基于化学荧光测定的板蓝根抗病毒效价检测方法的建立
生物效应检定法 中药
生物效应测定法的研究进展及展望【摘要】生物效应测定法是一类应用广泛、结果真实有效的一类定量、半定量检测方法。
生物效应测定法也逐渐被各个研究领域接受，成为一个比较热门的研究技术和方法。
本文作者通过阅读大量的国内外文献资料，对生物效应测定法的内容作一简单综述，包括方法建立、分类、特点等方面，并提出展望以期待能为其他学者的研究提供一些借鉴。
关键词：生物效应测定法；方法建立；分类；特点1 前言生物效应评价法，又称生物效应检测或生物效应鉴定法。
它是以药理学为基础，生物统计为方法，运用特定的实验设计，通过药物对于生物整体、离体器官、细胞、酶或分子等所起的作用，严格控制的实验条件，通过比较对照品和供试品的生物体或离体器官与组织的特定生物效应，从而控制和评价供试品质量、活性或作用强度[1-3]。
生物效应检测法主要用于有效物质不明确、含量较低、化学结构多样的天然药物和生物制剂等，特别适用于成分复杂、结构复杂、理化方法不能测定其含量、不能反映其临床生物活性且具有多种功能相似的已知和未知活性成分药品定量或半定量测定[4]。
生物活性测定法主要包括生物效价测定法( 定量反应法) 和生物活性限值测定法( 半定量法或质反应法) ，前者在一定剂量范围内，量效关系较明显，易于量化评价。
后者多用于达到某一特定给药量的条件下，才出现某效应的评价( 如出现死亡、惊厥、凝集等) ，属于半定量或定性的范畴[5]。
一般地，优先选用生物效价测定法，不能建立生物效价测定的品种可考虑采用生物活性限值测定法，待条件成熟后可进一步研究采用生物效价测定法。
在《中国药典》2010年版“中药生物活性测定指导原则”(征求意见稿)中提到：中药的生物活性检测应优先选用生物效价测定法，不能建立生物效价测定的品种可考虑采用生物活性限值测定法。
生物效应测定法技术近年来发展的很快，在各个领域都得到了很好的应用，尤其是中药的研究领域，生物效应测定法的诞生为中药的研究者们带来了福音，本文作者主要以生物效测定法在中药研究领域的应用为例对生物效应测定法的检测方法思路、方法分类、特点、优点、等方面进行综述，并提出关于生物效应测定法在今后发展、应用方面的展望。
十味板蓝根颗粒剂抗病毒作用的实验研究
Ｃ ｉｅ ｕｎｌｆ ｒｇ ｐｌａｏ ｄ ｎｏｉ ， ｏ８Ｎ ． Ｏ ｔ ｅ２ １ ｈｎｓ Ｊ ｒａｏＤ ｕ Ａ ｐ ｃ ｉ ａ Ｍｏｉｒ ｇＶ １， ｏ ， ｃ ｂｒ ０ １ ｅｏ ｉｔｎｎ ｔｎ ． ５ ｏ
十昧板蓝根颗粒 剂抗病 毒作用的实验研究
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细胞 维持液为含有 ２ ％胎牛血清 的 Ｄ Ｍ ； ＭＥ 常规加 入
解毒 中药 ， 究 其抗 病毒 作 用可 为 临床 应用 提 供参 研
考依据 。
【 通信作者 ｌ 邱彦 ， 博士， 男， 主管药师， 研究方向： 药理学。Ｅ ｍ ｉ — ａ ｌ ｑ ｙｎ １ ９ ６ ． ｍ ｉ ａ ２ ８ ＠１３ ｏ ｕ ｃ
于 ３ Ｉ吸附 ２ｈ ７ｃ ＝ 后均弃去病毒 液 ， 分别加入 ６ 个不 同 浓度 （ ０ ０ ５ ０ ２ ０ １５ ６ 和 ３ ｇｍＬ ） １０ ， ０ ， ５ ， ２ ， ３ １ ・ 。 的十味
板 蓝根溶 液和利 巴韦林药 液 ， 每个浓度 ４ 孔 ， 个 同时 均设 溶剂对照 、 病毒对 照及正常 细胞 对照 ， ３ 置 ７℃ ， ５ Ｏ： ％Ｃ 培养 箱 中连 续培 养 ９ ， ６ｈ 每天 于倒 置 显微镜 下观察 细 胞病 变 ， 录 病变 情况 。当病毒 对 照达 到 记 “＋ ＋ 时 ， ＋ ＋ ” 判定结果 ， 如果细胞对照生长 良好 ， 加入 药物的细胞 出现 “ ＋ ” ＋ ＋ 以上病变 时 ， 可判定该 浓度 的
板蓝根的综述
板蓝根的综述目录摘要 (1)基本概要 (2)板蓝根的有效成分研究 (3)板蓝根的药理作用研究 (4)板蓝根的提取 (5)板蓝根注射液的研究 (7)板蓝根的质量分析 (8)板蓝根的临床应用 (9)板蓝根的不良反应 (10)实验设计 (10)结语 (11)参考文献 (12)致谢 (13)板蓝根的研究摘要通过相关资料，如：对板蓝根研究的关键词进行文献检索，检索出相关的研究论文、期刊，及相关的医药杂志报纸等对南北板蓝根的植物形态、性状等进行鉴别，并对板蓝根的有效成分、提取工艺、药理作用、临床应用及不良反应进行综述。
同时,通过各种实验与研究也将板蓝根注射剂应用于临床上,但不良反应颇多。
因此,应在目前的研究基础上开展相对的药理学和毒理学方面的研究，解决板蓝根注射液安全用药的相关问题。
板蓝根的质量与其生长年限、采收季节有关，通过控制相应的生长条件可得到更优质的产品。
【关键词】板蓝根、有效成分、药理作用、临床应用、不良反应。
【基本概要】1、植物名称板蓝根又分北板蓝根、南板蓝根。
2、植物的形态板蓝根科别为十字花科，在我国北方地区得到广泛的运用，习称“北扳蓝”，另一种为爵床科植物马蓝的根，在华北地区级西南大部分地区得到广泛的应用，习称“南扳蓝”。
崧蓝的形态特征如下：（1）植株特征为二年生草本，高50-130厘米，无毛。
一年生植株不高，40-80厘米；二年生者（多留种）植株较高，50-130厘米。
（2）根为直根系草本植物，根系不太发达，有分支，主根呈圆柱形，直径0.5-1.2厘米，肉质肥厚,灰黄或白色,基部光滑、无毛，多木质纤维化。
（3）茎茎直立，略有棱，上部近顶端多分枝，稍带有白粉霜。
（4）叶单叶互生，茎基部生叶，呈倒长卵形至距圆倒披针形，肥厚，呈蓝绿色，无柄，先端钝圆，基部渐窄，全缘或略有锯齿，茎生叶呈距圆状形，长6-9厘米，宽1.5-3厘米，先端钝圆，叶的基部呈耳垂形半抱与茎生，全缘或略具不明显的轮距齿样，具白粉，尖端略尖。
板蓝根的实训报告
一、实训目的1. 了解板蓝根的药用价值及其在中医药中的应用。
2. 掌握板蓝根的提取方法，提高实验室操作技能。
3. 学习板蓝根的有效成分分析，为临床用药提供参考。
二、实训环境1. 实验室：具备提取设备、分析仪器、实验药品等。
2. 实验器材：板蓝根药材、乙醇、蒸馏水、离心机、分光光度计等。
三、实训原理板蓝根是一种中药材，具有清热解毒、凉血消肿等功效。
其有效成分主要包括板蓝根苷、靛蓝、靛玉红等。
本实训采用溶剂提取法提取板蓝根中的有效成分，并利用分光光度计对提取液进行定量分析。
四、实训过程1. 板蓝根药材的预处理：将干燥的板蓝根药材粉碎，过筛，备用。
2. 提取过程：（1）称取适量板蓝根药材，置于提取瓶中。
（2）加入一定量的乙醇，搅拌均匀。
（3）将提取瓶放入超声波提取仪中，超声提取30分钟。
（4）提取液过滤，收集滤液。
3. 定量分析：（1）将提取液置于离心机中，离心分离。
（2）取适量离心后的上层清液，用分光光度计测定其在特定波长下的吸光度。
（3）根据标准曲线，计算提取液中有效成分的含量。
五、实训结果1. 板蓝根药材提取液呈蓝色，表明有效成分提取成功。
2. 经分光光度计测定，提取液中有效成分含量为0.45mg/mL。
六、实训总结1. 本实训成功提取了板蓝根中的有效成分，为板蓝根在临床用药提供了参考。
2. 在提取过程中，操作人员需注意以下几点：（1）提取瓶应密封，避免溶剂挥发。
（2）提取过程中，温度不宜过高，以免破坏有效成分。
（3）提取液过滤时，注意避免滤液浑浊。
3. 本实训提高了实验室操作技能，为今后从事中医药研究奠定了基础。
七、改进意见或建议1. 在提取过程中，可尝试不同溶剂和提取方法，以提高有效成分的提取率。
2. 在定量分析过程中，可增加检测波长，以检测更多有效成分。
3. 可结合临床用药，对提取出的有效成分进行药效研究，为临床用药提供更全面的数据支持。
通过本次实训，我们对板蓝根的提取与应用有了更深入的了解，提高了实验室操作技能，为今后从事中医药研究打下了基础。
基于生物热动力学分析的板蓝根抑菌效价检测方法的建立
板 蓝根对 金黄色 葡 萄球 菌 作 用 的生 长 代谢 热 曲线 ，
酸 二氢钾 和 磷酸氢 二 钾 等试 剂均 为分 析纯 （ 京 化 北 学 试剂 公司 ） 板蓝 根药 材 样 品均 系 原产 地 采 集 ， ； 经
版 ） 写大 纲 明确 提 出 ： 中药 的质 量标 准 要逐 步 由 编 “
单一 指标成 分定性 定 量 测定 ， 活性 有 效 成分 及 生 向
用、 经济 ” 的原则 。本 文 采 用生 物 热动 力 学 方 法 ， 以 金 黄色葡 萄球 菌为 工作 菌 ， 生 物 热 活性 检 测 角 度 从 初 步建立 了中药生 物效 价 方 法 ， 将 其 运用 于板 蓝 并 根 生物效 价检 测 ， 为更 好 地评 价 中药 质 量 提供 了新
ｍｅ ｔ ｏ ｉｌｇｃ ｌ ｏｅ ｃ ｅｅ ｔ ｎ Ｔ ｅ ｃ ａ ａ ｔｒｓ ｃ ｉｆ ｒ ｔ ｎ ｏ ｉｌｇ ｃ ｌｔ ｅ ｍｏ ｙ ａ ｃ ｒ ｓ ｎｅ ｎ ｓ ｆ ｏｏ ｉａ ｔ ｎ ｙ ｄ ｔｃｉ ． ｈ ｈ ｃ ｅ ｔ ｎ ｏｍａｉ ｆｂ ｏｏ ｉａ ｈ ｒ ｄ ｎ ｍｉ ｓ ｐ ｅ ｅ ｔｄ ａ ｂ ｐ ｏ ｒ ｉ ｉ ｏ
・ 溶 浓度 的溶液 ， ｍＬ 按药 典 管碟 法操 作 规 程进 行 操作 ， 精密 吸取 上 述各 浓 度 的板 蓝 根溶 液 ０ ３ｍ ． Ｌ， 按管碟 法操 作规 程操 作 ， 个 浓度 工 作 标 注 品溶 每 液重 复 ８次 ， 录各管碟 抑 菌圈直径 ， 以磷酸盐 缓 记 并 冲液 （ Ｈ： ． ） ｐ ７ ８ 为空 白对照 。 ６ 数据 处理 ： 用 Ｏｉｉ 计 分析 软件 进 行 运 ． 运 ｒ ｎ统 ｇ 算。板蓝根生物效价检测用 中国药典生物检定统 计软件进行统计分析。
药学毕业论文--板蓝根药理研究综述
板蓝根药理研究综述【摘要】目的对近几年来国内外板蓝根药理作用与临床应用的研究进展加以综述。
方法查阅近几年来关于板蓝根研究的国内外文献资料。
结果对板蓝根化学成分研究逐步深入，总结出板蓝根的药理作用、临床研究与不良反应三个方面。
结论板蓝根化学成分分离鉴定技术日渐完善，为进一步揭示板蓝根的药理作用与临床研究提供了科学依据。
【关键词】板蓝根药理作用综述【Abstract】Objective To summarize on advances on pharmacological activities and clinical application of Radis Isatidis of recent years. Methods Some literatures about Radis Isatidis were refered. Results Research of chemical components of Radis Isatidis was further studied. Pharmacological activities, clinical application and adverse reaction were summed up. Conclusion Identification technology of chemical components of Radis Isatidis were gradually perfecting. It’s providing scientific basis to the reveals in the pharmacological action and clinical application of Radis Isatidis.【Key words】Radix Isatidis; pharmacological activities; review板蓝根（Radis Isatidis),别名靛青根、蓝靛根、靛根,为十字花科植物菘蓝（Isatis indigotica Fort.）的干燥根。
板蓝根药理研究综述
板蓝根研究进展综述院系：生命科学学院专业：制药工程1103班姓名：孙晓可学号：20【摘要】目的：对近几年来国内外板蓝根药理作用与临床应用的研究进展加以综述。
方式：查阅近几年来关于板蓝根研究的国内外文献资料。
结果：对板蓝根化学成份研究慢慢深切，总结出板蓝根的药理作用、临床研究与不良反映三个方面。
结论：板蓝根化学成份分离鉴定技术日渐完善，为进一步揭露板蓝根的药理作用与临床研究提供了科学依据。
【关键词】板蓝根研究进展-药理作用综述【正文】板蓝根,别名靛青根、蓝靛根、靛根,为十字花科植物菘蓝的干燥根。
本品始载于《神农本草经》，具有清热解毒、凉血消瘀、利咽消肿之功效。
表面淡灰黄色或淡棕黄色,有纵皱纹及横生皮孔,并有支根或支根痕。
可见暗绿色或暗棕色轮状排列的叶柄残基和密集的疣状突起。
最近几年来,关于板蓝根的药理作用和临床应用文献较多,本文要紧综述了板蓝根的药理作用、临床应用和不良反映。
1 板蓝根的药理作用《本草纲目》记载:板蓝根主治“时气头痛,火热口疮,热病发斑,热毒下痢,喉痹、丹毒、黄疸、痄腮……”。
现代药理实验证明:板蓝根具有抗炎、抗病毒、解热和增强免疫等作用。
抗病毒作用实验说明,板蓝根对肝炎病毒(HBA及HAV)、甲型流感病毒、乙型流感病毒、腮腺炎病毒、乙型脑炎病毒、和烟草花叶病毒（TMV)均有抑制作用。
研究以为,板蓝根～ml)有必然的抗CVB3病毒及心肌细胞爱惜作用。
抗菌消炎作用实验证明,板蓝根对革兰阳性和阴性杆菌都有抑制作用;板蓝根水浸液对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草杆菌、八联球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、肺炎双球菌、流感杆菌、脑膜炎双球菌均有抑制作用。
板蓝根的抑菌有效成份为色胺酮等一些化学方式尚未说明的吲哚类衍生物,目前虽无有效的理化分析方式可用于这种抑菌活性成份的含量测定,但许帧灿应用微生物测定法可方便地对其抑菌生物活性成份进行总的评判,重复性好。
实验说明,按必然的抑菌效价方式测定板蓝根丙酮回流值,发觉1ｇ药材相当于μｇ苯唑霉素的生物效价。
药学板蓝根制作实验报告
药学板蓝根制作实验报告引言板蓝根是一种广泛应用于中药领域的植物，以其具有抗菌、抗病毒和抗炎等多种功效而受到广泛关注。
本实验旨在通过自制药学板蓝根制剂，并对其成分和药效进行研究，为深入理解板蓝根的药理作用提供实验依据。
实验方法材料准备- 板蓝根：从药店购买新鲜且质量良好的板蓝根。
- 高纯度乙醇：用于提取板蓝根的有效成分。
- 研钵和研杵：用于研磨板蓝根。
- 滤纸和漏斗：用于过滤提取液。
- 高速离心机：用于离心提取液。
- 蒸馏水：用于稀释和制剂。
制备板蓝根提取液1. 将板蓝根洗净并晾干，然后用研杵将其研磨成粗粉末状。
2. 将粉末状的板蓝根放入研钵中，加入适量的乙醇。
3. 用研杵将板蓝根和乙醇充分混合，直至得到均匀的混合物。
离心和过滤1. 将板蓝根和乙醇混合物倒入一个漏斗中，放置在一个装有滤纸的烧杯上。
2. 等待片刻，直至所有的乙醇通过滤纸流入烧杯中。
3. 将过滤液放入高速离心机，离心10-15分钟。
分离和稀释1. 将离心后的板蓝根提取液分为两层，上层为上清液。
2. 将上清液取出，并用蒸馏水稀释。
实验结果通过制备的板蓝根提取液，我们进行了以下实验，得到了如下结果：1. 成分分析：通过气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）对板蓝根提取液的成分进行了分析。
结果显示，板蓝根中含有丰富的黄酮类、多糖类和酚类等化合物。
2. 抗菌实验：使用板蓝根提取液对多种细菌进行了抗菌实验。
结果显示，板蓝根提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等常见细菌具有一定的抑菌作用。
3. 抗炎实验：使用小鼠模型进行了抗炎实验。
结果显示，给予患有急性炎症的小鼠板蓝根提取液后，其炎症症状得到显著缓解。
讨论和结论通过本实验，我们成功制备了药学板蓝根制剂，并研究了其成分和药效。
实验结果表明，板蓝根富含多种有益化合物，具有抗菌和抗炎作用。
这为深入挖掘板蓝根的药理作用提供了重要实验依据。
然而，本实验还存在一些限制，比如实验样本较少和实验时间较短等。
未来的研究可以进一步扩大样本量，并延长实验时间，以更全面地了解板蓝根的药理特性。
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法具有灵敏、快捷、可定量、重复性好等特点，是较理想的 药物体外生物活性检测方法，然而在中药的抗病毒活性筛选 和评价中还未见报道，尤其是未见将该方法按生物检定的统 计学原理设计和条件优化后用于抗病毒类中药的生物效价检 测，进而用于中药的质量控制和品质评价。
板蓝根（ＲＡＤＩＸ ＩＳＡＴｌＤＩＳ）是常用的防治感冒中药，临 床疗效可靠，文献报道其具有确切的抗流感病毒作用陪１１］， 预试验表明板蓝根具有明显的体外抑制ＮＡ作用。本文采用 化学荧光法系统考察了板蓝根的体外抑制ＮＡ作用，并以此 为基础，建立了板蓝根抗流感病毒效价检测方法作为其质量 评价方法。一方面可以提高其自身质量控制水平，另一方面 为其他药效物质不清楚中药质量的生物控制研究提供参考。
１．解放军第３０２医院全军中药研究所，北京１０００３９ ２．成都中医药大学药学院，四川成都６１００７５ ３．北京中医药大学东直门医院药学部，北京１００７００
摘要荧光测定法在化学分析和生物检测中已广泛应用，将该法引用到中药的生物效价检测中则是一种 新的尝试。而生物效价检测与药效直接相关联，是研究中药质量控制与品质评价方法的新趋势。为了建立与 抗病毒药效相关的板蓝根质量控制和评价方法，采用化学荧光测定法考察了板蓝根提取物对流感病毒神经 氨酸酶（ＮＡ）的体外抑制活性，分析了其药理作用的量效曲线变化趋势和作用规律。在此基础上并根据生物 检定的统计学原理，以“质反应平行线”法设计和优化检测条件，建立了板蓝根抗病毒生物效价荧光检测方 法。实际测试结果能够灵敏、定量表征样品间的品质差异，方法的可靠性和可重复性较好。以此作为板蓝根 质量生物控制和评价方法，能够体现中药药效特点。
近年来，化学荧光法测定流感病毒神经氨酸酶（ＮＡ）的 体外活性用以评价流感病毒的活力已被广泛采用。ＮＡ在流 感病毒的复制、感染和致病过程中起重要作用，通过抑制 ＮＡ活性，可有效地控制流感症状和疾病的传播［５“］。因此， 通过测定ＮＡ与药物作用以后活性变化，可以反映药物的抗 流感病毒活性，目前该方法已成为抗流感病毒药（包括植物 药）的体外筛选方法之一［７］。ＮＡ活性的体外化学荧光测定
万方数据
９１０
光游攀奄光谱分祈
第２９卷
·ｒａｔ，～。 ３．２板蓝根与阳性对照药量效关系比较
结果表明板蓝根量效关系曲线与阳性对照药达菲相似， 说明两者与ＮＡ的作用方式殷作用规律相近。将反应率转换 成概率单位后，对数剂量与反成函数呈直线关系，板蓝根＿燃 效越线的回归方程ｙ一８。７２５ ９＋ｌ。２１６ ９×ｌｏｇ＜Ｄ），Ｒ２— ０．９９９，说鹱该反应适会惩垒物捻定孛“质反应平行线测定” 浚遴行效价测定陆强】。 ３．３方法学考察 ３．３．１仪器精密度考察
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对燕药材
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ｌｏｇｄｏｓｅ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｆ ＮＡ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｒａｄｉｘ ｉｓａｔｉｄｉｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｃｅｓ
３．５不同产地板蓝根抗病毒效价的测定 以工作对照品为参比，按照上述效价测定和计算方法，
按上述条件，取工作对照黼配成不同浓度溶液，点样于 ９６孔板中参与酶促反应，绱泶后用ＦＬＵ（）ｓｔａｒ ＯＰＴＩＭＡ酶 标仪进行连续６次荧光扫描，计算每孑Ｌ荧光值的变异系数。 结果ＲＳＤ值在０．５％～１．５％之阔，表明仪器精密度良好。 ３．３．２重复往考察
弱一撬群瑟分５次提取，按上法与工幸＃对照晶溶滚送行 瓣魄检定，计算效价著求审阅德的变异系数。ＲｓＤ一５．７８％， 液明该方法具有较好的重复性。 ３．３．３稳定性考察
检定５拿来源扳蓝校鹃效徐，结果冤表ｌ。
Ｔａｂｌｅ １ Ｂｉｏｐｏｔｅｎｃｙ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｅａｃｈ ｓａｍｐｌｅ
Ｎｏｔｅ：＊Ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔ：ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｓｔｒａｉｇｈｔ ｌｉｎｅ Ｐ＞０．０５，ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｐａｒａｌｌｅｌ ｌｉｎｅ Ｐ＞０。０５； ▲Ｉｎｆｅｒｉｏｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｓａｍｐｌｅｓ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｒｏｕｔｉｎｅ ｍｅｔｈｏｄ（ｅｘｐｉｒｅｄ ｓａｍｐｌｅｓ，ｇｏｔ ｆｒｏｍ ｍａｒｋｅｔ）
收稿日期：２００８－０５－０２。修订日期：２００８４）８－０６
基金项目：国家杰出青年科学基金项目（３０６２５０４２）和国家“十一直”科技支撑计划课题（２００６ＢＡｌ０８８０３）资助
作者简介：李寒冰，１９７３年生，解放军第３０２医院全军中药研究所药学博士 ＊通讯联系人 ｅ－ｍａｉｌ：ｐｈａｒｒｎａｃｙ３０２｛园１２６．ｃｏｍ
Ｆｉｇ，２ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｎｏｎｒｅａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｒａｄｉｘ ｉｓａｔｉｄｉｓ ｗｉｔｈ ＮＡ
１：１３１ａｎｋ；２：Ｔｅｓｔ ｏｆ ｓａｍｐｌｅｓ；３：Ｂａｃｌ【ｇｒｏｕｎｄ ∞
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关键词化学荧光测定；抗病毒效价；板蓝根；生物测定 中图分类号：０６５７．３ 文献标识码：Ａ ＤＯＩ：１０．３９６４／ｊ．ｉｓｓｍ １０００－０５９３（２００９｝０４－０９０８－０５
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引言
将生物效价（Ｂｉｏｐｏｔｅｎｃｙ）测定方法引入到中药质量控制 和品质评价中来，是现今中药质量控制模式和方法研究的重 要发展方向［１’２］。建立和优选适宜的生物效价检测方法是中 药质量生物控制模式的关键点也是难点。当前在中药质量评 价中已应用的有益母草缩宫素生物效价检测法［３］，部分清热 解毒中药的小鼠抗炎、镇痛、解热以及毒性致死卧］等生物效 价检测方法。这些方法多是基于药物对整体或离体组织的定 性或定量药理实验，存在影响因素多、精密度相对较低、费 用高、周期长等弊端。质量控制不同于药效研究，所用方法 除了要求临床疗效相关外，更应满足定性／定量准确、灵敏 快捷、简单、重现性好等基本要求。
Ｃｏｎｅｅｎｔｒａｔｉｏｎ／（ｍｇ·ｍＬ一１）
Ｆｉｇ．３ Ｄｏｓｅ－ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｍｈｉｐ
０．１２
由图２可见药物作用组荧光强度随样品浓度的增加而递 减，而背景对照组（ＭＩ跗ＡＮＡ＋板蓝根）荧光强度并没有相 应减弱（反而略有增加，可能与样品自身含少量荧光成分有 关，在计算中予以扣除），可见板蓝根通过抑制ＮＡ的活性使 荧光性产物（７－Ｈｙｄｒｏｘｙ－４－ｍｅｔｈｙｌｃｏｕｍａｒｉｎ）生成量减少而表 现出测得荧光值下降。扣除背景荧光后，通过与空白组（未 加药物组）比较（转化成抑制率），抑制率与剂量之间是一条 长尾的“肩斜”型曲线（图３），剂量对数转换，则呈对称的“Ｓ” 型曲线，属典型的药理反应量效曲线Ｌｌ引，经计算本反应体系 中板蓝根对ＮＡ的抑制活性ＩＣｓｏ一（ｏ．９０土０．２０）ｍｇ（生药）
ｅ－ｍａｉｌ：１ｈｂ８８９９（园１６３．ｔｏｍ
万方数据
第４期
光谱学与光谱分析
为工作对照品；ＮＡ底物，４－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ－Ｎ－ａｃｅｔｙｂａ－Ｄ－ ｎｅｕｒａห้องสมุดไป่ตู้ｉｎｉｃ ａｃｉｄ（ＭＵＮＡＮＡ）Ｓｉｇｍａ公司；Ｎｐ－４０，ＦＩｕｋａ公 司；ＤＭＥＭ，ＧＩＢＣＤ公司；其余为分析纯。 １．２主要仪器
１仪器与材料
１．１药材及试剂 板蓝根药材，经解放军中药研究所肖小河研究员鉴定为
来源于十字花科（Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ）植物菘蓝Ｉｓａｔｉｓ ｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ Ｆｏｒｔ． 的干燥根；达菲胶囊（Ｏｓｅｌｔａｍｉｖｉｒ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｃａｐｓｕｌｅｓ），批号 Ｂ１２１２，Ｒｏｃｈｅ ｐｈａｒｍａ（Ｓｃｈｗｅｉｚ）公司；取板蓝根对照药材（中 国药品生物制品检定所），制成醇提取物（得率７．７０％），作
Ｕ·ｍｇ叫）。具体算法由根据“质反应的平行线测定（４·４）
法＂［１５］效价测定原理编制的计算软件完成。
３结果与讨论
２实验方法
２．１ ＮＡ体外荧光检测原理 化合物ＭＵＮＡＮＡ是ＮＡ的特异性底物，在ＮＡ作用下
的产物４ＭＵ（７一Ｈｙｄｒｏｘｙ－４－ｍｅｔｈｙｌｃｏｕｍａｒｉｎ，Ｃ４０ Ｈ８０３）在３５５ ｎｍ入射波长激发下，可以产生４６０ ｎｎｌ荧光，采用荧光检测 器测定该波长荧光强度的变化，可灵敏地反应ＮＡ活性Ｌｌ钉； 同样，如果反应体系中加入能够抑制ＮＡ活性的药物，则荧 光强度会相应减弱，从而该药物的ＮＡ抑制活性就能通过荧 光强度的变化被表征（见图１）。
ＦＬＵＯｓｔａｒ ＯＰＴＩＭＡ荧光酶标检测仪，德国ＢＭＧ公司； ９６孔荧光酶标板，美国ＣＬＬｑＴＡＲ公司。
。
１．３ ＮＡ的制备 参照文献方法［１厶１３］，对培养的ＭＤＣＫ细胞接种流感病
毒（Ａ／ＰＲ８／３４标准株），待完全感染病变后取滤除细胞的病
毒液，加ＮＰ－４０灭活，用０．２２肿滤器滤过后分装，作为
ＮＡ的原酶液，－－７０℃冻存备用。
各组样品设复孔加样。根据各组荧光值（取复孔的平均值）计
算各样品的抑制活性（２．３．１所列公式）。
２．３数据处理与效价计算
Ｉ－－嚆黼蒜耘琶㈣×１００ （１）反应抑制率（Ｄ计算公式
酶活性对照荧光一背景荧光
ｏＡ。。
（２）效价计算：ＰＴ—Ｒ·Ｐ。（Ｐ。为工作对照品的效价约定为１
３５５劬，发射波长４６０ ｎｎ－ｔ，测定温度３７℃。为便于活性比
较，同时设样品测试组（ＮＡ＋样品＋ＭＵＮＡＮＡ），背景对照 组（样品＋ＭＵＮＡＮＡ，ｂｕｆｆｅｒ补足至相同体积），酶活性对照 组（ＮＡ＋ＭＵＮＡＮＡ，反应终止后再加入同体积样品溶液）。
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓａｍｐｌｅｓ／（ｍｇ·ＩｎＬ一１）
第２９卷，第４期 ２ ０ ０ ９年４月
光谱学与光谱分析 Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｖ０１．２９，Ｎｏ．４，ｐｐ９０８—９１２ Ａｐｒｉｌ，２００９
基于化学荧光测定的板蓝根抗病毒效价检测方法的建立