临床血液学检验：实验六 抗人球,异丙醇
《重庆市医疗服务项目价格(2014年版)》(实验室诊断)
脆性试验 新鲜血液。 控品 红细胞孵育 样本类型： 2.试剂，质 渗透脆性试 新鲜血液。 控品 2.试剂，质 热溶血试验 样本类型： 新鲜血液。 2.试剂，质 冷溶血试验 样本类型： 控品 蔗糖溶血试 新鲜血液。 样本类型： 验 血清酸化溶 新鲜血液。 样本类型： 血(Ham)试 酸化甘油溶 新鲜血液。 样本类型： 控品 2.试剂，质 控品 2.试剂，质
析 血液、骨髓 控品 血液病相关 样本类型： 2.试剂，质 基因定性检 血液、骨髓 控品，校准 血液病相关 样本类型： 2.试剂，质 基因定量检 血液、骨髓 控品，校准
CACM8000 CACN8000 CACP1000 CACQ8000 CACR8000 CACS8000 CACT8000 CACU8000 CACV8000 CACW8000 CACX8000 CACY8000 CACZ8000 CADA8000
泳测定 抗碱血红蛋 新鲜血液。 样本类型： 控品 2.试剂，质 白(HbF)测 胎儿血红蛋 新鲜血液。 样本类型： 控品 2.试剂，质 白(HbF)显 样本类型： 新鲜血液。 2.试剂，质 控品 血红蛋白H 包涵体检测 新鲜血液。 控品
甘肽(GSH) 新鲜血液。 控品，校准 红细胞丙酮 样本类型： 2.试剂，质 酸激酶(PK) 新鲜血液。 控品，校准 2.试剂，质 热变性试验 样本类型： 新鲜血液。 红细胞镰变 样本类型： 控品 2.试剂，质 试验 血红蛋白 (Hb)测定 血红蛋白电 新鲜血液。 样本类型： 新鲜血液。 样本类型： 控品 2.试剂，质 控品，校准 2.试剂，质
血液、骨髓 样本类型： 2.试剂，质 CADB8000 血液、骨髓 样本类型： 控品 2.试剂，质 CADC8000 刺激因子测 血清、体液 控品，校准 CAEA-CAFP 3.贫血、 红细胞包涵 样本类型： 2.试剂 CAEA1000 溶血检验 体检查 新鲜血液。 2.试剂，质 样本类型： CAEB1000 血浆游离血 CAEC1000 CAED1000 CAEE1000 CAEF1000 CAEG1000 CAEH1000 CAEJ1000 CAEK1000 CAEL1000 CAEM1000 CAEN1000 CAEP1000 CAEQ1000 CAER1000 CAES1000 CAET1000 CAEU1000 CAEV1000 CAEW1000 CAEX1000 CAEY1000 CAEZ1000 CAFA1000 CAFB1000 CAFC1000 CAFD1000 红蛋白测定 新鲜血液。 控品 血清结合珠 样本类型： 2.试剂，质 蛋白(HP)测 新鲜血液。 高铁血红素 样本类型： 控品 2.试剂，质 白蛋白过筛 新鲜血液。 红细胞自身 样本类型： 控品，校准 2.试剂，质 溶血过筛试 红细胞自身 溶血试验及 红细胞渗透 新鲜血液。 样本类型： 新鲜血液。 样本类型： 控品，校准 2.试剂，质 控品，校准 2.试剂，质
实验诊断学之临床血液学检验
临床血液学检验Ⅰ、血液一般检验----红细胞系统一、红细胞生成起源二、红细胞及血红蛋白增多1、男：RBC>6.0×1012/L,Hb>170g/L女：RBC>5.5×1012/L,Hb>160g/L2、红细胞及血红蛋白增多的【临床意义】⑴、相对增多：血浆容量减少血液浓缩⑵、尽对增多①继发性：非造血系统疾病，要紧环节是EPO增多代偿性增加：血氧饱和度低，组织缺氧所致生理性：新生儿、高原居民病理性：慢性心肺疾病、异常血红蛋白病非代偿性增加：无血氧饱和度低和组织缺氧肿瘤和肾病所致：肾癌、肝细胞癌、卵巢癌、子宫肌瘤、肾盂积水、多囊肾等②原发性：真性红细胞增多症三、红细胞及血红蛋白减少1、贫血：男<120g/L,女<110g/L贫血程度：轻度：>90g/L中度：90-60g/L重度：60-30g/L极重度：<30g/L2、红细胞及血红蛋白减少的【临床意义】⑴、生理性减少：婴幼儿〔生长发育迅速〕，妊娠中、后期〔血容量增加，血液稀释〕，老人〔骨髓造血减少〕⑵、病理性减少①生成减少骨髓造血障碍造血干细胞异常：再障骨髓浸润：急性白血病等缘故不明或多种机制：慢性感染、肿瘤、肝病、内分泌病等伴发的贫血细胞分化和成熟障碍DNA合成障碍：巨幼细胞贫血血红蛋白合成障碍血红素合成障碍：IDA珠蛋白合成障碍：海洋性贫血②破坏过多红细胞内在缺陷〔遗传性〕：遗球、红细胞酶缺陷的溶贫、珠蛋白生成障碍性贫血、异常血红蛋白病、PNH 红细胞外在缺陷〔获得性〕：免疫性、机械性③失血急性失血慢性失血四、网织红细胞〔reticulocyte〕【定义】网织红细胞是晚幼红细胞到成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞，胞质中尚残存多少不等的核糖核酸等嗜碱性物质。
用煌焦油蓝或新亚甲蓝进行活体染色，这些嗜碱性物质被凝聚沉淀并着色，在胞浆中呈现蓝色细颗粒状，颗粒间又有细丝状联缀而构成网状结构，故称网织红细胞。
检验科实验室消毒安全规程
重用浓度为37%-40%的水溶液，亦称福尔马林。 2、适用范围 纸张、精密仪器、环境物体表面等。
3、使用方法
熏蒸处理。
（1）加热熏蒸法
（2）化学熏蒸法
（二）戊二醛
1、特性 属于高效消毒剂。 2、适用范围 和精密仪器。 3、使用方法 （1）消毒液的配制 （2）消毒处理方法 适用于不耐热的医疗器械
（三）过氧乙酸
中水平或低水平消毒方法。
④对存在较多有机物物品消毒时，应加大消毒剂的使
用浓度和延长消毒时间。
（2）采用的消毒器械和消毒剂应有卫生部卫生许可批
件，消毒产品在有效期内，应按照说明书标识的作用
浓度，作用时间和作用方法进行消毒操作。
（3）消毒灭菌设备应定期测定消毒和灭菌 效果。 4、消毒灭菌前应进行清洁 5、避免二次污染 6、减少对人的危害
三、物理消毒灭菌方法
常用的有压力蒸汽、干热、电离辐射、紫
外线、过滤除菌等。 （一）压力蒸汽灭菌
1、适用范围 适用于耐高温、高湿的医疗器械和 实验室器材物品的灭菌，预真空和脉动真空试压力 蒸汽灭菌器适用于多孔性物品的灭菌，但不适用于 液体的灭菌。
2、压力蒸汽灭菌的方法
压力蒸汽灭菌所需时间
物品种类 121℃下排气（min） 134℃预真空（min） 134℃脉动真空（min）
3、有效消毒
（1）要根据消毒对象和微生物的种类选择合适的 消毒和灭菌方法 ①对受到细菌芽孢、真菌孢子和分支杆菌污染的 物品，选用高水平消毒法或灭菌法。 ②对受到真菌、亲水病毒、螺旋体、支原体、衣 原体和病原微生物污染的物品，选用中水平以上
的消毒方法。
③对受到一般细菌和亲脂病毒等污染的物品，可选用
＊＊（七）乙醇
1、特性 属于中效消毒剂，具有速效、无毒， 对皮肤黏膜有刺激。 2、适用范围 皮肤、环境表面及医疗器械的消 毒等。 3、使用方法 浸泡法、擦拭法 4、注意事项 （1）乙醇易燃，忌明火。 （2）用于手和皮肤消毒时，对乙醇过敏者慎用。 （3）乙醇能破坏用胶镶嵌的仪器镜头。
【专家共识】中国末梢采血操作共识
【专家共识】中国末梢采血操作共识静脉血和末梢血为临床常用血液检测标本。
随着检验医学技术现代化、微量化、便捷化的不断发展和日益完善，末梢血的应用也越来越广泛。
由于儿童自主配合依从性差、血管纤细，在静脉血标本采集过程中，相比成人采血成功率低、并发症发生率更高，因此末梢血采集在儿科临床工作中占有不可或缺的地位。
与静脉血相比，末梢血影响因素较多，如采集过程操作不规范，易导致检测结果变异或不准确，因此规范末梢采血操作至关重要。
目前我国缺乏末梢采血操作的统一标准和规范，国外的相关指南又难以符合我国的实际需求。
为规范我国末梢采血操作流程，中国医师协会检验医师分会儿科疾病检验医学专家委员会和世界华人检验与病理医师协会共同制定了本共识，旨在提供中国末梢血液标本规范化采集操作的参考依据，提高末梢血标本检验质量。
本共识的适用范围1．末梢血液标本的临床应用范围：目前，末梢血主要用于全血细胞分析、血型、血糖、血沉和新生儿筛查等检验项目。
随着现代检验医学技术的发展，一些既往用血量较大的项目也建立了快速微量法，如微量元素、感染性标志物、传染性疾病的抗体以及床旁检测项目等。
此外，许多新项目还在不断开发中，末梢血的临床应用具有广阔前景。
2．本共识适用人群：本共识适用于儿科患者、特殊成人患者及其他适用于末梢血检验的受试者。
对于6岁以上的受试者可优先考虑用静脉血进行检测。
特殊成人患者包括严重烧伤患者、极度肥胖患者、具有血栓形成倾向的患者、老年患者、需要保留浅部静脉用于静脉给药治疗的患者、浅部静脉不易获得或非常脆弱的患者、需自行采血检测的患者(如糖尿病患者)、对静脉穿刺恐惧的患者以及需行床旁检测的患者。
应注意，若患者脱水或由于其他原因(如外周性水肿)导致外周循环不佳，可能无法通过皮肤穿刺采集到合格的血标本，不建议进行末梢采血检测。
术语和定义1．末梢采血(capillary blood collection)：末梢采血又称皮肤穿刺采血法，临床通常在手指或足跟特定部位穿刺，采集毛细血管血液(即末梢血)进行检验。
六氟异丙醇测试分子量方法_概述及解释说明
六氟异丙醇测试分子量方法概述及解释说明1. 引言1.1 概述六氟异丙醇是一种重要的有机化合物，具有广泛的应用领域。
在许多工业和科研领域中，准确测定六氟异丙醇的分子量对于化学过程及性质研究至关重要。
因此，开发出可靠的六氟异丙醇分子量测定方法具有重大的意义。
本文旨在对现有的三种主要六氟异丙醇分子量测定方法进行概述与解释说明，包括凝固点降低法、粘度测定法以及质谱分析法。
通过详细介绍每种方法的原理、步骤和数据处理方法，以及比较它们之间的优缺点，为研究人员提供参考与选择依据。
1.2 文章结构本文共包括五个主要部分：引言、六氟异丙醇的基本介绍、六氟异丙醇的分子量测定方法、实验步骤与数据处理方法讲解以及结果与讨论。
通过这样的结构安排，读者可以系统全面地了解到不同测定方法的原理和应用，并对其优劣进行比较和分析。
1.3 目的本文的主要目的是对六氟异丙醇分子量测定方法进行综述，介绍不同方法的实施步骤与数据处理方法，并讨论其优缺点。
通过对这些方法的详细解释，读者将能够了解如何选择适当的测定方法来获得准确可靠的六氟异丙醇分子量测定结果。
此外，本文还将对这些方法在实际应用中可能遇到的问题进行讨论，并提出未来研究的展望和建议，以推动该领域进一步发展。
以上是“1. 引言”部分内容的详细清晰撰写，请检查确认。
2. 六氟异丙醇的基本介绍2.1 化学性质六氟异丙醇，化学式为C3F6O，是一种无色液体。
它是由三氟乙酸通过脱水反应制得的，在化学结构上与环氧乙烷相似。
这种化合物具有高度的稳定性和惰性，不易被其他物质影响。
2.2 物理性质六氟异丙醇具有低粘度和低表面张力，在常温下为无色透明液体。
其密度较大，沸点较高，并且不易挥发。
此外，六氟异丙醇在水中可以溶解，并能够与一些有机溶剂混溶。
2.3 应用领域六氟异丙醇具有许多重要的应用领域。
首先它被广泛应用于实验室和工业生产中作为溶剂和反应介质。
其次，在电子行业中，该化合物常用于清洗电路板及其他电子元器件表面。
六氟异丙醇
六氟异丙醇引言六氟异丙醇（hexafluoroisopropanol，HFIP）是一种具有广泛应用的有机化合物。
它的化学式为C3HF7O，分子式为C3H2F6O。
六氟异丙醇具有许多重要的物理和化学性质，使其在许多不同领域得到广泛应用。
本文将介绍六氟异丙醇的性质、制备方法以及应用领域等内容。
性质•物理性质：六氟异丙醇是无色液体，具有特殊的酒精味道。
它的密度为1.771 g/cm^3，熔点为-54℃，沸点为59℃。
•化学性质：六氟异丙醇是一种强酸，可以贡献出氢离子。
它可以与碱反应生成盐。
此外，六氟异丙醇也具有良好的稳定性，可以在常规的实验条件下进行操作。
制备方法六氟异丙醇的制备方法有多种，以下是其中两种常用的方法：1.氢氟化钾和乙烷醛反应：先将氢氟化钾溶解在无水六氟异丙醇中，然后将乙烷醛滴加到反应容器中，并加热回流反应，最后通过减压蒸馏纯化得到目标产物。
2.六氟异丙酮脱酸：先将六氟异丙酮与浓盐酸反应，生成六氟异丙醇盐酸盐，然后通过碳酸钠中和，生成六氟异丙醇。
应用领域六氟异丙醇在许多不同的领域中具有广泛的应用，以下是其中的几个典型应用：1.溶剂：六氟异丙醇是一种优良的极性溶剂，在有机合成和分析化学领域中有广泛应用。
它可以溶解许多有机物并提供良好的溶解度。
2.表面活性剂：六氟异丙醇可以作为表面活性剂在液体的表面降低表面张力，增加液体的扩展性。
因此，它常被用作喷墨打印、涂料和油墨等领域中的添加剂。
3.催化剂：六氟异丙醇在一些有机反应中可以起到催化剂的作用。
例如，它可以与氨基酮反应，生成α-氨基酮化合物，从而用于合成药物中间体。
4.生物学研究：六氟异丙醇可以用作蛋白质和核酸的溶解剂，常被用于生物学研究中的蛋白质折叠和DNA/RNA的提取等实验。
结论六氟异丙醇是一种重要的有机化合物，具有多种特殊的物理和化学性质。
它的制备方法较为简单，广泛应用于溶剂、表面活性剂、催化剂和生物学研究等领域。
随着科学技术的不断发展，六氟异丙醇在更多领域中的应用前景也将不断拓展。
(完整word)临床分子生物学检验
绪论1.20世纪50年代，Waston和Crick提出了DNA双螺旋结构,标志着现代分子生物学的兴起。
2.从广义上来讲，应用到临床的分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物,目前，临床分子生物学检验的靶标主要以核酸(DNA或RNA）为主.第一章:核酸与分子标志物1.分子标志物：可以反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质、代谢产物等生物分子,是生物标志物的一种类型。
核酸分子标志物是分子生物学检验的主要内容，包括基因突变、DNA多态性、基因组DNA片段、RNA和循环核酸等多种形式。
2.DNA的组成：是一种高分子化合物，其基本单位是脱氧核苷酸,每个核苷酸由磷酸、脱氧核糖和含氮碱基3部分组成。
3。
DNA与RNA的区别：2位脱氢。
4。
DNA的结构：①DNA一级结构：各种核苷酸单体沿多核苷酸链排列的顺序，表明该DNA分子的化学构成。
②DNA二级结构：双螺旋结构，DNA双螺旋的直径为2nm,一圈螺旋含10个碱基对,每一圈螺距为3.4nm，每个碱基的旋转角度为36度.维持DNA结构稳定的力量主要是碱基对之间的堆积力，碱基对之间的氢键也起着重要的作用.③DNA三级结构：DNA双螺旋进一步盘曲形成的更加复杂的结构。
5.核小体的形成(真核生物染色体包装过程)：在核小体中,DNA盘绕组蛋白八聚体核心,使DNA缩短为原来的1/7；6个核小体形成螺丝管，缩短为1/6；核小体彼此相连成串珠状染色质细丝，螺旋化形成染色质纤维，进一步折叠成染色单体.6.DNA双螺旋结构的变异：右手螺旋A—DNA、C-DNA、D-DNA、E—DNA、H—DNA、L—DNA、P-DNA，左手螺旋Z —DNA7.RNA主要分为三类：tRNA、rRNA、mRNA 还有一些小型RNA：反义RNA、微小RNA（microRNA，miRNA是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA。
)8.真核mRNA与原核mRNA的区别(简答题)原核mRNA结构简单，为多顺反子,编码序列之间有间隔序列，原核生物mRNA中没有修饰碱基。
血细胞测试方法
血细胞测试方法(血细胞计数板)1 RBC测试方法小鼠尾静脉取血20ul，吹入盛有3.98ml红细胞稀释液的试管内，充分混匀，显微镜下计数。
将血细胞计数板5个中方格内的红细胞总数乘以10000，即得1mm3血液内的RBC数量。
2 TWBC测试方法取小鼠尾静脉血20ul，吹入盛有0.38ml 白细胞稀释液的试管内，充分混匀，显微镜下计数。
将血细胞计数板4个大方格内的白细胞总数乘以50，即得1mm3血液内的WBC数量。
3 PC测试方法取小鼠尾静脉血20ul，吹入盛有038ml血小板稀释液的试管内，充分混匀，显微镜下计数。
将血细胞计数板5个中方格内的血小板总数乘以1000，即得1mm3血液内的PC数量。
用自动血液分析仪应该是可以的，只是要注意采血过程中避免混入其它杂质及凝血，造成仪器堵孔！可以稀释，用生理盐水也可以用自动血液分析仪测定血细胞需要的最少容积是多少？这就要看你是什么样的仪器了，一般都在50uL以下，另外，抗凝可以考虑使用EDTA，用生理盐水应该不会影响到测定的稳定性，只是注意在测定前一定要混匀。
一般医院都有用微量血的血液分析仪，只需要用毛细吸管是20uL血。
只要注意将血打入时一定要充分和凝剂混匀，避免凝集。
一般的医院可能用的是枸橼酸钠抗凝。
你可以到医院检验科看一下，仪器是什么型号的的，现在用的什么抗凝剂并且加多少抗凝剂动物血液标本阻塞是标本采集质量问题，和动物本身的细胞没有关系。
还有现在有成品的稀释液购买，很便宜的。
采用预稀释模式，需要更少的血量，我们一般是采用20ul。
测定RBC ,WBC（TWBC）,PLT( PC) 三个指标，如果用血液分析仪测定，一般100微升就可以了，也有一些仪器采用全自动进样方式可能标本量要多些，但是最好多一点，因为抗凝剂浓度过大对细胞有影响，推荐使用EDTA-K2，终浓度2-4mg/ml，我测过一些小鼠血常规，因为血难取，经常凝固，所以采血一定要顺利，可短尾取血，取血后迅速混匀。
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抗人球蛋白试验
阳性→免疫性溶血 阴性→凝聚胺试验阳性→同种免疫
溶血、溶血性输血反应
冷热溶血试验阳性→感染,如先天梅毒
RBC
抗人球蛋白
IgG不完 全抗体
Coombs Test
步骤
• 1ml抗凝血于试管中，3000rpm/min，离心10分钟， 弃去血浆层
• 等量生理盐水洗涤红细胞，3000rpm/min，离心 10分钟，弃去上清，重复3次，第三次完全弃去 生理盐水
临床应用
• U-Hb（不稳定血红蛋白）阳性， HbF， HbH, HbE增多、α地贫、G-6PD缺陷可出现 阳性
• 早产儿脐带血阳性 ++++
• 脐带血阳性 ++~++++
• 新生儿阳性 +~+++
• 1 - 3月
(+)~(-)
• 4 - 6月
(-)~(+)
• 6月-成人
(-)
• 用生理盐水配制3%-5%的红细胞悬液:1ml的 NS+40ul的红细胞悬液
• 测定管加两滴RBC悬液+两滴coomb’s试剂，对照 管加两滴RBC悬液+两滴生理盐水，1000rpm/min 离心2分钟后，镜检看有无凝集
hemolysis
Coomb’s
+:IHA,HDN -:Ham test
+:PNH
-:脆性
HS,HE
N
Hb电泳
MHb-RT
HbC
N
G-6-PD缺乏
HbS
PK
HbF,HbA2
PK缺乏
HbH,HbBarts
异丙醇沉淀试验原理
• 异丙醇为非极性溶剂，可降低Hb分子内 部氢键
• 不稳定Hb稳定性下降，在异丙醇中更快 沉淀
操作步骤
• 取17%的异丙醇液1ml加入试管中37℃预 温10分钟
• 加入0.1ml的Hb液，混匀，计时 • 37℃水浴 • 5min，10min，15min，20min分别观察 • 5min出现浑浊， 20min内出现大块沉淀为
强阳性。
注意事项
– 异丙醇浓度及温度应严格控制，pH値不得低于7.2， 预热温度不足可致假阳性。
– Hb浓度应控制在10%，过低会形成假阴性。 – Hb液需要新鲜配制，久置可导致假阳性。 – HbF含量过高可产生假阳性。