反相高效液相色谱法测定岩白菜素含量的方法
高效液相法测定慢支紫红丸中岩白菜素的含量
ｒ＝ Ｉ ＝
●－ －一
冯 冲，黄晓丹 ，秦春梅
（ 州王 老吉 药业股 份有 限公 司 ， 东 广 州 ５ ０ ５ ） 广 广 １４ ０ 摘要 ： 目的 建立了 慢支紫红丸中岩白菜素的高效液相法（ ＰＣ 测定方法。方法 使用甲醇溶液加热回流提取岩白菜 ＨＬ ）
Ａｂ ｔａ ｔ Ｏｂｅｔ ｅＡ Ｐ Ｃ ｍ ｔｏ ｒ ｅ ｒ ｎｔ ｎｏ ｅｇｎ ｎｈｚ ｏｇＰｌ ａ ｓ ｂｉ ｅ， ｔｏ ｓ Ｂ ｒｅｉ ｓｒ ｃ ： ｊｃ ｖ ｎＨ Ｌ ｅｈｄｆ ｔｍｉａ ｏ ｆ ｒｅｉ ｉ Ｍａｚｉｈｎ ｉｓｗ ｓ ｔ ｌ ｈｄ Ｍｅ ｄ ｅｇｎ ｉ ｏｄ ｅ ｉ ｂ ｎｎ ｉ ｌ ｅａ ｓ ｈ ｎ Ｗ ｘ ａｔ ｙｍ ｔ ｎ ｌ ｎ ａｌ ｕ ｎ ｅｕ ．Ａ ＰＣ８ ｏ ｍ ａ ｓｄｗｔ ｔｅ ｏ ｉ ｈ ｅｏ ｍ ｔａｏ —ｗ ｔ （ ５ ｓ ａ ｅｔ ｃ ｄｂ ｅｈ ｏ ａｄｗ ｌ —ｐａｄｒ ｌ ｒ ｅ ａ ＇ ｎ ｆ ｘ ｎＲ Ｉｃｌ ｎｗ ｕｅ ｉ ｂｌ ｐ ａ ｆ ｅｈｎｌ ａ ｒ２ ： ｕ ｓ ｈｈ ｍ ｅ ｓ ｅ ７ ） ａ ｔｅｄｔ ｔ ｎｗ ｖｌ ｇｈｏ ２５ａ ｎ ｅｆ ｗｒｔ ｗ ．ｍ／ ｉ．Ｒ ｓ ｌ ｈ ｎａ ｇ ａ ．５ ５— ．３ ｄ ５ ， ｔｈ ｅｅ ｉ ａｅ ｎｔ ｆ ７ ｍ ａｄｔ ｏ ｅ ａ １Ｏ ｌｍｎ ｅｕｔ Ｔ ｅ ｉ ｒａ ｅ ｓ ０ ３ ０５ ５ａ ｃｏ ｅ ｈｌ ａ ｓ ｓ ｌｅ ｒ ｎ ｗ ０ ｎ ｔ ｖｒ ｅｒｃｖｒ ａ ８ ２ （ Ｓ ．５ ） Ｃ ｎ ｌｓ ｎ Ｔ ｅｍｅ ｏ ｐｄ ｃｎｅｉ ｔ ｈ ａｅａ ｏｅ ｗ ９ ．％ Ｒ Ｄ ２ １％ ． ｏ ｃ ｉ ｈ ｔ ｄｉｒ ｉ，ｏｖｎ ｎ． ｅ ｇ ｅ ｙ ｓ ｕｏ ｈ ｓａ ｅ
高效液相色谱法测定抗痨胶囊中岩白菜素的含量
医药导报 ２ ０ ０ ４年 １ ０月第 ２ ３卷第 １ ０期
５ ４ ． ７ ４ ９３ ２ ． １ ２ ２５ ６ ． ８ ７ ４４ １ ０ ０ ． １ ２
·７ ９ １ ·
为０ ３ ０ ３ ０ ３ ， ０ ３ ０ ３ ０ ４ ， ０ ３ ０ ３ ０ ５的抗痨胶囊每粒含岩白菜素分别为 １ ． ９ ８ ， ５ ． ５ ９ ， ６ ． ７ ３ｍ ｇ 。
制有抑制作用且能改善肝功能和肝组织病变。目前多项研究 证明， 对拉米夫定治疗出现 Ｙ Ｍ Ｄ Ｄ变异而耐药的患者， 应用阿 德福韦酯治疗可获得良好疗效。两药联用能否提高抗 Ｈ Ｂ Ｖ的 Ｍ Ｄ Ｄ变异的发生和耐药引起的病情恶化， 疗效， 防止和治疗 Ｙ 值得进一步研究。在一项试验中， Ｈ Ｂ ｅ Ａ ｇ 阳性的慢性乙肝患者
１ ］ 链的延长， 抑制病毒复制 ［ 。另外， 该药还可通过促进干扰素
０ ． ０ １ ） ； 治疗后肝组织病变改善（ Ｋ ｎ ｏ ｄ ｅ ｌ ｌ 积分下降 ≥ ２ ） 率分别 为５ ９ ％， ５ ３ ％和 ２ ５ ％（ Ｐ＜０ ． ０ １ ） ； 血清 Ｈ Ｂ ｅ Ａ ｇ转阴率分别为
［ ２ ］ １ ４ ％， １ ２ ％和 ６ ％（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。提示阿德福韦酯对 Ｈ Ｂ Ｖ的复
·７ ９ ０ ·
有效的控制肤洁灵的制剂质量。
［ 参考文献］
Ｈ ｅ ｒ ａ ｌ ｄｏ ｆ Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅＶ ｏ ｌ ． ２ ３Ｎ ｏ ． １ ０Ｏ ｃ ｔ 刘金军， 王 平．肤洁灵治疗儿童“ 昆明疹” 的临床疗效 Ｊ ］ ． 儿科药学杂志， ２ ０ ０ ２ ， ８ （ ３ ） ： ５ ８－ ５ ９ ． ［
１ ｄ ） 阿德福韦酯治疗≥２ ０周将出现明显中毒性肾损害， 立即停 ４ ］ 药后， 肾小管损害可以恢复 ［ 。
【最新】岩白菜药材标准检验操作规程
岩白菜药材标准检验操作规程本品为虎耳草科植物岩白菜的干燥根茎。
秋、冬二季采挖，除去叶鞘和杂质，晒干。
【性状】本品根茎呈圆柱形，略弯曲，直径0.6～2cm，长3～10cm；表面灰棕色至黑褐色，具密集或疏而隆起的环节，节上有棕黑色叶基残存，有皱缩条纹和须状根痕。
质坚实而脆，易折断。
断面类白色或粉红色，略显粉质，部分断面有网状裂隙，近边缘处有点状维管束环列。
气微，味苦、涩。
【鉴别】（1）本品根茎横切面：常有残存的表皮细胞，木栓层由10余列扁平细胞组成。
形成层明显。
维管束外韧型，外侧偶见中柱鞘纤维。
韧皮部组织多皱缩，木质部以导管为主。
髓部宽广。
薄壁细胞含草酸钙簇晶、淀粉粒和棕色物。
粉末棕黄色。
草酸钙簇晶较多，直径15～58μm。
淀粉粒椭圆形或梨形，两端通常稍尖，直径3～10μm，长8～20μm，层纹和脐点不明显。
导管多为网纹，直径13～35μm。
表皮细胞红棕色，表面观呈多角形或类长方形。
木栓细胞表面观呈多角形。
（2）取本品粉末0.2g，加甲醇20ml，超声处理40分钟，放冷，滤过，取滤液作为供试品溶液。
另取岩白菜素对照品、熊果苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇（4:4:1.5）为展开剂，展开2次，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。
供试品色谱中，在与岩白菜素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；再喷以2%三氯化铁溶液-1%铁氰化钾溶液（1:1）的混合溶液，供试品色谱中，在与岩白菜素对照品、熊果苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】水分不得过12.5%（通则0832第二法）。
总灰分不得过7.5%（通则2302）。
【浸出物】照醇溶性浸出物测定法（通则2201）项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于36.0%。
【含量测定】照高效液相色谱法（通则0512）测定。
反相高效液相色谱法测定岩白菜素含量的方法
过滤， 滤渣 重复提取 １ ， 次 合并 滤液 ， 后定 容至 ２ ｌ过 浓缩 ５ｎ， ｒ ０４ 舢 滤膜 ， 定色谱 条件 下测定 峰 面积 。 ． ５ 在选 １３ 色 谱条 件 色 谱 柱 ：Ｏ Ｂ Ｘ Ｓ．ｌ （５ ｒｘ ． ． Ｚ Ｒ Ａ ＢＣ８ ２０ｒｎ ６ 柱 Ｉ ４ １ ｒ ｎ５肿 ） 流动相 ： Ｉ， １ ｒ ； 甲醇 ： ＝２ ：５ 检测 波长 ：７ 流速 水 ５７ ； ２４ｎ ｍ； ０８ ｌ ｉ 柱温 ３ ． ｍ／ ｎ ｍ ； ５℃。该 条件 下 岩 白菜 素 可达 基 线分 离 ，
Ｏ ｊｃｉ ： ０ｅｔ ｌｈａｑ ａｔａｉ ｂｅｔｅ Ｔ ｓ ｂｉ ｕｎｉ ｔｅ ｖ ａ ｓ ｔ ｖ
ｓａ ｔ ｅ ｅ ｄ叩 ｔｅｅｌ￣ ｆ ｂｘＳ －｜ ２０脚 ｘ４６姗 ， ｈ ｏ ｍ ｏ ａ ＢＣ８ ５ ｕ （ ． ５舯 ）ｗ ｉ ｌ ｗｌ ｍｅ ａｏ ａｄｗ ｔ （５７ ） ｅｅ￣ ａｅｅｇｈａ ２４眦 ， ｈｃ ｅｕ ｈ ｉｌ ｔ ｎｌ ｎ ａ ｒ２ ：５ ．Ｄ ｔ ｄｗ ｖｌ ｔ ｔ ＂ ｌ ｈ ｅ ｅ ｎ ／
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ｒｔ ｔ ８ｍｌ ｎ，ｃ ｌｍｎ ｔ珈ｐＴ ｂＩ ｔ３ ℃ ；Ｔ ｓＪ ａｅａ ０． ／ｍｌ ｏｕ ｅ ｅａ ｌ ａ ５ ｅ ｔ ｌ ｐ ｃｅ ｔ ｆ￣ ｏ ｔ ｅｌｌ ｓｓｕ ｉｄ ｂ ｌ ０ ｌｌｅ ｐ ｒ ｎｓ ｘｍｅ ｉ ｆｂ唾； ｊ ｔｄｅ ｙ０ 粤 ａ ｘ ｅｉ ｔ．ＲｅＩｔ：Ｂｅｇｎｎ ｗａ ＩＩｗａ ｍｅ 吕ｌ ｌｓ ｒｅ ｉ ｓ
中药岩白菜素的反相高效液相色谱分析
中药岩白菜素的反相高效液相色谱分析
张文珠;师彦平;刘霞;蒋生祥
【期刊名称】《分析科学学报》
【年(卷),期】2003(19)6
【摘要】采用反相高效液相色谱法(RP HPLC),以甲醇∶水=45∶55(V/V)为流动相,紫外275nm波长检测,用外标法测定了虎耳科植物提取产物中岩白菜素的含量。
该方法简便、快捷、准确,结果重现性好。
日内和日间精密度(RSD)在0.79%～4.22%之间,回收率为98.1%～103.1%。
【总页数】3页(P525-527)
【关键词】中药;岩白菜素;反相高效液相色谱法;药用植物;测定
【作者】张文珠;师彦平;刘霞;蒋生祥
【作者单位】中国科学院兰州化学物理研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R282.71
【相关文献】
1.中药复杂样品高效液相色谱和超高效液相色谱分析条件转换方法 [J], 金郁;薛兴亚;肖远胜;章飞芳;石慧;梁鑫淼
2.单宁酸的自动固相萃取-反相高效液相色谱分析 [J], 柯炜昌;陈义坤;刘华臣;潘曦
3.发酵液中香兰素的反相高效液相色谱分析方法研究 [J], 朱慧霞;姚日生;何炜静;李晓菊
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高效液相色谱法测定八爪金龙及组方制剂中岩白菜素的含量
高效液相色谱法测定八爪金龙及组方制剂中岩白菜素的含量作者：赵欧杜莹来源：《湖北农业科学》2016年第01期摘要：为测定八爪金龙及其组方制剂开喉剑中的有效成分岩白菜素，研究建立高效液相色谱（HPLC）法，以甲醇∶水（25∶75，V/V）为流动相，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃，检测波长274 nm。
结果表明，溶液中岩白菜素在0.585 6～58.560 0 μg/mL时有良好的线性关系（r=0.999 5），平均回收率为103.17%，RSD为0.28%，该方法操作简单、稳定、准确、可行，可用于开喉剑及组方药材八爪金龙中岩白菜素的含量测定。
关键词：八爪金龙；开喉剑喷雾剂；岩白菜素；高效液相色谱中图分类号：O657.7+2；R284.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）01-0186-03DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2016.01.049八爪金龙[Ardisia crispa （Thunb.） A. DC.]又名百两金、八爪龙、八爪根、铁雨伞、高八爪、开喉箭（四川），主要分布在湖北、四川、贵州、江西、广西等地。
为紫金科植物百两金或矮茎朱砂根的根茎或全草，《贵州草药》有记载，称其辛微苦涩，平，能清热，利咽化瘀，对慢性咽炎有较好疗效，被苗族奉为喉科良药，清热排湿，消肿止痛，为贵州民间常用的治疗咽喉的中草药，具有明显的抑制甲型流感病毒作用，能显著抑制革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的生长，对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、枯草杆菌、变形杆菌抑制作用更为明显，具有明显抗炎、镇痛和解热作用。
岩白菜素（Bergeninum）是八爪金龙的成分之一，属于异香豆素类化合物，具有良好的镇咳、祛痰、抗炎、护肝、抗病毒和神经保护作用[1]，选择岩白菜素类型的药物活性成分作为八爪金龙质量控制指标具有科学意义和应用前景。
开喉剑喷雾剂由八爪金龙、山豆根、蝉蜕、薄荷脑等4味药材组成，具有清热解毒、消肿止痛的功效。
RP—HPLC法测定复方威麦灵胶囊中岩白菜素的含量
RP—HPLC法测定复方威麦灵胶囊中岩白菜素的含量作者：朱正华保花艳罗敏来源：《中国民族民间医药·下半月》2017年第02期【摘要】目的：建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定复方威麦灵胶囊中岩白菜素含量的方法。
方法：采用ODS HYPERSIL C18色谱柱（250mm×46mm，5um）；以乙腈-水（15∶85）为流动相，流速为10mL/min；柱温：30℃；检测波长：275nm。
结果：岩白菜素浓度在209～2094μg范围内与峰面积呈良好线性关系，r=09998，平均回收率为9880%（RSD 为065%）。
结论：本方法操作简单，结果准确可靠，可用于复方威麦灵胶囊中岩白菜素的含量测定。
【关键词】复方威麦灵胶囊；岩白菜素；反相高效液相色谱法【中图分类号】R914【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）04-0027-03Determination of Bergenin in Compound Wei Mailing Capsules by RP-HPLCZHU ZhenghuaBAO HuayanLUO MinYunnan qujing city food and drug inspection test center，Qujing 655000，ChinaAbstract：Objective To establish high performance liquid chromatography（HPLC） determination of bergenin in compound Wei Mailing capsulesMethod The determination was performed on ODS HYPERSILC18（250mm×46mm，5μm）column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（15∶85，V/V）at the flow rate of 10 ml/min The column temperature was 30 ℃，and the detection wavelength was set at 275nmResults The linear range of bergenin were 209～2094 μg（r=09998）with an average recovery of 9880%（RSD=065%）.Conclusions The method is simple， the result is accurate and reliableIt can be used for the determination of bergenin in compound Wei Mailing capsulesKeywords：Compound Wei Mailing Capsules； Bergenin；RP-HPLC复方威麦灵胶囊是曲靖市第一人民医院研制的院内制剂。
RP-HPLC
１ ． ２ 试药
体 内吸 收快 、 排泄 快 ， 故 作 用 时 间 短． 且 反 复使 用 无
明显 耐 药性 ， 不 良反 应 较 少 ， 较 大 剂量 对 心 、 肾 和肝
也无 明显毒性 Ｊ ． 近年 来 复方 岩 白菜 素 片 市 场 的逐 步扩 大 ， 消费 者 、 新 闻媒 体对 复方 岩 白菜素 片 的品质 要求 越来 越 高 ， 对 复 方 岩 白菜素 片 的质 量 关 注度 越 来越 强 ， 而复 方岩 白菜 素 片 现行 质 量 标 准 为 紫外 分 光光 度 法 Ｊ ， 精 确度 不高 ． 目前 有部 分文 献研 究 了复方 岩 白菜素 片 的液相
摘 要 ：建 立 了复 方岩 白菜素 片 中岩 白菜素含 量测 定 的反相 高效 液相 色谱 法 ． 采 用 色谱 柱 Ｄ ｉ ａ ｍｏ ｎ —
ｓ ｉ ｌ Ｃ １ ８ （ ５ ｍ， ４ ． ６ ｍｍ ×２ ５ ０ ｍ ｍ） ， 柱 温为 ３ Ｏ℃ ； 流 动 相 为 （乙腈 ） － （ 水 ）：１ ５ ： ８ ５ ； 流 速 为
复 方岩 白菜 素 片是 由岩 白菜素 与马来 酸 氯苯那
方 岩 白菜素 片含 量 测定 的高 效 液 相 色 谱 法 简便 、 快 速、 重 复性好 ， 适 用 于岩 白菜素 含量 测定 ．
敏 制成 的复 方制 剂 ， 对 慢 性 支气 管 炎 具 有 良好 的镇
高效液相色谱法测定达肺草颗粒中岩白菜素的含量
高效液相色谱法测定达肺草颗粒中岩白菜素的含量
廖新麟
【期刊名称】《医药导报》
【年(卷),期】2009(28)4
【摘要】目的建立高效液相色谱法测定达肺草颗粒中岩白菜素的含量,提高达肺草颗粒质量标准.方法采用Agilent C18 柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),甲醇-水(17:83)为流动相,流速为1 mL*min -1,检测波长:275 nm.结果岩白菜素在进样量0.200 1～1.200 3 μg范围内,其浓度与峰面积呈良好的线性关系,r＝0.999 9;平均回收率为99.92%,RSD＝0.89%(n＝6).结论该方法专属性强,准确可靠,操作简便快速,可用于该药品的质量控制.
【总页数】2页(P509-510)
【作者】廖新麟
【作者单位】广西壮族自治区南宁食品药品检验所,530001
【正文语种】中文
【中图分类】R286;R927.2
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定银仙通肺宝颗粒中岩白菜素的含量 [J], 苏明武;柳俊;姚雪莲;袁征;尹久
2.高效液相色谱法测定复方垂盆草颗粒剂中岩白菜素含量 [J], 唐光明;柯立坚
3.高效液相色谱法测定虎耳草中岩白菜素含量 [J], 冉启军;丁宁
4.RP-HPLC法测定益肺通络颗粒中岩白菜素的含量 [J], 刘红宇;杨励;曾建国
5.高效液相色谱法测定清肺颗粒中甘草酸的含量 [J], 许世富
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高效液相色谱法测定复方垂盆草颗粒剂中岩白菜素含量
ｌ 仪器与试药
高效液相色谱仪： 日本 岛津公司 Ｌ － １， ＣＳｌ ｉ Ｃ２ ０ Ｌ －ｏ ｔｎ ０ ｕｏ
工作 软件 ； 紫外分光光度计 ： 岛津公司 Ｕ － ５； 日本 Ｖ２ ０ 甲醇为 ４ 色谱 纯试剂 ， 为重蒸水 ， 水 其他试剂均 为分析纯 ； 白菜 素对 岩
京： 化学工业 出版社 ，０ ５ ５ ， ２ ０ ：８ 附录Ⅵ Ｂ．
［］ ３ 江苏 新 医学 院． 中药大辞 典 （ 上册 ） Ｍ］ １ ． ［ ．２版 上海 ： 上
海科 学技术 出版社 ，９ ７ １ —１ ． １７ ：１ ２ （ 编辑 陈明伟）
高 效 液 相色 谱 法 测 定 复方 垂 盆 草 颗粒 剂 中岩 白菜 素 含 量
图 １ 薄层 层析 图谱
参考文献
［ ］中国科学 院中 国植 物志编 委会 ． １ 中国植 物志 （ ２ 第 ９卷 ） ［ ． Ｍ］ 北京 ： 科学 出版社 ，０ １２ ３ ２ ． ２ ０ ：２ —２ ４ ［ ］国家 药 典委 员会 ． ２ 中华 人 民共 和 国药典 （ 一部 ） Ｓ ． ［ ］ 北
维普资讯
２０ 年 第 １ 卷 第 １ ０８ ｌ 期
广西 中医学 院学报
－４ ・ ９
滴 ， 生橙 红色沉淀。③取滤液 ｌ ， 产 ｍｌ加硅钨酸试剂 １ ２滴 ， －
产 生黄 白色沉淀 。
２ １２ 小檗碱 专属反应 ．．
生 气泡 ， 液显樱红色 。 溶 ２ ２ 薄层 色谱 鉴别 ． ２ ２ １ 供 试 品溶液的制备 ．．
１长柱 十大功劳 （ 百色产） ２长柱 十大功劳（ 南宁产）
３ 讨
论
３阔叶十大功 劳（ 南宁产 ） ４盐 酸小檗碱对照品
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反相高效液相色谱法测定岩白菜素含量的方法赵素琴(青海民族学院学报编辑部,青海西宁810007)摘要 建立西藏产舌岩白菜中岩白菜素含量的反相高效液相色谱分析方法。
色谱柱:ZO RB AX SB -C 18柱(250m m ×4.6m m,5μm );色谱条件:检测波长274nm,柱温35℃,流速0.8m l/m in ;流动相:甲醇∶水=25∶75。
利用正交试验确定了超声提取的最佳条件,结果表明,在选定条件下岩白菜素与其他组份达到了基线分离,岩白菜素的线性范围为0.306～2.14μg ,r =0.9998,回收率为101%(R SD =2.2%),该方法快速、简便,结果准确。
关键词 反相高效液相色谱;舌岩白菜;岩白菜素;方法中图分类号 Q657.7+2 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2006)11-2323-02D e te rm in a t ion o f Co n te n t o f B e rg en inin B er genr ae pacu m bis b y R P -H PLG ZHAO Su -q in (E d ito r D epa r t m en t o f Q in gh a i N a tion a litie s In stitu te ,X i n in g ,Q in gh a i 810007)A b s tra c t O b jectiv e :T o e stab lish a qu an tita tive m e th od o f de term in a tion o f berg en in in B er g enrae pacum b is by R P -H P L C.M e th od :T h e sam p le w ere sepa ra ted onth e co lum no f Zo rbax SB -C 18(250m m ×4.6m m,5μm )w h ich e lu ted w ith m e th an o l an d w a te r(25∶75).D e tected w av e len g th a t 274nm,flow ra te a t 0.8m l/m in ,co lum nte m pe ra tu re a t 35℃;T h e Su pe rson ic ex tra ction o f be rgen in w a s stu d ied by o r th ogon a l expe r i m en ts .R e su lts :B e rgen i n w a s base -iso la ted.T h e lin ea r ran ge s o f be rgen in w a s 0.306～2.14μg(r =0.9998);T h e ave rag e reco ve rie s w e re 101%(R SD =2.2%).C on clu s ion s :T h e m e th od is rap id an d p recise.K e y w o rd s R P -H P L C;B ergen rae pacu m b is ;B e rgen in ;M e th od舌岩白菜(B er genrae pacum bis )为多年生虎耳草科岩白菜属植物[1-3],目前,岩白菜素的定量分析方法主要有紫外分光光度法[4]、薄层扫描法[5]、高效液相色谱法[6]等,但对西藏舌岩白菜中岩白菜素的H PLC 分析方法未见报道,笔者利用二极管阵列检测器优化了检测波长,并对流动相进行了优化,利用正交试验优化了岩白菜素的提取条件,建立了用反相高效液相色谱法测定西藏舌岩白菜中岩白菜素含量的方法。
1 材料与方法1.1 试验仪器、试剂及样品 ①仪器。
A g ilen t1100高效液相色谱仪:手动进样器,在线脱气机,高压二元梯度泵,恒温柱温箱,DAD 检测器,A g ilen t1100色谱工作站;ZORB AX S B -C 18(250m m ×4.6m m,5μm )色谱柱;KQ 3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);S Z -97自动三重纯水整流器(上海亚荣生化仪器厂)。
②试剂。
甲醇为高效液相色谱专用试剂(山东禹王实业有限公司禹城化工厂);水是自制三重蒸馏水;岩白菜素对照品由舌岩白菜中分离得到,1HNM R 、13C NM R 数据与文献报道一致,经归一化检验,纯度大于99%。
③样品。
舌岩白菜2003、2004、2005年7、8月采于西藏林芝地区,阴干粉碎至80目,冷藏保存。
1.2 溶液配置 对照品溶液:精密称取对照品岩白菜素61.1m g ,置于5m l 容量瓶中,以甲醇溶解并定容,配置成相应浓度的对照品储备液,使用时稀释成所需浓度。
样品溶液:精密称取1g 样品,加20m l 甲醇超声60m in ,过滤,滤渣重复提取1次,合并滤液,浓缩后定容至25m l ,过0.45μm 滤膜,在选定色谱条件下测定峰面积。
1.3 色谱条件 色谱柱:ZORB AX SB -C 18柱(250m m ×4.6m m,5μm );流动相:甲醇∶水=25∶75;检测波长:274nm;流速0.8m l/m in ;柱温35℃。
该条件下岩白菜素可达基线分离,保留时间为8.27m in(图1)。
图1 岩白菜素对照品及样品色谱2 系统适应性试验2.1 线性关系的考察 精密量取对照品储备液,以甲醇配制浓度为0.122m g/m l 的对照品溶液,分别进样2.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5μl ,以峰面积的积分值定量,测得岩白作者简介 赵素琴(1966-),女,青海西宁人,副教授,从事应用色谱学研究。
收稿日期 2006-02-15菜素的回归方程:A =8245.3X -10.599,r =0.9998,线性范围0.306～2.14μg 。
2.2 检测限 在选定的色谱条件下,当信噪比S/N =3时,测得该条件下岩白菜素的最低检测限为2.7n g 。
2.3 精密度试验 取浓度为0.0122m g/m l 岩白菜素对照品溶液,在选定的色谱条件下测定色谱峰的峰面积,计算得R SD 为0.92%(n =6),表明仪器精密度良好。
安徽农业科学,J ou rn a l o f A n h u i A g r i .S c i .2006,34(11):2323-2324 责任编辑 庆瑢 责任校对 庆瑢2.4重复性试验精密称取舌岩白菜样品6份,每份1g,在选定的色谱条件下测定岩白菜素的含量,计算得R SD为1.6%(n=6)。
表明方法重复性良好。
2.5稳定性试验精密称取舌岩白菜样品1g,分别在0、2、4、6、8、24h时分别进样,测定岩白菜素的峰面积,计算得R SD为1.2%(n=6)。
表明样品溶液在24h内稳定。
2.6回收试验精密称取舌岩白菜样品1g共3份,分别加入岩白菜素对照品约15m g,按“1.2”法提取岩白菜素测得加标回收率为(n=3)为101%,R SD为2.0%。
3结果与分析3.1测定结果取制备的样品溶液按色谱条件进行分析,经DAD检测器检测岩白菜素的峰纯度且其紫外光谱与对照品一致后,按外标法以峰面积积分值计算,测得5批西藏舌岩白菜中岩白菜素的含量(每个样品重复进样3次,取平均值)。
结果见表1。
表1舌岩白菜中岩白菜素的含量%批次含量R SD1 2.27 1.252 2.990.943 3.03 1.634 2.52 1.445 2.49 1.963.2不同提取方法的分析结果3.2.1 不同提取方法对岩白菜素提取率的影响。
精密称取9份舌岩白菜样品,每份重1g,分别用甲醇热回流2h、超声20m in、冷浸24h,测得用冷浸、热回流、超声提取法岩白菜素含量分别为1.16%(RSD2.1%)、1.65%(RSD1.7%)、2.09%(RSD1.9%),超声提取法提取时间短,提取率最高,因此选用超声提取法。
3.2.2不同提取溶剂对岩白菜素提取率的影响。
精密称取9份舌岩白菜样品,每份重1g,分别用甲醇、乙醇、水超声提取20m in,测得甲醇、乙醇、水提取岩白菜素的含量分别为2.09%(RSD1.8%)、1.67%(RSD1.4%)、0.645% (RSD2.9%),甲醇提取率最高,因此选用100%甲醇为岩白菜素提取溶剂。
3.3正交试验结果为进一步探讨以甲醇为提取溶剂的岩白菜素最佳超声提取方法,采用正交表L9(34)考察提取时间(m in)、提取次数和料液比对岩白菜素提取率的影响。
甲醇超声法正交试验结果如表2所示。
直观分析表明,以甲醇为溶剂超声提取岩白菜素的主要影响因素是提取时间和料液比,但提取次数对分析结果影响不大;方差分析表明,提取次数对岩白菜素的影响很小,应与误差项合并后,计算总试验误差,但提取时间和料液比对试验结果有非常显著的影响(F0.01(2,4)=18),结合分析和实际工作,选定以甲醇为溶剂超声提取岩白菜素的最佳试验条件为:提取时间60m in,次数2次,料液比为1∶40。
3.4检测波长的确定利用DAD检测器在220～400nm扫描其吸收光谱,岩白菜素对照品在274nm波长处有较高的表2正交试验因素水平及结果序号时间∥m in次数∥次料液比实验误差岩白菜素提取率∥%实验12011∶201 1.90实验22031∶302 1.97实验32051∶403 2.07实验44011∶303 2.13实验54031∶401 2.22实验64051∶202 2.12实验76011∶402 2.28实验86031∶203 2.12实验96051∶301 2.25均值1 1.981 2.105 2.049 2.124均值2 2.155 2.102 2.115 2.122均值3 2.216 2.145 2.189 2.106极差0.2350.0430.1400.018表3方差分析因素偏差平方和自由度F比P时间0.089289<0.01次数0.00323料液比0.030230<0.01合并误差0.0034吸收,结合文献选择该波长为检测波长(图2)。
图2岩白菜素的紫外吸收光谱3.5流动相的选择经试验,当在甲醇∶水=25∶75时,岩白菜素与其他组分在10m in内达到基线分离,故选择甲醇∶水=25∶75为流动相。
4结论通过试验建立的用反相高效液相色谱法测定西藏舌岩白菜中岩白菜素含量的方法,具有提取完全、分析方法简便、快速、结果准确、可靠等特点,对分析评价药物质量有重要的参考作用。