分子标记的实验原理及操作流程
分子标记——AFLP原理和操作步骤
分子标记——AFLP原理和操作步骤一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。
但AFLP是通过P CR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。
实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后PCR反应的引物结合位点。
实验中，根据需要通过选择在末端上分别填加了1～3个选择性核苷的不同引物，可以达到选择性扩增的目的。
这些选择性核苷酸使得引物能选择性地识别具有特异配对顺序的内切酶片段，进行结合，导致特异性扩增。
二、实验试剂Taq酶、EcoRI/ MseIEcoRI/ MseI接头、E+A引物M+C引物、T4DNALigaseE和M引物、琼脂、过硫酸胺、丙烯酰胺、尿素、硝酸银、甲酰胺、dNTPs、二甲苯青、冰醋酸、玻璃硅烷、50bpMark三、操作步骤（一）基因组DNA提取和纯化A、参考实验一的大量提取DNA实验方法，B、DNA的纯化：用0.8%琼脂糖凝胶（含EB0.5μg/ml）电泳检测片段大小，取出其中的1/3已提取的基因组D NA进行纯化，首先用TE缓冲液补满至总体积50ul，再等体积苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）、氯仿/异戊醇（2 4∶1）各抽提一次，离心吸上清液于Eppendorf管中，加入1/10体积的NaAC和二倍体积预冷的无水乙醇，－20℃放置2h以上，10000g离心10min，用70%的乙醇漂洗DNA沉淀2次，风干后溶于30μlTE缓冲液中，U V-2401PC（岛津）紫外分光光度计检测A260、A280值并定量，再用0.8%琼脂糖凝胶（含EB0.5μg/ml）电泳检测片段大小。
注：0.1-0.2g组织可用100ul溶液E溶，0.5g组织，溶液E可增加至300ul，此时DNA浓度大约为100ng/ul。
（二）限制性酶切及连接在0.2ml离心管中加入：模板量约为250ng，2.5μl 10×酶切缓冲液， 2.5μl 10×T4DNA连接酶切缓冲液，5U EcoRⅠ，5U MseⅠ，2U T4连接酶，50pmol MseⅠ接头（序列见表2），双蒸水补至25μl。
分子标记技术的原理和应用
分子标记技术的原理和应用1. 简介分子标记技术是一种用于标记和检测生物分子的方法。
通过在目标分子上引入特定标记物，可以实现对这些分子进行定量、定位及特异性检测。
本文将介绍分子标记技术的原理和应用。
2. 原理分子标记技术主要通过以下步骤来实现对目标分子的标记和检测：•选择标记物：标记物通常是具有特异性的分子或结构，如荧光染料、酶、金纳米颗粒等。
根据标记物的特性和应用需求，选择合适的标记物。
•引入标记物：将选定的标记物与目标分子进行结合。
这可以通过化学反应、酶促反应或物理吸附等方法实现。
•检测标记物：使用适当的检测方法，如光谱分析、电化学方法等，对标记物进行定量或定性检测。
这些方法可以根据标记物的特性和需求选择。
3. 应用分子标记技术在许多领域都有广泛的应用。
以下是一些主要的应用领域：3.1 生物医学研究•免疫组织化学：通过标记特定抗体来检测组织中的蛋白质，用于研究疾病诊断、治疗反应和组织学研究。
•分子诊断：使用分子标记技术检测体液中的特定生物分子，如DNA、RNA和蛋白质，用于早期疾病诊断和个体化治疗。
•药物研发：利用分子标记技术对药物与靶标的相互作用进行研究，加速药物研发过程。
3.2 食品安全检测•农药残留检测：使用分子标记技术检测食品中的农药残留物，保证食品安全。
•食品成分分析：通过标记特定分子，检测食品中的成分和添加物。
3.3 环境监测•水质检测：使用分子标记技术检测水中的有害物质和污染物，保护环境和人类健康。
•大气污染监测：通过标记特定分子，检测大气中的污染物，评估空气质量。
3.4 基因组学研究•基因定位：使用分子标记技术对基因组中特定序列进行定位和研究。
•基因表达分析：通过标记RNA或蛋白质，研究基因在各个组织中的表达情况。
4. 总结分子标记技术以其高灵敏度、高特异性和高可视性等优势，在生物医学研究、食品安全检测、环境监测和基因组学研究等领域具有广泛的应用前景。
随着技术的不断发展和创新，相信分子标记技术将在未来发挥更大的作用，并为各个领域的研究和应用带来更多的突破。
ssr分子标记原理
ssr分子标记原理SSR分子标记原理引言：SSR分子标记（SSR molecular tagging）是一种用于分析和鉴定生物体内特定分子的技术。
它基于分子生物学和生物化学的原理，通过特定的标记物，可以在细胞、组织或体液中准确地检测和定位目标分子。
本文将介绍SSR分子标记的原理及其在科研和医学领域的应用。
一、SSR分子标记的原理SSR分子标记是一种基于DNA序列多态性的分子标记技术。
它利用了DNA序列中的简单重复序列（simple sequence repeat, SSR），即由1-6个碱基重复组成的核酸序列。
SSR序列在基因组中广泛存在，具有高度变异性和遗传稳定性，因此可以作为DNA分子标记的候选序列。
SSR分子标记的原理可以简单概括为以下几个步骤：1. DNA提取：从样品（如细胞、组织或体液）中提取总DNA。
2. SSR标记物设计：根据目标分子的序列信息，设计特异性引物，引物的两端分别包含互补的SSR序列。
3. PCR扩增：利用PCR技术，使用设计好的引物对DNA进行扩增，扩增产物中包含了目标分子的序列和SSR序列。
4. 电泳分析：将PCR扩增产物进行电泳分析，根据SSR序列的长度变异性，可以将不同样品中的目标分子进行定性和定量分析。
二、SSR分子标记的应用SSR分子标记技术在科研和医学领域具有广泛的应用价值，以下是几个典型的应用案例：1. 遗传多样性研究：SSR分子标记可以用于研究不同物种或不同个体间的遗传多样性。
通过对多个基因座进行SSR分子标记，可以获得物种或个体的遗传背景信息，进而推断种群结构、基因流动和进化关系等。
2. 基因定位和图谱构建：SSR分子标记可以用于构建遗传图谱，帮助研究人员定位和克隆感兴趣的基因。
通过SSR标记物在遗传图谱上的位置，可以确定目标基因的大致区域，为后续的克隆工作提供有力的指导。
3. 疾病诊断和预后评估：SSR分子标记在医学诊断中的应用也日益广泛。
通过对特定基因的SSR序列进行分子标记，可以检测和鉴定与疾病相关的突变或多态性。
dna分子标记技术概述
DNA分子标记技术概述1. 引言DNA分子标记技术是现代生物学和医学领域中非常重要的一项技术。
它可以通过特定的标记方法，在DNA分子上进行特异性地标记，从而实现对DNA序列的检测、定位和分析。
本文将对DNA分子标记技术进行全面、详细、完整和深入地探讨。
2. DNA分子标记技术的原理2.1 标记物选择在进行DNA分子标记之前，需要选择合适的标记物。
常用的DNA分子标记物包括荧光染料、辣根过氧化物酶标记物、生物素标记物等。
这些标记物具有不同的优势和适用范围，可以根据具体实验需求来选择合适的标记物。
2.2 标记方法DNA分子标记方法有多种，常用的包括直接标记法和间接标记法。
直接标记法是将标记物直接连接到DNA分子上，常用于荧光标记。
间接标记法是通过先引入标记物、再进行特定的反应来实现标记，常用于酶标记和生物素标记等。
2.3 标记效率和准确性DNA分子标记技术的效率和准确性是衡量其优劣的重要指标。
高效率和准确性可以保证实验结果的可靠性和准确性。
因此，在选择标记物和标记方法时，需要考虑到其标记效率和准确性，以及对实验结果的影响。
3. DNA分子标记技术的应用领域3.1 DNA测序和基因组学研究DNA分子标记技术在DNA测序和基因组学研究中有广泛的应用。
通过标记技术，可以对DNA序列进行检测和定位，从而实现对基因组的研究和分析。
3.2 分子诊断和疾病检测DNA分子标记技术在分子诊断和疾病检测中起到关键作用。
通过标记技术，可以检测和分析与疾病相关的基因或基因突变，从而实现早期诊断和治疗。
3.3 人类遗传学研究DNA分子标记技术对人类遗传学研究具有重要意义。
通过标记技术，可以进行人类遗传多样性和遗传变异的研究，为疾病发生机制和个体差异提供重要的参考和依据。
3.4 动植物遗传改良DNA分子标记技术在动植物遗传改良中有广泛应用。
通过标记技术，可以进行动植物基因分型和基因定位，为遗传改良工作提供重要的科学依据和技术支持。
分子标记技术原理方法及应用
分子标记技术原理方法及应用分子标记技术是一种用于检测和定位特定分子的方法。
其原理是通过将一种特殊的化学物质（标记物）与目标分子结合，然后利用标记物的性质来对目标分子进行分析和检测。
分子标记技术被广泛应用于生物医学研究、生物学检测和药物研发等领域。
常用的分子标记技术有荧光标记、酶标记和放射性标记等。
荧光标记是一种将目标分子与荧光染料结合的技术。
荧光标记的原理是通过荧光染料的特性，使得目标分子在荧光显微镜下显示出特定的荧光信号，从而对其进行定位和分析。
荧光标记可以在细胞、组织和体内进行，具有灵敏度高、分辨率高和实时监测的优点。
常见的荧光标记方法有间接免疫荧光标记、原位杂交荧光标记和荧光蛋白标记等。
荧光标记技术广泛应用于细胞定位、蛋白质相互作用研究、细胞分析和分子诊断等领域。
酶标记是一种利用酶与底物反应的方法进行分子标记。
通常，酶标记将目标分子与特定的酶（如辣根过氧化酶、碱性磷酸酶等）结合，然后通过对底物的催化作用产生显色或荧光信号。
酶标记在生物学检测中得到广泛应用，特别是在酶联免疫吸附试验（ELISA）中。
酶标记具有灵敏度高、稳定性好的特点，可以用于检测蛋白质、核酸和小分子等生物分子。
放射性标记是利用放射性同位素与目标分子结合的技术。
放射性同位素具有高灵敏度和长时间半衰期的特点，可以用于追踪和测定目标分子的存在和分布。
放射性标记技术广泛应用于细胞和分子影像学、放射性定位和药物代谢等领域。
分子标记技术在生物医学研究、生物学检测和药物研发等领域有着广泛的应用。
在生物医学研究中，分子标记技术可以用于研究细胞和分子的结构和功能，探索疾病的发生机制和药物的作用机理。
在生物学检测中，分子标记技术可以用于检测和定位特定的生物分子，如蛋白质、核酸和小分子等，从而实现对生物过程的观察和分析。
在药物研发中，分子标记技术可以用于筛选和评价药物的活性和毒性，以及研究药物的代谢和药理学特性。
总之，分子标记技术的发展和应用为生物医学研究和生物学检测提供了强大的工具，有助于我们深入理解生命的奥秘和开发有效的治疗手段。
分子标记的实验原理及操作流程
AFLP分子标记实验扩增片段长度多态性 Amplified fragment length polymorphism（AFLP 是在随机扩增多态性（RAPD和限制性片段长度多态性（RFLP技术上发展起来的DNA多态性检测技术,具有RFLP技术高重复性和RAPD技术简便快捷的特点,不需象RFLP 分析一样必须制备探针，且与RAPD标记一样对基因组多态性的检测不需要知道其基因组的序列特征，同时弥补了 RAPD技术重复性差的缺陷。
同其他以PCR为基础的标记技术相比，AFLP技术能同时检测到大量的位点和多态性标记。
此技术已经成功地用于遗传多样性研究，种质资源鉴定方面的研究，构建遗传图谱等。
其基本原理是：以PCR（聚合酶链式反应为基础,结合了 RFLP、RAPD的分子标记技术。
把DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增（在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的’接头”用与接头互补的但3-端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增,只有那些与3-端严格配对的片段才能得到扩增，再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物，用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。
一、实验材料采用青稞叶片提取总DNA实验设备1. 美国贝克曼库尔特CEQ8000毛细管电泳系统,2. 美国贝克曼库尔特台式冷冻离心机，3. 美国MJ公司PCR仪,4. 安玛西亚电泳仪等。
三、实验试剂1. 试剂:请使用高质量产品，推荐日本东洋坊TOYOBO公司的相关产品DNA提取试剂盒；EcoRI酶,Msel酶,T4连接酶试剂盒；Taq 酶,dNTP, PCR reactio n buffer;琼脂糖电泳试剂：琼脂糖，无毒GeneFinder核酸染料替代传统EB染料;超纯水（18.2M ? • cm2. 其他实验需要物品微量移液枪（一套及相应尺寸Tip头,PCR管，冰浴等。
四、实验流程1、总DNA提取使用DNA提取试剂盒提取植物基因组DNA,通过紫外分光光度计检测或用标准品跑胶检测。
分子印迹技术的原理
分子印迹技术的原理分子印迹技术（Molecular Imprinting Technology，MIT）是一种通过专门设计合成分子再加上聚合物化学方法生成特定空腔结构的方法，用于选择性识别和捕获特定目标分子的技术。
分子印迹技术的原理主要包括以下几个步骤：模板选择、功能单体选择、预聚合体形成以及模板分子的去除。
1. 模板选择：分子印迹技术的第一步是选择目标分子作为模板。
模板可以是一种有机小分子、蛋白质、胞内分子或其他化合物。
根据目标分子的性质和应用需求，选择合适的目标分子进行印迹。
模板的物化性质对印迹物的形成和识别能力具有很大影响。
2. 功能单体选择：在印迹物的选择方面，通常选择具有与目标分子相互作用的功能单体。
功能单体可以通过与目标分子之间的氢键键合、离子键作用、范德华力等非共价作用力或共价键作用来选择和固定目标分子。
3. 预聚合体形成：选择合适的功能单体后，需要将其与交联剂共聚合形成三维聚合物网络。
功能单体通过与交联剂的共聚合，在高分子聚合物中形成特定的空腔结构。
这些空腔与目标分子的大小、形状和化学特性相适应，可以使目标分子在聚合物中得到选择性的识别和捕获。
4. 模板分子的去除：在印迹物形成后，需要将模板分子从聚合物中去除，以形成分子印迹空腔。
常用的去模板方法包括溶剂洗提、酸碱水解、热解、微波辅助去模板等。
经过去模板后，留下了与模板分子形状和功能相匹配的空腔结构，实现了对目标分子的高度选择性识别。
分子印迹技术的原理主要基于分子的空间结构和相互作用力。
通过在高分子聚合物中形成与目标分子形状和性质相适应的空腔结构，可以实现对目标分子的高度选择性识别和捕获。
在识别过程中，分子印迹物与目标分子之间发生分子识别反应，通过非共价作用力或共价键作用，实现了对目标分子的特异性识别。
与其他识别方法相比，分子印迹技术具有选择性好、稳定性高、重复性好、操作简单等优点。
分子印迹技术在生命科学、分析化学、环境监测等领域具有广泛的应用。
分子标记方法
分子标记方法：AFLP原理和操作步骤AFLP原理：AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。
但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。
实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后PCR反应的引物结合位点。
实验中，根据需要通过选择在末端上分别填加了1～3个选择性核苷的不同引物，可以达到选择性扩增的目的。
这些选择性核苷酸使得引物能选择性地识别具有特异配对顺序的内切酶片段，进行结合，导致特异性扩增。
实验试剂Taq酶、EcoRI/ MseIEcoRI/ MseI接头、E+A引物M+C引物、T4DNALigaseE和M引物、琼脂、过硫酸胺、丙烯酰胺、尿素、硝酸银、甲酰胺、dNTPs、二甲苯青、冰醋酸、玻璃硅烷、50bpMark操作步骤（一）基因组DNA提取和纯化参考大量提取DNA实验方法提取基因组DNA。
DNA的纯化：用0.8%琼脂糖凝胶（含EB0.5μg/ml）电泳检测片段大小，取出其中的1/3已提取的基因组DNA进行纯化，首先用TE缓冲液补满至总体积50ul，再等体积苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）、氯仿/异戊醇（24∶1）各抽提一次，离心吸上清液于Eppendorf 管中，加入1/10体积的NaAC和二倍体积预冷的无水乙醇，－20℃放置2h以上，10000g 离心10min，用70%的乙醇漂洗DNA沉淀2次，风干后溶于30μlTE缓冲液中，UV-2401PC 紫外分光光度计检测A260、A280值并定量，再用0.8%琼脂糖凝胶（含EB0.5μg/ml）电泳检测片段大小。
注：0.1-0.2g组织可用100ul溶液E溶，0.5g组织，溶液E可增加至300ul，此时DNA 浓度大约为100ng/ul。
（二）限制性酶切及连接在0.2ml离心管中加入：模板量约为250ng，2.5μl 10×酶切缓冲液，2.5μl 10×T4DNA 连接酶切缓冲液，5U EcoRⅠ，5U MseⅠ，2U T4连接酶，50pmol MseⅠ接头，双蒸水补至25μl。
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MgCl2
1.6ul
dNTPs(2.5mM) 1.6ul
Taq 酶(1U/ul) 1ul
10×Buffer
2ul
预扩增程序：
94℃ 2min
94℃ 20s
56℃ 30s 20cycles
72℃ 2min
60℃ 30min
6、选择性扩增（20ul 体系/样品）
sample
4ul(预扩增产物稀释 20 倍)
进的荧光标记技术和毛细管电泳分离技术进行实验，扩增产物在高分辨率毛细管中电泳 分离，采用激光激发荧光采集数据，灵敏度极高，电泳结果通过软件自动统计分析并转 换成“0、1”矩阵，便于对结果进一步深入分析研究，整个电泳、数据采集和数据分析 过程由软件来控制完成，最大程度避免了人工操作造成的误差，提高了数据的可靠性。
T4 DNA Ligase
2ul(1U/ul)
10×Buffer
2ul
sample(双酶切产物)
10ul
Mse1 Adaptor
1ul
22℃ 3hrs
65℃ 10min 终止反应
EcoR1 Adaptor
1ul
ddH2O
4ul
5、预扩增（20ul 体系/样品）
sample
4ul
Primer(Mse1/EcoR1)
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Fax: +86 532 80998005
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E-ACC: 5-GACTGCGTACCAATTCACC-3
M-CAA: 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACAA-3 M-CAC: 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACAC-3 M-CAG: 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACAG-3 M-CTA: 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACTA-3 M-CAT: 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACAT-3 M-CTC: 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACTC-3 M-CTG: 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACTG-3 M-CTT: 5-GAT GAG TCC TGA GTA ACTT-3
1ul
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AFLP Core Mix
15ul
* AFLP Core Mix 配方：
ddH2O
13.8ul
一、 实验材料 采用青稞叶片提取总 DNA。
二、 实验设备 1.美国贝克曼库尔特 CEQ8000 毛细管电泳系统， 2.美国贝克曼库尔特台式冷冻离心机， 3.美国 MJ 公司 PCR 仪， 4.安玛西亚电泳仪等。
三、 实验试剂 1. 试剂：请使用高质量产品，推荐日本东洋坊 TOYOBO 公司的相关产品。
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E-AAC: 5-GACTGCGTACCAATTCAAC-3
E-ACA: 5-GACTGCGTACCAATTCACA-3
E-AGC: 5-GACTGCGTACCAATTCAGC-3
E-ACT: 5-GACTGCGTACCAATTCACT-3
E-AAG: 5-GACTGCGTACCAATTCAAG-3
四、操作步骤：
1. 在 25ul反应体系中，加入
模板DNA 1ul (30-50ng)
ISSR引物 1ul (约 5pmol)
10xPCR Buffer 2.5ul
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产物电泳数据采集在 CEQ8000 遗传分析系统上进行（图 1），得到的数据（图 2）
用第三方软件再进一步统计分析。 图 1 AFLP 分子指纹图谱
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Primer(Mse1-XXX/EcoR1-XXX) 1ul
AFLP Core Mix
15ul
选择性扩增程序：
94℃ 2min
94℃ 20s
66℃ 30s
每循环降 1℃，共 10 个循环
72℃ 2min
94℃ 20s
56℃ 30s
20 个循环
72℃ 2min
60℃ 30min
7、产物电泳检测
上样液：Loading Buffer
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Panel A: AFLP fingerprints of control maize DNA using EcoR1 primer E-AGG with eight Mse1 primers: M-CAA (1), M-CAC (2), M-CAG (3), M-CAT (4), M-CTA (5), M-CTC (6), M-CTG (7), and M-CTT (8).
DNA 提取试剂盒； EcoRI 酶,MseI 酶，T4 连接酶试剂盒； Taq 酶，dNTP, PCR reaction buffer； AFLP 引物；
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琼脂糖电泳试剂：琼脂糖，无毒 GeneFinder 核酸染料替代传统 EB 染料； 超纯水（18.2MΩ·cm） 2．其他实验需要物品 微量移液枪（一套）及相应尺寸 Tip 头,PCR 管,冰浴等。
附录 2：AFLP 传统垂直板电泳(银染法检测)介绍： 原理与方法同前，区别：1.选择性扩增引物不带荧光标记；2.电泳方法不同，采用测序
胶垂直板电泳；3.电泳结果采用银染法，比较直观，但条带的统计与分析全人工化，工作量 大，银染法灵敏度比荧光标记法要低。
示例：下图为玉米(maize)DNA 的 AFLP 图谱。
四、 实验流程
1、 总 DNA 提取
使用 DNA 提取试剂盒提取植物基因组 DNA，通过紫外分光光度计检测或用标准品跑
胶检测。一般来说，100ng 的基因组 DNA 作为反应模板是足够的。
2、 EcoR1 酶消化（20ul 体系/样品）
EcoR1
1ul (10U/ul)
10×Buffer
2ul
37℃ 2hrs
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MgCl2 2ul dNTP 2ul Taq酶 1 单位（U） 加ddH2O 至 25ul 混匀稍离心, 加一滴（约 20 ul）矿物油。 2. 在PCR仪中预变性 94℃ 2 分钟, 然后循环: 94℃ 1 分钟，45℃-68℃ 40 秒，72℃ 1-2 分钟，共 40 轮循环。 3. 循环结束后, 72℃ 10 分钟，4℃保存。 4. 取PCR产物 15ul加 3ul上样缓冲液(6x)于 1.6% 或 1.8% 琼脂糖胶上电泳, 稳压 50-100 Ｖ（电压低带型整齐， 分辨率高）。 5. 电泳结束，溴化乙锭染色 20 分钟。 6. 用凝胶成像仪观察、拍照。
其基本原理是：以PCR(聚合酶链式反应)为基础，结合了RFLP、RAPD的分子标记技术。 把DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两 端加上带有特定序列的“接头”，用与接头互补的但3-端有几个随机选择的核苷酸的引物进行 特异PCR扩增，只有那些与3-端严格配对的片段才能得到扩增)，再在有高分辨力的测序胶上 分开这些扩增产物，用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。
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一 AFLP 分子标记实验
扩增片段长度多态性Amplified fragment length polymorphism（AFLP）是在随机扩增多 态性（RAPD）和限制性片段长度多态性（RFLP）技术上发展起来的DNA 多态性检测技术， 具有RFLP技术高重复性和RAPD技术简便快捷的特点，不需象RFLP分析一样必须制备探针， 且与RAPD标记一样对基因组多态性的检测不需要知道其基因组的序列特征，同时弥补了 RAPD技术重复性差的缺陷。同其他以PCR为基础的标记技术相比，AFLP技术能同时检测到 大量的位点和多态性标记。此技术已经成功地用于遗传多样性研究，种质资源鉴定方面的研 究，构建遗传图谱等。
20ul
Size standard-600
0.2ul
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Sample
3ul(稀释 10 倍)
四、实验结果与分析 本实验使用贝克曼库尔特（BeckmanCoulter）公司 CEQ8000 遗传分析系统，运用先
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二 ISSR 分子标记的实验原理及操作流程
ISSR（inter-simple sequence repeat）标记是一种类似 RAPD，但利用包含重复序列 并在 3’或 5’锚定的单寡聚核酸引物对基因组进行扩增的标记系统，即用 SSR 引物来扩增重 复序列之间的区域。其原理具体是，ISSR 标记根据生物广泛存在 SSR 的特点，利用在生物 基因组常出现的 SSR 本身设计引物，无需预先克隆和测序。用于扩增的引物一般为 16-18 个碱基序列，由 1-4 个碱基组成的串联重复和几个非重复的锚定碱基组成，从而保证了引物 与基因组 DNA 中 SSR 的 5’或 3’末端结合，导致位于反向排列、间隔不太大的重复序列间的 基因组节段进行 PCR 扩增。