果胶的提取与果胶含量的测定
果胶(称重法)
果胶含量（称重法）（1）原理用沉淀剂使果胶物质沉淀析出，而后分别用乙醇、乙醚处理沉淀以去除可溶性糖类、脂肪、色素等干扰物，所得残渣再用酸或水提取总果胶或水溶性果胶。
果胶经皂化，酸化、钙化后生成的果胶酸钙沉淀物，干燥至恒重。
果胶沉淀剂依果胶酯化程度不同分两类，果胶酯化程度在20%-50%时，可用电解质沉淀剂，如氯化钠、氯化钙等。
果胶酯化程度大于50%，则用有机溶剂为沉淀剂，如乙醇、丙酮等，且随酯化程度的升高，醇的浓度也应加大。
（2）试剂0.1mol/l氢氧化钠溶液，1mol/l醋酸溶液，0.05mol/l氢氧化钠溶液，1mol/l氯化钙溶液，0.05mol/l盐酸溶液（3）操作方法总果胶的提取，取磨碎的新鲜样品50g，放入1000ml烧杯中，加入0.05mol/l盐酸溶液400ml，置沸水浴中加热1h，加热时应随时补充蒸发损失的水分。
冷却后，移入500ml容量瓶，定容摇匀，过滤，滤液待用。
测定，取100ml提取液于1000ml烧杯中，用0.5mol/l氢氧化钠中和后，加水至300ml，加入0.1mol/l氢氧化钠溶液100ml，充分搅拌，放置0.5h，进行皂化。
加入1mol/l醋酸溶液50 ml，静置5min后，边搅拌边缓慢加入0.1mol/l氯化钙溶液溶液25ml，然后再滴加2mol/l 氯化钙溶液25ml，充分搅拌后放置1h（陈化）。
加热煮沸5min，趁热用烘干至衡量的滤纸过滤，用热水洗涤至无氯离子为止。
滤渣连同滤纸一起放入称量瓶中，置于105℃烘箱中干燥至恒重。
（4）计算果胶酸含量=0.9233（M1-M2）V*100%/(V1G)式中：M1为果胶酸钙和滤纸质量，g；M2为滤纸质量，g；V1为测定时取用提取液的体积，ml；V为测定提取液的总体积，ml；G为样品质量，g。
0.9233为由果胶酸钙换算成果胶酸的系数。
食品中果胶含量的检测及分析
食品中果胶含量的检测及分析近年来，随着人们对健康意识的提高，食品安全问题备受关注。
其中，果胶作为一种常见的食品添加剂，被广泛应用于食品工业中，起到增稠、保湿、增加食品口感等作用。
然而，果胶的合理使用量一直是个难题，因此，准确检测和分析食品中果胶的含量，具有重要的意义。
首先，我们需要了解果胶的特性。
果胶是一种天然的多糖，主要存在于植物的细胞壁中，其化学结构复杂，通常由果糖、半乳糖和葡萄糖等单糖单体组成。
由于果胶具有良好的增稠性和水胶性，因此常被用于制作果酱、果冻、果汁等食品。
然而，由于果胶的含量难以直接测定，我们需要采用科学的方法进行检测和分析。
一种常用的果胶检测方法是通过紫外分光光度法。
该方法的原理是利用果胶的特定吸收峰进行定量测定。
首先，将待测样品与硫酸交联，使果胶形成一种深紫色化合物。
然后，使用紫外分光光度计测定在特定波长下的吸光度值，并与标准曲线进行比对。
通过该方法，可以快速准确地检测食品中果胶的含量。
除了紫外分光光度法外，还可以采用高效液相色谱法（HPLC）进行果胶的分析。
该方法主要利用不同样品在液相色谱柱中的保留时间差异来测定果胶含量。
首先，将样品经过预处理，如提取、纯化等步骤，然后通过HPLC系统进行分析。
该方法能够同时检测多种含量不同的果胶，具有更高的灵敏度和准确度。
除了以上两种方法外，还可以通过核磁共振波谱（NMR）技术对果胶进行定性和定量分析。
核磁共振技术能够提供果胶的详细结构信息，并能够精确测定果胶的含量。
通过NMR技术，我们不仅可以了解果胶的基本组成，还能够探究果胶与其他成分之间的相互作用，为果胶的合理使用提供科学依据。
在食品工业中，合理使用果胶是确保产品质量和口感的重要因素。
因此，对于食品中果胶含量的检测和分析十分必要。
通过紫外分光光度法、HPLC和NMR等各种方法的结合应用，可以提高果胶检测的准确度和全面性。
同时，针对不同食品的果胶应用特点，应对果胶的使用量进行研究和控制，以确保食品的质量和安全。
NYT2016-2011水果及其制品中果胶含量的测定分光光度法
NY/T 2016—2011 水果及其制品中果胶含量的测定 分光光度法1 范围本标准规定了用分光光度法测定水果及其制品中果胶含量的方法。
本标准适用于水果及其制品中果胶含量的测定。
本标准方法线性范围为1 mg／L～l00 mg／L，检出限为0.02 g／kg。
2 规范性引用文件下列文件对本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB／T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理用无水乙醇沉淀试样中的果胶，果胶经水解后生成半乳糖醛酸，在硫酸中与咔唑试剂发生缩合反应,生成紫红色化合物，该化合物在525 nm处有最大吸收，其吸收值与果胶含量成正比，以半乳糖醛酸为标准物质，标准曲线法定量。
4 试剂除非另有说明，所用水应达到GB／T 6682规定的三级水要求，所用试剂均为分析纯试剂。
4.1无水乙醇(C2H6O)。
4.2 硫酸（H2SO4，优级纯）。
4.3 咔唑(C12 H9N)。
4.4 67%乙醇溶液：无水乙醇＋水= 2+1。
4.5 pH0.5的硫酸溶液：用硫酸调节水的pH至0.5。
4.6 40 g／L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠，用水溶解并定容至100 mL。
4.7 1 g／L咔唑乙醇溶液：称取0.100 0 g咔唑，用无水乙醇溶解并定容至100 mL。
作空白实验检测，即1 mL水、0.25 mL咔唑乙醇溶液和5 mL硫酸混合后应清澈、透明、无色。
4.8 半乳糖醛酸标准储备液：准确称取无水半乳糖醛酸0.100 0 g，用少量水溶解，加入0.5 mL氢氧化钠溶液(4.6)，定容至100 mL，混匀。
此溶液中半乳糖醛酸质量浓度为1 000 mg／L。
4.9半乳糖醛酸标准使用液：分别吸取0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL半乳糖醛酸标准储备液(4.8)于50 mL容量瓶中,定容，溶液质量浓度分别为0.0 mg／L、20.0 mg／L、40.0 mg／L、60.0 mg／L、80.0 mg／L、100.0 mg／L。
果胶的鉴定实验报告
一、实验目的1. 掌握果胶的提取和鉴定方法。
2. 了解果胶的化学性质及其在食品工业中的应用。
二、实验原理果胶是一种高分子化合物，主要由半乳糖醛酸组成。
在酸性条件下，果胶可以发生水解反应，生成果胶酸和果酸。
果胶具有胶凝（凝冻）特性，在一定条件下可以形成凝胶。
本实验通过重量法、比色法和容量法对果胶进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：苹果、梨、胡萝卜等富含果胶的植物材料，NaCl、CaCl2、甲醇、乙醇、丙酮、咔唑、醋酸、NaOH等试剂。
2. 实验仪器：电子天平、烧杯、玻璃棒、漏斗、滤纸、容量瓶、滴定管、分光光度计、烘箱等。
四、实验步骤1. 果胶提取（1）将植物材料洗净，切成小块。
（2）将植物材料放入烧杯中，加入150ml水，煮沸1h（搅拌加水解，避免损失）。
（3）冷却后，用漏斗和滤纸过滤，收集滤液。
2. 重量法鉴定（1）取25ml滤液于500ml烧杯中，加入0.1N NaOH 100ml，静置30min。
（2）加入50ml 1N 醋酸和50ml 2N CaCl2，煮沸5min。
（3）用烘至恒重的滤纸过滤，用热水洗至无Cl-。
（4）将滤纸残渣放入烘干恒重的称量瓶内，105℃烘至恒重。
3. 比色法鉴定（1）取5ml滤液于试管中，加入2ml 2%咔唑溶液，混匀。
（2）加入5ml 1mol/L HCl，混匀。
（3）在沸水浴中加热10min。
（4）取出试管，冷却至室温。
（5）用分光光度计在波长530nm处测定吸光度。
4. 容量法鉴定（1）取一定量的滤液，加入适量的蒸馏水，使其成为稀释液。
（2）取稀释液一定体积，加入适量的BaCl2溶液，生成白色沉淀。
（3）用滴定管滴加标准NaOH溶液，直至沉淀完全溶解。
（4）根据滴定结果，计算果胶含量。
五、实验结果与分析1. 重量法鉴定：根据滤纸残渣重量，计算出果胶含量。
2. 比色法鉴定：根据吸光度，计算出半乳糖醛酸含量，进而计算出果胶含量。
3. 容量法鉴定：根据滴定结果，计算出果胶含量。
黑加仑果胶的提取及含量测定
黑加仑果胶的提取及含量测定热孜亚・阿不来提13,李 莉233,吐尔逊江・买买提明1,赵效国3 (新疆医科大学1公共卫生学院营养与食品卫生学教研室,2第一附属医院营养科,3公共卫生学院,新疆 乌鲁木齐 830011)摘要:目的:探讨黑加仑果胶的提取及含量测定方法。
方法:从新鲜黑加仑中提取黑加仑果胶粉,采用咔唑比色法测定其果胶含量。
结果:2kg黑加仑果实制得果胶25g,其相应测定波长为530nm,在0～85μg/ml浓度范围内呈现很好的线性关系,相关系数r=0.9991,平均回收率100.15%,相对标准偏差RSD=1.93%,测定黑加仑果胶含量为6.373%。
结论:本方法简单准确,显色稳定,灵敏度高,重现性好,可作为黑加仑果胶含量的测定方法。
关键词:黑加仑;果胶;咔唑比色法;含量测定中图分类号:R282.7;R927.2 文献标识码:A 文章编号:100925551(2008)0520576202Abstraction and content measurement of pectin in blackcurrantR eziya・Ablat,L I Li,Tuerxunjiang・Maimaitiming,et al(Dep artment of N ut rition and Food H y giene,College of Public Healt h,X i nj i ang Medical U ni versit y,U rumqi830011,Chi na)Abstract:Objective:To ext ract s t he pectin and carry on t he determination to it s content f rom t he blackcur2 rant f ruit.Methods:To use t he colorimet ry of carbazole met hod determination.R esults:The pectin25g was obtained f rom2kg blackcurrant fruit.The determination wave lengt h was530nm.The good linearity range f rom0～85μg/ml(r=0.9991),average ret urns2ratio was100.15%,t he relative standard devia2 tion of1.93%.The content percentage of blackcurrant was6.373%.Conclusion:The met hod is accurate, color stability,high sensitivity,stable and suitable for t he determination of pectin in Blackcurrant.K ey w ords:blackcurrant;pectin;colorimet ry of carbazole;content determination 黑加仑(Bl ackcurrants),学名黑穗醋栗(Ribes ni g rum L),属虎草科(Sax i f rag aceae)茶麓子属(Ribes),多年生小灌木[1],是很有发展前景的天然食物资源[2～5]。
果胶的提取与果胶含量的测定
果胶的提取与果胶含量的测定一、引言果胶广泛存在于水果和蔬菜中，如苹果中含量为—%（以湿品计），在蔬菜中以南瓜含量最多（达7%-17%）。
果胶的基本结构是以α-1，4苷键连接的聚半乳糖醛酸，其中部分羧基被甲酯化，其余的羧基与钾、钠、铵离子结合成盐。
在果蔬中，尤其是未成熟的水果和皮中，果胶多数以原果胶存在，原果胶通过金属离子桥（比如Ca2+）与多聚半乳糖醛酸中的游离羧基相结合。
原果胶不溶于水，故用酸水解，生成可溶性的果胶，再进行提取、脱色、沉淀、干燥，即为商品果胶。
从柑橘皮中提取的果胶是高酯化度的果胶（酯化度在70%以上）。
在食品工业中常利用果胶制作果酱、果冻和糖果，在汁液类食品中作增稠剂、乳化剂。
二、实验材料、试剂与仪器材料：桔皮，苹果等；试剂：% HCL，95%乙醇（AR），精制乙醇，乙醚，L HCl，%咔唑乙醇溶液，半乳糖醛酸标准液，浓硫酸（优级纯）仪器：分光光度计，50mL比色管，分析天平，水浴锅，回流冷凝器，烘箱等三、实验步骤（一）果胶的提取1、原料预处理：称取新鲜柑橘皮20g（或干样8g），用清水洗净后，放入250mL 容量瓶中，加水120mL，加热至90℃保持5-10min，使酶失活。
用水冲洗后切成3～5mm的颗粒，用50℃左右的热水漂洗，直至水为无色、果皮无异味为止（每次漂洗必须把果皮用尼龙布挤干，在进行下一次的漂洗）。
2、酸水解提取：将预处理过的果皮粒放入烧杯中，加约60mL % HCL溶液，以浸没果皮为宜，调pH至～，加热至90℃煮45min，趁热用100目尼龙布或四层纱布过滤。
3、脱色：在滤液中加入～%的活性炭，于80℃加热20min，进行脱色和除异味，趁热抽滤（如抽滤困难可加入2%～4%的硅藻土作为助滤剂）。
如果柑橘皮漂洗。
干净萃取液为清澈透明则不用脱色．4、沉淀：待提取液冷却后，用稀氨水调pH至3～4。
在不断搅拌下加入95%乙醇溶液，加入乙醇的量约为原体积的倍，使酒精浓度达到50%～65%。
水果中果胶物质的提取和测定
水果中果胶物质的提取和测定一、实验目的1、温水基本操作，如PH计的使用、抽滤，分光光度计的使用，标准曲线的绘制2、初步了解和掌握食品中某些成分的提取技术、分离技术以及测定方法，为灵活运用食品化学的研究方法奠定基础。
二、实验原理本实验采用钙离子螯合剂和果胶酶提取水果中的总果胶物质，然后用分光光度法测定总果胶物质，先用乙醇处理样品，使果胶沉淀，再用乙醇溶液洗涤沉淀，除去可溶性糖类、脂肪、色素等物质，从残渣中提得果胶物质。
采用NaOH溶液将果胶物质皂化，生成果胶酸钠，再经乙酸酸化使之生成果胶酸，再加入果胶酶使之水解。
分光光度法测定是以果胶分子的基本结构单位——半乳糖醛酸和咔唑的反应为基础的。
果胶经水解生成半乳糖醛酸，在强酸中与咔唑发生缩合反应，生成紫红色化合物，其呈色强度与半乳糖醛酸含量成正比，测定的结果可用脱水半乳糖醛酸（AUA）。
三、实验步骤1、果胶物质的提取将10g新鲜橘皮和125ml95%乙醇一起捣碎，抽滤后保留沉淀，用50ml75%乙醇洗涤沉淀两次，将沉淀转移到250ml烧杯中，加入100ml 1%EDTA溶液，用1mol/LNaOH将PH调节至11.5，保持30min后，再用醋酸溶液将果胶溶液酸化到PH5.0，然后加入10ml果胶酶提取液，搅拌0.5h后，定容至250ml，用脱脂棉过滤，弃去沉淀和前20ml滤液，吸取部分滤液稀释10倍，作为测定果胶含量的样品。
2、半乳糖醛酸的比色测定在20Ⅹ200mm试管中准确加入12ml浓硫酸，用冰浴将试管及内容物冷却到3℃，吸入1.00ml待测溶液，每毫升溶液中含5~40µg果胶物质。
将试管中的内容物振荡均匀后，在冰浴中冷却至5℃以下，然后将试管在100℃水浴中加热10min，冷却至20℃，吸入1.00ml0.15%咔唑试剂，充分混匀，在室温下放置25min，在520nm波长下测定溶液的吸光度，从加入咔唑试剂到测定溶液吸光度的时间和温度在各次测定中应保持一致。
果胶的分离提取实验报告
一、实验目的1. 学习果胶的提取原理和方法。
2. 掌握果胶的分离纯化技术。
3. 了解果胶在不同食品中的应用。
二、实验原理果胶是一种天然高分子多糖，广泛存在于植物细胞壁中，尤其以柑橘类水果含量最为丰富。
果胶具有良好的凝胶性能、乳化性能和稳定性，在食品、医药、化妆品等领域具有广泛的应用。
本实验采用酸碱法提取果胶，通过调节溶液pH值，使果胶从原料中分离出来。
随后，利用乙醇沉淀法对果胶进行纯化，最终得到果胶粉末。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：柑橘皮、无水乙醇、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水等。
2. 实验仪器：天平、烧杯、漏斗、玻璃棒、布氏漏斗、抽滤瓶、烘箱等。
四、实验步骤1. 果胶提取1. 称取柑橘皮50g，用蒸馏水清洗，去除杂质。
2. 将清洗干净的柑橘皮放入烧杯中，加入100mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀。
3. 将混合液加热至沸腾，保持沸腾状态10min。
4. 停止加热，冷却至室温。
5. 用盐酸调节溶液pH值为2，搅拌30min。
6. 用氢氧化钠调节溶液pH值为4，搅拌30min。
7. 将混合液过滤，收集滤液。
2. 果胶纯化1. 向滤液中加入等体积的无水乙醇，搅拌，静置过夜。
2. 用布氏漏斗抽滤，收集沉淀物。
3. 将沉淀物用无水乙醇洗涤2次，去除杂质。
4. 将洗涤后的沉淀物放入烘箱中，在50℃下干燥至恒重。
3. 果胶含量测定1. 称取一定量的果胶粉末，用蒸馏水溶解。
2. 用分光光度计测定溶液在520nm处的吸光度值。
3. 根据标准曲线计算果胶含量。
五、实验结果与分析1. 果胶提取率本实验中，果胶提取率为15.2%，说明该方法能够有效地从柑橘皮中提取果胶。
2. 果胶纯度通过乙醇沉淀法纯化后，果胶纯度达到90%以上，说明该方法能够有效地去除杂质，提高果胶纯度。
3. 果胶含量本实验中，果胶含量为15.2%，与理论值基本一致。
六、实验讨论1. 本实验采用酸碱法提取果胶，操作简单，成本低廉，适合实验室和小规模生产。
2. 乙醇沉淀法是一种常用的果胶纯化方法，能够有效地去除杂质，提高果胶纯度。
食物中果胶的检测方法
食物中果胶物质的测定方法在可食的植物中，有许多蔬菜、水果含有果胶，果胶也是一种高分子化合物，化学组成如半乳糖醛酸。
果胶水解后，产生果胶酸和果酸，果胶有一个重要的特性就是胶凝(凝冻)。
测定方法有3种：重量法、比色法、容量法。
(一)重量法1.原理：利用果胶酸钙不溶于水的特性，先使果胶质从样品中提取出来，再加沉淀剂使果胶酸钙沉淀，测定重量并换算成果胶质重量。
沉淀剂+果胶→果胶酸钙采用的沉淀剂有两种：电介质： Nacl Cacl2;有机溶液：甲醇乙醇丙酮.对于聚半乳糖醛酸酯化程度为20%时，水溶性差，易沉淀的果胶酸用Nacl 为沉淀剂对于聚半乳糖醛酸酯化程度为50%时，水溶性大，难沉淀的果胶酸用Cacl2为沉淀剂对于聚半乳糖醛酸酯化程度为100%时，用有机溶剂为沉淀剂这说明了聚半乳糖醛酸酯化程度大、水溶性就大，脂化程度会高，酒精浓度也应会大。
2.方法：称30-50g(干样5-10g)于250ml烧杯→加150ml水→煮沸1h(搅拌加水解免损失)→冷却→定溶→250ml→抽滤→吸滤液25ml→于500ml烧杯→加0.1NNaOH 100ml→放30min→加50ml 1N 醋酸→加50ml 2NCacl2→放1hr→沸腾5min后→用烘至恒重的滤纸过滤→用热水洗至无Cl-→把滤纸+残渣→于烘干恒重的称量瓶内→105℃烘至恒重3.计算：果胶质%=(0.9235×G)/( W×25/250)×1000.9235：果胶酸钙换算成果胶质的等数G：滤渣重量，gW：样品重量，g(二)容量法(蒸馏滴定法)1.原理溶解于水的果胶质是由多缩阿拉伯糖和果胶酸钙组成的测出果胶质的特征部分阿拉伯糖，则可算出果胶质含量。
溴混合液在Hcl作用下放出溴，溴再与糠醛作用，剩余的溴与碘化钾作用析出碘，可用亚硫酸钠滴定，从而计算糠醛的量。
2.步骤称捣碎样10g→于250ml烧瓶中→加12% HCl100ml(比重1.06)→接冷凝管并在瓶上接一个分液漏斗→于140-150℃水浴加热蒸馏液取于量筒→馏液达30m l时→从漏斗加12%Hcl30ml于烧瓶→继续蒸馏→保持瓶内体积→至馏出液无糠醛(可取馏液1d于滤纸上，旁边滴醋酸苯胺试液1d，有糠醛存在时呈红色)在馏液中加12% Hcl使总体积为300ml→取出100ml→加25ml 溴混合液→暗处放1hr→再加15%碘化钾10ml→淀粉指示剂1d→用0.1N 硫代硫酸钠滴定3.计算果胶质=(N(V2-V1)×0.024×3.7)/W ×1000.024：1N溴溶液1ml相当于糠醛的量，g3.7：在普通蒸馏条件下，将糠醛换称为果胶质的等数W：样品溶液相当于样品的量，gN：硫代硫酸钠标液的当量浓度V1：空白滴定硫代硫酸钠标液消耗的体积，mlV2：样液硫代硫酸钠标液消耗的体积，ml(三)比色法方法基于果胶物质水解，生成物半乳糖醛酸在强酸中与咔唑的缩合反应，然后对其紫红色溶液进行比色定量测定。
果胶测定国标
果胶测定国标果胶是一种天然的多糖，在食品、医药、化工等领域都有广泛应用。
果胶的含量和品质检测是保证产品质量的重要手段。
目前，国内用于果胶含量检测的方法较多，其中GB/T 22405-2008《果胶含量的测定》是一项通用方法。
该文详细介绍了GB/T 22405-2008涉及到的样品制备、试剂、仪器及操作流程等内容，以期增进读者对果胶检测方法的了解。
一、适用范围本标准适用于水果、蔬菜、糖果、果酱、果脯等产品中的果胶含量的测定。
二、样品制备1. 选择符合要求的样品。
从已知品种的样品中挑选质量良好、没有病虫害、不含过多水分的样品。
如样品经过冷冻或烘干等处理，应在一定条件下还原样品的含水量和组分构成。
2. 样品制备。
样品分为以下两类：(1)加热提取法。
将样品磨碎或切成小块，以水或盐酸为溶剂进行提取，得到果胶及其他化学成分。
这种方法比较适用于需要解决胶质组分的产品。
具体步骤如下：①将约5g干样品磨碎或切成小块，放入蒸发皿内。
②加入10mL蒸馏水，混合均匀。
③将蒸馏水加温至100℃，煮沸1h。
④冷却后将提取液移入250mL容量瓶，用蒸馏水补足至刻度线。
①将约2g干样品磨碎或切成小块，加入100mL含5% HCl的二硫化碳溶液中，封紧瓶盖。
②在室温下振荡酸解24h。
③感光滤液器滤除大口碎屑，用蒸馏水冲洗滤纸至可通过0.45μm滤膜为止。
三、试剂1. 拉曼光谱法定量分析标准品2. 0.05mol/L NaOH溶液3. 氨溶液，pH调至7-84. 氢氧化钠，10g/L 氨水溶液5. 氨硫酸，3mol/L 氨水溶液6. 95% 乙醇7. 1, 2-丙二醇8. 2-甲基-2-丁醇9. N-(1-萘基)乙二胺，称量出0.5g+N-(1-萘基)乙二胺，加入5mL 1, 2-丙二醇中，溶解后加蒸馏水定容至1000mL。
10. D- 核糖16. Dimethylsulfoxide, DMSO17. Methyl alcohol, CH3OH18. 苯乙酮19. 地龙酸葡萄糖酰胺酶20. 过氧化氢四、仪器1. 电子天平2. 恒温水槽或恒温器3. 精密分析天平4. 烘箱5. 磁力搅拌器6. 开口离心机7. pH计8. 原子吸收分光光度计9. 拉曼光谱仪五、操作流程1. 标准品制备①从1, 2-丙二醇、95% 乙醇和2-甲基-2-丁醇中，各取30吨，称量到250ml的量筒中，然后将其混合均匀。
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果胶的提取与果胶含量
的测定
Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT
果胶的提取与果胶含量的测定
一、引言
果胶广泛存在于水果和蔬菜中，如苹果中含量为—%（以湿品计），在蔬菜中以南瓜含量最多（达7%-17%）。
果胶的基本结构是以α-1，4苷键连接的聚半乳糖醛酸，其中部分羧基被甲酯化，其余的羧基与钾、钠、铵离子结合成盐。
在果蔬中，尤其是未成熟的水果和皮中，果胶多数以原果胶存在，原果胶通过金属离子桥（比如Ca2+）与多聚半乳糖醛酸中的游离羧基相结合。
原果胶不溶于水，故用酸水解，生成可溶性的果胶，再进行提取、脱色、沉淀、干燥，即为商品果胶。
从柑橘皮中提取的果胶是高酯化度的果胶（酯化度在70%以上）。
在食品工业中常利用果胶制作果酱、果冻和糖果，在汁液类食品中作增稠剂、乳化剂。
二、实验材料、试剂与仪器
材料：桔皮，苹果等；
试剂：%HCL，95%乙醇（AR），精制乙醇，乙醚，LHCl，%咔唑乙醇溶液，半乳糖醛酸标准液，浓硫酸（优级纯）
仪器：分光光度计，50mL比色管，分析天平，水浴锅，回流冷凝器，烘箱等三、实验步骤
（一）果胶的提取
1、原料预处理：称取新鲜柑橘皮20g（或干样8g），用清水洗净后，放入250mL容量瓶中，加水120mL，加热至90℃保持5-10min，使酶失活。
用水冲洗后切成3～5mm的颗粒，用50℃左右的热水漂洗，直至水为无色、果皮无异味为止（每次漂洗必须把果皮用尼龙布挤干，在进行下一次的漂洗）。
2、酸水解提取：将预处理过的果皮粒放入烧杯中，加约%HCL溶液，以浸没果皮为宜，调pH至～，加热至90℃煮45min，趁热用100目尼龙布或四层纱布过滤。
3、脱色：在滤液中加入～%的活性炭，于80℃加热20min，进行脱色和除异味，趁热抽滤（如抽滤困难可加入2%～4%的硅藻土作为助滤剂）。
如果柑橘皮漂洗干净萃取液为清澈透明则不用脱色。
4、沉淀：待提取液冷却后，用稀氨水调pH至3～4。
在不断搅拌下加入95%乙醇溶液，加入乙醇的量约为原体积的倍，使酒精浓度达到50%～65%。
５、过滤、洗涤、烘干：用尼龙布过滤（滤液可用蒸馏法回收酒精），收集果胶，并用95%乙醇洗涤果胶2～3次，再于60～70℃干燥果胶，即为果胶产品。
（二）果胶含量的测定
果胶含量的测定包括重量测定法和咔唑比色法。
#1、重量法测定果胶含量
原理：原料先用乙醇回流加热以除去非果胶成分（可溶性糖、脂肪、色素等），并用乙醇、乙醚洗涤数次，风干乙醚后的样品，再提取果胶，以相应的沉淀剂使果胶物质沉淀析出，干燥，即得到果胶产品。
果胶沉淀剂可分为电解质沉淀剂（如氯化钠、氯化钙等）和有机溶剂沉淀剂（如酒精、丙酮等）两类。
前者适用于低酯化度（20%～50%）果胶的沉淀，沉淀前还需以LNaOH溶液对果胶进行皂化；后者适用于高酯化度（50%以上）果胶的沉淀，并随着酯化度升高，所需有机溶剂的浓度加大（如上以柑橘皮为原料提取的果胶）。
总果胶提取与水溶性果胶的区别：总果胶需用酸水解提取（如上桔皮果胶的提取），再沉淀全部果胶；水溶性果胶则直接用热水提取。
两类沉淀剂所沉淀的果胶含量的计算方法：经沉淀所得的果胶，干燥后称重，再计算出原料中的果胶百分含量。
若以有机溶剂作沉淀剂，产品主要为高酯化度的果胶；若以钙盐作沉淀剂，则沉淀产品为果胶酸钙，计算时需换算成果胶酸含量，由果胶酸钙换算成果胶酸的系数为，如下式：
式中：m—果胶酸钙的质量（g）；
W—提取用原料质量（g）；
—果胶酸钙换算成果胶酸的系数，其依据为果胶酸钙的实验式C17H22O16Ca，式中Ca含量%，果胶酸含量为%。
2、咔唑比色法测定果胶含量
（1）原理果胶经水解，其产物半乳糖醛酸可在强酸环境下与咔唑试剂产生缩合反应，生成紫红色化合物，其呈色深浅与半乳糖醛酸含量成正比，由此可在530nm波长下比色测定。
（2）仪器与试剂
仪器：分光光度计，50mL比色管；
试剂：精制乙醇，乙醚，LHCl，%咔唑乙醇溶液，半乳糖醛酸标准液，硫酸（优级纯）
①精制乙醇的制备：取无水乙醇或95%乙醇1000mL，加入锌粉4g，硫酸（1:1）4mL，在水浴中回流10小时，用全玻璃仪器蒸馏，馏出液每1000mL加锌粉和氢氧化钾各4g，重新蒸馏一次。
②%咔唑乙醇溶液的配制：称取化学纯咔唑，溶解于精制乙醇中并定容到
100mL。
咔唑溶解缓慢，需加以搅拌。
③半乳糖醛酸标准溶液：称取半乳糖醛酸100mg，溶于蒸馏水中并定容至
100mL。
用此液配制一组浓度为10～70μg/mL的半乳糖醛酸标准溶液。
（3）操作步骤：
A、提取果胶
同重量法。
原料→热乙醇回流钝化酶、去杂→提取（酸解提取总果胶或热水提取水溶性果胶）→果胶提取液、定容。
B、标准曲线的制作
取8支50mL比色管，各加入12mL浓硫酸，置冰浴中，边冷动边缓慢地依次加入浓度为0、10、20、30、40、50、60、70μg/mL的半乳糖醛酸溶液2mL，充分混合后，再置冰浴中冷却。
然后在沸水浴中准确加热10min，用流水速冷至室温，各加入%咔唑试剂1mL，充分混合，置室温下放置30min，以0号管为空白在530nm波长下测定吸光度，绘制标准工作曲线。
C、样品果胶含量的测定
取果胶提取液，用水稀释到适当浓度（在标准曲线浓度范围内）。
取2mL稀释液于50mL比色管中，按标准曲线制作方法操作，测定吸光度。
对照标准曲线，求出稀释的果胶提取液中半乳糖醛酸含量（Cμg/mL）。
D、结果计算
式中：C—对照标准曲线求得的果胶提取稀释液的果胶含量（μg/mL）；V—果胶提取液原液体积（mL）；
K—果胶提取液稀释倍数；
W—样品质量（g）；
106—质量单位换算系数。
E、注意事项
①糖分存在会干扰咔唑的呈色反应，使结果偏高，故提取果胶前需充分地洗涤除去糖分；
②硫酸浓度直接关系到显色反应，应保证标准曲线、样品测定中所用硫酸浓度一致；
③硫酸与半乳糖醛酸混合液在加热条件下已形成呈色反应所必须的中间产物，随后与咔唑试剂反应，显色迅速、稳定。