四氯化碳致小鼠急性肝损伤动物模型建立方法的研究
肝损伤动物模型研究进展
肝损伤动物模型研究进展内容摘要：肝疾病；毒物，四氯化碳；醋氨酚；疾病模型，动物肝损伤是各种肝脏疾病的病变结果，对肝损伤的防治目前仍是一个严峻的课题。
通过建立实验性肝损伤动物模型，研究肝病的发生机制，筛选保肝药物，探索保肝作用原理，具有重要的现实意义。
现将近年来国内外对实验性肝损伤动物模型分类、作用原理、造模方法及其优缺点等研究进展作综述和探讨。
1化学性肝损伤动物模型1.1四氯化碳（carbontetrachloride,CCl4）CCl4导致肝损伤的主要机制目前认为与其自身和自由基代谢产物有关。
CCl4代谢产生的自由基进入机体后，在肝脏经细胞色素P450激活，生成三氯甲基自由基和三氯甲基过氧自由基，攻击肝脏细胞膜上的磷脂分子，使得细胞膜、内质网膜发生氯烷化和脂质过氧化，损伤细胞膜、细胞器；还能与膜脂质和蛋白质大分子进行共价结合，影响蛋白质代谢，并且破坏膜结构和功能的完整性，钙离子内流增加，影响细胞正常生理功能，最终导致肝细胞胞质中的可溶性酶渗出，细胞死亡[1]。
CCl4所致肝损伤可分为急性和慢性。
急性肝损伤：赖力英等应用4mL/kgCCl4剂量灌胃可诱发SD大鼠急性肝功能衰竭，死亡率达85%[2]。
慢性肝损伤：Zhang等采用2mL/kgCCl4腹膜内注射SD大鼠，每周2次，持续9周可伴有肝细胞坏死和明显炎症的肝硬化[3]。
CCl4导致肝损伤是经典模型之一，能准确反应肝细胞功能、代谢及形态学变化，重复性好且经济。
但CCl4同时还损伤动物的心、脾、肺、肾、脑等器官，另外，蒸汽和液体可由呼吸道、皮肤吸收，对人体也有一定毒性，操作时应注意。
1.2α萘基异硫氰酸酯(αNaphthylisothiocyanate,ANIT)ANIT是一种间接肝毒剂，其主要损害是通过膜脂质过氧化反应，致使肝细胞变性、坏死、胞内血清谷丙转氨酶(ALT）大量溢入血流，同时还导致胆管上皮细胞肿胀坏死，引起毛细胆管增生及小叶间胆管周围产生炎症，从而造成胆管阻塞，形成明显的胆汁淤积，并伴随以点状坏死为主的肝实质细胞损害，产生梗阻性黄疸，出现高胆红素血症和胆汁分泌减少。
建立急性肝损伤模型
一、四氯化碳急性肝损伤模型[造模原理]四氯化碳(CCl4 )是无色透明液体,不溶于水.CCl4的毒性主要与其活性代谢产物有关.在肝内CCl4惊NADPH和肝微粒体细胞色素P450混合功能氧化酶的作用,生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基.这些自由基能与细胞内和细胞膜上大分子发生共价结合,引起富含不饱和脂肪酸的生物膜发生脂质过氧化,导致膜结构和功能完整性的破坏,肝细胞损伤坏死.三氯甲基自由基还能抑制细胞膜和微粒体膜上该泵的活性,食Ca2+内流增加,从而引起细胞中毒死亡;三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键,损害线粒体,使还原型辅酶Ⅰ(NADH)及ATP在肝内生成减少,脂肪酸氧化抑制,影响肝脏能量生成障碍,并使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积.[实验动物]体重18-22g的小鼠、体重150-180的大鼠或体重4-45kg的家兔.[操作方法]用CCl4 在不同动物可以多种方法引起急性肝损伤.一般用花生油将CCl4 稀释为所需浓度. CCl4 致急性肝损伤所需剂量和用法见表8-1[模型评价与注意事项]1.( CCl4肝损伤模型是最常用的急性肝损伤模型,造模方法简单,成功率高,重复性好，价格低廉。
2．CCl4剂量不宜过大，以免造成动物中毒死亡。
3：CCl4是无色澄清的有毒液体，有特殊气味，难溶于水。
CCl4 一般用花生油、橄榄油、豆油等植物油混合成所需浓度，有时也可与矿物油(如液体石蜡)混合。
以植物油为例，10％CCl4的配制方法是：取5ml植物油和5g阿拉伯胶，置于乳钵中研匀，再加lOml纯CCl4。
研匀，然后加蒸馏水lO~15ml调成乳状，最后加蒸馏水至lOOml，用前摇匀。
4．用CCl4复制肝损伤模型的主要缺点是,不同动物个体肝损伤的程度差异较大. 还有研究表明，小鼠接受CCl4后肝脏病理学改变与血清ALT等生化指标改变的相关性不如大鼠好。
5 CCl4 液体和蒸气可以从呼吸道、皮肤吸收,对人体有一定毒性，操作时应注意防护.二、D-半乳糖胺急性肝损伤模型[造模原理]D-半乳糖胺(D-galactosamine)引起急性肝损伤的机制尚不完全清楚。
四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝炎模型筛选
CCl4 在体内对肝脏的亲和力很强, 在肝细胞内质网中经细胞色素 P450 依赖性混合功 能氧化酶的代谢, 生成三氯甲烷自由基、二氯甲烷自由基和过氧化三氯甲烷自由基, 可与细 胞膜大分子共价结合,使酶的功能丧失, 细胞膜发生脂质过氧化, 破坏肝细胞膜的结构和功 能完整, 使蛋白质合成障碍; 并通过抑制细胞膜上 Ca2 + 泵的活性, 使 Ca2 + 离子大量内 流, 导致肝细胞损伤, 从而使胞浆内转氨酶渗入血液中。 服务项目：
200×
立，以保证模型稳定可靠 2. 对病理损伤程度进行量化评分分析，更加客观评价药物的治疗肝炎的疗效 3. 可提供相关的 WB、IHC、real time-PCR、ELISA 细胞因子分析服务，深入研究药物
作Hale Waihona Puke 机理正常组：中央静脉及其周肝细胞
200×
模型组：肝细胞灶状坏死
200×
受试药物组：静脉周围少量炎细胞浸润
考察受试样品对四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠肝炎的保护作用 服务内容：
1. 四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠肝炎模型制备 2. 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药物三个剂量组，每组 10 只
动物 3. 血清生化指标检查谷丙转氨酶 ALT、谷草转氨酶 AST 4. 病理损伤程度分级量化评分及病理照片 客户提供：受试样品、阳性对照药 我们提交：详细实验报告 服务周期：3 个月 服务收费：根据实验方案确定，请咨询 服务特点： 1. 通过生化指标谷丙转氨酶 ALT、谷草转氨酶 AST、病理检查综合判断肝炎模型的建
常用急性肝损伤动物模型研究进展
常用急性肝损伤动物模型研究进展肝脏是人类重要的代谢器官，承担着维持生命的重要功能，还有解毒、造血和凝血作用，其中一些有损肝脏的物质也必须依靠肝脏解毒，故肝损伤的发生率极高，肝病的防治工作刻不容缓。
寻找一种较为适合的肝损伤模型是进行肝病防治研究的必要前提，目前常用的肝损伤模型有化学性、免疫性、酒精性还有其他类肝损伤模型。
本文将近几年常用的各种急性肝损伤的动物模型进行综述，为选择合适的造模方法提供思路。
标签：急性肝损伤;动物模型;方法化学性肝损伤四氯化碳（CCl4）。
四氯化碳是最常用的致化学性肝损伤的药物，其特异性高，能够有效造成肝脏发生脂质过氧化反应。
CCl4进入体内后，能够在肝药酶的催化作用下产生自由基，与细胞膜上的大分子物质共价结合，产生脂质过氧化反应，破坏细胞膜的结构和功能。
周迎春[1]给小鼠灌胃1% CCl4（0.1 ml/10 g），24h后建立小鼠急性肝损伤模型，该模型重复性好，具有强烈的肝毒性，能使血清中ALT、AST含量迅速升高，是理想的造模药物。
但CCI4挥发性强，可经多途径传播吸收，对实验人员有一定的危害。
对乙酰氨基酚（AP）。
AP是目前临床常常用的解热镇痛药，但长期过量应用，会造成肝损伤疾病。
AP在体内代谢产生的N-乙酰对苯醌亚胺（NAPQI）可与肝细胞内生物大分子共价结合，影响蛋白质的正常生理功能。
吴洋东等[2]给昆明种系小鼠一次性腹腔注射AP 200mg/kg，40h后造成急性肝损伤模型，AP 可造成肝损伤而不会损害其他组织器官，模型重复性好，是常用的肝损伤模型。
D-氨基半乳糖（D-GaIN）。
D-氨基半乳糖（D-GaIN）可对肝细胞磷酸尿嘧啶产生干扰，可以损害质膜，形成肝细胞内复合物，消耗尿苷三磷酸，使肝细胞出现炎症和弥漫性坏死，其病理变化与病毒性肝炎相似。
王超等给小鼠一次性腹腔注射10% D-GalN 生理盐水溶液，剂量为600 mg /kg ，16h后造成急性肝损伤模型。
四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型建立与考察
基金项目!河南省科技创新人才计划C杰出青年项目"%&)%""&%""!"$%国家-十三五.科技重大专项课题"!"%'RU%"$!&&"+C""!$ 作者单位!%"""(#北京解放军总医院第五医学中心中医肝病科"付双楠#宫?$%河南中医药大学"高达#郭佳佳#苗明三#朱平生$ 通信作者!朱平生#!"#$%!LE)8$,65E+,6! %!+*(G"%宫?#!"#$%!6G,6"#,("!!%+(*(G"
期间自由饮水(摄食#第'天开始联苯双酯组以&*+!& "6+96灌胃#空 白 对 照 组 及 模 型 组 灌 胃 等 剂 量 蒸 馏 水#每天%次#连续灌胃$'%第%&天腹腔注射"*%? 浓度 44=) 橄榄油溶液制备急性肝损伤模型#分别于 造模后((+(%!和!)E后处理各组动物#以%"?水合 氯醛按"*"( "=+%"6麻醉动物#摘眼球取血#) \# )""";+"$,离 心 %& "$,#取 血 清#采 用 全 自 动 生 化 分 析仪测各组生化指标 2=K 及 2IK'
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急性肝损伤模型的建立
四氯化碳性肝损伤的关键点
1.急性肝损伤是一个短期过程，一般在1248h内成模，因此，分组建模、取材、标本 固定的时间安排等很重要。 2.腹腔注射CCl4溶液，要注意进针部位、深 度。对给药浓度和剂量，因为鼠源不同或 相关文献数据的不一致性，可以分组进行 不同剂量、浓度的对比性实验。 3. 在制模过程中可以加入戊巴比妥或乙醇代 替饮水，以加速肝损伤进程。
实验目的
1.掌握四氯化碳对肝脏的毒性机理，成功建 立其急性肝损伤模型。 2.熟悉建模过程中的各个环节，并能解决相 关问题，真正感受造模的过程，为将来真 正进入实验做铺垫。
四氯化碳性肝损伤的机制
关于CCl4 肝毒的作用机制,存在多种假设,但都一致公认,其主要 机制是自由基的形成及引发的链式过氧化反应。CCl4在体内可经 肝微粒体细胞色素P450 代谢激活,生成两个活性自由基(CCl3O2 和Cl) 及一系列氧活性物,可与肝细胞质膜或亚细胞结构的膜脂质 发生过氧化反应,膜磷脂大量降解,从而破坏细胞膜结构完整性,引 起膜通透性增加,最终导致肝细胞死亡。另外,CCl4 的代谢产物能 迅速与细胞成分如胞内脂质、蛋白、核脂质、核蛋白和DNA 等 多种大分子发生不可逆的共价结合而导致细胞死亡,特别是当自 由基作用于DNA 时,损伤核糖和碱基,使核酸直接破坏引起DNA 链的断裂或DNA 链与蛋白间交联,影响其信息传递功能以及转录 和复制特性。在CCl4代谢产物引起的脂质过氧化物和共价结合的 双重作用下,导致膜脂质流动性降低、钙泵抑制、谷胱甘肽活性 抑制、肝微粒和线粒体功能丧失、肝细胞内钙稳态失调及代谢紊 乱,引起肝细胞损伤加剧 。
四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型建立与考察
四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型建立与考察付双楠;高达;郭佳佳;苗明三;朱平生;宫嫚【期刊名称】《肝脏》【年(卷),期】2022(27)9【摘要】目的考察四氯化碳(CCL 4)致小鼠急性肝损伤稳定的动物模型,便于临床新药的研究与应用。
方法将KM小鼠随机分为空白组、模型组和联苯双酯组(5.625 mg/kg),通过腹腔注射0.1%CCL 4溶液复制小鼠急性肝损伤,检测造模后3 h、6 h、12 h和24 h的转氨酶水平、肝脏指数、肝组织病理变化进行模型稳定性研究。
结果模型组染毒后,ALT在3 h(45.21±13.17 IU/L)轻度升高(P<0.01)、12h(112.30±30.54 IU/L)和24 h(121.98±21.66 IU/L)升高明显(P<0.01);AST在3h(162.51±28.57 IU/L)、6 h(192.07±31.05 IU/L)、12 h(250.75±90.82 IU/L)、24 h(274.27±44.02 IU/L)均升高(均P<0.01),但在12 h和24 h升高显著;肝脏指数在3 h(6.72±1.90 g/100 g)、6 h(7.27±1.38 g/100 g)轻度升高(P<0.01),12h(12.41±1.18 g/100 g)及24 h(14.90±2.56 g/100 g)升高明显(P<0.01);肝脏病理变化在12 h及24 h可见明显的肝细胞肿胀、炎性细胞浸润,24 h损伤程度更显著。
结论腹腔注射0.1%CCL 4溶液制备小鼠急性肝损伤模型时,在12~24 h小时之间建模更适宜。
【总页数】5页(P1036-1040)【作者】付双楠;高达;郭佳佳;苗明三;朱平生;宫嫚【作者单位】解放军总医院第五医学中心中医肝病科;河南中医药大学【正文语种】中文【中图分类】R28【相关文献】1.四氯化碳致小鼠急性肝损伤动物模型建立方法的研究2.四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤模型的建立和优化3.高活性小牛血去蛋白提取物对四氯化碳致急性肝损伤模型小鼠的保护作用4.四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型的研究5.四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型造模要素及中医药防治的数据挖掘研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
笔筒草对四氯化碳所致急性肝损伤小鼠保肝作用研究
笔筒草对四氯化碳所致急性肝损伤小鼠保肝作用研究目的探讨壮药笔筒草醇提物对CCl4所致小鼠急性肝损伤的作用。
方法采用CCl4腹腔注射造成急性肝损伤模型，将小鼠随机分成6组（空白对照组、模型组、联苯双酯阳性药组和笔筒草高、中、低剂量组），观察各剂量组对小鼠血清谷丙转氨酶（GPT）及谷草转氨酶（GOT）的影响。
结果与模型相比，给药组能降低GPT、GOT活性，联苯双酯模型组及笔筒草醇提取高、中、低剂量组均有显著性差异。
结论笔筒草对于CCl4所致小鼠急性肝损伤具有一定的保肝降酶作用。
标签：急性肝损伤；笔筒草；四氯化碳笔筒草，又称节节草（Equisetum ramosissimum），为木贼科木贼属植物，全草入药。
主要分布于东北、云南、贵州、陕西、甘肃等地，也分布于世界热带、亚热带地区[1]。
笔筒草主要成分为黄酮等[2]，中药学记载木贼有利尿作用，之前有文献报道过木贼草合剂治疗急性黄疸型肝炎有较好效果[3]。
近年来，药理实验表明本科植物具有抗心肌缺血、降血压、调血脂、降血糖的作用。
本实验通过研究笔筒草醇提物对于CCl4所致的急性肝损伤降酶保肝作用，为进一步研究保肝壮药，筛选其合理的组方提供科学实验依据。
1 材料与方法1.1 实验动物昆明小鼠（SPF级），雌雄兼用，体重18～22 g，2月龄，共90只，购自广西医科大学实验动物中心，动物证号（SCXK桂2009—0002）。
研究所用笔筒草采自广西南宁市老虎岭水库，经过广西中医药大学壮医药学院韦松基教授鉴定为木贼科木贼属植物笔筒草Equisetum ramosissimum全草。
采集回来经打粉机打碎后过40目筛，其有效成分采用渗漉法提取，溶剂为95%乙醇。
1.2 药物及试剂CCl4（成都市科龙化工试剂厂，批号：20110222）；花生油（鲁花一级压榨花生油）；氯化钠注射液（贵州科伦药业有限公司，批号：8110101G）；GOT试剂（南京建成生物工程研究所批号：20110616）；GPT试剂（南京建成生物工程研究所，批号：20110616）；联苯双酯滴丸（浙江万邦药业有限公司，批号：101207）。
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四氯化碳致小鼠急性肝损伤动物模型建立方法的研究
周琼;刘芳萍;刘颖姝;赵玉林;李昌文;李睿;张秀英
【期刊名称】《东北农业大学学报》
【年(卷),期】2012(043)006
【摘要】通过对染毒途径、剂量和时间的研究,建立四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤模型.采取腹腔注射和灌胃两种途径给予小鼠1％ CCl4,染毒后24h检测血清转氨酶含量,并观察肝脏病变.结果显示,灌胃组比腹腔注射组小鼠血清转氨酶变化个体差异小,肝脏病变明显,病灶分布均匀,且与实际中毒途径一致,故采用灌胃方法进行确定染毒剂量及时间试验.分别以0.125％、0.25％、0.35％、0.5％的CCl4给小鼠灌胃,染毒24h后检测血清转氨酶含量,确定最佳染毒剂量.以该浓度给小鼠灌胃,分别于染毒后2、6、12、16、20、24、28、32、48h检测小鼠血清转氨酶含量.结果表明,灌胃0.35％ CCl4,小鼠血清转氨酶升高与对照组相比差异极显著(P＜0.01),此浓度灌胃后,20h血清转氨酶含量显著升高(P＜0.01),24h达到最高值,与对照组相比差异极显著(P＜0.01).因此,以0.35％四氯化碳,按0.1mL·10g-1体重灌胃,染毒24h,可建立较理想的小鼠急性肝损伤模型.
【总页数】5页(P77-81)
【作者】周琼;刘芳萍;刘颖姝;赵玉林;李昌文;李睿;张秀英
【作者单位】东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨150001;东
北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030
【正文语种】中文
【中图分类】S854
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2.紫堇灵对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制的研究 [J], 冯培文;韩吉春;李德芳;王凤华;房雪;郑秋生
3.金线风总黄酮对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用及机制研究 [J], 葸博婷;钟明利;曹后康;管玉满;陈毅飞;晋玲;张可锋
4.滨蒿内酯对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用研究 [J], 彭静;陈曦
5.四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型造模要素及中医药防治的数据挖掘研究 [J], 胡凤娇[1];宋文杰[1];王张[1];梁源[1];刘光丽[1]
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