新型免疫抑制剂J2对角膜移植小鼠淋巴细胞中白细胞介素10及干扰素γ分泌的影响
免疫细胞在角膜移植排斥反应中作用的研究进展
免疫细胞在角膜移植排斥反应中作用的研究进展[摘要] 角膜无血管和淋巴管，处于相对的“免疫赦免”状态，但仍可因细胞介导的排斥反应，植片在移植后1周左右被排斥。
角膜移植排斥反应是多种免疫细胞和免疫因子参与的、复杂的免疫反应过程。
主要就近年来各类免疫细胞在角膜移植排斥反应中作用的研究进展做一综述。
[关键词] 角膜移植；排斥反应；免疫；细胞角膜病致盲率在我国盲目流行病学调查中排名第二，仅次于白内障。
角膜移植是目前临床上治疗角膜盲最为可靠、有效的复明手段。
随着现代显微手术和角膜保存技术的发展，移植术后的免疫排斥反应已成为角膜移植失败的主要原因。
角膜无血管和淋巴管，处于相对的“免疫赦免”状态，但仍可因细胞介导的排斥反应，植片在移植后1周左右被排斥。
角膜移植排斥反应是多种免疫细胞和免疫分子参与的、复杂的免疫反应过程。
1 T细胞介导的免疫反应及相关细胞因子T淋巴细胞是机体细胞免疫重要的执行和调节细胞，其中CD4 T细胞在免疫排斥反应发生中具有极其重要的作用。
CD4 T细胞根据其分泌细胞因子的不同可分为Thl和Th2两类亚群。
Thl细胞介导细胞免疫；Th2细胞辅助B细胞增殖及抗体生成。
正常状态下，Thl和Th2细胞功能处于动态平衡之中。
同种异体角膜移植时，Thl是角膜植片中主要的浸润细胞⋯，通过识别异体抗原，释放细胞因子以激活不同的效应细胞启动迟发型超敏反应】。
CIM T细胞亦能诱导角膜植片上皮细胞和内皮细胞的凋亡 ]。
1细胞因子概述细胞因子是指一类由免疫细胞(淋巴细胞、单核巨噬细胞)和相关细胞(成纤维细胞、内皮细胞等)产生的调节细胞功能的高活性多功能低分子蛋白质，不包括免疫球蛋白、补体和一般生理性细胞产物。
自上个世纪5O年代发现特异性细胞因子以来，目前被发现并正式命名的细胞因子有数十种，其分类方法多种，按习惯主要分为干扰素(in—terferon,IFN)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)、白介素(interleukin,IL)、转化生长因子 (transforminggrowth factor,TGF)、集落刺激因子和趋化冈子6类。
中药免疫调节剂对小鼠细胞免疫功能的影响
中药免疫调节剂对小鼠细胞免疫功能的影响【关键词】中药免疫调节剂;，小鼠;，脾淋巴细胞转化;，含药血清[摘要] 目的: 探讨中药免疫调节剂对正常小鼠及环磷酰胺(Cy)所致免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响。
方法: 以Cy诱导建立免疫抑制小鼠模型，给正常小鼠和免疫抑制小鼠饮服中药及生理盐水，采用MTT法检测淋巴细胞的增殖反应情况。
结果: 试验各组小鼠脾细胞在48 h培养时间内淋巴细胞转化率与各组含药血清加入到正常小鼠脾细胞反应体系中，在相同培养时间内的淋巴细胞转化率呈高度正相关。
表现为: 在机体正常条件下，两个中药组与正常组之间差异无统计学意义（P>0.05），但均高于Cy组（P<0.05）; 在免疫抑制条件下，两个中药组明显高于正常对照组和Cy组（P<0.05），且中药免疫调节剂组优于玉屏风组（P<0.05）; 另外， 50 mL/L浓度的含药血清优于100 mL/L浓度的含药血清（P<0.05）。
结论: 该中药免疫调节剂能显著促进免疫抑制小鼠淋巴细胞的转化，而对正常小鼠作用不明显。
[关键词]中药免疫调节剂; 小鼠; 脾淋巴细胞转化; 含药血清目前，国内外在中药免疫调节剂的研究开发方面，研究单味药和其所含的单体成分（最多的是多糖，其次为有机酸、甙类、生物碱、黄酮等）占多数[1-3]，复方研究较少且不深入。
但是，正是复方制剂的复杂成分才获得了单味药和单体成分所不具备的药效整体性和协同互补作用，使疗效增强、毒副作用减少，在实际应用中更具优势。
为此，我们根据中药方剂的组成原则，结合现代药理学研究成果，以具有免疫调节作用的经典方剂“玉屏风散”为对照，通过体外筛选、毒性测定，最后由黄芪、茯苓、白术、甘草、防风、桔梗6味药组成了复方中药免疫调节剂，并用MTT法探讨了该中药免疫调节剂对正常小鼠及Cy所致免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响。
1 材料和方法1.1 材料 RPMI1640培养基（Gibco公司）; MTT（四甲基偶氮唑盐，Amresco公司），以pH7.2的 RPMI1640培养液制成5 g/L溶液; PHA（Sigma公司），以pH7.2的RPMI1640培养液制成200 mg/L溶液; 小牛血清(杭州四季青生物工程有限公司，批号: 051215); 环磷酰胺（Cy，上海华联制药有限公司，批号: 050306）; 中药免疫调节剂（ZY）: 黄芪、茯苓、白术、防风、甘草、桔梗组成复方免疫调节剂，采用自动循环煎药机提取浓缩，按照生药量计算使终浓度为300 g/L，购自山东泰安工商联医药商行。
周期联合免疫抑制剂对干燥综合征模型小鼠治疗作用和TNF-α、IL-1β表达的影响
周期联合免疫抑制剂对干燥综合征模型小鼠 治疗作用及耵师一仅、ＩＬ一１ｐ表达的影响 中文摘要
背景
干燥综合征（Ｓｊｏｇｒｅｎ’Ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＳＳ）是一种常见的系统性自身免疫性疾病，致炎性
细胞因子ＴＮＦ．ａ及也．１Ｂ在ＳＳ患者涎腺局部破坏和放大全身免疫紊乱中发挥关键作用。 单用免疫抑制剂治疗常因疗效差、毒副作用大而不能坚持治疗，周期联合免疫抑制剂甲氨
ｏｂｖｉｏｕｓ ｅｆｆｅｃｔｓ，ｏｒ ｈａｓ
ｍａｎｙ
ｓｉｄｅ
ｅｆｆｅｃｔｓ．Ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｌｌｉａｎｃｅ ｏｆ ｍｅｔｈｏｔｒｘａｔｅ ａｎｄ ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｃｙｃｌｅ
Ｃａｎ ｉｍｐｒｏｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ
ｅｘｃｅｓｓｉｖｅｌｙ
ＭＴＸ、析ｎｌ
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ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｓａｌｉｖａｒｙ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ，ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｇｒａｄｅ ｏｆ ｓａｌｉｖａｒｙ ｇｌａｎｄ ａｎｄ ｔｈｅ
ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ＴＮＦ－ａ
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ＭＴＸ，ｌａｒｇｅ・ｄｏｓａｇｅ ＭＴＸ，ＣＴＸ
ｐａｕｓｅ，ＣＴＸ ｑｏｄ，ｌｏｗ－ｄｏｓａｇｅ
ｐａｕｓｅ）．Ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌ
ｈａｄ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ２４ ｗｅｅｋｓ．
３．Ｔｏ
ＩＬ－１ ｐ
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ，ｓａｌｉｖａｒｙ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ，ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ＴＮＦ－ａ ａｎｄ
蛋白质抗体芯片技术检测金黄扶正散对免疫抑制小鼠细胞因子的影响
蛋白质抗体芯片技术检测金黄扶正散对免疫抑制小鼠细胞因子的影响目的：采用蛋白质抗体芯片技术观察金黄扶正散对免疫抑制小鼠细胞因子的影响。
方法：皮下注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型，金黄扶正散低、中、高剂量组分别连续给小鼠灌胃10 d，末次用药后小鼠禁食12 h，各组小鼠尾静脉取血1 mL，离心，取血清备用，采用细胞因子抗体芯片进行细胞因子定量检测。
结果：与对照组比较，环磷酰胺组的2种细胞因子IFN-γ和RANTES呈显著性降低（P＜0.05），金黄扶正散低、中、高剂量组给药后IFN-γ有显著性提升，高剂量组的RANTES呈显著性升高（P＜0.05）；与对照组比较，环磷酰胺组的5种细胞因子IL-5，IL-6，IL-9，IL-13和MCP-1呈显著性升高（P＜0.01，P＜0.05），给药组给药后有不同程度降低（P＜0.01，P＜0.05）；13种细胞因子GM-CSF，IL-1α，IL-1β，IL-2，IL-3，IL-4，IL-10，IL-12，IL-17，M-CSF，TNF-α，KC 和VEGF无明显变化。
结论：金黄扶正散对免疫抑制小鼠20种细胞因子有不同程度的影响，这可能与调节免疫抑制小鼠Th1/Th2 亚群有关。
标签：金黄扶正散；免疫抑制；蛋白质抗体芯片目前发现的细胞因子种类繁多，在分子结构、生物活性等方面各不相同。
在机体抗感染免疫、肿瘤免疫以及自身免疫过程中，细胞因子和免疫细胞、细胞因子和细胞因子、免疫细胞与免疫细胞之间通过相互作用和信息传递构成了彼此协调、彼此协同和彼此拮抗的复杂免疫调节网络[1]，在自身免疫性疾病的发病机制中发挥了举足轻重的作用[2]。
金黄扶正散由黄芪、金银花、大枣、浮小麦制成，具有扶正驱邪，益气解毒的功效。
它是根据我国传统医学理论，扶正祛邪的精髓，结合现代药理学研究和临床实践经验而组成的方剂。
通过前期研究发现其可增强免疫抑制小鼠的免疫功能[3]，本实验在前期基础上，采用抗体芯片检测技术测定免疫抑制小鼠血清的20种细胞因子，探讨金黄扶正散是否通过细胞因子对小鼠发挥免疫调节作用。
001 白细胞介素10在支气管哮喘发病机制中作用-喻昌利
白细胞介素10在支气管哮喘发病机制中作用喻昌利，郭艳丽，郝小惠，刘和亮1,摘要：目的研究白细胞介素10在支气管哮喘发病机制中的作用。
方法哮喘组用卵白蛋白OVA敏原制备C57小鼠哮喘模型；IL-10抗体干预组与哮喘组均在激发后24h、48h、96h、及第8d行支气管肺泡灌洗（BAL），酶联免疫吸附法（ELISA）测定BALF中IL-10、IL-12、TNF-α及血清中IgE、一氧化氮浓度。
结果哮喘模型组干预组BALF中TNF-α和血清中IgE、NO含量显著高于对照组，BALF中IL-10、IL-12含量显著低于对照组。
哮喘组与干预组内IL-10与IL-12均有正相关性；哮喘组IL-10与TNF-α、IgE有负相关性；IL-10抗体干预组内IL-10浓度与相应时相TNF-α、Ig-E、NO的浓度作直线回归分析，显示负相关关系。
结论 IL-10参与支气管哮喘发病的整个过程,随IL-10含量减少，支气管哮喘进行性加重。
因此在支气管哮喘不同时期检测IL-10水平具有重要的临床意义。
关键词：支气管哮喘；IL-10；IgE；NOInterleukin 10 in the pathogenesis of asthmaYu chang-li ,Guo Yan-li,Hao xiao-hui ,He liang-liu【Abstract】Objective(s)To study the role of interleukin 10 in the pathogenesis of bronchial asthma. Method(s) Asthma group with ovalbumin OVA allergen preparation C57 mice model of asthma,Antibody IL-10 intervention group and asthma group were 24h, 48h, 96h after excitation, and 8D underwent bronchoalveolar lavage (BAL), enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) in BALF by IL-10, IL-12, TNF- α and IgE in serum, the concentration of nitric oxide.Result(s) IgE, the content of NO in serum TNF- α and BALF in asthma model group and intervention group was significantly higher than that of the control group.Asthma group and intervention group in both IL-10 and IL-12 positive correlation，a negative correlation between IL-10 and TNF- α in asthmatic group, IgE.Concentration of IL-10 antibody intervention group and IL-10 concentration of TNF- α, Ig-E, NO in linear regression analysis, showed negative correlation.Conclusion IL-10 is involved in the pathogenesis基金项目：河北省自然科学基金C2010001788通讯作者：刘和亮教授Email: heliangliu@.of bronchial asthma throughout the process, with reduced IL-10 content, bronchial asthma aggravated sexual.Therefore in bronchial asthma in different periods to detect IL-10 levels has important clinical significance.【Key words】Asthma IL-10; IgE; NO;支气管哮喘是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病。
重组人白细胞介素10单克隆抗体对角朊细胞增殖及产生细胞因子的影响
重组人白细胞介素10单克隆抗体对角朊细胞增殖及产生细胞因子的影响陈飞虎;李俊;陈敏珠【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2005(040)002【摘要】目的研究重组人白细胞介素10单克隆抗体对无血清培养的角朊细胞增殖、产生细胞因子的影响.方法用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定对细胞增殖的影响;用小鼠胸腺细胞增殖法检测IL-1;ELISA法检测IL-6、IL-8.结果抗重组人白细胞介素10单克隆抗体促进角朊细胞增殖与IL-1、IL-6及IL-8的分泌,并呈剂量依赖关系.结论重组人白细胞介素10单克隆抗体促进角朊细胞增殖与细胞因子分泌.【总页数】3页(P105-107)【作者】陈飞虎;李俊;陈敏珠【作者单位】安徽医科大学药学院,合肥,230032;安徽医科大学药学院,合肥,230032;安徽医科大学药学院,合肥,230032【正文语种】中文【中图分类】R392.12;R329.24【相关文献】1.重组人白细胞介素-11对2,4-二硝基氟苯致小鼠接触性皮炎和炎症细胞因子水平的影响 [J], 李应全;王进;谢青;王菊英;张岫美2.重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞增殖及产生细胞因子的影响 [J], 夏丽娟;陈飞虎;任斌;黄学应;宋群亮;李俊3.重组人白细胞介素10单克隆抗体的制备 [J], 陈飞虎;盛晓蓉;吴亦伦4.白芍总苷胶囊配伍枸杞子、重组人表皮生长因子治疗糜烂型口腔扁平苔藓的临床疗效及对血清干扰素γ、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素10表达的影响 [J], 吴子忠;朱鸿翔;刘春玲;韩翠香;刘文超5.重组人白细胞介素10对角朊细胞增殖及产生细胞因子的影响 [J], 陈飞虎;陈敏珠;李俊;汪光宝;智强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验性异种角膜移植的免疫学指标测定
实验性异种角膜移植的免疫学指标测定林云朝;郭振喜【期刊名称】《热带医学杂志》【年(卷),期】2004(4)5【摘要】目的通过32磷(32P)标记供体白细胞预处理受体,观察含β射线的32P 对异种(鸡→兔)角膜移植免疫学指标的影响。
方法建立异种(鸡→兔)角膜移植实验模型,术前2周将32P标记供体白细胞注入兔血管内预处理受体,术后观察新生血管长至植床植片交界处时间,植片透明、半透明和完全混浊时间,同时检测移植家兔外周血白细胞、T淋巴细胞术前术后数量的变化。
测定淋巴细胞核内DNA含量及血清抗角膜抗体。
结果应用32P标记供体白细胞预处理受体组角膜移植后,植片完全混浊的时间显著延长,但预处理组淋巴细胞数量及淋巴细胞核内DNA含量未见显著降低,而空白对照组则有显著差异,表明小剂量的32P静脉注射是安全的。
结论32P标记供体白细胞预处理受体免疫学指标未见显著改变,提示该方法是安全可靠的,为抗角膜移植免疫排斥反应提供了新的手段。
【总页数】3页(P556-558)【关键词】角膜移植;^32磷;免疫学指标【作者】林云朝;郭振喜【作者单位】广州市白云区人民医院;深圳三九企业集团【正文语种】中文【中图分类】R779.65【相关文献】1.大鼠异种穿透性角膜移植的临床免疫学研究 [J], 丁伟;伍桂军;陈家祺;杨方耀;王晶;刘业滋2.环孢霉素A(Cyclosporin A,CsA)对穿透性异种角膜移植的影响—免疫学检测与形态学观察 [J], 黎锦堂3.实验性异种板层角膜移植的免疫学研究—特异性体液免疫及非特异性细胞免疫测定 [J], 何宇光4.角膜移植的免疫学研究—实验性角膜移植排斥反应的病理组织学观察 [J], 杜晶5.实验性异种穿透性角膜移植的免疫学研究 [J], 钟敬祥;徐锦堂因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
自噬-il-1β信号通路在角膜移植免疫排斥中的作用研究
角膜植片明显水肿，角膜基质中可见大量炎性细胞浸润，而NLRP3基因缺陷小鼠的角膜植片不水肿，角膜基质中炎性细胞浸润明显减少。
Real-time PCR的结果表明：与野生型小鼠相比较，NLRP3基因缺陷小鼠角膜植片中IL-17的表达水平明显下降。
上述结果表明NLRP3基因缺陷可延缓角膜移植免疫排斥反应的发生。
同时，Western Blot结果显示：与野生型小鼠相比较，NLRP3基因缺陷小鼠角膜植片中IL-1β成熟体的表达水平明显减少。
而通过结膜下注射向NLRP3基因缺陷小鼠的角膜植片中回输IL-1β则可促进角膜移植免疫排斥反应的发生。
基于上述结果，我们提出NLRP3可通过影响IL-1β的成熟参与角膜移植免疫排斥反应过程。
结论：1.诱导自噬可以抑制角膜移植免疫排斥反应，并延长角膜植片存活时间；而抑制自噬则可显著促进角膜移植免疫排斥反应的发生。
2.自噬可通过调节NLRP3炎症小体介导的IL-1β成熟参与角膜移植免疫排斥反应的病理过程。
硕士研究生：向德猛（眼科学）指导导师：高华（教授）关键词：自噬；穿透性角膜移植术；免疫排斥；白介素-1βIIIThe roles of autophagy-interleukin-1β signal pathway in c ornealallografts immune rejectionAbstractObjective：The aim of this study was to investigate the roles of autophagy- interleukin-1β signal pathway in corneal allografts immune rejection using a mouse corneal transplantation model.Methods：（1）Allogenic full-thickness corneal transplantation was performed in Balb/c mice and the mice were randomly divided into three groups: an allograft group (Allo), which received no therapy; an allograft group treated with rapamycin (RAPA) nano-micelle eye drops (Allo+RAPA); and an allograft group treated with 3-Methyladenine (3-MA) eye drops (Allo+3-MA). The survival of corneal allografts was observed by slit lamp, and histopathological changes of corneal allografts were examined using hematoxylin-eosin (H-E) staining. The corneal grafts were isolated at 2 weeks after keratoplasty, and used to determine the levels of autophagy-related protein and interleukin-1β in cornea by Western Blot.（2）BMDMs induced by macrophage colony stimulating factor (M-SCF) were stimulated with lipopolysaccharide (LPS) and adenosine triphosphate (ATP) after pretreatment with RAPA or 3-MA, separately.Autophagy-related protein and IL-1β in macrophage lysis were examined using Western Blot, and the levels of IL-1β in supernatants were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).（3）Allogenic full-thickness corneal transplantation was performed using wild-type (WT) and NLRP3 -/-mouse as corneal recipients. The corneal rejection was observed using slit lamp, and histopathological changes were examined by H-E staining. The corneal allografts were isolated at 2 weeks after corneal transplantation. The levels of Interleukin-17 (IL-17) in corneal allografts were detected by real-time quantitative PCR, and the levels of IL-1βwere analysed using western blot.Results：（1）The mean survival times of the allografts in Allo, Allo+RAPA and Allo +3-MA were (16.83±1.21) days, (30.00±0.00) days and (12.63±3.42) days, respectively. Their statistical difference was significant (P<0.05). Compared with allografts from Allo, the corneal allografts treated with 3-MA eyedrops were rejected with obviously turbid edema and a large amount of inflammatory cells infiltrating into corneal stroma, while theIVcorneal allografts instilled with RAPA eyedrops were shown hyaline with less inflammatory cells infiltrating into corneal stroma. These results demonstrated that RAPA could inhibit corneal allograft rejection; while 3-MA promoted corneal allograft rejection. As shown by western blot, the corneal allografts treated with RAPA showed increased expression of microtubule-associated protein 1 light chain 3 (LC3)-II (membrane-bound type) and decresed expression of LC3-I (cytoplasmic type) , as well as decreased expression of p62/SQSTM1 protein (an important substrate of autophagy), suggested the elevated autophagic activity; while 3-MA treated corneal allografts showed dereased expression of LC3-II and increased expression of LC3-I, as well as increased p62/SQSTM1 protein levels, which indicated decreased autophagic activity. The results demonstrated that autophagy induced by RAPA delayed corneal allografts rejection, while inhibition of autophagy by 3-MA promoted allograft rejection. Furthermore, we also found that the cleavaged form of pro-interleukin-1β (pro-IL-1β) in RAPA treated corneal grafts was more significantly decreased than in Allo groups, while more pronouncedly elevated in 3-MA treated corneal grafts than in corneal grafts from Allo groups. This suggested that the maturation of pro-IL-1β be regulated by autophagy and involvement of IL-1β in the pathogenesis of corneal allografts rejection.（2）We found that the matured form of IL-1β in RAPA pre-treated BMDMs was much more siginificantly declined both in supernatants and lysis after stimulation with LPS and ATP than in BMDM without RAPA treatrment, as well as pronouncedly decreased levels of p62/SQSTM1 protein; While much more increased levels of matured IL-1βboth in supernatants and lysis were found in 3-MA pretreated BMDMs than in without pretreatment, alonged with increased levels of p62/SQSTM1 protein. The results above further improved that autophagy was involved in the maturation of IL-1β.（3）In order to evaleuate the pathogical roles of IL-1β implicated in corneal allografts rejection, NLRP3-/- mice were used as corneal recipients to perform keratoplasty. Compared with WT mice, the mean survival time of corneal grafts in NLRP3 -/- mice was more siginificantly prolonged，with less inflammatory infiltration and decreased production of pro-inflammatory factors, interleukin-17 (IL-17). Moreover, western blot analysis also found the more siginificant reduction of IL-1β protein in cornea of NLRP3 -/- mice than in WT mouse, which was recorrespondance with levels of IL-1β in RAPA treated coreal allografts. The supplement of IL-1βwith biological acitivity through subconjunctival injectionVpromted the allografts rejection in NLRP3 -/- mice. Based on the above results, we suggested that NLRP3 can be involved in corneal allografts immune rejection by affecting the maturation of IL-1β.Conclusion：1. Induction of autophagy can inhibit corneal allograft rejection, and prolong the corneal graft survival; while inhibition of autophagy can promote allogrft rejection. 2. Autophagy involves in the pathogenesis of the corneal allograft rejection through regulating the maturation of IL-1β induced by NLRP3 inflammasome.Graduate student: Demeng Xiang(Ophthalmology)Directed by Prof. Hua GaoKeywords：Autophagy；keratoplasty；immune rejection；interleukin-1βVI目录引言 (1)材料与方法 (3)1 实验材料 (3)1.1 实验动物 (3)1.2 实验器材 (3)1.3 实验耗材 (3)1.4 实验仪器 (4)1.5 主要溶液配制 (5)1.6 Real-time PCR 引物信息 (6)2 实验方法 (6)2.1 小鼠穿透性角膜移植模型的建立和观察 (6)2.2 Western blot 检测 (7)2.3 石蜡切片苏木素-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色 (11)2.4 小鼠骨髓巨噬细胞原代分离、培养及处理 (12)2.5 Real-time PCR (12)3 统计学分析 (14)结果 (15)1 RAPA可抑制角膜移植免疫排斥反应，3-MA可促进角膜移植免疫排斥反应 (15)2自噬可以调节促炎细胞因子IL-1β的成熟 (15)3诱导自噬可以影响巨噬细胞分泌IL-1β (16)4 NLRP3可通过影响IL-1β的成熟参与角膜移植免疫排斥反应过程 (16)讨论 (18)结论 (22)参考文献 (23)综述 (33)1综述参考文献 (37)攻读学位期间研究成果 (40)缩略词表 (41)致谢 (42)学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明 (43)2引言引言我国约有超过600万的盲人，其中角膜盲人约200万，是第二位致盲性眼病。