分子生物学实验室常用试剂的配制
分子生物学实验室常用试剂配方

分子生物学实验室常用试剂配方:医药观察之我见2. 常用试剂配方(Prescriptions of Ordinary Reagents)(高媛). (217)(1) PBS (217)(2) 胰酶Trypin (217)(3) Tris-NH4Cl (217)(4) Running buffer (218)(5) Washing buffer (218)(6) 湿转液 (218)(7) LB培养基 (218)(8) LB培养板 (218)PBS:PBS是磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline)一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用。
主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl,由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离,缓冲的pH值范围很广;而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。
配置方法:NaCl : 320g 优级纯Na2HPO4. 12H2O 61.44gKCl 8gKH2PO4 8g三蒸水4L烧杯溶解后用HCl调PH为7.2-7.4,细胞用需要高温灭菌,放于超净台冷却,贴上封口膜及标签。
胰酶:Trypsin 一种胰蛋白酶,通过在特定位置上降解蛋白,使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解,使两者分离。
细胞消化胰酶常用工作浓度为0.25%,PH为7.2-7.4,储存液放在-20冻存,使用液放在4度。
Tris-NH4Cl :红细胞裂解液,是一种从人,鼠及其他哺乳动物等体内烦人组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液,应用低渗的原理,改变红细胞渗透压,使得红细胞胀大破裂。
配置方法:2L 体系:NH4Cl : 14.94g 溶于1800mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤Tris : 5.15g 溶于200mL ddH2O3L体系NH4Cl : 22.41g 溶于2700mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤Tris : 7.725g 溶于300mL ddH2ORunning buffer: 4L (5X)Tris: 60.6gGly: 288.3gSDS: 20gddH2O 3.78LWashing buffer: 4L (10X)Tris : 48.6gNaCl : 116.9gTween 20 : 40mLddH2O: 3.9L湿转液:4L (10X)Tris: 121.4gGly: 576.6gddH2O 3.57LLB液体培养基:名字来源于英语lysogeny broth 即溶菌肉汤,应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
分子生物学常用试剂配制

试剂配制:1、1 M Tris-HCl (pH 8.0): 称取Tris-Base 121g, 加入约800 ml 水在磁力搅拌器上搅拌,使其充分溶解后加入浓盐酸调整pH至8.0后加水定溶至1000 ml. 灭菌后于室温保存。
2、0.5 M EDTA (pH 8.0): 称取EDTA-Na2盐187 g 加入约800 ml水,在磁力搅拌器上边搅拌边加入固体NaOH,当EDTA和NaOH均完全溶解,溶液变清时其pH值刚好达到8.0左右,再用pH试纸略加调整即可, 灭菌后于室温保存。
3、5.0 M NaCl:称取NaCl 300 g, 加入蒸馏水约800 ml 于磁力搅拌器上充分搅拌,约5分钟后停止搅拌,静止2~3分钟,倒出上清液,再加入100 ml蒸馏水重复前面的步骤,直到NaCl充分溶解后定溶至1000 ml., 灭菌后于室温保存。
4、DNA Buffer的配制:1 M Tris-HCl (pH 8.0) 100 ml0.5 M EDTA (pH 8.0): 100 ml5.0 M NaCl: 300 mlH2O 500 ml灭菌后于室温下保存3个月左右,用时按往Buffer中加入15g CTAB,10g PVP在电炉上烧开;在通风橱里加入1%的巯基乙醇( 现配现用)。
5、5 X TBE溶液配制:约800 ml蒸馏水中加入Tris-base 54 g,硼酸27.5 g,充分溶解后加入0.5 M EDTA(pH: 8.0)定溶到1000 ml, 调节pH为8.0备用,于室温下短期存放。
使用时配制成1×TBE或0.5×TBE稀释缓冲液。
6、1XTE10ml 1M Tris-HCl (pH 8.0),2ml 0.5M EDTA (pH 8.0)定溶到1000 ml, 调节pH为8.0备用。
实验一常用试剂配制

实验一 分子生物学实验 常用试剂配制
分子生物学实验室注意事项
• 规范使用仪器 • 有毒试剂使用和净 • 蓝色:1ml 黄色:200ul 白色:10um 带一次性PE手套 高压灭菌后使用
微量移液器的正确使用
• 1.设定取液值:转动移液器的调节旋钮,反时针方向转动旋钮,可 提高设定取液量。顺时针方向转动旋钮,可降低取液量。在调整旋钮 时,不要用力过猛,并应注意使移液器显示的数值不应超过其可调范 围。 2.吸液: (1)选择吸头(Tip) 放在移液器套筒上,稍加压力使之与套筒之间无 空气间隙。 (2)把按钮压至第一停点(图A),垂直握持加样器,使吸头浸入液 面下3-5毫米处,然后缓慢平稳地松开按钮,吸入液体(图B)。 3.放液: (1)将吸头口贴到容器内壁底部并保持倾斜,平稳地把按钮压到第 一停点(图C),再把按钮压到第二停点以排出剩余液体(图D)。 (2)压住按钮,同时提起加样器,使吸头贴容器壁擦过(图D)。松 开按钮(图E),按吸头弹射器除去吸头。
常用试剂配制
需配
0.25% 溴酚蓝 40% M/V 40%(M/V)蔗糖 4℃贮存
1mol/L CaCl2
54 g CaCl2•H2O溶于200mL纯水中,0.22um 滤器过滤除菌,分装每 小份10mL,-20℃贮存。用时稀释。
75% 乙醇 RNA酶 酶
1.取0.5g RNase A置于50ml塑料离心管中。 2.加入40ml灭菌水,充分混合溶解之后定容50ml。 3.100℃煮沸15min,缓慢冷却至室温,小份分装(1ml一管)后, 置于-20℃保存。 实验书P79
分子生物学实验室常用试剂配方-ProbeGene2015(精)

分子生物学常用试剂配制与保存一 . 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine :溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中,使终体积为 10ml 。
分装成小份贮存于 -20℃。
1mol/L精胺(Spermine :溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使终体积为 10ml 。
分装成小份贮存于 -20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate:将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白 (BSA :加 100mg 的牛血清蛋白 (组分 V 或分子生物学试剂级,无 DNA 酶于 9.5ml 水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白,盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到 10ml ,然后分装成小份贮存于 -20℃。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate:溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中,加水定容到 100ml 。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate:溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中, 用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2, 再加水定容到 100ml 。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液 (0.5mol/L , 混合后形成 EDTA 的三钠盐。
或称取 186.1g 的 Na2EDTA·2H2O和 20g 的 NaOH ,并溶于水中,定容至 1L 。
1mol/L HCl:加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。
25mg/ml IPTG:溶解 250mg 的 IPTG (异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷于 10ml 水中, 分成小份贮存于 -20℃。
100mmol/L PMSF:溶解 174mg 的 PMSF (苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中, 定容到 10ml 。
分子生物学常用试剂配制表

LB 培养基PBS 缓冲液1x 10x 胰蛋白胨Tryptone 10g/L液体Na2HPO4(8mM/L )1.14g/L11.36g/L酵母提取物Yeast extract 5g/L Nacl(136mM/L)7.95g/L 79.56g/L氯化钠Nacl10g/L KH2PO4(2mM/L)0.27g/L 2.72g/L 琼脂20g/L固体Kcl(2.6mM/L)0.2g/L 1.94g/L ddWater 至1L 至1LSDS-PAGE 电泳缓冲液5X NaOH 调节pH 至7.4-7.6Tris 15.1g 用前稀释TBS 缓冲液1X 10X甘氨酸94g Tris 2.42g/L 24.2g/L SDS 5g氯化钠Nacl 8g/L 80g/L ddWater 至1L ddWater 至1L 至1LHcl 调节pH 至7.4-7.6WB 湿转转膜液10X 加500ul Tween-20/L 得PBST/TBST Tris 30.3g/用前稀释甘氨酸144g/L细胞破碎缓冲液ddWater 至1L Kcl(300mM)22.37g/L WB 湿转转膜液使用KH2PO4(50mM) 6.81g/L 10X Trans Buffer 100mlEDTA(1mM)0.292g/L 甲醇200ml ddWater 至1L pH8.0ddWater 700ml 10%SDS 50℃加热可促溶解IPTG (1mM/L )1ul+1ml 菌液SDS 10g IPTG 2.38g10XddWater 至100ml 灭菌ddWater 至10ml稀释10倍后10ul+1ml 菌液10%过硫酸铵APS3周内使用过硫酸铵APS0.2g Amp (50-100ug/ml )10X1ul+1ml 菌液ddWater 2ml Amp 1g 灭菌ddWater至10ml1.5MTris-Hcl pH 8.8Hcl 调至8.8稀释10倍后10ul+1ml 菌液Tris 18.8g ddWater 至100ml考马斯亮蓝染色液过滤后可循环使用1M Tris-Hcl pH6.8Hcl 调至6.8甲醇500ml Tris 12.12g 乙酸100ml ddWater 至100ml R-250考马斯亮蓝0.5gddWater 至1L考马斯亮蓝脱色液乙醇比例越高脱色越快3705ZZL甲醇/乙醇100-500ml 乙酸50ml ddWater 至1LTAE 50X ELISA 包被液Tris 242g 先溶解再加乙酸后定容Na2CO3 1.59g pH9.6Na2EDTA·2H2O 37.2g NaHCO3 2.93g ddWater 800ml灭菌ddWater 至1L 乙酸57.1ml ddWater 至1L 生理盐水0.9%氯化钠Nacl 9g 灭菌使用SDS 分离胶浓度分离范围ddWater 1L6%50-150kd 8%30-90kd 鲜血培养基10%20-80kd 培养基100ml 约37℃加血12%12-60kd 鲜血5ml 15%10-40kd巧克力培养基同样5%鲜血于≥90℃时加入琼脂糖凝胶琼脂糖1XTAE 1%核酸染料透析袋处理0.2g 20ml 6/8/11孔1ul 2%(W/V)碳酸氢钠+1mmol/L ED TA(pH 8.0)煮沸10min 0.3g 30ml 13孔 1.5ul 0.4g 40ml 18/25孔2ul 0.3g 20ml 1.5%1ul ddWater 清洗0.4g20ml2%1ul1mmol/LEDTA(pH 8.0)煮沸10min包涵体溶解液包涵体洗涤液磷酸钠(20mm ) 3.27g Hcl 调至pH 7.4EDTA (0.5mM )0.146g Hcl 调至pH8.0氯化钠(300mM)17.53g Nacl (100mM ) 5.844g 咪唑(10mM )0.68g Tris (50mM ) 6.06g 尿素(8M )484.8g TritonX-100(1%)10mlddWater 至1L ddWater 至1L 加入后超声10min ,离心20min 0.1M 氯化钙CaCl2感受态用蛋白复性缓冲液CaCl2 1.1g 照紫外灭菌Nacl (100mM ) 5.85g Hcl调至pH8.灭菌ddWater 10mlTris (50mM ) 6.06g甘油(5-10%)50ml枸橼酸钠抗凝剂109mM/LGSH (2mM)0.6gNa3C6H5O7·2H2O 32.05g 灭菌后用,以实际分子量计算用量GSSG(0.2mM)0.1gddWater 至1L 尿素(6/4/2/0M)计算1:9血使用ddWater 至1L尿素6-4-2-0梯度分别1LELISA 终止液(2mM/L )H2SO43705ZZL浓硫酸(98%)21.7ml酸入水中!ddWater 178.3ml。
分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法

分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法1.离心管清洗液配制方法:将500mL蒸馏水加入500mL乙醇中配制而成。
2.TE缓冲液配制方法:将1 M Tris-HCl (pH 8.0) 溶液和0.5 M EDTA (pH 8.0) 溶液以1:200的比例混合,加入蒸馏水配制而成。
最终pH值约为8.0。
3.LB培养基配制方法:将10g/L氯化钠、5g/L酵母浸粉、10g/L蛋白胨加入1L蒸馏水中,调整pH至7.0-7.5、将溶液加热,搅拌溶解,然后使用纸滤器滤过,装入含有取10g搅拌均匀的琼脂糖的培养皿中。
灭菌后冷却到45°C左右,然后再倒入培养皿中。
4. 蒸馏水(Milli-Q水)配制方法:使用商用蒸馏水设备如 Milli-Q等,生成去离子水,再通过0.22 μm的滤器进行过滤,获得蒸馏水。
5. LB/Agar培养基配制方法:将10g/L氯化钠、5g/L酵母浸粉、10g/L蛋白胨、15g/L 琼脂加入1L蒸馏水中,调整pH至7.0-7.5、将溶液加热,搅拌溶解,然后使用纸滤器滤过。
将过滤后的溶液倒入培养皿中,灭菌后冷却到45°C 左右。
1.TBE缓冲液配制方法:将1 M Tris-Borate 溶液、0.1 M EDTA 溶液、10% (w/v) Boric acid 溶液按5:19:75的比例混合,加入蒸馏水配制而成。
最终pH值约为8.0。
2.TAE缓冲液配制方法:将40 mM Tris、20 mM 醋酸和1 mM EDTA 按1:0.5:0.1的比例混合,加入蒸馏水配制而成。
最终pH值约为8.0。
3. Tris-HCl缓冲液配制方法:将1 M Tris-HCl 溶液加入蒸馏水,调整pH值至所需范围。
4.PBS缓冲液配制方法:将0.2g/LKH2PO4、0.2g/LNa2HPO4、8.5g/LNaCl和0.2g/LKCl加入1L蒸馏水中,调整pH值至7.45. Tris-EDTA缓冲液(TE缓冲液)配制方法:将1 M Tris-HCl (pH 8.0) 溶液和0.5 M EDTA (pH 8.0) 溶液以1:200的比例混合,加入蒸馏水配制而成。
分子生物学常用药品配方

分子生物学常用药品配方/data/2007/0513/article_39530.htm一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH 至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
分子生物学实验常用试剂配方

10%FBS
DMEM 500ml
胎牛血清(FBS)50ml
P/S 5.5ml
乙酰化体外反应相关试剂
5× HAT buffer
Tris-HCl(PH8.0)100mM
KCl500mM
DTT 5mM
EDTA 1mM
5× HDAT buffer
Tris-HCl(PH8.0)125mM
NaCl685mM
称取100gSDS固体,溶于1000mlddH2O中
Tris缓冲液(1.5M,PH8.8)
称取181.71gTris固体,溶于1L水中,用HCl调PH值至8.8
Tris缓冲液(1.0M,PH6.8)
称取121.14gTris固体,溶于1L水中,用HCl调PH值至6.8
10%过硫酸铵
1g过硫酸铵加水至10ml
使用前用ddH2O和无水甲醇按1:1稀释成1×Transfer buffer
Strip buffer(100ml)
ddH2O 73ml
10%SDS 20ml
1MTris-HCl (PH6.8) 6.25ml
β-Me0.69ml
10×TBST(2.5L)
Tห้องสมุดไป่ตู้is60.57g
NaCl219.15g
调PH到8.0
加1MDTT到其终浓度为0.4M
5×Running buffer(2.5L)
Tris37.75g
甘氨酸(Glycine)235g
10%SDS 62.5ml
使用前用ddH2O稀释成1×Running buffer
5× Transfer buffer(2.5L)
Tris37.75g
甘氨酸(Glycine)235g
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一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine):溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassiumacetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodiumacetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/LHEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/mlIPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/LPMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。
分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-freeRNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0)。
溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。
用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。
(配制过程中要戴手套)5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。
10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
(稀释液应在临用前配制)2.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。
100×Denhardt试剂(Denhardt's regent)成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖(Ficoll,400型)2g2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)2g2%BSA(组分V)2g水加水至总体积为100ml依照上表称取各组分,溶于水中定容。
过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液(standardDNAligasebuffer)(粘端、平端连接)成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl5ml 1mol/L贮液100mmol/L MgCl21ml 1mol/L贮液100mmol/L DTT1ml 1mol/L贮液2mmol/L ATP200ul 100 mmol/L贮液5mmol/L盐酸亚精胺(可选)50ul 1 mmol/L贮液0.5mg/ml BSA(组分V)(可选)0.5ml 10 mg/mL贮液水2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃。
100 mmol/L dNTP溶液(dNTP solutions)可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/L dNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP贮液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP贮液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP贮液水12ul20%PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水20g50ml 5 mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠(二水)88.2g3mol/L氯化钠175.3g水补足1L溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。
DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水加100ul DEPC于100ml水中,使DEPC的体积分数为0.1%。
在37℃温浴至少12h,然后在15psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。
DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺(deionized formamide)直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。
经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。
磷酸缓冲液(phosphate buffer)按照下表所给定的体积,混合1mol/L的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。
配制1mol/L的磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)贮液:溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。
1mol/L磷酸二氢钠(ml)1mol/L磷酸氢二钠(ml)最终pH值877850815775 735 685 625 565 510 450 390 330 280123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 6707206.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE(用于悬浮和贮存DNA)成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris-HCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)200ul0.5 mol/L EDTA(pH8.0)98.8mlTris缓冲液(Tris-HCl buffer)将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L。
浓盐酸的体积(ml)8.6142128.53846566671.376二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris碱1mol/L乙酸100 mmol/L EDTA水5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris碱445 mmol/L硼酸盐10 mmol/L EDTA水pH9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2242g57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)200ml的0.5 mol/L EDTA(pH8.0)补足1L54g27.5g硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH8.0)补足1L染料1%溴酚蓝(bromophenol blue)加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide)小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。
用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gel loading solutions)6×碱性凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖(400型)0.15%溴甲酚绿0.25%二甲苯青FF水300ul 10N氢氧化钠120ul0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.8g15mg25mg补足到10ml6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖(400型)1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.5g水补足到10ml6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25%溴酚蓝0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖(400型)水2.5ml 1%溴酚蓝2.5ml 1%二甲苯青FF1.5g补足到10ml6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50%甘油水1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul0.5mol/L EDTA(pH8.0)3ml3.9ml6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40%聚蔗糖水1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul0.5mol/L EDTA(pH8.0)4g补足到10ml10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2%溴酚蓝0.2%二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1%SDS50%甘油水20mg20mg4ml0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10%SDS5ml补足到10ml三.常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨酵母提取物氯化钠10g5g10g如果需要用1NNaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。