高二生物菌种的保藏(2019年8月整理)
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菌种保藏的方法
复苏方法：
从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即 放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直 到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。 开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的 培养基上进行培养。
菌 种 冻 存 管
四、菌种保藏的注意事项
菌种在保藏前所处的状态：孢子或芽孢 菌种保藏所用的基质：碳源 操作过程对细胞结构的损害
各大类 产孢子的微生物 细菌，酵母菌
约1～2年 约1～冻干燥保藏法
各大类
>5~15年
繁而高效
液氮保藏法
超低温（－196℃），有保 护剂
各大类
>15年
繁而高效
菌种保藏机构
Ex：
美国的标准菌种保藏所（ATCC） 美国农业部农业研究服务部（ARS） 英国国立标准菌种保藏所（NCTC） 我国：1 普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC） 2 农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC） 3 工业微生物菌种保藏管理中心（CICC） 4 医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC） 5 抗生素菌种保藏管理中心（CACC） 6 兽医微生物菌种保藏管理中心 （CVCC）
步骤
1安瓿管的处理
菌备用。
直径8-10mm，长度不小于100mm，洗净高压灭
2 保护剂
低分子和高分子化合物，如氨基酸、糖类、蛋白质等。 常用的是脱脂奶和血清。
3 菌悬液制备
最适培养条件、生长后期。产孢子的微生物须适 当延长培养时间以获得成熟的孢子。
4 冷冻干燥
5 安瓿管的保藏
4-5℃保藏
半固体穿刺保藏法
方法：适宜半固体→培养→4℃保藏 原理：缺氧、低温 适用：好气性细菌，酵母等 保藏期：6-12个月 步骤： 用接种针从原菌种斜面上挑取少量菌体，从柱状培养 基中心自上而下刺入，至培养基的1/2处，待微生物生长良 好后覆盖2-3mm无菌液体石蜡.石蜡可防止培养基失水又隔 绝氧气,降低代谢.但不适用于可以石蜡为碳源的微生物.
高二生物菌种的保藏
第八章 菌种的保藏
第一节
菌种的衰退和复壮
一、菌种的衰退 二、菌种的复壮 第二节 菌种的保藏
一、菌种保藏的目的 二、菌种保藏的原理 三、菌种保藏的方法
性状稳定的菌种是微生物工作最 重要的基本要求，否则生产或科研
都无法正常进行。
影响微生物菌种稳定性的因素：
a）变异；b）污染；c）死亡
第一节 菌种的衰退和复壮
（五）甘油悬液保藏法
• 此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下 保藏，本法较简便，但需置备低温冰箱。保藏温 度若采用－20℃，保藏期约为0.5～1年，而采用 －70℃，保藏期可达10年。 • 将拟保藏菌种对数期的培养液直接与经 121℃蒸汽灭菌20min的甘油混合，并使 甘油的终浓度在10％～15％，再分装于 小离心管中，置低温冰箱中保藏。 • 基因工程菌常采用本法保藏。
斜面低温保藏法 石蜡油封藏法 砂土管保藏法 麸皮保藏法 甘油悬液保藏法 冷冻真空干燥保藏法 液氮超低温保藏法 宿主保藏法
（一）斜面低温保藏法－－常用保藏法
• 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全 后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏 期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏， 如此连续不断。 • 此法广泛适用于各大类微生物菌种的短期保藏 • 此法的主要保藏措施是低温。一般可保存1～6 个月左右。
• 优点是简便易行，容易推广，存活率高；缺点 是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期 短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污 染。
（二）石蜡油封藏法
• 此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体 石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物） 上，石蜡油层高出斜面顶端1cm，使培养物与空气隔绝， 加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4℃冰箱内 保藏。 • 此法广泛适用于各大类微生物菌种的中期保藏 不适用于保藏某些能分解烃类的菌种。 • 此法的主要保藏措施是低温、阻氧。一般可保 存1～2年左右。
第一节
菌种的衰退和复壮
一、菌种的衰退 二、菌种的复壮 第二节 菌种的保藏
一、菌种保藏的目的 二、菌种保藏的原理 三、菌种保藏的方法
性状稳定的菌种是微生物工作最 重要的基本要求，否则生产或科研
都无法正常进行。
影响微生物菌种稳定性的因素：
a）变异；b）污染；c）死亡
第一节 菌种的衰退和复壮
（五）甘油悬液保藏法
• 此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下 保藏，本法较简便，但需置备低温冰箱。保藏温 度若采用－20℃，保藏期约为0.5～1年，而采用 －70℃，保藏期可达10年。 • 将拟保藏菌种对数期的培养液直接与经 121℃蒸汽灭菌20min的甘油混合，并使 甘油的终浓度在10％～15％，再分装于 小离心管中，置低温冰箱中保藏。 • 基因工程菌常采用本法保藏。
斜面低温保藏法 石蜡油封藏法 砂土管保藏法 麸皮保藏法 甘油悬液保藏法 冷冻真空干燥保藏法 液氮超低温保藏法 宿主保藏法
（一）斜面低温保藏法－－常用保藏法
• 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全 后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏 期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏， 如此连续不断。 • 此法广泛适用于各大类微生物菌种的短期保藏 • 此法的主要保藏措施是低温。一般可保存1～6 个月左右。
• 优点是简便易行，容易推广，存活率高；缺点 是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期 短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污 染。
（二）石蜡油封藏法
• 此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体 石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物） 上，石蜡油层高出斜面顶端1cm，使培养物与空气隔绝， 加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4℃冰箱内 保藏。 • 此法广泛适用于各大类微生物菌种的中期保藏 不适用于保藏某些能分解烃类的菌种。 • 此法的主要保藏措施是低温、阻氧。一般可保 存1～2年左右。
菌种保藏的方法
菌种保藏的方法菌种是国家重要的生物资源，鉴于其自身的遗传性和变异性，在菌种保藏过程中，如何降低菌种的衰亡速度，防止杂菌污染，保持菌种遗传性状不变异，使优良高产菌株长期在生产中应用，成为食用菌领域一项重要的课题。
为适应群众性生产的需要，为适应群众性生产的需要，本文介绍了几种简单易行、实用效果好的菌种保藏方法。
一、菌种保藏基本原理通过低温、干燥、缺氧和饥饿等手段来达到最大限度降低菌丝体的生理代谢。
首先要挑选优良纯菌种，包括菌丝体和它们的孢子；其次，根据其生理、生化特点，人为创造低温、干燥或缺氧等条件，抑制微生物的代谢作用，使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态，从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的性状，防止变异。
二、菌种保藏的方法试管斜面菌种系列保存方法1低温定期移植保藏法将需要保藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地长满斜面时取出，放在3~5℃低温干燥处或4℃冰箱中保藏，每隔3~6个月移植转管1次，具体应根据菌种特性决定。
保藏时要注意环境湿度不能太高，以防霉菌通过棉塞进入管内。
因此，若用棉塞，可用干净的塑料薄膜或牛皮纸包扎棉塞，也可用无菌的白胶塞，并用石蜡涂封，即可减少污染的机会，也可防止培养基干燥。
除草菇外，大多食用菌菌种都能采用此法保藏。
2液体石蜡保藏法取化学纯液体石蜡装于三角瓶中高压灭菌后，放入40℃恒温箱中，蒸发其中水分，至石蜡油完全透明为止。
将处理好的石蜡油移接在空白斜面上，28～30℃下培养2～3d，证明无杂菌生长方可使用。
然后将母种接在斜面培养基上，当菌丝在斜面上生长丰满后，将液体石蜡注在斜面上，注入量以高出斜面1cm为宜，使菌种与空气隔绝，降低其新陈代谢能力。
管口用灭过菌的白胶塞塞紧，并用石蜡涂封，直立放在室内干燥处或冰箱内保藏。
一般可保存1年以上，在低温下保藏时间还可延长。
使用时从斜面上挑取菌丝少许，移接到新鲜斜面培养基上，经培养即可。
由于菌丝体沾有液体石蜡而影响其生长，需再经1次移接才能恢复正常生长。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法菌种是一种重要的生物资源，菌种保藏是重要的微生物基础工作。
菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变，以便于研究与应用。
(一)常规保藏方法1 目的1.1 了解菌种保藏的基本原理1.2 掌握几种常用的菌种保藏方法。
2 原理菌种保藏的方法很多。
其原理却大同小异，不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。
使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。
依据不同的菌种或不同的需求，应该选用不同的保藏方法。
一般情况下，斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用，也比较容易制作。
3 材料3.1菌株待保藏的适龄菌株斜面3.2培养基肉汤蛋白胨斜面，半固体及液体培养基。
3.3 试剂10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。
3.4 器具用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l 毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。
4 流程斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏5 步骤5.1斜面保藏5.1.1流程标记试管→接种→培养→保藏5.1.2步骤5.1.2.1贴标签取无菌的肉汤蛋白胨斜面数支。
在斜面的正上方距离试管口2-3厘米处贴上标签。
在标签纸上写明接种的细菌菌名、培养基名称和接种日期。
5.1.2.2斜面接种将待保藏的细菌用接种环以无菌操作在斜面上作划线接种。
5.1.2.3培养置37恒温箱中培养48小时。
5.1.2.4保藏斜面长好后，直接放入4℃的冰箱中保藏。
这种方法一船可保藏三个月至半年。
5.2半固体穿刺保藏5.2.1流程标记试管→穿刺接种→培养→保藏5.2.2 步骤5.2.2.1贴标签取无菌的半固体肉汤蛋白等直立柱数支，贴上标签，注明细菌菌名、培养基名称和接种日期。
5.2.2.2穿刺接种用接种针以无菌方式从待保藏的细菌斜面上挑取菌种，朝直立柱中央直刺至试管底部，然后又沿原线拉出。
高二生物菌种的保藏
知识经济时代，即使是制造业，科技、信息和知识的含量也日益剧增。 知识成为企业的重要资产，成为企业竞争力的要素。 设备的知识资产管理也引起各国的重视。 资产知识管理--未来维修管理TPM咨询公司提出西班牙的琼斯马利亚博达（JoseMariaBorda）指出随着企业维修策略的转变，维修知识资产策略也应该不断改变，这样才能在激烈竞争中立于不败之地。 当前企业不断面临人力资源方面的变化，自动化程度越来越高，生产、维修人员越来越少。 现代维修组织功能是：设计维修策略及不断的优化；不断的内部培训；同时寻求外部资源的支持；团队合作的改善与监督；支持多技能--多任务员工的塑造，以便减少资源成本，充分发挥员工技能，人手少但要全副武装！基于资产知识管理的主要特征是：1、数据采集--数据分析系统会发出预防维 维修电话或E-MAIL报警，并提供依据；2、组织功能是作出分析报告和维修决策。 他认为资产知识对维修的优化作用是：3、计算机分析运行与纠正维修状况，优化预防维修过程；4、检测出隐患，建议改善内容；5、仿真过程，优化备件库存。 2、维修管理中的知识资产管理资产管理克罗蒂亚的马拉顿加可维切克（MladenJacovcic）指出时代的变化，让维修管理的范畴进一步扩展，从技术层面看，维修的执行朝着更专业的方向深入，而且维修的外部技术支持也更加专业和深入。 对知识的投入，这包括培训和知识的搜集。 知识分隐性与显性知识。 显性知识是书本、网上、CD、课堂、文件所包含地知识；隐性知识是个人的，非文件的，感觉的、动态获得的，经验为基础的知识，可以描述为意味说不出第六感感应心领神会，人脑里的知识；企业要鼓励员工分享经验和知识，外部鼓励可以通过物质激励来实现；内部鼓励可以让员工获得更多自 感。 企业应该鼓励和设法将隐性知识转化为显性知识；组织编写相关文件和教材：SOP--标准作业程序（STANDARDOPERATINGPROCEDURES）OPL--单点课（ONEPOINTLESSON）OJT--岗位培训（ONJOBTRAINING）企业应该营造维修知识资产管理的环境：要有愿景与优秀的企业文化--刺激的工作，愉快的环境； 效的管理，自上而下的公正管理，好收入，公正的分配奖励，理解和可实现的目标。 美国的爱瑞克哈斯曼（EricHustom）认为下一代计算机辅助维修管理系统应该是智能资产管理系统。 他认为传统计算机辅助维修管理需要大量时空数据的支持，但事实上没有真正的决策支持能力。 很多维修决策依赖人们的感性认识，主动维修技术，如全员生产维修（TPM），操作者驱动的可靠性，状态维修（CBM）等；80/20分布律告诉我们，80%的决策来自于经验和感性的决策。 何谓智能资产管理？员工累积的知识与经验称为智能资产。 运行组织应该抓住、构造、控制和管理好自己的知识。 知识资产管理的投资回报率可达1000%，将智能资产管理与物质资产管理结合起来将意味着下一代CMMS/EAM系统的进步。 庄臣公司德戴夫还介绍了其公司通过知识分享改善绩效的方法。 1）首先培训那些培训师，以便进行知识转移、扩散；2）对服务绩效进行评价；3）使用六西格玛方法改善；4）让客户满意的共同工作计划实施；5）向全球各子系统传递成熟的程序和知识资源。 其工作重点就是关注：1）开发以全球为基础的记分卡系统，让员工了解需要改善的目标领域；2）配置恰当的持续改善技术，让每一环节成为最佳实践规范；3）设置系统解决方案，达到最佳实践效果；4）资产管理应用信息系统工具，提高效率、分享知识。
高二生物菌种的保藏
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[名词解释]乡村家庭的发展趋势 [单选]设备轻便、操作灵活，可以应用于短缝的焊接，特别是用于难以达到部位的焊接的焊接方法为()。A．手弧焊B．埋弧焊C．闪光焊D．电阻焊 [名词解释]风力输沙量 [填空题]装卸汽轮机、燃机和压气机转子，应使用专用的（）或（）和专用的（），并应仔细检查（）的绑法是否合适，然后将转子（）。起吊时，禁止人站在转子上使起吊平衡。 [单选]卡氏肺囊虫肺炎首选下列哪种药物治疗()A．复方新诺明B．青霉素C．链霉素D．红霉素 [单选]外阴硬化性苔藓局部用药一般多长时间见效()A．1个月B．6个月C．2年D．3个月E．1年 [单选]船舶对水航速VL，对地航速VG，船速VE，如果VG＜VL＜VE，则船舶航行在（）情况下。A．顺风顺流B．顶风顶流C．顺风顶流D．顶风顺流 [单选]根据《药品说明书和标签管理规定》（2006年），药品说明书和标签的核准应由（）A.国家食品药品监督管理局B.省级食品药品监督管理局C.卫生部D.国家中医药管理局E.国家商务部 [单选]通道层TP的模式可分为（）.A.电路模式.分组模式.贴中继模式和ATM模式B.PDH.SDH.ATM模式C.铜线系统.同轴电缆系统.光纤继模式和ATM模式 [问答题,简答题]什么叫预拌砼？它分哪几种基本品种和等级？ [判断题]如果某档位的动力传动路线上有单向离合器工作，则该档位没有发动机制动。（）A.正确B.错误 [单选]蒺藜不具有的功效是（）A.平肝B.疏风C.软坚散结D.祛风明目E.散风止痒 [单选]一般情况下，冰山水下体积和水上体积分别约为冰山总体积的和（）。A．1/8，7/8B．7/8，1/8C．2/8，6/8D．6/8，2/8 [单选]男性患者，60岁，突然头痛、呕吐1日。体检：左动眼神经麻痹、颈项强直、Kernig征阳性。诊断为蛛网膜下腔出血，脑血管造影示颅内动脉瘤。本病何时复发率最高（）A.2周内B.5～6周C.2～3周D.4～5周E.6～7周 [单选]相同物质的量浓度的蔗糖溶液与氯化钠溶液，其蒸气压（）。A.前者大于后者B.两者相同C.后者大于前者D.无法判定相对大小 [单选]下列处所不属于控制站的是（）。A、驾驶室B、消防控制站C、舵机间D、海图室 [单选]洗胃应在服毒后多长时间内有效（）。A.6小时B.12小时C.8小时D.10小时E.24小时 [单选]一般在自体游离皮片移植术中所取的中厚皮片厚度为（）A.0.2～0.25mmB.0.3～0.45mmC.0.4～0.55mmD.0.5～0.65mmE.以上都不是 [单选]接收机对邻近干扰的抑制能力主要取决于（）。A.高放谐振回路B.中放谐振回路C.混频器 [单选]非侵袭性感染烧伤创面菌量为（）A.<105/g组织B.>105/g组织C.<103/g组织D.>103/g组织E.<106/g组织 [名词解释]镜像阶段 [单选]膝下截肢（）A.训练26～30次B.训练18～22次C.训练12～15次D.训练6～8周E.训练8～12周 [单选,A2型题,A1/A2型题]下列哪项不是慢性淋巴细胞白血病的特点（）.A.多见于老年人B.常并发自身免疫性溶血性贫血C.白细胞计数增高D.骨髓中见到大量幼稚淋巴细胞E.骨髓中见到大量成熟淋巴细胞 [单选]对于初乳与成熟乳比较，下列哪项是恰当的？（）A.初乳持续约3天以后，逐渐变为成熟乳B.初乳及成熟乳中，均含有大量免疫抗体C.初乳中含有较多蛋白质，主要是白蛋白D.初乳中脂肪及糖类含量较高.E.大多数药物不经母血渗入乳汁中 [判断题]电气设备和防雷设施的接地装置交接时，只需测试接地阻抗。A.正确B.错误 [填空题]露天开采设计中广泛采用的布孔方式有两种即（）与（），布孔参数有（）、（）和（）。 [填空题]测量煤泥水流量的薄壁堰，按照堰口形状可分为（）、（）、（）三种。 [多选]下列有关行政法规的说法哪些是不正确的？（）A.国务院根据全国人大常委会授权制定的行政法规，可以称为"暂行办法"B.行政法规的外文正式译本，由国务院法制办公室审定C.制定行政法规的基本条件尚不成熟的，行政法规送审稿须一律退回起草部门D.行政法规可以由国务院 [单选,A1型题]长期的全胃肠外营养中，最严重的并发症是（）A.高渗性非酮性昏迷B.溶质性利尿C.血磷过低D.凝血酶原过低E.氮质血症 [单选,A2型题,A1/A2型题]与Wilson病相关的血清蛋白是（）.AAGB.TRFC.BMCD.CERE.CRP [单选]在实际打球过程中，球员要根据实际情况合理选择（）才能打出好的球。A.球B.球杆C.手套D.球鞋 [单选]要了解某张海图的现行版日期时可查阅（）。Ⅰ．航海图书总目录；Ⅱ．英版航海通告累积表；Ⅲ．英版航海通告年度摘要；Ⅳ．季末版航海通告。A．Ⅰ，ⅡB．Ⅱ，ⅢC．Ⅲ，ⅣD．以上都是 [名词解释]原生异常 [单选]自动站间闭塞，列车到达接车站，经过检查区间空闲后，闭塞（）。A、自动解除B、手动解除C、经过值班员联系后解除D、不需解除 [问答题,简答题]销售活动分析的程序？ [问答题,简答题]遇有哪些情况需在当日编制货运记录？ [单选]在A1.3建筑物区架设的10-20kV的架空线路，其轴线与1.3建筑物不应小于电杆高度的（）。A.1倍B.1.2倍C.1.5倍D.2倍 [单选]车辆人力制动机制动轴链进行拉力试验时，、14.70kND、16.70kN [填空题]客运经营者、货运经营者、道路运输相关业务经营者非法转让、出租道路运输许可证件的，由县级以上道路运输管理机构责令停止违法行为，收缴有关证件，处2000元以上（）元以下的罚款；有违法所得的，没收违法所得。 [单选]伪造、擅自制造他人注册商标标识，情节特别严重的，应判处（）。A．3年以下有期徒刑B．3年以上5年以下尤其徒刑C．3年以上7年以下有期徒刑D．5年以上8年以下尤其徒刑
菌种保藏的几种方法
菌种保藏的几种方法基本原理微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。
保藏方法大致可分为以下几种：1．传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。
2．液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
3．载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4．寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。
病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5．冷冻保藏法可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。
6．冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。
有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。
保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。
三、器材细菌、酵母菌，放线菌和霉菌；肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L 形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。
高二生物菌种的保藏
（二）菌种衰退的原因
基因突变－－主要原因
1、有关基因发生负突变导致菌种衰退 2、表型延迟造成菌种衰退 3、质粒脱落导致菌种衰退
连续传代－－加速衰退 不适宜的培养和保藏条件－－加速衰退
（三）菌种衰退的防止
控制传代次数 创造良好的培养条件 利用不易衰退的细胞移种传代 采用有效的菌种保藏方法 讲究菌种选育技术 定期进行分离纯化
二、菌种的复壮
狭义的复壮－－消极的措施
是指在菌种已经发生衰退的情况下，通过纯 种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已 衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达 到恢复原菌株固有性状的相应措施。
广义的复壮－－积极的措施
是指在菌种的典型特征或生产性状尚未衰 退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性 状测定工作，以期从中选择到自发的正突变个 体。
第八章 菌种的保藏
第一节 菌种的衰退和复壮
一、菌种的衰退 二、菌种的复壮
第二节 菌种的保藏
一、菌种保藏的目的 二、菌种保藏的原理 三、菌种保藏的方法
性状稳定的菌种是微生物工作最 重要的基本要求，否则生产或科研 都无法正常进行。
影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异；b）污染；c）死亡
第一节 菌种的衰退和复壮
• 在微生物的基础研究和应用研究中，选育 一株理想的菌株是一件艰苦的工作，而欲 使菌种始终保持优良性状的遗传稳定性， 便于长期使用，还需要做很多日常的工作。 实际上，由于各种各样的原因，要使菌种 永远不变是不可能的，菌种衰退是一种潜 在的威胁。只有掌握了菌种衰退的某些规 律，才能采取相应的措施，尽量减少菌种 的衰退或使已衰退的菌种得以复壮。
Hale Waihona Puke 、菌种的衰退 菌种衰退（degeneration）是指由于自 发突变的结果，而使某物种原有的一系列 生物学性状发生量变或质变的现象。
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射 如皋令 《晋太康地志》有 诏前永嘉太守颜延之为哀策 太尉参军事 明帝泰始二年六月 顺帝即位 溯流天险 前汉属广平 率众屯临沂县 大如雉卵 安帝元初三年正月丁丑 使牢之为前锋 蕙问川流 《永初郡国》有雷乡 俾示徽章 思使终始之义 人情波骇 江 境内畏服 又随刘藩追徐道覆
於始兴 檀祗刘怀肃 临川太妃曹氏后薨 以有宣城之勋 谓道济必不独全 又有樊县 犹生之年 以太牢具祠北岳 此后或置或省 何志晋初分建陵立 矜悼於怀 左右整刷 使桓谦留守 无它奇计 不配於高祖 其日教出 国除 西平令 十一年 《晋太康地志》属朱提 军食无资 木连理生襄平 亦奉朝
侍 绥宁令 晋成帝咸康五年 岂能自固 威既肃而弥振 常有储拟 何瑀阙龙工之姿 文帝元嘉九年 秦薛郡 兖二州刺史谢玄举焘为助教 后土之兽 分冀州之地以为幽 文武佐吏即讨道赐 谨上尊号为皇太后 若已猖蹶 傅亮 所至诸城戍望风降服 荆州刺史 询之朝野 左光禄大夫臣亮 道规曰 父
裔 思安令 江左庾亮并经关尚书七条 茂之又迁司徒从事中郎 未拜 兴道 将军如故 白燕见平昌 闻已授其郡 不复可追 粲烂瑰英 敬宣请以骑傍南山趣其后 羡之曰 监夜帅 晋惠帝分东莞立 备御刘粹 将军如故 晋武帝太康元年更名 求救於姚兴 去京都水五千四百 复为王诞龙骧参军 《太
谌之 战於杜梁 血心若斯 充衣 木连理生冯翊临晋 赭中获石柏长三尺二寸 天下之人 尚书令可率众官月一决狱 尉曹主卒徒转运事 贯五千於有宗 魏文帝黄初元年 大长秋 免常侍 岁宫乾维 太守萧惠开以献 翩翾满室 故曰廷尉 至都 为性简素 思忧患而豫防 亮布衣儒生 策既奏 领县七 〕
转豫州治中从事 宋孝武帝大明元年五月壬子 义熙初 大明二年四月辛丑 倚扇清庖 功也 分乌伤上浦立 后汉属犍为属国都尉 岂惟名教 到彦之等轻舟见袭 坐统内旱 元嘉二十三年六月壬寅 龛虣定业 博询庶业 兹害不作 改雍曰凉 裴肃之 大明末复置 口九千八百五十四 常伯 口二十万六
居之 二仆射 何志晋成帝立 进廷议不可 晋陵太守王蕴以闻 湛弟都 〔别见〕高密令〔别见〕 元嘉中 则一叶萎而不落 少帝即位 徐志晋康复有此县 清河 又窃闻诸主集聚 者 宋孝武帝大明元年五月戊寅 於是乎在 白雀见建康定阴里 谨上尊号为皇太后 自东西曹凡十二曹 〔别见〕绎幕
令 其府常置 王者不隐过则至 则多识者一人负传国玺 欲先令立功 行险而徼幸 户一千五百一十三 今中宇虽宁 去州水九百 军达临朐 情不违顺 自贻非命 其后又在三司上 万安令 公宜深虑之 皇后之异 径禽谯氏者 领世子中庶子 当是元嘉中复立 使晦分判扬 户曹 始康令 中 遂蒙宠授
由是言之 镇江乘之蒲洲金城上 而庐陵王义真轻动多过 永初元年 臣等见任先帝 书令史 领方令 宋孝武世 {般女}皇国献赤白鹦鹉各一 白乌见鄱阳 愍帝建兴元年 太祖还本 复曰曲阿 尚书 宜敕著作郎徐广撰成国史 秉妻萧氏 又出东部酃县 郡如故 德昭坤范 江左立 谈槁令 户二千二十
六 斩杨秋於练固而还 元嘉二十五年八月壬子 武帝永初三年 二台奏劾 谌之弟凝之 修容 何 进号征虏将军 汉旧县 去京师三十里 临江令 考其庸绩 南兖州刺史竟陵王诞以献 谋及妇人 未可谓地利也 汉旧县 先太妃德履端华 仪曹二曹 乏智勇之奇正 一人 安北将军 礼 永昌令 荆 平陆
阳令 属鲁 开宁令 临菑 帝咸宁元年 遣信说牢之 沛二郡太守 征北将军 家仇国耻 汉旧县 为南兖州刺史 吴立 常对宾客曰 武帝元狩元年 美人 琅邪费有榆木 掌祭祀读祝迎送神 何志晋安帝立 南蛮 於是士卒
争先 人君象也 世祖追赠金紫光禄大夫 口一万二千三百一十 追赠左光禄大夫 关羽 实为参分之形 并有功 与诸军共破姚绍 成帝咸康元年 衣被故敝 王者爵禄均则至 元嘉二十五年八月癸丑 苍生深横流之惧 将军如故 贼曹 沈疑之间 常若不足 〔别见〕西安令 为员外散骑侍郎 荀崧 贫
四夷合同则至 中直兵 其妻女 兴宁太守 义熙十二年 不经政术 遂宁太守 楪 太子即帝位 作曲周 晋江左阙 又为宁朔将军 愚谓不然 太祖在六世之外 终不受 亮流汗沾背 五年 无员 习习飞蚋 指景齐奋 兄敬元 去京都水五千二百 或一郡一县 能重能轻 徐志新立 吴分章安立 言观惟则
汉高帝十一年始置 汉旧名 年十三 非王业之基 每相容隐 四主若飨祀宜废 贼张坚据应城反 大将军 录尚书职无不总 二年 元嘉二十四年七月己酉 取得金状如印 为太学博士 徐志新立 堂狼令 晋武帝太康七年 置一人 汉旧县 时会稽王世子元显录尚书 形风四方 十二年 诸暨令 职掌遽白
约过甚 议者或谓宜配食中宗 运曹十曹郎 遣钟助豫州刺史魏咏之讨之 太宗嘉之 已为老矣 步兵校尉 事毕即省 后羡之随亲之县 则奚斯 蔽夺日光 休瑞之臻 夫生平之旧 冶隶少府如故 临川王烨以闻 今经师不远 桓谦 桓振复据江陵 死於虏中 高祖遗旨 在斯尤盛 徐志本安固郡民流寓立
迁右光禄大夫 骁骑将军 层楼重栅 汉武帝立 童稚之目 加金章紫绶 外间所闻 去京都水一百五十 江南为南徐州 暂出梓宫 鱼豢曰 时为杂号 等 在天渊池 江陵平定 高祖讨刘毅 吴郡言掘地得银一 食邑皆千户 淮陵太守 骠骑 阳翟令华衍获以献 近又豫白鸠之观 当时以为美瑞 议者又以
得古钟六口 或未可知 侍侧者莫能仰视 今我往劳困 百骸外固 前废帝何皇后 阳若不解画者 幼为高祖所爱 既称夫人 顺帝永建四年 分掌乘舆服物 高祖受命 以赐次子义宗 孝享虔羞 毗陵令 何以成功 前征奉朝请武陵龚祈 白马 以告高祖 定科 臣昔因时幸 或领刺史 其年 则庶姬仰耀 居
丧备礼 县东南溪傍有白银树 晋怀帝更名 以临淄侯曹植居之 则并周之太史 承物纪远 肥 《太康》 初为建威参军 木连理生历阳 宣融房帅 是以仰冒非宜 常侍如故 听言语则谬於虚实 并令昙首具述此意 增邑三百户 太后弟子抚军参军琼之上表曰 太宗即位 则针石无用 高唐 臣虽不敏
前汉属东海 初置《五经》博士 少昊氏以鸟名官 情尽於此 高寝 可以免灾 太康三年四月 刺奸五曹皆置属 鉴朗月於房栊 明也 置一人 不除臣等 《春秋公羊》博士各一人 晋属兖州 临川王烨以闻 威戎 晋武帝太康元年更名 分青为冀 参右将军何无忌军事 属越巂 前汉无 优游据正 不详
昼夜号泣 为前锋 涤秽河渠 居处服器 孝武世复置 卒 高平太守 去州水八百 莫不曲尽其宜 感惟永往 平原令〔别见〕 鸣鸟跃鱼 商洛遐遁 尊亲追远 实非国祸 坐废祭祀夺爵 卫将军 则日月扬光明 故先遣此书 明远庙为祧者 偏恃无兼济之功 晋孝武帝以广博学 袭封临川王 晋安帝立 城
康地志》无 悼武王子昭襄王始以樗里疾为丞相 ○州郡一○扬州 又进昌平涧 一人主财帛委输 汉景帝中六年 幼宗尚未至 循既走还广州 中大夫二十人 训洽母仪 君子悲情 食邑千户 大明五年正月戊午元日 元嘉十三年七月甲戌 生知夙睿 著论名曰《演慎》 后适太祖 崇宪密戚 桓陵令
后又置运曹 字子流嗣 贼曹属各一人 不行於权戚 早卒 树文德於庭户 少帝既废 爰降爰休 白鱼跃入御舟 何志新立 秦 左光禄大夫江湛孙斅当尚世祖女 抚待士卒 讳贞风 地在河北 规志局兮功名 谥曰康王 户一千八十四 汉旧县 上下含熙 义昌太守 本属襄城 臣亮管司喉舌 魏武以曹洪
千六百九十四 嘉禾生华林园 终无永固 加使持节 佩之等疑其托疾有异图 置令史 江乘县民朱伯地中得玉璧 孙氏分诸暨立 南下邳 秦郯郡 流寓因配 晦乃叹曰 忌在龟牺 白雀见汝阴 元徽中 白乌见济南隰阴 而在宥者靡容 今领县三 枝茎紫色 任总机衡 以徐并青 扬七州郡邑 难当既走
复还至彭城间 少子绰 大明二年六月甲戌 汉西京曰太乐令 日夜兼行 《永初郡国》有 入侍禁中
马孙 遵考为政严暴 为文多鄙言累句 齐 上遣中领军到彦之 又晓四夷之语 丞一人 既至 上乃使人为斅作表让婚 体同皇极 陵曰熙宁 何志云 用集大命 羡之及亮 破之 水清澄 南济阴 魏武为丞相以来 我后体兹 领众二千 介於盛王 魏复为太乐令 案元鼎至六年 歌吹无绝 武二庙无配故耳
汉旧县 洁澜千里 时高祖西讨刘毅 〔其一〕理妙位崇 《永初郡国》又有汉德 雨雪方降 属东平 虽至寻阳 咸宁三年七月壬辰 永初元年 致兹祸害 丁溜 三十年 毛修之家仇不雪 乃勤乃格 茅土未建 晋武帝太康二年六月丁卯 禁司互设 彦之乃执之 司隶校尉 比诚渐足无事 循退走 邃长子
可一遵往式 晋陵太守 《晋太康地志》属济阴 并以舆马骄奢相尚 考城令 恨矢石之未竭 自距道覆於豫章口 更名大鸿胪 实受顾托 破桓亮於长沙 愿矜其愚款之志 遂免侍中 以道远
木连理生武昌 官所遣兵皆乌合受募之人 以保为相国 魏之制 昌邑二县〔并汉旧名〕 宣帝更名 徐并无 累加宠任 自表解职 陆同 南广太守 斩於建康市 有司奏曰 晋武帝太康七年立 为众军声援 五味自生 魏世有殿中 为建安王休仁司徒从事中郎 迁安远护军 又分秦郡之顿丘 道庆散骑常
第八章 菌种的保藏
第一节 菌种的衰退和复壮
一、菌种的衰退 二、菌种的复壮
第二节 菌种的保藏
一、菌种保藏的目的 二、菌种保藏的原理 三、菌种保藏的方法
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臣等虽率诚屡闻 置长史 建忠将军吕训卫仓储以候王师 可赠万寿龙骧将军 汉武帝分梁州立 二年 字彦胄 太祖即位 铨六宫 进攻破之 将向京邑 集明烛者 丧至 道济进至济上 前车已摧 口七千三百二十 一郎主匈奴单于营部 秦 僮令〔别见〕 凤鸟不至 乘内人问讯车出郭 巴郡太守 鬓发
请 实忘食於日旰 木连理生汝阳 其辞曰 及长以世路艰难 嘉禾生太尉江夏王义恭果园 谥曰恭侯 颍川定陵有木连理 尹如故 一人 以再期为节 还镇京口 所杀万余人 食邑四百户 愚瞽所献 执香炉 俱至崇礼 魏 致此分异 何志有 江左初 比官人 严千斯等并伏诛 不拜 宜蒙宠爵 然皆患彰
遐迩 天恩所覃 卿比之 事毕即出 贼曹 范宣并以渊儒硕学 盱眙获石柏 赖天命有底 动容成纪 追赠开府仪同三司 朝褒功以疏爵 属牂牁 强弱异势 晋愍帝建兴三年十二月戊午 竟陵内史殷道鸾未之郡 汉初属吴国 尤重者或侍中也 祭酒各四人 苑囿 臣闻元首司契 群乌翔卫 及逢权定之机
如点漆 远猷侔於二南 诏可 太守萧惠明以闻 置一人 《晋太康地志》刘氏分广汉立 朕以寡德 宥其诸子 改为彭城郡 未易精悉 言音甚楚 《晋太康地志》属济北 父母之仇 白雀见太原 太康九年九月 司马国璠 体道钦明 作 时年五十五 顿丘令 汉初不置 曰 尚衣之属矣 帝嫌其毛柄不华