HIV-1病毒载量试剂1技术参数
全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)
全国艾滋病检测技术规范National Guideline for Detection of HIV/AIDS（2015年修订版）中国疾病预防控制中心二○一五年十二月前言艾滋病在我国的流行已数十年，随着感染者和临床病人的不断增加、感染人群的变化，艾滋病检测工作量逐渐加大，对监测和检测的需求也不断增加，承担艾滋病检测的实验室已遍及全国各级医疗、疾病预防控制、采供血、妇幼保健机构，出入境检验检疫、军队等各个系统。
为了尽早发现HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨询、治疗，同时为适应基层艾滋病检测工作需求，在新的形势下，根据《关于艾滋病抗病毒治疗管理工作的意见》、《中国预防与控制艾滋病中长期规划（1998—2010年）》、《中国遏制与防治艾滋病十二五行动计划的通知（国办发[2012]4号）》、“四免一关怀”等国家艾滋病防治重要方针政策和十三五防治工作重点，在广泛征求各省、市疾病预防控制机构和医疗机构意见的基础上，在中华人民共和国卫生和计划生育委员会艾滋病专家及省级专家的参与下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心对《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》进行修改、增补和完善，制定出《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需求，又能体现检测技术的发展。
本次《规范》修订工作立足于我国目前检测状况，结合发达国家使用的指南，主要对以下几个方面内容进行了修改、增补和完善：（1）完善了不同的检测策略，并将其整合为独立的一章；（2）增加了HIV-1新发感染检测一章；（3）新增补充试验概念,其内容包括抗体确证试验（WB，RIBA/LIA等）和核酸试验（定性和定量试验）；（4）增加了第4代试剂（抗原抗体联合检测试剂）的检测流程；(5)增加核酸检测流程；(6)完善了检测报告。
将抗体筛查和复检报告整合为 HIV抗体筛查检测报告，增加HIV-1核酸检测报告和婴儿艾滋病感染早期诊断检测报告，取消了流行病检测HIV抗体检测报告单、艾滋病病毒抗体检测数和阳性人数统计报表、艾滋病职业暴露个案登记表和艾滋病防治工作人员职业暴露事故汇总表；（7）取消实验室生物安全一章和艾滋病检测实验室质量管理一章。
国产全自动hiv-1核酸定量检测试剂盒的性能评价
剂盒相当的国产试剂盒迫在眉睫[8]。目前，国内 已有厂商自主研发了一些HIV-1核酸定量检测试 剂盒，并用于临床检测，但准确性、敏感性尚 不明确。本研究拟对国产全自动HIV核酸检测试 剂的主要性能进行评估，并与进口试剂进行比 对，探讨其临床应用的可行性。 1 材料和方法 1.1 样本
收集巴中市疾病预防控制中心2018年2—5 月210例临床样本，其中男127例、女83例，年 龄15～68岁。感染HIV-1的样本190例，非HIV-1 感染样本20例。所有样本均采用乙二胺四乙酸 二钾抗凝， 1 000×g离心15 min，吸取上层血浆 待测。所有样本均无重度溶血、变质及反复冻 融等情况。 1.2 仪器与试剂
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检验医学 2020 年 2 月第 35 卷第 2 期 Laboratory Medicine，February 2020，Vol. 35，No. 2
自东北制药集团辽宁生物医药有限公司。cobas AmpliPrep/cobas Taq-Man全自动核酸提取纯化 及实时荧光定量PCR检测系统购自瑞士罗氏公 司。待测试剂为NEPG全自动HIV-1核酸定量检 测试剂盒（简称国产NEPG HIV-1试剂，批号
2018001），购自东北制药集团辽宁生物医药 有限公司。参比试剂为cobas AmpliPrep cobas TaqMan HIV-1 Test v2.0试剂盒（简称进口HIV-1 试剂，批号Y06193），购自瑞士Roche公司。2 种试剂盒的技术参数见表1。
表1 国产NEPG HIV-1试剂和进口HIV-1试剂的技术参数
核酸提取方法 纳米磁珠法
纳米磁珠法
定量原理 内标定量
外标定量
1.3 方法 1.3.1 准确性 将灵敏度/定量参考品用参 考品稀释液稀释成低（5.0×102 IU/mL）、中 （5.0×103 IU/mL）、高（5.0×104 IU/mL）3个 浓度，采用国产NEPG HIV-1试剂检测，每个浓 度重复检测3次，计算均值。将检测结果用lg函 数转换成对数值。绝对偏差=测定结果均值的对 数值-预期值的对数值。根据我国医药行业标准 YY/T 1182—2010中的要求，绝对偏差≤±0.5个 对数数量级为符合要求。 1.3.2 灵敏度 将灵敏度/定量参考品用参考品 稀释液稀释至200、100、50、25 IU/mL，采用 国产NEPG HIV-1试剂检测，每个浓度重复检测3 次，计算可检出浓度。 1.3.3 对照试验 分别采用待测试剂和参比试 剂双盲检测同份一血浆样本，评价2种试剂的符 合率和一致性。待测试剂的定性结果判断：如 果扩增曲线不呈现S型曲线或循环阈值（cycle threshold，Ct）为0，同时内标检测为阳性，报 告为HIV-1 RNA阴性；除此之外，其他情况加上 内标检测为阳性均判定为HIV-1 RNA阳性。 1.3.4 单位换算 根据基于核酸技术的HIV-1 RNA世界卫生组织第1代国际标准品（NIBSC 97/656）[9]，1拷贝/mL相当于1.67 IU/mL。 1.4 统计学方法
Abbott雅培RealTimeHIV-1病毒载量检测试剂
Abbott雅培RealTimeHIV-1病毒载量检测试剂
包2-病毒载量试剂（雅培）
Abbott雅培RealTi m e HIV-1病毒载量检测试剂技术规格
1．检测项目：HIV-1病毒载量检测
1.1检测亚型：HIV-1型M组(A-H)、O组、N组
1.2检测方法：应用RT-PCR和Real-time实时荧光定量检测技术HIV-1型各组
病毒载量
1.3 检测平台：m2000sp或m24sp自动核酸提取仪或手工核酸提取，m2000rt实
时荧光定量PCR仪
2．定量方式：外部标准品定量
3．技术要求
3.1检测灵敏度: 40 copies/ml（0.6ml、1.0ml样本体积）
3.2特异性：100% ( 95%CI 99.28-100% )
3.3检测范围: 40-10,000,000 copies/ml
3.4检测样本: 血浆(ACD-A、EDTA抗凝)、干血斑
3.5检测样本体积: 可选0.2ml、0.5ml、0.6ml和1.0ml
3.6检测报告单位: copies/ml、log copies/ml、IU/ml、log IU/ml
3.7检测方式: 96孔PCR板
3.8 检测批量：一次检测批量可选24，48，72和96
3.9 内测标准差(SD): ≤0.25 log copies/ml
3.10 内标：添加于裂解液中，与样本一起提取和扩增，质控整个实验流程
3.11 执行标准：VQA和WHO第一届国际HIV-1 RNA定量标准
3.12供货计划：按用户要求数量分批次供货，到货试剂有效期大于10个月。
两种仪器定量检测HIV-1病毒载量比较研究
两种仪器定量检测HIV-1病毒载量比较研究李丽华;余婷婷;丁彩梅;张润武;杨冬梅;王红英;白经;普冬【摘要】目的比较雅培m2000和罗氏AmpliPrep/TaqMan两种全自动分析系统定量检测人类免疫缺陷病毒(HIV)-1病毒载量的一致性,为临床选择高精度检测方法提供参考.方法对30例艾滋病患者血浆标本同时采用雅培m2000全自动分析系统和罗氏AmpliPrep/TaqMan全自动分析仪进行病毒载量测定,比较二者检出率、相关性和一致性.结果雅培m2000全自动分析系统和罗氏AmpliPrep/TaqMan全自动分析仪测得HIV-1病毒载量平均值分别为(2.990±0.284)log copy/mL和(3.100±0.244)log copy/mL,差异无统计学意义(t=1.446,P>0.05);两种检测系统检测出的病毒载量有明显相关性(r=0.968,P<0.001),且与患者的CD4+T细胞数及CD4+/CD8+呈明显直线负相关.结论雅培m2000全自动分析系统和罗氏AmpliPrep/TaqMan全自动分析仪检测HIV-1病毒载量具有较好的相关性和一致性,在实际工作中,均可作为高精度检测HIV-1的可靠方法.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2018(015)024【总页数】4页(P3678-3681)【关键词】HIV病毒载量;雅培m2000全自动分析系统;罗氏AmpliPrep/TaqMan 全自动分析仪;高精度【作者】李丽华;余婷婷;丁彩梅;张润武;杨冬梅;王红英;白经;普冬【作者单位】云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041【正文语种】中文【中图分类】R33随着艾滋病(AIDS)防治工作的不断强化，AIDS实验室检测技术也在不断发展，根据《艾滋病资料手册》规定[1]，接受治疗的AIDS患者必须定期检测病毒载量，人类免疫缺陷病毒(HIV)载量检测被认为是目前预示疾病演变、提示开始临床治疗和评估疗效的有效指征[2]。
凯杰HIV说明书
1. 结果分析条件设定 阈值(threshold)设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照曲线(无规
则的噪音线）的最高点为准。 基线（baseline）应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比
较稳定的一段区域(所有样本荧光信号无较大波动)，起始点（循环 数）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（循环数）应比 最早出现指数扩增的样本 Ct 值减少 1-2 个循环。 【注】具体设置方法请参照各仪器使用说明书。 2. 质控标准 2.1 将校准品 1-4 的浓度值输入，仪器将自动以定量标准品的浓度值为 横坐标，以其实际测得的外标 Ct 值为纵坐标给出标准曲线，标准曲 线的拟和度的绝对值应大于等于 0.980，否则视为定量结果无效。 2.2 阴性对照 HIV RNA 应为 0.0IU/ml(Ct 值应无数值显示)； 强阳性对照 Ct 值≤25.0； 强阳性对照 Ct 值≤临界阳性对照 Ct 值≤30.0； 否则此次实验视为无效。所有实验从样本处理开始重做。
阳性对照+1 管阴性对照），作好标记。 1.2 在上述每一个管中加入 150μl 裂解液，然后加入待测样本和阴性对
照 50μl，强阳性对照管和临界阳性对照管中先加入强阳性对照和临 界阳性对照 25μl，然后加入阴性对照管中的血浆 25μl(切不可将二者 混合后加入)，用吸头反复吸打混匀（一份样本换用一个吸头）；再 加入 50μl 氯仿，混匀器上振荡混匀 5 秒或颠倒混匀 15 次（不宜过
靶区域是 gag 基因区域中部的一段保守区，长度 102bp。gag 基因位于
HIV-1 基因组的 5’端约 790-2292nt 处，编码核衣壳蛋白等结构蛋白。试
剂盒同时利用荧光探针(Taqman 探针和杂交双探针)检测技术，该探针能
某国产HIV-1核酸定量检测试剂盒的应用性能评估
某国产HIV-1核酸定量检测试剂盒的应用性能评估李梅;王静【摘要】Objective To evaluate the variation and stability of a new domestic nucleic acid quantitative detec-tion kit for human immunodeficiency virus type 1( HIV-1) .Methods A total of 247 blood samples were detected by both the tested kit and the contrast kit approved by SFDA ,when different results were obtained ,the sample was re-examined with HIV-1 vrral load kit producted by Rochecompany .Results The results of 233 samples from the test-ed kit and the control kit were consistant ,and 14 samples were not consistent(8 samples were proved to be positive by the tested kit but to be negative by the control kit .Another 6 samples showed that the difference of the lg values between the two kits were more than 1) .The results weren't consistent reexamined by the revcew kit were in consis-tency with the results from the tested kit .The consistency of the evaluated kit with the control kit and the reexamined ki was 100% .There was a strong overall correlation of the test results between the two methods (r=0 .976 1) .Con-clusion High qualitative consistency and strong correlation between the tested kit and the control kit were found , and the tested kit showed the same sensitivity ,accuracy and consistency with the reexamined kit .%目的：对某国产人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）的临床应用性能进行评估。
病毒载量检测方法及其意义
工效率
6.5小时48份标本
48小时192份标本
二、病毒载量检测的意义
早期诊断 婴儿的早期诊断：感染HIV的母亲所生婴儿小 于18个月时，不能按照常规检测程序进行抗体检测 来确证是否感染了HIV。这种情况下，采集婴儿不 同时间的样本进行HIV核酸检测。 也可使用集合法对采供血机构的原料血浆及 HIV抗体阴性的高危人群样品进行核酸检测，及时 发现窗口期感染者，降低“残余危险度”，预防传 播。
指导抗病毒治疗及疗效判定
通常在病毒载量达到一定水平后（如>3500050000拷贝/毫升）抗病毒治疗才显示良好的 治疗效果。治疗后通过病毒水平的检测能够 确定治疗是否有效。理想的结果是治疗24周 后，病毒水平会控制在检测线以下。
.耐药性监测
可用于HIV耐药性检测和监测。治疗后病毒载 量得不到有效控制时被认为治疗失败。引起 治疗失败的原因之一是病毒对治疗药物的敏 感性降低或不敏感，也就是产生了耐药。对 病毒载量>1000拷贝/毫升的样本进行耐药性 检测对临床医生修改治疗方案有一定的帮助。
Roche
Simens(Bayer)
RT-PCR bDNA 产物为DNA，易发生污染，不对目标进行扩增，只进 对实验室区域划分严格 行信号放大
检测
辣根过氧化物酶标记检测 探针，TMB底物显色 用样品OD值和定标物OD 值的比值计算结果，需要 稀释扩增产物，检测范围 小，并且受酶活性、底物 氧化显色的影响 每次检测12或24个标本 需要设一个阴性、一个弱 阳性和一个强阳性对照 48人份/盒 每次试验12人份分装 一旦打开试剂盒，需要在 1个月内使用完48人份， 否则试剂失效 8小时24份标本
标记的探针与该复合体杂交结合。与化学发光底物共同孵育，所产生的光强度与
包病毒载量试剂梅里艾
包4-病毒载量试剂（梅里艾）
生物梅里埃HIV病毒载量试剂技术参数
全自动技术指标
HIV病毒载量检测
生产厂家：生物梅里埃公司
品牌： NucliSens
型号： EasyQ HIV-1
原产国：荷兰
招标要求
1、用于定量检测HIV病毒载量
2、原理：实时NASBA扩增检测
3、线性范围：至少4个数量级（不需要稀释检测）
4、线性动力学范围50 - 10,000,000 IU/mL, 用国际单位/毫升(IU/mL)报告结果
5、特异性：99.7%（95%可信区间98.5-100%）
6、精密度：50 - 3,000,000 IU/mL，0.12 log，≤1,000 IU/mL，0.28 log
7、样品体积：10-2000微升
8、样品处理能力：可以同时提取24个样品中的核酸，可以同时检测48个样品
9、核酸提取速度：24个样品的核酸提取时间约40分钟，一个操作员配合一部提纯仪于8小时内能完成168个标本的提取
10、检测速度： 48个标本扩增检测时间约1小时
11、试剂盒包装规格：扩增检测试剂48人份/盒，核酸提取试剂384人份/盒
12、检测亚型：HIV-1 M组 A-J亚型
13、仪器和HIV病毒载量试剂必须通过国家食品药品监督管理局进口注册
14、供货计划：按用户要求数量分批次供货，到货试剂有效期大于10个月。
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HIV-1病毒载量试剂1技术参数
1.名称：人类免疫缺陷病毒（1型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光法）。
2.用途：用于定量检测人血浆中人类免疫缺陷病毒（1型）。
3.原理：应用实时荧光定量聚合酶链式反应原理。
4.检测项目：HIV-1RNA定量检测。
5.检测亚型：HIV-1M、O组。
6.检测方法：全自动核酸分离纯化，全自动核酸扩增和实时荧光PCR方法。
7.适用样品种类：非肝素抗凝血浆。
8.定量方式：内部标准品定量。
9.质控品：提供阴性、弱阳性、强阳性对照质控品。
10.技术要求：
a.检测灵敏度：≤20copies/ml,置信度≥95%。
b.检测范围：20-1×107copies/ml。
c.检测特异性：100%。
d.重复性：CV值≤0.3log。
e.规格:48T/盒。
f.即开即用型液体试剂。
11.试剂储存条件：2-8℃保存。
12.试剂组份：包括核酸提取、纯化、扩增和检测的全部试剂。
13.抗污染方案：采用UNG酶防止PCR产物污染。
14.样品处理能力：可以同时进行检测1-72个样品
15.备件：含完整实验过程中所需的相关耗材及洗液。
16.适用设备：适用于CobasAmpliprepCobasTaqman全自动病毒载量检测系统。
17.认证文件：中国医疗器械进口注册证等文件。
18.供货计划：按用户要求数量准时分批供货，试剂到货时有效期大于10个
月。
HIV-1病毒载量试剂2技术参数
1．名称：人类免疫缺陷病毒（HIV-1）核酸（RNA）提取及检测试剂盒
2．用途：用于定量检测人血浆中人类免疫缺陷病毒（1型）。
3．检测方法：应用RT-PCR和Real-time实时荧光定量检测技术HIV-1型各组病毒载量。
4．检测项目：HIV-1RNA定量检测。
5.检测亚型：HIV-1型M组(A-H)、O组、N组。
6.适用设备：m2000sp自动核酸提取仪，m2000rt实时荧光定量PCR仪; 7．定量方式：外部标准品定量
8．技术要求
8.1检测灵敏度:≤40copies/mL（0.6mL、1.0mL样本体系）
8.2特异性：100%(95%CI99.28-100%)
8.3检测范围:40-107copies/mL
8.4适用样本种类:血浆(ACD-A或EDTA抗凝)
8.5检测样本体积:可选0.2mL、0.5mL、0.6mL和1.0mL
8.6检测方式:96孔PCR反应板
8.7检测批量：一次检测批量可选24，48，72和96
8.8内测标准差(SD):≤0.25log copies/mL
8.9内参要求：与样本一起提取和扩增，质控整个实验过程;
9.认证文件：中国医疗器械进口注册证等文件。
10.供货计划：按用户要求数量准时分批供货，到货时试剂有效期大于10个月。
HIV-1病毒载量试剂3技术参数
1.名称：人类免疫缺陷病毒（HIV-1）核酸（RNA）提取及检测试剂盒
2.原理和方法：采用磁珠法提取血清或血浆样本中病毒RNA，采用Taqman探针法进行HIV-1的实时荧光定量RT-PCR检测。
3.检测项目：HIV-1RNA定量检测
4.检测亚型：HIV-1M组A，B，C，D，AE，F，G，AG-GH和O组，共9个亚型
5.定量方法：外部标准品定量
6.检测灵敏度：≤50IU/mL（约28copies/mL,置信度≥95%。
）
7.线性范围：2×102-1×109IU/mL
8．特异性：100%。
9.性能指标：Ct值的变异系数＜10%，浓度变异系数＜50%
10.样品类型：血清、非肝素抗凝血浆
11.样品体积和规格：可选0.2mL、0.4mL；48T/盒
12.样品处理能力：可以同时进行检测8-96个样品
13.抗污染方案：采用UNG酶防止PCR产物污染
14.适用设备：Hamilton Microlab STAR、TECAN EVO全自动液体工作站及ABI7500荧光定量PCR仪。
15试剂组份：包括核酸提取、纯化、扩增和检测的全部试剂。
16.注册资格：须提供国食药监械（准）字号注册证。
17.供货计划：按用户要求数量准时分批供货，到货时试剂有效期大于10个月。
CD4+T检测试剂1技术参数
1）技术要求
（1）适用设备：ACEA NovoCyte流式细胞仪
（2）试剂、耗材组成
预混三色试剂：CD3FITC/CD8PE/CD4PerCP；
溶血素：100ml/800人份
质控微球：每500人份配一套
鞘液
清洗液
上样管
（3）检测线性范围
白细胞计数位于500-30000cell/μL，相关系数r不小于0.95
CD3:≥1cell/μL
CD4:≥1cell/μL
CD8：≥1cell/μL
（4）检测重复性：CV≤8.0%
2）供货计划：按用户要求数量准时分批供货，到货时试剂有效期大于18个月
3）质保期：24个月
CD4+T淋巴细胞检测试剂2技术参数
1）技术要求
（1）适用设备：Alere T淋巴细胞计数仪（Pima）（2）试剂组成
检测试剂：荧光免疫法淋巴细胞检测试剂盒
仪器质控：标准板（bead standard）
（3）检测准确性：0.96(95％可信区间0.94‐0.97)
（4）检测重复性：CV≤8.0%
2)供货计划：按用户要求数量准时分批供货
3）质保期：12个月（交货时，实际使用效期≥10个月）
4
1）技术要求
（1）适用设备：BD FACSCount流式细胞仪器
（2）试剂盒、耗材组成:
预配双色试剂组合CD4/CD3,CD8/CD3
固定液
零、低、中、高质控微球：每300人份配一套
鞘液
（3）检测线性范围：CD4:1‐2000cell/μL
（4）检测重复性：CV≤8.0%,
2)供货计划：按用户要求数量准时分批供货
3）质保期：12个月（交货时，实际使用效期≥18个月）
4
1）技术要求
（1）适用设备：Beckman Navious流式细胞仪
（2）试剂、耗材组成
预配三色试剂CD4/CD8/CD3
裂解液
绝对计数微球
仪器标准荧光微球
鞘液
上样管
（3）检测线性范围
CD3:≥1cell/μL
CD4:≥1cell/μL
CD8：≥1cell/μL
（4）检测重复性
CV≤8.0%
2)供货计划：按用户要求数量准时分批供货
3）质保期：12个月（交货时，实际使用效期≥10个月）
4
1）技术要求
（1）适用设备：迈瑞BriCyte E6流式细胞仪
（2）试剂组成:
四色试剂CD45/CD4/CD8/CD3（体积法）
溶血剂：100ml/800人份
硬质上样管
清洗液
鞘液
流式多色质控微球
（3）检测线性范围
淋巴细胞浓度25～23.5×103cells/μL
CD3:≥32cell/μL
CD4:≥6cell/μL
CD8：≥12cell/μL
（4）检测重复性：CV≤8.0%
2)供货计划：按用户要求数量准时分批供货
3）质保期：18个月（交货时，实际使用效期≥12个月）
4
1）技术要求
（1）适用设备：BD FACSCalibur流式细胞仪
（2）试剂、耗材组成
预配三色试剂CD4/CD8/CD3
预配四色试剂CD4/CD8/CD3/CD45
绝对计数管（含荧光微球）
溶血素：100ml/800人份
鞘液
清洗液
仪器校准微球：每500人份配一套（含APC）
（3）检测线性范围
CD3:≥1cell/μL
CD4:≥1cell/μL
CD8：≥1cell/μL
（4）检测重复性：CV≤8.0%
2)供货计划：按用户要求数量准时分批供货
3）质保期：24个月（交货时，实际使用效期≥18个月）。