建立急性肝损伤模型
ConA建立小鼠急性免疫性肝损伤模型研究
第20卷第1期北华大学学报(自然科学版)Vol.20No.12019年1月JOURNAL OF BEIHUA UNIVERSITY(Natural Science)Jan.2019文章编号:1009-4822(2019)01-0055-04DOI :10.11713/j.issn.1009-4822.2019.01.011Con A 建立小鼠急性免疫性肝损伤模型研究单莹莹,王佳烨,王晓丽,于佳卉,王春梅,李㊀贺,孙红霞,张成义,陈建光,孙靖辉(北华大学药学院,吉林吉林㊀132013)摘要:目的㊀探讨刀豆蛋白A(Con A)诱导急性免疫性肝损伤小鼠模型的最适剂量及最佳给药途径.方法㊀选用雄性ICR 小鼠180只,分为尾静脉注射与腹腔注射两种给药途径,每个给药途径分为6组,对照组㊁Con A 10,20,30,40和50mg /kg 剂量组,Con A 各剂量组注射相应剂量的Con A,对照组注射生理盐水,在注射8h 后,检测各组血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的水平,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织病理变化.结果㊀与对照组比较,腹腔注射Con A 各剂量组的ALT 和AST 水平无明显变化;尾静脉注射Con A 40mg /kg 剂量组的ALT 和AST 水平明显升高(P <0.05);组织学病理显示:肝损伤明显,Con A 10,20,30mg /kg 剂量组ALT 和AST 水平变化不明显,50mg /kg 剂量组死亡率较高.结论㊀小鼠尾静脉注射40mg /kg 的Con A 可成功诱导ICR 小鼠的急性肝损伤.关键词:刀豆蛋白A;免疫性肝损伤;小鼠中图分类号:R364.5文献标志码:A收稿日期:2018-05-13基金项目:吉林省科技计划项目(20170307016YY);吉林省教育科学技术研究项目(JJKH20180373KJ).作者简介:单莹莹(1994-),女,硕士研究生,主要从事抗炎免疫药理学研究,E-mail:a186********@;通信作者:孙靖辉(1979-),男,博士,副教授,主要从事抗炎免疫药理学研究,E-mail:sunjinghui2008@.Con A on Establishing Acute ImmunologicalLiver Injury Model in MiceShan Yingying,Wang Jiaye,Wang Xiaoli,Yu Jiahui,Wang Chunmei,Li He,Sun Hongxia,Zhang Chengyi,Chen Jianguang,Sun Jinghui(College of Pharmacy ,Beihua University ,Jilin 132013,China )Abstract :Objective To investigate the optimal dose and route of Con A administration on acute immunological liver injury in mice.Method 180ICR mice were divided into intraperitoneal and intravenous injection of two routes of administration.Each route was divided into control group,Con A 10,20,30,40,50mg /kg dose groups.The mice in Con A group were injected with Con A and those in control group were intraperitoneally injected with normal saline.After the administration for 8h,the levels of Aspartate aminotransferase (AST)and Alanine aminotransferase (ALT)were measured,the histomorphological liver were observed by hematoxylin and eosin (HE)stain.Results Compared with the control group,there were not significantly changed in the levels of AST and ALT by intraperitoneal injection.While in intravenous injection group,the levels of AST and ALT of mice in Con A 40mg /kg group were increased obviously and the histomorphological examination of liver indicated that there was an obvious injury,and those in Con A 10,20,30mg /kg groups were not significantly changed.The mortality rate was higher in 50mg /kg dose group.Conclusion Intravenous injection of 40mg /kg Con A can induce acute liver injury in ICR mice.Key words :Con A;immunological liver injury;mice㊀㊀肝脏疾病严重影响人类健康,目前进行肝脏疾病的治疗仍然是世界性的问题,建立与人类肝脏疾病病理机制相似的实验性肝损伤动物模型,有助于肝脏疾病发病机制的研究,因此,成功建立科学性㊁实用性㊁重现性良好的实验性肝损伤动物模型是研究肝病发生机制㊁筛选保肝药物㊁探索保肝作用的重要工具[1].近年来,国内外常用Con A建立急性免疫性肝损伤动物模型,而Con A的剂量并没有统一标准,干预时间也不一致,这对实验操作造成了一定的困难[2].为此,本研究以ICR小鼠为研究对象,观察尾静脉注射Con A建立急性肝损伤模型的适用剂量,为急性肝损伤模型建立时所用Con A的剂量选择提供参考.1㊀材料与方法1.1㊀实验动物雄性SPF级ICR小鼠(长春市亿斯实验动物技术有限公司,合格证号:SCXK(吉)2016-0003),体质量(22ʃ2)g.1.2㊀试剂与仪器刀豆蛋白A(Con A)Ⅳ型(美国Sigma公司);血清ALT,AST试剂盒(南京建成生物工程研究所);酶标仪(瑞士Tecan公司);荧光倒置显微镜(日本OLYMPUS公司).2㊀实验方法2.1㊀动物分组及给药雄性ICR小鼠180只,分为尾静脉注射与腹腔注射两种给药途径,每个给药途径分为6组:对照组㊁Con A10,20,30,40,50mg/kg剂量组,每组15只.将Con A各剂量组注射相应剂量的Con A,对照组注射同等体积的生理盐水,给药后小鼠禁食不禁水8h,取血和肝脏待测.2.2㊀血清ALT,AST的测定将血液3000r/min㊁离心10min以获得血清,按试剂盒说明书进行AST和ALT检测,运用酶标仪于520nm处测定吸光度值.2.3㊀肝组织病理切片的制备将肝组织放置在配好的福尔马林溶液中固定,石蜡包埋,切片,苏木素-伊红(H&E)染色,于显微镜下观察肝组织病理改变.2.4㊀统计学分析应用SPSS19.0软件进行统计分析,所有值均以平均值ʃ标准差(ʏxʃs)表示,以P<0.05为差异具有统计学意义,从P<0.01为差异具有显著统计学意义.3㊀结㊀㊀果3.1㊀Con A注射后各组小鼠死亡数量尾静脉注射Con A10,20,30,40mg/kg剂量组在8h内小鼠死亡0只,50mg/kg剂量组8h内小鼠死亡8只,腹腔注射Con A剂量组8h内小鼠未见死亡.3.2㊀Con A对各组小鼠血清ALT,AST含量的影响与对照组比较,在尾静脉注射Con A剂量为10,20,30mg/kg时,血清中AST与ALT的水平无明显差异,Con A剂量为40和50mg/kg时,血清中AST与ALT的水平明显升高(P<0.01).见表1.与对照组比较,腹腔注射Con A各剂量组血清中ALT 与AST水平未见明显变化.见表2.表1㊀尾静脉注射不同剂量Con A对小鼠血清中AST 及ALT含量的影响Tab.1㊀Effect of different dosages of Con A on AST and ALT levels in miceλ/(U㊃L-1)组别n AST ALT对照组1552.63ʃ12.5235.23ʃ3.41 Con A10mg/kg1558.74ʃ0.7538.15ʃ7.38 Con A20mg/kg1563.96ʃ10.7143.09ʃ10.33 Con A30mg/kg1567.22ʃ10.8945.94ʃ12.80 Con A40mg/kg15164.79ʃ18.09∗∗140.27ʃ19.35∗∗Con A50mg/kg15214.69ʃ38.39∗∗233.25ʃ30.65∗∗㊀注:与对照组比较,∗:P<0.05;∗∗:P<0.01表2㊀腹腔注射不同剂量Con A对小鼠血清中AST 及ALT含量的影响Tab.2㊀Effect of different dosages of Con A on AST and ALT levels in miceλ/(U㊃L-1)组别n AST ALT对照组1547.57ʃ8.9330.30ʃ8.71 Con A10mg/kg1551.71ʃ14.3634.31ʃ15.29 Con A20mg/kg1544.76ʃ23.0633.46ʃ16.27 Con A30mg/kg1548.32ʃ18.4335.38ʃ24.87 Con A40mg/kg1548.97ʃ27.3640.71ʃ22.70 Con A50mg/kg1552.93ʃ29.3637.96ʃ15.93㊀注:与对照组比较,∗:P<0.05;∗∗:P<0.013.3㊀Con A对各组小鼠肝脏病理组织学的影响在200倍光镜下,对照组肝组织形态大小正常,肝小叶结构清晰.与对照组比较,尾静脉注射Con A10,20,30mg/kg剂量组未见明显异常,40和50mg/kg剂量组出现大量淋巴细胞浸润,中央静脉充血,且可见大量肝细胞核破裂和凋亡小体,65北华大学学报(自然科学版)第20卷并可见片状坏死,肝小叶失去正常结构,肝索排列紊乱[3].见图1.腹腔注射Con A 50mg /kg 剂量组出现少量淋巴细胞浸润,中央静脉少量充血并可见少量肝细胞坏死,而其他各剂量组均未见异常.见图2.A:Control;B:Con A 10mg /kg;C:Con A 20mg /kg;D:Con A 30mg /kg;E:Con A 40mg /kg;F:Con A 50mg /kg;a:中央静脉;b:淋巴细胞图1尾静脉注射不同剂量Con A 对小鼠肝组织形态学的影响Fig.1Effect of different doses of Con A on morphology of liver tissue inmiceA:Control;B:Con A 10mg /kg;C:Con A 20mg /kg;D:Con A 30mg /kg;E:Con A 40mg /kg;F:Con A 50mg /kg图2腹腔注射不同剂量Con A 对小鼠肝组织形态学的影响Fig.2Effect of different doses of Con A on morphology of liver tissue in mice4㊀讨㊀㊀论Con A 作为一种植物凝集素,具有促进有丝分裂的作用,可以激活T 淋巴细胞,引起T 细胞介导的肝损伤,其损伤具有特异性和剂量依赖性[4].利用Con A 诱导小鼠特异性肝损伤模型是最近几年来新发展起来的,它的建立和应用为深入研究肝损伤发病机制以及对治疗药物筛选提供了非常方便和理想的试验动物模型[5].ALT 与AST 对肝脏疾病的检测有重要意义,ALT 存在于肝细胞胞质,AST 存在干细胞胞质与线粒体[6].当干细胞受损时,大量AST 与ALT 被释放入血,血清中的ALT 与AST 可以间接地反映肝脏受损程度,是最为经典的肝损伤检测指标[7].近年来,大量研究报道了Con A 诱导免疫性肝损伤动物模型的建立,但给药途径和注射剂量有很大差异,张炜等[8]研究发现:小鼠腹腔注射20mg /kg 的剂量能够成功建立急性肝损伤模型,马静[9]的研究结果表明:BALB /C 小鼠尾静脉注射11mg /kg 的Con A 可成功诱导肝损伤,刘悦晖等[10]研究结75第1期单莹莹,等:Con A 建立小鼠急性免疫性肝损伤模型研究果表明:尾静脉注射Con A20mg/kg能够成功诱导BALB/C小鼠的肝脏损伤.在本研究中,通过腹腔注射和静脉注射两种给药途径,结果显示:小鼠尾静脉注射40mg/kg的Con A后可见大量肝细胞凋亡坏死和明显的淋巴细胞浸润现象,并且血清中AST和ALT转氨酶水平明显升高,虽然50mg/kg的Con A也可引起明显的肝脏损伤,但死亡率较高.腹腔注射Con A的各个剂量组血清中AST和ALT水平均未出现明显变化,且组间数据离散程度较大,表明腹腔注射给药途径存在不稳定因素,不适宜进行进一步推广.于慧杰等[2]研究也证明了这一结果.因此,ICR小鼠尾静脉注射Con A40mg/kg建立急性免疫性肝损伤实验模型,具有稳定性高㊁死亡率低㊁损伤明显等特点,能够为今后急性免疫性肝损伤模型的建立提供参考.参考文献:[1]李红,于慧杰,盛国光.刀豆蛋白A诱导的C57BL/6J小鼠急性免疫性肝损伤模型的研究[J].中西医结合肝病杂志,2016,26(2):93-95,131.[2]于慧杰,李红,郭明星,等.ConA不同给药途径所致C57小鼠急㊁慢性肝损伤模型的建立与比较[J].湖北中医药大学学报,2014,16(4):5-7.[3]周琼,刘芳萍,刘颖姝,等.四氯化碳致小鼠急性肝损伤动物模型建立方法的研究[J].东北农业大学学报, 2012,43(6):77-81.[4]Kaneko Y,Harada M,Kawano T,et al.Augmentation of Vα14NKT cell mediated cytotoxicity by interleukin4in an autocrine mechanism resulting in the development of concanavalin A induced hepatits[J].J Exp Med,2000, 191(1):105-114.[5]Tiegs G,Hentschel J,Wendel A.A T cell-dependent experimental liver injury in mice inducible by concan-avalin A[J].Journal of Clinical Investigation,1992, 90(1):196-203.[6]张雯,黄磊,陈叶香,等.复方龙垂草水煎剂对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用[J].中药新药与临床药理,2015,26(3):280-284.[7]刘慧敏,韩延忠,郭玉明,等.六味五灵片对刀豆蛋白A诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用研究[J].中国药理学通报,2017,33(1):133-140. [8]张炜,陈明,傅涓涓.不同剂量刀豆蛋白A诱导Balb/c小鼠肝纤维化的量效关系[J].徐州医学院学报, 2007,27(6):375-378.[9]马静.刀豆蛋白A致肝损伤模型条件优化及痰热清注射液对其保护作用研究[A].中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会.中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会第一次(2016年)学术交流大会论文集[C].中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会,2016:2.[10]刘悦晖,范学工,李宁,等.刀豆球蛋白A所致实验性肝损伤模型的构建[J].中国感染控制杂志,2008,7(5):297-301.ʌ责任编辑:陈丽华ɔ85北华大学学报(自然科学版)第20卷。
四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型建立与考察
基金项目!河南省科技创新人才计划C杰出青年项目"%&)%""&%""!"$%国家-十三五.科技重大专项课题"!"%'RU%"$!&&"+C""!$ 作者单位!%"""(#北京解放军总医院第五医学中心中医肝病科"付双楠#宫?$%河南中医药大学"高达#郭佳佳#苗明三#朱平生$ 通信作者!朱平生#!"#$%!LE)8$,65E+,6! %!+*(G"%宫?#!"#$%!6G,6"#,("!!%+(*(G"
期间自由饮水(摄食#第'天开始联苯双酯组以&*+!& "6+96灌胃#空 白 对 照 组 及 模 型 组 灌 胃 等 剂 量 蒸 馏 水#每天%次#连续灌胃$'%第%&天腹腔注射"*%? 浓度 44=) 橄榄油溶液制备急性肝损伤模型#分别于 造模后((+(%!和!)E后处理各组动物#以%"?水合 氯醛按"*"( "=+%"6麻醉动物#摘眼球取血#) \# )""";+"$,离 心 %& "$,#取 血 清#采 用 全 自 动 生 化 分 析仪测各组生化指标 2=K 及 2IK'
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
实验性肝损伤模型的建立和评价
半 乳 糖 胺 是 一 种 肝 细 胞 毒性 药 物 ， 在 短 时 间 内引 起 严 重 可 肝 损 害 ， 作 用 机 制 是 ： 通过 抑 制 肝 细 胞 的 Ｒ 其 ① ＮＡ 和浆 膜 蛋 白 合 成 造 成肝 细胞 坏 死 一 ② 肝 细 胞 坏 死 与 细 胞 外 ｃ ＋大 量 进 ； ａ ２ 人 细胞 内有 关 ； 一 些 研 究 指 出 ． 外 因 素 ， 括 胃肠 通 透 性 ③ 肠 包
隔 ４ ｄ皮 下 注 射 ０ ３ｍｌ１ ０ｋ ． ／ ０ ｇ体 重 ， ｌ 共 Ｏ次 ；Ｓ 大 鼠 （ 重 Ｄ 体
增 加 ． 菌 的 移 位 和 内 毒 素 等 都 增 加 了 半 乳 糖 胺 的 肝 脏 毒 细
忡 。
急 性肝 功 能 衰 竭 模 型 ： 白 猪 颈 外 静 脉 置 管 注 射 半 乳 糖 胺 大 （ ． ５ｇ ｋ ０ ７ ／ ｇ体重 ） 给 药 １ ． 功 能 损 害 开 始 明 显 ． ４ ， ８ｈ 肝 至 ８ｈ达 高 峰． 疗肝功能 衰竭 的各种措 施可 在这 段 时间 内进 行试验 ， 治
该 模 型适 合 进 行 人 工 肝 脏 支 持 治 疗 的 研 究 ｌ ； 猪 经 门 静 脉 注 ｌ 家
射 半乳 糖 胺 ０ ５ ｇ ｋ ． ／ ｇ和 脂 多 糖 １ｇ ／ ｇ１ ， 单 用 半 乳 糖 胺 ｇ ｋ ； 与 ６ （ ／ ｇ 外 周 静 脉 注 射 诱 导 大 动 物 急 性 肝 功 能 衰 竭 模 型 相 比 ， １ ｋ） ｇ 半 乳 糖 胺 用 量 减 少 了 一 半 ， 合 应 用 脂 多 糖 ， 药 有 明 显 协 同 联 两 作用 。 长 期 小 剂 量 可 导 致 肝 纤 维 化 和 肝 癌 。半 乳 糖 胺 诱 发 的 急 性 肝 功 能 衰 竭 模 型 症 状 、 化 、 织 学 表 现 接 近 人 ， 复 性 生 组 重
10种细胞损伤模型建立方法
10种细胞损伤模型建立方法转载请注明来自丁香园发布日期：2012-10-09 14:36 文章来源：丁香园分享到：收藏夹新浪微博腾讯微博开心网豆瓣社区人人网关键词：细胞细胞培养技术专题义翘神州丁香园丁香通点击次数：997现在很多实验都涉及到细胞损伤模型的建立和运用，如CCl4诱导肝细胞损伤模型（体内、体外）、PC12细胞的NO和淀粉样蛋白(Aβ)损伤模型、神经元缺血再灌注损伤模型，以及脉络宁对骨骼肌缺血再灌注损伤保护作用等。
一、体外肝细胞损伤模型建立（CCl4和H2O2）1大鼠肝细胞的分离和培养大鼠4％戊巴比妥麻醉，门静脉插管，先以无钙灌流液灌流，继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。
将肝脏移至一平皿内，轻轻撕去肝包膜后，加入含5％小牛血清的清洗液，用吸管吹打成单个肝细胞悬液，200目尼龙网过滤，低速离心（500 r·min-1，1 min，4℃）弃上清，同法用清洗液反复洗3次。
然后用完全1640培养液（内含10％小牛血清，105U·L-1青霉素，100 mg·L-1链霉素和10 mg·L-1胰岛素）制成1×109个·L-1肝细胞悬液。
分离的肝细胞经0.6％台盼蓝拒染法测得细胞活力大于90％，高碘酸雪夫反应显示糖原法鉴定99％为肝实质细胞。
将上述肝细胞悬液分别加入24孔（每孔1 ml）和96孔（每孔0.1 ml）培养板中，置37℃，5％CO2培养箱中培养。
12～16 h后可见肝细胞贴壁于培养板孔底上生长。
2CCl4诱导肝细胞坏死性损伤模型的建立肝细胞培养12 h后，吸弃上清，更换培养液并加入不同浓度的CCl4〔（1～16mmol·L-1），以少量的二甲亚砜助溶，二甲亚砜终浓度为0.1％（体积分数）〕，作用不同时间（1～12 h）后，收集24孔板中培养上清检测AST，以及肝细胞的MDA含量和GSHpx 活性；同步测定96孔板中培养肝细胞的MTT反应。
急性肝损伤试验实验报告
一、实验目的1. 了解急性肝损伤的实验方法及原理。
2. 掌握急性肝损伤动物模型的建立方法。
3. 学习观察肝损伤指标的变化，评估肝损伤程度。
4. 探讨不同药物对急性肝损伤的保护作用。
二、实验原理急性肝损伤是指由多种因素导致的肝脏急性损伤，如药物、毒素、酒精等。
本实验采用CCl4诱导的小鼠急性肝损伤模型，通过观察肝功能指标的变化，评估肝损伤程度，并探讨不同药物对急性肝损伤的保护作用。
三、实验材料1. 实验动物：ICR小鼠，体重18-22g，雌雄不限。
2. 试剂与仪器：CCl4、橄榄油、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）试剂盒、酶标仪、离心机等。
四、实验方法1. 实验分组：将60只ICR小鼠随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型组、阳性对照组、药物高剂量组、药物中剂量组和药物低剂量组。
2. 建立急性肝损伤模型：除正常对照组外，其余各组小鼠按20mg/kg剂量腹腔注射CCl4橄榄油溶液，正常对照组注射等体积的橄榄油。
3. 给药：阳性对照组给予联苯双酯（200mg/kg），药物高、中、低剂量组分别给予不同剂量的药物，正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水。
4. 样本采集：给药后24小时，各组小鼠眼球取血，分离血清，测定ALT、AST和TBIL。
5. 数据处理：采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，组间比较采用单因素方差分析。
五、实验结果1. 各组小鼠ALT、AST和TBIL水平比较：与正常对照组相比，模型组ALT、AST和TBIL水平显著升高（P<0.01）；与模型组相比，阳性对照组和药物高、中、低剂量组ALT、AST和TBIL水平均显著降低（P<0.01）。
2. 药物对急性肝损伤的保护作用：与模型组相比，药物高、中、低剂量组ALT、AST和TBIL水平均显著降低，且呈剂量依赖性。
六、实验结论1. 本实验成功建立了CCl4诱导的小鼠急性肝损伤模型。
小鼠急性酒精性肝损伤模型的制备及观察
北方药学 ２ ０ １ ４年第 １ １ 卷第 ６期
６ ７
小 鼠急 性 酒 精 性 肝 损 伤 模 型 的 制备 及 观 察
林 晓晖 黄 玲 王 一 铮 刘 如 玉 （ 福建中医 药大学中 西医结 合学院 福卅 Ｉ Ｉ ３ ５ ０ １ ２ ２ ）
摘要 ： 目的 ： 建立小鼠酒精 性肝损伤模型 ， 并动 态研 究小鼠血清和肝脏的生化指标 的变化 。 方法： 将８ ０只清洁级 Ｉ Ｃ Ｒ小鼠随机 分为 ８个组 ： ４个模型组和 ４个空白组。模型组 小鼠按 １ ２ ｍ ｌ ・ ｋ ｇ ｄ 胃灌注 ５ ２ 度 白酒 ， 空白组 小鼠给 予 胃灌注等量蒸馏水 ， 分 别在 灌 胃 后２ ｄ ， ４ ｄ ， ６ ｄ ， ８ ｄ各取一组模型组和空 白组 小鼠 ， 测定血 清 Ａ Ｌ Ｔ 、 Ｔ Ｇ， 肝脏指数 ， 肝组织 Ｓ Ｏ Ｄ和 ＭＤ Ａ 。结果 ： 与 同时段 空 白组比较 ， 造模 ６ ｄ后 ， 小鼠血清 中 Ａ Ｌ Ｔ和 Ｔ Ｇ均显著升 高（ Ｐ ＜ ０ ． ０ １ ） ， 肝脏指数 、 肝组织 中 Ｔ Ｇ和 ＭＤ Ａ显著升高（ Ｐ ＜ ０ ． ０ １ ） ， 而Ｓ Ｏ Ｄ活性显 著下 降（ Ｐ ＜ ０ ． ０ １ ） 。结论 ： 本 实验在 短时间 内成功建立 小鼠急性酒精性肝损伤模型 ， 稳 定性好 ， 可应用于护肝 药物保护机制的研究。 关键 词 ： 酒 精 性肝 损 伤 动 物 模 型
急性肝损伤模型的研究进展
（ 收稿 日期 ：∞６—０ ２ ９—１ ） ５
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综 述 与讲 座 ・
急性 肝损 伤模 型 的研 究 进 展
刘彦双 朱淑霞 王 永利
由基 （ Ｃ ０ Ｃ Ｌ ２和 ｃ） １及一系列 氧活性物 ， 可与肝 细胞 质膜 或亚细 胞结 构的膜脂 质发 生过 氧化 反应 ， 磷脂 大 量降解 ， 而破 坏 膜 从 细胞膜结 构 完 整 性 ， 引起 膜 通 透 性 增 加 ， 终 导致 肝 细胞 死 最 亡… 。另 外 ， ｃ ｃ ｈ的 代谢产 物能 迅速 与细 胞成 分如胞 内脂 质 、
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煎 医蕴
６ 第 ２ 卷第 ６ ９ 期 Ｈ ｂｉ ｅ ｃ ｕ ａ， ｎ Ｏ７ｖ １９Ｎ ． ｅｅＭ ｄ ａＪ ｒ ｌＪ ０ ，０２ ，ｏ６ ｉ ｌｏ ｎ ｕ ２
６１ ３
停滞 因素有关 ， 制动 、 理疗 、 注药效果 良好 ， 极少手术治疗ｎ 。 参考文献
ｄｏ ｕｉｇ ａｄ ｏ ｅ ｒｇ ｍｍｙ． ｓｌ ｒｅ２ ０ ２ ９１— ７． ｒｍｅｄ ｒｎ ｎ ｆ ｒｐｅｎ ＭｕｃｅＮｅｖ ，０ ２，５： ４９１ １ Ｐ ｄ ａＬ， ｒｅＩ Ｃ ｌ ｎ ｒ ｅ １Ｃ ）ｌｔｎ ｄ ｙ ｄｏ ｎｐ ｅｎｎ ｙ ２ ａ ｕ Ａｐｉ ， ａｉ ｄｏＰ，ｔａ ． ｌ ａ ａ ｕ ｎ ｓｎ ｒｍｅ ｉ ｒｇ ａｃ ：
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大鼠急性放射性肝损伤模型的建立
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一、四氯化碳急性肝损伤模型
[造模原理]
四氯化碳(CCl4 )是无色透明液体,不溶于水.CCl4的毒性主要与其活性代谢产物有关.在肝内CCl4惊NADPH和肝微粒体细胞色素P450混合功能氧化酶的作用,生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基.这些自由基能与细胞内和细胞膜上大分子发生共价结合,引起富含不饱和脂肪酸的生物膜发生脂质过氧化,导致膜结构和功能完整性的破坏,肝细胞损伤坏死.三氯甲基自由基还能抑制细胞膜和微粒体膜上该泵的活性,食Ca2+内流增加,从而引起细胞中毒死亡;三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键,损害线粒体,使还原型辅酶Ⅰ(NADH)及ATP在肝内生成减少,脂肪酸氧化抑制,影响肝脏能量生成障碍,并使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积.
[实验动物]
体重18-22g的小鼠、体重150-180的大鼠或体重4-45kg的家兔.
[操作方法]
用CCl4 在不同动物可以多种方法引起急性肝损伤.一般用花生油将CCl4 稀释为所需浓度. CCl4 致急性肝损伤所需剂量和用法见表8-1
[模型评价与注意事项]
1.( CCl4肝损伤模型是最常用的急性肝损伤模型,造模方法简单,成功率高,重复性
好，价格低廉。
2．CCl4剂量不宜过大，以免造成动物中毒死亡。
3：CCl4是无色澄清的有毒液体，有特殊气味，难溶于水。
CCl4 一般用花生油、橄榄油、豆油等植物油混合成所需浓度，有时也可与矿物油(如液体石蜡)混合。
以植物油为例，10％CCl4的配制方法是：取5ml植物油和5g阿拉伯胶，置于乳钵中研匀，再加lOml纯CCl4。
研匀，然后加蒸馏水lO~15ml调成乳状，最后加蒸馏水至lOOml，用前摇匀。
4．用CCl4复制肝损伤模型的主要缺点是,不同动物个体肝损伤的程度差异较大. 还有研究表明，小鼠接受CCl4后肝脏病理学改变与血清ALT等生化指标改变的相关性不如大鼠好。
5 CCl4 液体和蒸气可以从呼吸道、皮肤吸收,对人体有一定毒性，操作时应注意防护.
二、D-半乳糖胺急性肝损伤模型
[造模原理]
D-半乳糖胺(D-galactosamine)引起急性肝损伤的机制尚不完全清楚。
D-半乳糖胺本身并无毒性,也不直接损伤肝细胞。
它是肝细胞磷酸尿嘧啶核苷的干扰剂,进入体内后与磷酸尿苷结合,形成磷酸尿苷一半乳糖胺复合物，致使磷酸尿苷耗竭。
从而使依赖其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物质的合成受抑制，限制了细胞器及酶的生成和补充,细胞器、生物膜受损、钙离子内流，从而造成肝细胞损伤。
另外，D-半乳糖胺引起细胞膜损伤可能与细胞膜中糖成分的改变有关，即己糖代替了中性糖介人细胞膜，导致膜分子结构发生变化。
[模型评价与注意事项]
1.本方法简便,成功率高,重复性好,其病变仅限于肝脏,在引起肝坏死的剂量下,
不引起其他脏器病变,对实验人员安全.因此D-半乳糖胺肝损伤模型是目前
公认的研究病毒性肝炎发病机制和药物治疗效果的较好模型.
2．造成机性肝损伤所需D-半乳糖胺的剂量.因实验动物的状态和实验要求的不同而有差异.一般使用200、400、500或850mg／kg体重，预实验时应摸索确定。
小鼠对D-半乳糖胺不甚敏感,腹腔和皮一卜注射的常用剂量均为800mg／kg体
重。
3．D-半乳糖胺与CCl4所致肝损伤的组织学改变明显不同。
CCl4损伤主要表现在肝小叶中央静脉周围区大量肝细胞坏死和出血，脂肪变性十分明显；而D-半乳
糖胺引起的损伤则呈弥漫性、多发性片状坏死，脂肪变性不如CCl4明显，细
胞内有大量PAS染色阳性的毒性颗粒，嗜酸性小体较多见，与人类病毒性肝炎
的肝伤类似.
三、硫代乙酰胺急性肝损伤模型
[造模原理]
硫代乙酰胺(thioacetamide)可干扰RNA从细胞核到细胞质的转运过程，影响蛋白质的合成，也可能损害肝细胞膜，致使细胞的离子环境破坏，导致肝细胞坏死。
[模型评价与注意事项]
1.该模型可作为抗肝损伤药物的常规筛选模型，但目前其应用不如CCl4和D-
半乳糖胺模型普遍。
2．雄性大鼠对硫代乙酰胺比雌性大鼠更敏感。
3.长时间喂饲小剂量硫代乙酰胺可造成慢性肝损伤模型，也可在食物和饮水
中加入一定量硫代乙酰胺，2周后出现肝细胞变性，甚至出现肝硬化或肝癌。
四、刀豆蛋白A急性肝损伤模型
[造模原理]
刀豆蛋白A(concanavalin A，Con A)是一种植物蛋白，被广泛应用的可活化T淋巴细胞的丝裂原。
Con A进入小鼠体内后，可引起与人类自身免疫性肝炎相似的肝损害.Con A诱发肝损害主要与下列因素有关：①活化T淋巴细胞、巨噬细胞、促进细胞因子释放.Con A与肝窦具有亲和性，使循环T淋巴细胞汇入肝窦并在局部增殖.肝窦内存在大量巨噬细胞，激活后产生的细胞因子可直接损伤肝细胞。
大量活他的T潜巴细胞也存在于脾脏、并产生细胞因子,T 细胞与细胞因子随血流到达肝脏,直接与肝细胞接触或进一步激活巨噬细胞、破坏血管内皮细胞导致肝损伤.释放的细胞因子如肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)等与早期肝细胞损伤有密切相关.②其他如黏附分子、趋化因子、一氧化氮、肝细胞凋亡等也参与了Con A所致肝损伤的发病过程.。