
6. Centrifuge for an additional 1minute at 12000×g and transfer the spin column to a sterile 1.5ml microcentrifuge tube. Recommend to centrifuge according to this step; otherwise, there will be residual liquid in the column.
Technical Information
Apparatus and materials to be supplied by the user
Sterile 1.5 microcentrifuge tubes 10μl/100 μl/1000 μl tips Microcentrifuge capable of 14,000g Vortex mixer Absolute ethanol
2. Add 2 volumes of binding buffer to 1 volume of the PCR or enzymatic reaction product and vortex.
3. Apply the mixture to the spin column by decanting or pipetting.
The kit should be stored dry at room temperature (15℃～25℃），the kit can be stored for up to 18 months if all components are kept in the manner above.
The kit can be transported at room temperature.
PCR Purification Kit
Kit components component binding buffer wash buffer elution buffer spin column handbook
amount 20ml 30ml 20ml 100 1 copy
Storage and Transportation
while the yield of DNA with size from 0.1kb to 10kb is 90～97%. Purified DNA can be used directly for kinds of down-stream molecular biological experiments such as cloning, sequencing, restriction enzyme digestion, PCR/real-time PCR and so on.