8.常用培养基制备.
真菌培养常用培养基
[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂，沙堡弱培养基，（一） 组成 40.0g 10.0g12.0- 15.0g 1000ml（二） 制法 上述混合后加入 200mg 氯霉素， 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。
（三） 目的 是常用的分离或保存菌种的培养基。
[ 沙氏液基， SDB]（一） 组成 葡萄糖 40.0g 蛋白胨 10.0g 蒸馏水1000ml（二） 制法 上述混合后加入 200mg 氯霉素， 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。
[ 加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，SDA with antibiotic]（一） 组成 葡萄糖 40.0g 蛋白胨 10.0g 琼脂 12.0〜15.0g 蒸馏水 1000ml（二） 制法上述混合后加入 200mg 氯霉素。
250mg 放线菌酮， 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。
[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，modified SDA]（一） 组成 葡萄糖 20.0g 蛋白胨 10.0g 琼脂 12.0〜15.0g 蒸馏水1000ml（二） 制法 上述混合后 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。
（三） 目的 保存菌种培养基。
[ 马铃薯葡萄糖琼脂， PDA]（一） 组成 马铃薯 200.0g 葡萄糖 20.0g 琼脂12.0〜15.0gSDA]葡萄糖 蛋白胨 琼脂 蒸馏水蒸馏水1000ml（二）制法先将马铃薯洗净去皮切片，加水180ml ，煮沸30 分钟后过滤，再加葡萄糖、琼脂，将过滤液补足到1000ml ，121 摄氏度灭菌后备用。
（三）用途此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。
鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。
[玉米吐温80 琼脂，CMA with T w80]（一）组成玉米粉琼脂蒸馏水吐温80（二）制法40.0g15.0g1000ml10ml先将玉米粉混于水中，65 摄氏度水浴一小时，过滤，再补足水量，然后加入琼脂和吐温80，121摄氏度10 分钟灭菌后备用。
lb培养基
lb培养基简介lb培养基是一种常用的微生物培养基，被广泛应用于实验室中的细菌培养和研究工作中。
它以兰伯特(Luria)和贝斯特好(Bertani)的姓氏命名，常用于培养大肠杆菌和其他革兰氏阴性菌。
该培养基提供了微生物所需的营养物质和条件，使得细菌能够生长和繁殖。
组成lb培养基的基本组成包括以下成分：•蛋白胨：提供氮源和碳源，促进细菌生长；•酵母提取物：富含维生素和氨基酸，提供细菌生长所需的维生素和营养物质；•氯化钠：调节溶液的渗透压，维持细胞内外的平衡；•磷酸二氢钾：提供磷源，促进生物体新陈代谢的正常进行；•葡萄糖：提供碳源，供细菌进行能量代谢和生长。
除了上述基本成分，lb培养基还可根据实验需要添加其他物质，如抗生素、色素等。
制备方法以下是lb培养基的制备方法：1.准备所需材料和设备，包括蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、磷酸二氢钾、葡萄糖、纯水、容量瓶、搅拌棒等。
2.根据需要测量和称量上述成分的适量，按照以下比例加入容量瓶中：–蛋白胨：10克/升–酵母提取物：5克/升–氯化钠：5克/升–磷酸二氢钾：2.5克/升–葡萄糖：1克/升3.加入适量的纯水，使溶液充分溶解。
4.使用搅拌棒充分搅拌混合，确保溶液均匀。
5.将溶液倒入无菌培养瓶或试管中，根据需要分装不同体积的培养基。
6.对培养瓶或试管进行高温高压灭菌，消除培养基中的细菌和其他微生物。
7.灭菌后的培养基可在低温条件下储存，以备后续实验使用。
应用lb培养基在微生物学实验中有广泛的应用，主要用于以下方面：1.细菌培养：lb培养基提供了细菌生长所需的营养物质和条件，促进细菌的生长和繁殖。
它常被用于培养大肠杆菌等革兰氏阴性菌，用于基因转化、蛋白表达等实验。
2.细菌存储：lb培养基也可用于细菌的长期储存。
培养出的细菌可通过分装到含有20%-40%甘油的lb培养基中，并冷冻保存在-80°C的低温条件下，可长期保存细菌种。
3.抗生素筛选：lb培养基可作为筛选培养基，用于检测细菌对不同抗生素的敏感性。
培养基的配制实验报告
培养基的配制实验报告说到培养基的配制，哎呀，这可是个有趣又重要的过程，特别是对于那些喜欢搞生物的小伙伴们。
想象一下，你的实验室里弥漫着一股淡淡的营养液的香气，真是让人感到兴奋。
培养基就像是小细胞们的豪华餐厅，给它们提供了成长所需的一切。
你说，这多重要啊！配制培养基就像做饭，有时候得讲究些“火候”，要让这些小家伙们吃得舒舒服服，才能茁壮成长。
好吧，我们得准备好一切材料。
无论是琼脂、氨基酸，还是各种微量元素，都要准备齐全。
这个过程啊，别小看，搞不好就像挑剔的客人，要求特别高。
如果你遗漏了某种成分，那可就麻烦了。
就像做菜，盐放少了，味道就不好。
我们得把这些成分一一称量，准确得让人心惊肉跳。
有时候觉得自己简直像个化学天才，手里拿着天平，心里默念：“这次一定要完美！”接下来就是混合了，哇，那个感觉，真是像在调制一杯美味的鸡尾酒。
把琼脂粉倒入水中，搅拌的时候，小心翼翼，生怕飞溅到四周。
这个过程可不能急，得慢慢来，像是在呵护你的宝宝。
水和琼脂混合后，你会发现，它们渐渐融合成了一种神奇的液体，仿佛在对你眨眼。
然后加热！注意了，要让它们彻底溶解，不然等会儿冷却了，就成了一块块“石头”，那就真得哭了。
我们得加点“调味品”，比如说，营养盐。
这个时候，别小看这些微量元素哦，它们就像是料理中的香料，让整个培养基的“味道”更加丰富。
加的过程就像是在给你的作品增添光彩，心里想着：“今天的配方一定要让小细胞们满意！”搅拌均匀之后，闻一闻，嗯，感觉就是不一样，简直想把它喝下去。
一切都准备好之后，我们得进行灭菌，这可是个关键步骤。
把混合好的培养基放进高压锅里，那一刻，你简直能感受到自己是个顶尖科学家。
高温高压的环境就像是给细胞们制造了一个“温室”，确保它们能在最干净的环境下成长。
过了几分钟，听着高压锅“嘭嘭”的声音，心里满是期待，想知道它们会变得多么茁壮。
等到冷却了，终于可以倒入培养皿，嘿嘿，那种感觉简直太棒了，像是在给小细胞们铺床。
酵母菌霉菌常用培养基的配方
酵母菌、霉菌常常使用培养基的配制之袁州冬雪创作一、目标要求懂得合成培养基、半合成培养基和天然培养基的配制原理.学习和掌握麦芽汁培养基、土豆葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法.二、基来历根基理麦芽汁培养基和土豆葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌.土豆葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌.豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基.察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用.麦芽汁培养基为天然培养基，土豆葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基，而察氏培养基则为合成培养基.培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH.三、实验资料(一)药品葡萄搪、蔗糖、NaN03、K2HP04、KCl、MgSO4·7H2O，FeS04、琼脂.(二)仪器天平、高压蒸汽灭菌锅.(三)玻璃器皿移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等.(四)其他物品药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、新鲜麦芽汁、黄豆芽、土豆等.四、实验内容(一)麦芽汁培养基的配制1．培养基成分新鲜麦芽汁一般为10-15波林.2．配制方法(1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，逐日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用.(2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即暗示糖化完全).(3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤).(4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH至6．4.如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用.(5)如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补偿失水.(6)分装、加塞、包扎.(7)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min.（二)土豆葡萄糖培养基的配制1、培养基成分土豆20g葡萄糖2 g琼脂-2g水100ml自然pH2．配制方法(1)配制20％土豆浸汁取去皮土豆200g，切成小块，加水1000m1.80℃浸泡lh，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积.100 Pa 灭菌20 min.即成20％土豆浸汁，贮存备用.（2)配制时，按每100 m1土豆浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水.(3)分装、加塞、包扎.(4)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min.(三)豆芽汁葡萄糟培养基的配制1．培养基成分黄豆芽10g葡萄糖5g琼脂-2g水100ml自然pH2．配制方法(1)称新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100 m1水，小火煮沸30 min，用纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁.（2)配制时，按每100 m1 10％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2 g琼脂，继续加热融化，补足失水.(3)分装、加塞、包扎.(4)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min.(四)察氏(czapck)培养基的配制1．培养基成分蔗糖3gNaN03K2HP04KClMgSO4·7H2O 0.05 gFeS04 0.001 g琼脂-2g蒸馏水 100ml自然pH 2．配制方法(1)称量及溶化量取所需水量约2／3左右加入到烧杯中，分别称取蔗糖、NaNO3、K2HP04、KCl、MgSO4.依次逐一加入水中溶解.按每100 ml 培养基加入％的FeS04溶液.（2）定容候药品全部溶解后，将溶液倒入量筒中，加水至所需体积.（3）加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水.(4)分装、加塞、包扎.(5)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min.五、实验陈述内容记录你所配制培养基的称号及成分.。
第二章 培养基的组成和配制法
培养基配制方法
移母液 确定配方 称取蔗糖、琼脂 定容 培养基熬制 调pH值
二次定容
接
种
灭
菌
扎口
分装
培养基配制室 Medium-making room
• 不同植物材料常需要改变配方，如维持生 长和诱导细胞分裂和分化的培养基配方就 不同。 • 配方的种类很多，目前以MS（Murashige and Skoog）培养基配方作为最常用的一 种基本培养基，它利于一般植物组织和细 胞的快速生长。
在进行组织培养研究时应根据研究目的和培养植物的种类 来确定培养基的组成，除营养、诱导作用外还应当注意离 子平衡和毒性问题，如水一般都采用重蒸馏水，无机盐类 一般都需用分析纯的药品， pH值可用1mol· L-1KOH（或 NaOH）溶液和2mol ·L-1HCI调整。 有时可以用普通药品代替，但须注意这些药品不仅应有营 养价值，还须无毒。如果在工业上使用大缸深层培养细胞 或组织生产有效成分和生物制品、应用培养基的量将要以 吨位计量时，则采用什么代用品较为经济实用更应慎重考 虑。
（4）当培养基配制好后应立即进行PH值的调整。最 好用酸度计。如无条件也可用精密PH试纸， pH值 可用1mol·L-1KOH（或NaOH）溶液和2mol ·L1HCI调整。
（5）配制好的培养基要趁热分装，分装时可采用烧 杯漏斗直接分注。一般以占试管或三角瓶等培养容 器的1/4—1/3为宜。
（6）由于未经灭菌处理的培养基既可能带有各种杂 菌，同时又是各种杂菌良好的生长繁殖场所，因此 培养基分装后应立即置于灭菌锅内进行灭菌 （7）高压灭菌后的培养基凝固后，宜将培养基放倒 培养室中预培养2—3天若没有杂菌污染才可放心使 用。
第一节 培养基成分
（1）无机营养物 （2）糖类 （3）维生素类 （4）氨基酸及有机附加物 （5）植物生长调节物质 此外，培养基中如加入0.5～1.0％的琼脂即 为静止培养的固体培养基，否则为悬浮培养 的液体培养基。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、引言在微生物学研究中，培养基的制备与灭菌是非常重要的步骤。
培养基是供养微生物生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了消除其中的有害微生物，保证培养基的纯净度。
本实验旨在探讨培养基的制备与灭菌的方法与步骤，以及其对微生物培养的影响。
二、培养基的制备2.1 选择培养基成分培养基的成分根据所需培养的微生物种类和目的而定，常见的成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基之前，需要明确所需微生物的营养需求，选择合适的成分。
2.2 配制培养基根据所选的成分和配方，按照一定比例将各种成分溶解在适当的溶剂中，常见的溶剂包括蒸馏水和生理盐水。
注意溶解顺序和温度，保证各种成分充分溶解。
2.3 调节pH值微生物对pH值的要求各不相同，因此在制备培养基时需要调节pH值。
使用酸碱溶液逐滴加入培养基中，同时使用pH试纸或pH计检测pH值，直到达到所需的范围。
2.4 灭菌前的处理在灭菌之前，需要对培养基进行一些处理，包括过滤、加热和冷却等。
过滤可以去除其中的固体杂质和大颗粒微生物。
加热可以杀灭其中的有害微生物，常用的方法包括高温灭菌和压力灭菌。
冷却后的培养基可以用于微生物的培养。
三、灭菌实验3.1 高温灭菌高温灭菌是常用的灭菌方法之一，其原理是利用高温杀灭微生物。
将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高温灭菌器中。
设置合适的温度和时间，一般为121℃，15-20分钟。
高温灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。
3.2 压力灭菌压力灭菌是一种利用高温和高压杀灭微生物的方法。
将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入压力灭菌器中。
设置合适的温度和压力，一般为121℃，15-20分钟。
压力灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。
3.3 灭菌效果验证灭菌后的培养基需要进行灭菌效果验证，以确保其中没有活菌存在。
常用的方法包括接种试验和平板计数法。
接种试验是将灭菌后的培养基接种到无菌平板上，观察是否有菌落生长。
sc培养基配方
sc培养基配方
1.无机盐配方：
-1L去离子水
-6.7g氯化钠(NaCl)
-1.47g柠檬酸(C6H8O7·H2O)
- 200mg 葡萄糖 (C6H12O6)
- 750mg 氯化钾 (KCl)
- 250mg 磷酸二氢钾 (KH2PO4)
- 500mg 氢氧化钠 (NaOH)
2.添加上述无机盐到去离子水中，搅拌混合至完全溶解。
3.设置pH至5.5-6.0，使用稀盐酸(HCl)或氢氧化钠(NaOH)进行调节。
4.加入葡萄糖，再次搅拌混合至完全溶解。
5.加入酵母菌所需的营养物质，如酵母提取物、酵母氮基、氨基酸等。
这些可根据具体的研究目的进行添加。
6.搅拌混合至完全溶解，并通过0.22μm过滤器过滤，以去除微生物
和固体颗粒。
7.将培养基分装至适合的容器中，如培养皿或试管。
8.用高温高压灭菌器灭菌，或用其他适合的方法进行灭菌。
SC培养基的优点是无机成分含量均匀，易于制备和灭菌，可以确保细胞生长环境的稳定性。
此外，SC培养基不含有机营养物质，可以减少环境因素对酵母生长和繁殖的影响，更便于对细胞生长特性进行研究。
黑木耳常用三级菌培养基配方
第三章第一节黑木耳常用三级菌培养基配方季占军黑木耳三级菌包也就是我们常说的出耳棒，三级菌是直接用来出耳的，所以在制作过程中的每一个细节都能直接影响到后期木耳的产量，而且在出耳期的很多病害也是菌棒制作期留下的隐患，所以菌棒制作至关重要，广大种植户一定要认真对待。
一句话菌壮耳肥，具体操作细节如下：一、常用三级菌培养基配方因黑木耳属木腐菌所以常用的培养基配方多为木屑配方，但因各地资源不一样，加之近年来天然林禁伐政策的实施，所以在零八年开始我们进行了黑木耳代料培养基的筛选实验，下面我把具体的培养基配比介绍一下：1. ⑴木屑培养基，木屑86%，麦麸10%，豆粕2%，石膏1%，石灰0.5%-1%。
⑵木屑81%，麦麸5%，稻糠10%，石膏1%，豆粕2%，石灰0.5%-1%。
以上木屑培养基配方中求大片不添加防腐剂，稻糠要求用磨米下来的精糠，石灰的添加量应以PH值为标准，要求拌完料后PH值7.5-8之间，石膏应该用食用菌专用石膏粉。
2.木屑加玉米芯配方：木屑：58%，玉米芯30%，麦麸8%，豆粕2%，石膏1%，磷酸二氢钾0.1%，石灰1%。
木屑：56%，玉米芯30%，稻糠10%，豆粕2%，石膏1%，磷酸二氢钾0.1%，石灰1%。
以上配方中要求玉米芯大小不超过0.6CM，木屑应为粗细各一半为好，特别注意两点：1，玉米芯使用前要充分预湿。
2，PH值在拌料后应在8左右，而且料要现拌现用。
3.木屑加棉壳配方：木屑48%，棉籽壳40%，麦麸10%，石膏1%，石灰0.5%-1%。
木屑43%，棉籽壳40%，麦麸5%，稻糠10%，石膏1%，石灰0.5%-1%。
在以上配方中，棉壳要求用中壳中绒的而且要提前预湿，因棉绒吸水性强所以在拌料过程中要格外注意含水量。
4.木屑加豆秸配方：木屑58%，豆秸30%，麦麸8%，豆粕2%，石膏1%，石灰0.5%-1%，磷酸二氢钾0.1%。
木屑53%，豆秸30%，麦麸5%，稻糠8%，玉米面2%，石膏1%，石灰扫码查看本文高清电子版0.5%-1%，磷酸二氢钾0.1%。
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《微生物检验技术》精品资源共享课程
第１ 页 共 ７ 页 & 项目八：常用培养基制备 学习目标 能力目标：会进行常用细菌培养基的配制；会正确矫正培养基ｐＨ值；会对物品进行常规消毒和灭菌。 知识目标：明确常用培养基制备原理、种类及其用途；知道常用培养基制备程序；知道常用消毒、灭菌的方法。 态度目标：严格按照操作规程进行操作，养成良好的习惯；严格无菌操作，注意生物安全；配制培养基时准确称量，认真操作。
一、知识链接 培养基是人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配置而成的一种混和营养基质，用以培养或分离各种微生物。细菌生长繁殖需要一定的营养物质，不同的细菌对营养的要求不同，但细菌生长需要的营养物质应含有氮源、碳源、无机盐类、生长因子和水等。 （一）培养基的种类与用途 １．根据培养基的物理性状分类 （１）液体培养基：呈液体状态的培养基为液体培养基。在实验室中主要用于微生物的生理、代谢研究和获取大量菌体，在发酵生产中绝大多数发酵都采用液体培养基。 （２）固体培养基：呈固体状态的培养基都称为固体培养基。常用的固体培养基是在液体培养基中加入凝固剂（约２％的琼脂或５％～１２％的明胶），加热至１００℃，然后再冷却凝固而成的。固体培养基主要用于菌种分离、鉴定、菌落计数、抗菌药物敏感试验等。 （３）半固体培养基：半固体培养基是指在液体培养基中加入少量凝固剂（如０．２％～０．５％的琼脂）而制成，可以通过穿刺培养观察细菌的运动能力、厌氧菌的培养及菌种保藏等。 ２．根据培养基的功能分类 （１）基础培养基：含有微生物需要的最基本营养成分，可供大多数微生物生长。 （２）营养培养基：在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、或酵母浸膏等有机物，可供营养要求较高的细菌生长，如血平板、血清肉汤等。 （３）选择性培养基：是利用不同种类细菌对各种化学物质的敏感性不同，制成有利于选择欲分离的细菌而抑制其它细菌生长的培养基。如在培养基中加胆酸盐能抑制革兰氏阳性菌的生长，有《微生物检验技术》精品资源共享课程
第２ 页 共 ７ 页 利于革兰氏阴性的肠道致病菌生长。 （４）鉴别培养基：供细菌生化反应试验，借以鉴定细菌之用。如在无糖基础培养基中加入乳糖和ｐＨ指示剂，接种细菌后培养，如细菌能分解乳糖产酸，则指示剂变色，不分解乳糖则颜色不变。如双糖或三糖铁培养基。 （５）厌氧培养基：专性厌氧菌须在无氧条件中才生长。进行厌氧培养的方法，一是将培养基放在无氧环境中培养；另一个办法是在培养基中加入还原性物质，降低培养基的氧化还原电势，并在培养基表面上用凡士林或石蜡封闭，使培养基与外界空气隔绝，让培养基本身成为无氧的环境。如庖肉培养基。 （二）培养基的制备程序 配制一般培养基的主要程序可分为调配、溶化、矫正ｐＨ值、澄清过滤、分装、灭菌及检定等步骤。 １．调配 按培养基处方准确称取各成分，混悬于蒸馏水中。先在三角烧瓶中加入少量蒸馏水，再加入蛋白胨、琼脂等各种固体成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水冲洗瓶壁。 ２．溶化 将各种成分混匀于水中，加热溶解，溶化完毕后，应注意补足失去的水分。 ３．矫正ｐＨ值 应用酸度计准确可靠，但常用的是比色法或ｐＨ试纸。一般细菌培养基须矫正ｐＨ至７．４～７．６，此外亦有需要酸性或碱性的培养基。培养基在高压灭菌后，其ｐＨ值约降低０．１～０．２，故矫正时应比实际需要的ｐＨ值高０．１～０．２。 ４．澄清过滤 培养基配成后一般都有沉渣或混浊，需过滤澄清使其清晰透明方可使用，液体培养基常用滤纸过滤，固体培养基（琼脂培养基）可在加热融化后需趁热以纱布或两层纱布中夹脱脂棉过滤。 ５．分装 根据需要将培养基分装于不同容量的三角烧瓶、试管内。分装的量不能超过容器的２／３，以免灭菌时外溢。琼脂斜面分装量为试管容量的１／４～１／３，灭菌后须趁热放制成斜面，斜面长度约为试管长度的２／３。半固体斜面分装量为试管长度的１／３，灭菌后趁热直立，待冷后凝固。高层琼脂分装量约为试管长度的１／３。灭菌后直立凝固待用。如高层琼脂斜面灭菌后略放斜，使之既有高层又有斜面。琼脂平板须将灭菌（或已灭菌好加热融化）后的培养基冷至５０℃左右，以无菌方式倾入灭菌平皿内，内径９ｃｍ的平皿倾注培养基约１３～１５ｍｌ，轻摇平皿底，使培养基平铺于平皿底部，待凝固后即成。 ６．灭菌 不同成分、不同性质的培养基，可采用不同的灭菌方法。①高压蒸气灭菌法：一般培养基高压灭菌１０３．４３ｋＰａ， １２１℃，１５～２０分钟即可；含糖的培养基高压灭菌５５ｋＰａ ，１１３℃，１５分钟，以免糖类被破坏。②流通蒸气灭菌法：凡不耐高热的物质，如糖类、明胶、血清等培养基的灭《微生物检验技术》精品资源共享课程
第３ 页 共 ７ 页 菌，可用流通蒸气灭菌，使温度达８０～１００℃之间，维持３０分钟，每天一次，连续３天。③血清凝固器灭菌：含血清、鸡蛋的培养基，可应用血清凝固器进行间歇灭菌。④滤过除菌法，可用于糖溶液、尿素液、血清等因加热即破坏的物质，可用滤菌器过滤除菌。 ７．检定 每批培养基制成后须经检定后方可使用，检定时将培养基置３５℃温箱内培养２４小时后，看是否有细菌生长，以此来证明无菌，同时用已知菌种检查在此培养基上的生长繁殖及生化反应情况，符合要求者方可使用。 ８．保存 制好的培养基，不宜保存过久，以少量、勤做为宜。每批应注明制作日期。平日少量分装的试管培养基均宜存放于４℃冰箱内，其他基础培养基等可保存于冷暗处。
二、技能训练 （一）训练目的 １．掌握培养基制备的基本过程。 ２．熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。 （二）材料准备 １．试剂 基础培养基干粉、营养培养基干粉、半固体培养基干粉、ＳＳ（沙门氏菌－志贺氏菌琼脂）培养基干粉、麦康凯培养基干粉、脱纤维羊血。 ２．器材及其他 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、ｐＨ试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。 （三）训练内容 １．培养基制备的基本过程 （１）称量：按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、ＮａＣｌ放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。 （２）溶化：在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后加热使其溶解。待完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化培养基中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂，最后补足所失的水分。 （３）调ｐＨ：在未调ｐＨ前，先用精密ｐＨ试纸测量培养基的原始ｐＨ值，如果ｐＨ偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ，边加边搅拌，并随时用ｐＨ试纸测其ｐＨ值，直至ｐＨ达７．６。反之，则用１ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ进行调节。注意ｐＨ值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。对于有些要求ｐＨ值较精确的微生物，其ｐＨ值的调节可用酸度计进行。 《微生物检验技术》精品资源共享课程
第４ 页 共 ７ 页 （４）分装：①液体分装高度以试管高度的１／４左右为宜。②固体分装试管，其装量不超过管高的１／３，灭菌后制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。③半固体分装试管一般以试管高度的１／３为宜，灭菌后垂直待凝。 （５）加塞：培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 （６）包扎：加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。 （７）灭菌：将上述培养基以１０３．４３ｋＰａ，１２１．３℃，２０分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。 （８）搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷至５０℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 （９）无菌检查：将灭菌的培养基放入３５℃的温室中培养２４～４８小时，以检查灭菌是否彻底。 ２．常用培养基的配制 （１）肉汤：在大容量三角烧瓶中，加定量蒸馏水，按培养基制备说明书准确称量所需干粉，使其成分混合。待充分溶解后，分装于小容量三角烧瓶或试管内，加塞包扎后１０３．４３ｋＰａ高压蒸汽灭菌２０分钟。冷却后放阴暗处或４℃保存备用。该培养基一般供作无糖基础培养基，适用于营养要求一般的细菌。 （２）营养琼脂（普通琼脂）：在大容量三角烧瓶中，加定量蒸馏水，按培养基制备说明书准确称量所需干粉，使其成分混合。待充分溶解后，分装于小容量三角烧瓶或试管内，加塞包扎后１０３．４３ｋＰａ高压蒸汽灭菌２０分钟。若制作琼脂斜面培养基，取出试管后摆成斜面，待凝固后即成琼脂斜面。烧瓶中的琼脂温度降至５０℃左右倾注无菌平皿，凝固后即成营养琼脂平板。该培养基适用于营养要求一般的细菌，也可做无糖基础培养基使用。 （３）半固体培养基：在大容量三角烧瓶中，加定量蒸馏水，按培养基制备说明书准确称量所需干粉，使其成分混合。待充分溶解后，分装入小试管，每管２ ｍｌ，１０３．４３ｋＰａ高压蒸汽灭菌２０分钟。待取出后直立凝固即成。此培养基可用于保存菌种和观察细菌动力用。 （４）血液和巧克力琼脂培养基：将灭菌后的普通琼脂培养基加热融化，冷却至５０℃左右，以无菌操作加入１０％无菌脱纤维羊血（临用前需置３７℃水浴预温３０分钟），轻轻摇匀（避免产生气泡），分装于无菌试管或无菌平皿内，凝固后即成血液琼脂斜面或血液琼脂平板。若琼脂温度在７０～８０℃时加入羊血，并在８０℃水浴中摇匀１５～２０分钟，倾注平板凝固后即成巧克力琼脂平板。主要用