作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物,像胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA中
BrdU掺入实验
1、BrdU掺入实验：注释：溴脱氧尿嘧啶核苷是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。
BrdU与胸腺嘧啶竞争掺入的强溴脱氧尿嘧啶核苷是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。
BrdU与胸腺嘧啶竞争掺入的强度可能与细胞增殖异常有关，如肝癌细胞约11.6%的胸腺嘧啶被替代，而正常肝细胞仅有1.1%。
既往在分子遗传学等研究中常采用同位素标记，但有放射污染，技术难度大，实验周期长等缺点。
近年来非放射性标记物的研究发展迅速，然而其敏感性多数不及同位素，使实验应用受限。
自82年Gratzer制备出抗BrdU 单抗及标记检测技术不断改良提高，应用BrdU标记的敏感性已与氘胸腺嘧啶核苷相似。
目前认为BrdU是最有希望取代同位素的非放射性标记物之一。
本文综述近年来BrdU研究概况，重点介绍标记过程中有关技术问题。
一、标记技术：1、剂量和途径：BrdU可用于体内或体外标记，体内标记时，实验鼠按体重60mg-200mg/kg于鼠腹膜射，狗按体重100mg/kg静脉注射，人体以表面积150μg/m2用量，取标本前8.25-10h静脉注射，免疫组化检测。
BrdU经静脉给药一般无副作用，偶有道过量可致细胞突变。
体外标记的研究广泛而深入，通常将保存在培养液中的新鲜组织剪啐至1-2mm3大小，离心去除了上清液后，加入100μg/mlBrdU，或新鲜组织在0.3mg/ml浓度的BrdU中37摄氏度1小时，然后固定包埋，细胞标记在RPMI1640-10培养液中进行，细胞数低于1×106/ml，加入20μl的BrdU孵育202、标本处理：适当的标本处理对BrdU染色强度至关重要。
Meyer对450例乳腺癌组织体外标记总结出3点经验：切组织块＜1mm厚；固定前组织有代谢活力；封闭脱氧胸腺核苷合成酶，因此酶能使脱氧尿苷转变成脱氧胸苷，从而阻止内源性脱氧胸苷与BrdU竞争掺入DNA。
BrdU掺入实验
1、BrdU掺入实验：注释：溴脱氧尿嘧啶核苷是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。
BrdU与胸腺嘧啶竞争掺入的强溴脱氧尿嘧啶核苷是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。
BrdU与胸腺嘧啶竞争掺入的强度可能与细胞增殖异常有关，如肝癌细胞约11.6%的胸腺嘧啶被替代，而正常肝细胞仅有1.1%。
既往在分子遗传学等研究中常采用同位素标记，但有放射污染，技术难度大，实验周期长等缺点。
近年来非放射性标记物的研究发展迅速，然而其敏感性多数不及同位素，使实验应用受限。
自82年Gratzer制备出抗BrdU 单抗及标记检测技术不断改良提高，应用BrdU标记的敏感性已与氘胸腺嘧啶核苷相似。
目前认为BrdU是最有希望取代同位素的非放射性标记物之一。
本文综述近年来BrdU研究概况，重点介绍标记过程中有关技术问题。
一、标记技术：1、剂量和途径：BrdU可用于体内或体外标记，体内标记时，实验鼠按体重60mg-200mg/kg于鼠腹膜射，狗按体重100mg/kg静脉注射，人体以表面积150μg/m2用量，取标本前8.25-10h静脉注射，免疫组化检测。
BrdU经静脉给药一般无副作用，偶有道过量可致细胞突变。
体外标记的研究广泛而深入，通常将保存在培养液中的新鲜组织剪啐至1-2mm3大小，离心去除了上清液后，加入100μg/mlBrdU，或新鲜组织在0.3mg/ml浓度的BrdU中37摄氏度1小时，然后固定包埋，细胞标记在RPMI1640-10培养液中进行，细胞数低于1×106/ml，加入20μl的BrdU孵育202、标本处理：适当的标本处理对BrdU染色强度至关重要。
Meyer对450例乳腺癌组织体外标记总结出3点经验：切组织块＜1mm厚；固定前组织有代谢活力；封闭脱氧胸腺核苷合成酶，因此酶能使脱氧尿苷转变成脱氧胸苷，从而阻止内源性脱氧胸苷与BrdU竞争掺入DNA。
同位素示踪法在高中生物学实验中的应用
同位素示踪法在高中生物学实验中的应用同位素示踪法是利用放射性核素作为示踪剂对研究对象进行标记的微量分析方法，即把放射性同位素的原子参到其他物质中去，让它们一起运动、迁移，再用放射性探测仪器进行追踪，就可知道放射性原子通过什么路径，运动到哪里了，是怎样分布的。
同位素示踪法是生物学实验中经常应用的一项重要方法，它可以研究细胞内的元素或化合物的来源、组成、分布和去向等，进而了解细胞的结构和功能、化学物质的变化、反应机理等。
用于示踪技术的放射性同位素一般是用于构成细胞化合物的重要元素，如3H、14C、15N、18O、32P、35S、131I等。
在高中生物学教材中有多处涉及到放射性同位素的应用，下面笔者对教材中的相关知识进行归纳如下：1研究蛋白质或核酸合成的原料及过程把具有放射性的原子参到合成蛋白质或核酸的原料（氨基酸或核苷酸）中，让它们一起运动、迁移，再用放射性探测仪器进行追踪，就可知道放射性原子通过什么路径、运动到哪里以及分布如何。
?2研究分泌蛋白的合成和运输?用3H标记亮氨酸，探究分泌性蛋白质在细胞中的合成、运输与分泌途径。
在一次性给予放射性标记的氨基酸的前提下，通过观察细胞中放射性物质在不同时间出现的位置，就可以明确地看出细胞器在分泌蛋白合成和运输中的作用。
例如，通过实验说明分泌蛋白在附着于内质网上的核糖体中合成之后，是按照内质网→高尔基体→细胞膜的方向运输的，从而证明了细胞内的各种生物膜在功能上是紧密联系的。
?3研究细胞的结构和功能?用同位素标记氨基酸或核苷酸并引入细胞内，探测这些放射性标记出现在哪些结构中，从而推断该细胞的结构和功能。
?4探究光合作用中元素的转移?利用放射性同位素18O、14C、3H作为示踪原子来研究光合作用过程中某些物质的变化过程，从而揭示光合作用的机理。
例如，美国的科学家鲁宾和卡门研究光合作用中释放的氧到底是来自于水，还是来自于二氧化碳。
他们用氧的同位素18O分别标记H2O和CO2，使它们分别成为H218O和C18O2，然后进行两组光合作用实验：第一组向绿色植物提供H218O和CO2，第二组向同种绿色植物提供H2O和C18O2。
BrdU和MTT
细胞增殖的检验方法：BrdU标记法1、细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0 期。
2、终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。
3、弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。
4、甲醇/醋酸固定10min。
5、经固定的玻片空气干燥，0.3％H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6、5％正常兔血清封闭。
7、甲酰胺100℃，5min变性核酸。
8、冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。
9、按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。
BrdU原理：细胞增殖周期包括G1、S、G2、M 4个时期，其中S期是DNA合成期，细胞内DNA进行半保留复制，各种构成DNA的原料掺入到DNA中。
BrdU作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物（其化学结构特点是胸腺嘧啶的碱基嘧啶环上与5位C原子连接的甲基被溴代替），像胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA中。
当细胞处于DNA合成期而同时又有BrdU存在时, 就会有BrdU掺入新合成的DNA中，只要细胞不消亡，这种BrdU就在胞核的DNA中长期存留。
掺入到DNA的BrdU可通过抗BrdU单克隆抗体在组织切片或细胞爬片上显示。
该方法能对细胞周期进行迅速而稳定的测量, 而且标记BrdU的细胞只要不受到紫外线照射，对细胞本身没有功能损害。
该技术可应用到跟踪检测移植细胞的存活、分化和功能状态。
MTT: /view/6e6ec769a45177232f60a243.html（1）单细胞悬液接种于96孔培养板；103-104细胞/孔，每孔培养基总量200微升（96孔培养板每孔容积370微升），37℃、5％CO2培养箱中培养一段时间（根据实验目的决定培养时间）（2）加入2毫克／毫升的MTT液（50微升／孔）；继续培养3小时。
Brdu 细胞增殖检测实验
Brdu检测细胞增殖实验实验操作:铺细胞，每个3.5cm dish 10万个，在37℃、5%CO2孵箱中培养72h（细胞密度至50-60%左右）。
Brdu（5-溴-2′-脱氧尿苷）加入培养细胞中，1mg/ml，标记48h。
(量：Brdu以铺满整个dish底面为准。
)固定：PBS洗细胞爬片3次，每次5min，在摇床上晃动清洗，4%PFA固定30min。
变性：将固定好的细胞爬片用PBS洗3次，每次5min，2mol/L的HCl在37℃条件下变性5min，可放置于37℃恒温孵箱，应用封口膜把培养皿封好。
（120r/m）中和：0.1mol/L的硼酸钠（PH8.3）中和10min，PBS洗3次，每次5min。
（50r/m）加入1ml的0.2%TritonX-100，10min。
吸出TritonX-100，用PBS洗3次，每次5min。
加入1ml 3%的BSA封闭，室温1h，可在摇床上晃动。
吸出BSA，用PBS洗3次，每次5min。
10．加一抗（尿嘧啶脱氧核苷Brdu（鼠单抗）1:200），用1%BSA稀释，4度过夜。
11．将孵好一抗的细胞爬片用PBS洗3次，每次10min。
12．加二抗（羊抗鼠IgG/Alexa Fluor 594 1: 100），用1%BSA稀释，避光室温孵育1h。
（60 r/min）13．将孵好二抗的细胞爬片用PBS洗3次，每次10min。
14．加DAPI染细胞核，储存浓度为1mg/ml，应将DAPI完全混匀，可用手弹几下，一般稀释比例为1:1000（用PBS稀释），避光室温反应10min。
15．将DAPI染好的细胞爬片用PBS洗3次，每次10min。
16．中性树胶封片，荧光显微镜观察，200×镜下取5个视野，计数Brdu阳性细胞和蓝染的细胞核数目，然后进行统计分析。
试剂配制：a. Brdu的溶解：室温下，将250mg粉末溶于2.5ml的DMSO中，储存浓度为100mg/ml分装，每管120ul，-20℃保存。
流式细胞仪检测细胞增殖方法有哪些
流式细胞仪检测细胞增殖方法有哪些？在生物学和医学研究中，细胞增殖是一个关键过程，对于理解生命活动的基本规律以及疾病的发病机理具有重要意义。
随着科技的发展，流式细胞仪作为一种高效、灵敏的分析工具，广泛应用于细胞增殖的检测。
流式细胞仪通过快速分析单个细胞，可以对细胞周期、细胞增殖活性、细胞凋亡等多个方面进行研究。
本文将探讨流式细胞仪在检测细胞增殖方面的主要方法，包括但不限于溴脱氧尿苷（BrdU）掺入法、细胞周期蛋白检测法以及细胞大小分析法等，为读者提供全面的技术应用概览。
流式细胞仪检测细胞增殖方法：1、3H（氚离子）掺入法原理：是在细胞DNA合成时，用3H脱氧胸腺嘧啶核苷代替普通的脱氧胸腺嘧啶核苷掺入新合成的DNA中，增殖的细胞因为掺入3H而具有放射性，通过定量检测样品细胞的放射性大小而反映细胞的增值活性缺点：1）使用的是具有放射性的同位素，操作较为复杂，同时需要采取放射性保护措施2）低比例高活跃增殖和高比例低活跃增殖可能得到的是相同的结果，用此方法无法进行鉴别3）此方法无法进一步得到具有活性的增值细胞用于下一步的研究4）此方法时间较短，无法检测加入前细胞的增殖情况，而且检测到放射性只能说明细胞DNA合成，而不能提供合成DNA的细胞是否进入增殖阶段的信息2、相对计数法原理：将对照组和各实验组控制在相同条件下直接计数然后比较计数结果得到增殖结论注意点：对照组与实验组每种细胞所加浓度必须相同，每组至少设置3个复孔，这样每个孔可以得到1个细胞数，将3个复孔取平均值后就是这个组的结果。
如果同时需要得到每孔目标细胞增殖后的绝对参数，在每孔细胞中加入1*105PE标记的人工微球作为内参收集各组的细胞于EP管中，注意必须尽量将各组的所有细胞都收集起来。
标记需要计数细胞的标志表型的荧光素偶联抗体，4℃静置30minPBS洗涤一次，洗去游离的抗体3、示踪染料标记法示踪染料与细胞结合的方式：1）能够与细胞内的蛋白质上的氨基发生非特异性的共价结合2）能够非特异性地嵌入细胞膜的脂质双分子层中与细胞发生非共价性结合原理：示踪染料的荧光信号都很强，当细胞分裂时，母细胞内的染料会被平均分配到子细胞中，细胞荧光信号会被减弱一半，所以通过检测减弱的、发射示踪染料荧光信号的细胞比例就可以判断细胞增殖的强弱。
2023-2024学年山东省潍坊安丘市等三区县高三10月过程性测试生物试题
2023-2024学年山东省潍坊安丘市等三区县高三10月过程性测试生物试题1.北京烤鸭外观饱满，皮层酥脆，外焦里嫩，与育肥时的饲料密切相关。
将甜面酱抹在小麦粉制作的荷叶饼上，夹几片烤鸭片，再放上几根葱条，最后卷起食用。
下列有关叙述错误的是（）A．可饲喂玉米、谷类和菜叶保障北京鸭育肥B．一张卷饼鸭肉中含量最多的糖类和脂质分别是多糖和脂肪C．烤鸭的加工过程会使蛋白质变性，但不影响蛋白质的营养价值D．将鸭的皮下脂肪经苏丹Ⅲ染液染色，可肉眼直接观察到脂肪颗粒被染成橘黄色2.科学家发现，细胞合成分泌蛋白时，游离核糖体最初合成一段氨基酸序列作为信号序列（SP），被位于细胞质基质中的信号识别颗粒（SRP）识别，引导核糖体附着于内质网上，继续蛋白质的合成。
当囊泡包裹的蛋白质离开内质网时，检测发现均不含SP，且此时的蛋白质一般无活性。
下列推测错误的是（）A．控制分泌蛋白合成的基因都有控制SP合成的序列B．内质网腔中可能含有催化肽键水解的酶C．内质网膜表面存在着识别SRP-SP-核糖体复合物的受体D．经胰岛B细胞的内质网加工后的蛋白质具有降血糖作用3.下列有关原核生物细胞与真核生物细胞的叙述错误的是（）A．基因的转录和翻译，在原核细胞中同时进行，在真核细胞中可以分开进行B．有的原核生物细胞中含有有氧呼吸酶C．原核生物细胞通过无丝分裂方式增殖D．原核生物和真核生物中均可发生基因重组4.磷酸肌酸在肌酸激酶催化下，将磷酸基团转移到ADP分子合成ATP，从而使细胞中的ATP含量维持在正常水平。
研究者对蛙的肌肉组织短暂电刺激，检测对照组和实验组（肌肉组织用肌酸激酶阻断剂处理）肌肉收缩前后ATP和ADP的含量，结果如下表。
下列说法错误的是（）对照组/（）实验组/（）收缩后收缩前B．肌肉组织中的ATP含量少，转化快C．在肌酸激酶的作用下，磷酸肌酸和ADP可生成ATPD．ATP和磷酸肌酸均可作为细胞代谢的能量物质5.研究发现，植物细胞膜上存在①②两种蛋白，①将H+运出细胞，②将H+和蔗糖分子同时运入细胞，过程如图。
免疫细胞检测技术
免疫细胞是泛指所有参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞及其前身，包括造血干细胞、淋巴细胞、单核巨噬细胞及其他抗原提呈细胞、粒细胞、红细胞、肥大细胞等。
各种免疫细胞的分离、纯化及其功能测定对于了解其在免疫应答中的作用及相互关系有着重要意义。
免疫细胞的检测即是用体外试验对机体各种参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞进行分离、纯化鉴定、计数和功能测定，藉以了解机体的免疫状态，并对某些临床疾病的诊断、疗效观察及预后判断等也有一定意义。
本综述将就免疫细胞的分离、免疫细胞功能的检测和细胞凋亡的检测三个方面主要方法的基本原理作简要介绍。
一．免疫细胞的分离免疫细胞包括多种细胞成分，例如淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、红细胞等。
它们具有不同的形态和功能特性，这不仅是我们认识各种免疫细胞的依据，也是分离各种免疫细胞的基础。
细胞的形态特征反映在其物理性质上，如各种细胞的大小、比重、表面电荷和粘附能力等存在差异;而细胞的功能特征往往由该细胞膜表面的蛋白质(表面标记)来体现，例如各种免疫细胞执行特定功能必须表达的受体等。
根据不同形态和功能特征，可以将各种免疫细胞从混合细胞群体中分离出来。
免疫细胞分离原理基本上可以归纳为基于细胞物理性状的分离方法和基于细胞表面标记的分离方法。
基于细胞物理性状的分离方法(一)根据各种细胞比重的差异1.自然沉降法2.密度梯度离心法人外周血单个核细胞(PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形状和比重与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞比重较大，为1.00左右，而淋巴细胞和单个核细胞比重为 1.075左右。
利用密度在l.077万±0.001之间近于等渗的Ficoll-Hypque混合溶液(称为淋巴细胞分层液)作密度梯度离心时，各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集。
血浆和血小板由于密度较低，故悬浮于分层被的上部;红细胞与粒细胞由于密度较大，故沉于分层液的底部;PBMC密度稍低于分层液，故位于分层被界面上，这样就可获得PBMC o（如图1-1所示）图1-1 淋巴细胞分离示意图3.改变细胞密度法巨噬细胞能够吞噬铁粉，增加其比重，通过密度梯度离心或磁场将其分离;T 细胞能够与绵羊红细胞形成花环，形成的花环复合物比重大，借助密度梯度离心将T细胞分离。
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Brdu标记-Brdu作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物，像胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA中
Brdu标记-Brdu作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物，像胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA中。
当细胞处于DNA合成期而同时又有Brdu存在时，就会有Brdu掺入新合成的DNA中，只要细胞不消亡，这种Brdu就在胞核的DNA
中长期存留。
学术术语来源---
骨髓间充质干细胞移植大鼠梗死心肌后的存活状况
文章亮点：
骨髓间充质干细胞移植梗死心肌后对心功能的改善，已得到大多数研究的共识，但其具体机制尚不清楚。
实验动态观察骨髓间充质干细胞移植梗死心肌后的存活状况，以及随移植时间延长其凋亡速度，间接了解干细胞移植梗死心肌后发挥作用的时期，为进一步研究其作用机制提供依据。
关键词：
干细胞；移植；急性心肌梗死；骨髓间充质干细胞；心肌梗死模型；细胞移植主题词：
骨髓；间质干细胞移植；心肌梗塞；模型，动物
摘要
背景：初步研究结果证实骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死安全、有效，但是其确切的治疗机制尚不清楚。
有关移植后干细胞的存活状况及发挥作用时机的研究较少。
目的：观察大鼠骨髓间充质干细胞移植梗死心肌后的存活状况。
方法：密度梯度离心法培养骨髓间充质干细胞。
制作大鼠心肌梗死模型80只，于心肌梗死后14 d，在心肌梗死周边区分4个点用微量注射器移植骨髓间充质干细胞，取移植干细胞后仍存活良好的70只大鼠，分别于移植后第3，5，7，10，14，20，28天检测骨髓间充质干细胞的存活情况。
结果与结论：移植后第3，5，7，10，14，20，28天免疫组化染色高倍视野(×400)内Brdu标记阳性骨髓间充质干细胞数分别为(36±12)，(33±13)，(28±9)，(15±5)，(5±3)，0，0个。
移植后骨髓间充质干细胞数整体呈下降趋势，骨髓间充质干细胞数与移植天数呈负相关(r=-0.47，P < 0.01)，其中移植1周后下降明显，至第20天已无存活骨髓间充质干细胞。
结果可见骨髓间充质干细胞移植大鼠梗死心肌后不能长期存活且不会转化为心肌组织。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程。