水产品中己烯雌酚快速检测方法试验分析
HPLC法测定己烯雌酚乳膏中己烯雌酚的含量
HPLC法测定己烯雌酚乳膏中己烯雌酚的含量张建国;何婧【摘要】Objective To determine the content of diethylstilbestrol in diethylstilbestrol cream by HPLC. Methods The HPLC was used with a Hypersil ODS C18( 150 mm × 2. 5 mm,5 μm )column,the mobile phase was methyl alcohol-water( 70: 30 ),the detective wavelength was 254 nm with the flow rate of 0. 5 mL/min,the column temperature was 25 ℃ ,the injection volume was 20 μL. Results The linear range of diethylstilbestrol was 0. 013 -0. 114 mg/mL( r =0. 999 7,n =5 )and the average recovery rate was 99. 8% ,RSD =0. 25% . Conclusion The method is simple with good sensitivity and good reproducibility. It can be used for the determination of diethylstilbestrol in diethylstilbestrol cream.%目的应用高效液相色谱法测定己烯雌酚乳膏中己烯雌酚的含量.方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Hypersil O DS C18(150 mm×2.5 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(70:30);流速:0.5 mL/min;检测波长:254 nm;柱温:25 ℃;进样量:20 μL.结果己烯雌酚的线性范围为0.013～0.114 mg/mL;r=0.999 7(n=5),平均加样回收率为99.8%,RSD=0.25%.结论该法操作简便,灵敏度高,重复性好,可用于己烯雌酚乳膏中己烯雌酚的含量测定.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2012(015)010【总页数】2页(P655-656)【关键词】HPLC;己烯雌酚;己烯雌酚乳膏;含量测定【作者】张建国;何婧【作者单位】湖北医药学院附属东风医院,湖北,十堰,442008;湖北医药学院附属东风医院,湖北,十堰,442008【正文语种】中文己烯雌酚是人工合成的非甾体雌激素物质，为无色结晶或白色结晶性粉末［1］，可用于绝经期综合征、卵巢功能不全引起的各种疾病、前列腺癌及老年性阴道炎等，也可用于前列腺癌［2］。
一种简单快速的己烯雌酚定性检测方法研究
一种简单快速的己烯雌酚定性检测方法研究作者：罗板鑫陈昌云来源：《中国教育技术装备》2012年第06期摘要己烯雌酚是一类严重危害人体健康的兽药，简单快速的检测方法研究具有重要意义。
从浓度、温度、酸碱性等方面研究己烯雌酚使高锰酸钾褪色的最佳反应条件。
结果表明：己烯雌酚使高锰酸钾褪色的最佳条件是中性条件下，温度在40 ℃以上，己烯雌酚的最低检测限为0.1 ppm。
这是一种适合于快速筛选的定性检测方法。
关键词己烯雌酚；快速检测；褪色反应中图分类号：G642.423 文献标识码：B 文章编号：1671-489X(2012)06-0126-03Simple and Rapid Qualitative Detection Method for Diethylstilbestrol//Luo Banxin1, Chen Changyun2Abstract To study the optimum reaction conditions of diethylstilbestrol qualitative color reaction. Because diethylstilbestrol molecule contains double-bond and it can react with potassium permanganate, we discuss the optimum reaction conditions of diethylstilbestrol with potassium permanganate’s color reaction from concentration, temperature, acid and alkaline three aspects. The optimal condition of diethylstilbestrol with potassium permanganate’s color reaction is neutral condition, temperature above 40 ℃, and the lowest detectable limit of diethylstilbestrol is 0.1 ppm.Key words diethylstilbestrol; rapid detection; color-fading reactionAuthor’s address1 No.13 High Middle School of Nanjing, Nanjing, China 2100082 School of Biochemical & Environmental Engineering, Nanjing Xiaozhuang University, Nanjing, China211171食品安全是一个国家涉及国民健康、社会稳定、经济利益和国际贸易、国家形象甚至国际外交的重大战略问题。
水产品中己烯雌酚快速检测方法试验分析
水产品中己烯雌酚快速检测方法试验分析摘要对一种快速检测水产品中己烯雌酚残留量ELISA方法进行试验分析,结果表明:在0.15~9.00ng/mL浓度范围内,回归方程y=-13.141Ln(x)+43.52,相关系数R2=0.994 8;相对平均偏差为3.0%~11.6%;回收率为73%~96%;样品检测下限为0.075ng/g;定量下限为0.25ng/g;操作过程简单,检测成本低,检测时间短,因而该方法适用于大批量水产品中己烯雌酚残留量快速检测。
关键词水产品;己烯雌酚;ELISA;快速检测己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES)是一种人工合成的雌性激素,应用于水产养殖中能够促进蛋白质同化,提高饲料转化率,同时促进鱼虾类生长。
但因其在水产动物中代谢较慢且作用顽强,极小的残留都会对人体生理功能产生影响,主要危害是扰乱人体激素平衡,并具有致癌性,现已被禁止应用于水产养殖中,规定水产品中不得检出己烯雌酚[1]。
为此,从2002年开始我国要求水产品中己烯雌酚残留量的检出限为0.6 μg/kg,欧盟要求以2μg/kg为阳性下限。
目前,己烯雌酚常用的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)和酶联免疫法(ELISA),但是HPLC法[2]在检出限上不能满足要求;ELISA法[3]是目前水产品中DES残留检测的标准方法,但也存在样品处理过程复杂、检测时间长、成本高等不足。
为了寻求一种经济、简便、灵敏、特异性强的测定方法,笔者对一种快速检测水产品中己烯雌酚残留量的ELISA方法进行试验分析,现将结果报告如下。
1材料与方法1.1仪器与试剂Lab system MK3型酶标仪、METTLER PB602-N电子天平、N- EV AP氮吹仪、LRH-150S恒温培养箱、移液器(10μL、20μL、100μL和1mL各1支)、多道移液器(50~300μL)。
美国Bioo MaxSignalTM己烯雌酚ELISA试剂盒、乙酸乙酯、正己烷、无水CaCl2。
一种新的酶联免疫法检测水产品中的己烯雌酚
２５
我们 在 比较 德国 、意大利 、荷 兰 、英 国 、美 国等
生产 的多个 己烯雌酚酶联 免疫检 测试剂盒 的基础 上 ， 选择 一种新 的试 剂盒 应用 于水 产品 中 己烯雌 酚 的检 测 ，经过对罗非 鱼和对 虾的加标 回收试验 ，发现新的
转蒸 发 、Ｃ ，固相萃取 等 多个 步骤 ，且酶 联免疫 反应
步骤需要 过夜孵育 ，耗时长 、对 技术人 员 的要求 高 ， 检测精密度较难 把握 ，是检测 人员普遍 反映难度较大 的一个药残检测项 目。因此 ，采用新 的快速 、准确 的 检验方法显得尤 其迫切和必要 。
试剂盒从 冰箱拿 出来 回温 ３ ｍｎ以上。根据样品 ０ｉ 数量确定所需的微孔板数 ，设计好标 准品和样品的排 布 。分别 加入 ５ Ｌ 准 品和样品 于所 设定 的孔 中； Ｏ 标
１２ 检 测步 骤 ＿
１２１ 样 品前 处 理 ．．
度 ，液相 色谱法检测 限无法满 足需要 ，而液 相色谱 串
联质谱法 因为仪器价格 昂贵无法推广普及 ，因此 利用 抗 原抗 体反 应 的高特 异性 而设 计 的高 灵 敏度检 测 方 法 一酶联 免疫法 ，在食品 中己烯雌酚 的检测 中 泛使 用 ，其 中水产行业标准 产品 中己烯雌酚残 留量 的 测 定 一酶联 免疫 法》 （Ｃ ＂ ０ ０ ２ ０ ） 是 目前 我 国 Ｓｆ ３２—０４ ｌ
甲醇 （ ：２ ）混合 物 ；漩 涡振 荡 ２ ｉ，４ ０ ｇ ３ ，Ｖ ｍ ｎ ０ ０
离 心 １ｍｎ ０ ｉ。离心后得 到的下清液 即为待 测 的样品提
取液 。
１ ． Ｅ ＩＡ检 测 步骤 ， ２ ＬＳ ２
高效液相色谱法测定水产品中己烯雌酚的残留量
高效液相色谱法测定水产品中己烯雌酚的残留量
吴红军;成强;臧素娟;陈红燕
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2014(000)014
【摘要】[目的]建立用高效液相色谱法测定水产品中己烯雌酚的分析方法.[方法]样品经甲醇提取,以保留时间定性,外标法定量.[结果]己烯雌酚峰面积与其质量分数有着良好的线性关系(r =0.999),最低检测限为0.05 mg/kg,加标回收率为89.0％～98.5％,RSD为1.1％～4.1％.[结论]该试验建立的方法能快速、准确地检测出水产品中的己烯雌酚残留量,适用于水产品质量检测工作.
【总页数】2页(P4447-4448)
【作者】吴红军;成强;臧素娟;陈红燕
【作者单位】扬州市农产品质量监督检测中心,江苏扬州225101;扬州市农产品质量监督检测中心,江苏扬州225101;扬州市农产品质量监督检测中心,江苏扬州225101;扬州市农产品质量监督检测中心,江苏扬州225101
【正文语种】中文
【中图分类】S917
【相关文献】
1.鳗鱼肉中己烯雌酚残留量的高效液相色谱法测定 [J], 林红英;蒋天梅;沈子龙
2.酶联免疫法测定水产品中己烯雌酚残留量 [J], 张瑞凌;许亦真;刘建萍;李福伟;张冲
3.分散固相萃取-高效液相色谱串联质谱法测定水产品中氯霉素类药物的残留量 [J], 张桂云;杨伟强
4.超高效液相色谱法测定水产品中喹乙醇的残留量 [J], 黄鸾玉;杨姝丽;韦信贤;童
桂香;吴祥庆;黄玉柳;蒙源
5.超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中瑞他莫林的残留量 [J], 马剑锋; 张小军; 陈雪昌; 严忠雍; 宗婧婧; 曾军杰
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水产品中氯霉素和己烯雌酚快速检测方法初探
水产品中氯霉素和己烯雌酚快速检测方法初探作者：易鸣朱志强曾智来源：《渔业致富指南》 2017年第13期在标准《NY 5070-2002 无公害食品水产品中渔药残留限量》中氯霉素和己烯雌酚因其对人体的危害已被列为不得检出的药物残留项目。
检测氯霉素和己烯雌酚的方法主要有酶联免疫法、气相法、液质联用法，其中酶联免疫法耗时最短且操作最简单，也是笔者检测工作的主要项目之一。
结合笔者的实际工作，本文详述了酶联免疫法测定水产品中氯霉素和己烯雌酚含量的原理、方法和注意事项。
一、材料和方法１. 氯霉素和己烯雌酚氯霉素属抑菌性广谱抗生素，能对多种细菌微生物产生作用，常用于对水生动物各种传染病的治疗，曾在水产养殖业中得到广泛应用，同时也带来了水产品中氯霉素残留的严重问题。
因其会引起人类的再生障碍性贫血、新生儿灰婴综合症等严重毒副作用，作为渔药已禁用。
己烯雌酚为人工合成的非甾体雌激素，对水生动物有提高繁育率等作用。
但人食用了残留有己烯雌酚的水产品后会造成体内激素失调，对人体健康产生危害，作为渔药也已禁用。
因此对水产品中氯霉素和己烯雌酚的检测对于食品安全有重要意义。
2. 酶联免疫法1971年瑞典学者Engvail和Perlmann，荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked ImmunoSorbentAssay，ELISA）。
它的中心原理就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。
具体步骤是使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，然后与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
荧光光度法测定己烯雌酚
荧光光度法测定己烯雌酚杜凌云;朱琳;王术皓【摘要】In 0.4 mmol · L-1 B-R buffer medium of pH 4.1,butyl-rhodamine B (BRMB) was rapidly oxidized by hydroxyl free radical produced by the reaction between Fe(Ⅱ) and H2O2,leading to significant decrease of fluorescence intensity of BRMB.When diethylstilbestrol (DES) was present in the above reaction system,due to the elimination action of DES toward OH free radical,the magnitude of decrease of fluorescence intensity was decreased,and values of fluorescence difference (△F =F-F0) were found to keep linear relationship with mass concentration of DES in the range of 0.1-50 μg · L-1.Based on these facts,a method of fluorophotometric determination of DES was proposed.Optimum conditions for this reaction were found as follows:① mass concn.of BRMB:2.0 mg · L-1 ; ② concn.of FeSO4:0.05 mmol · L-1 ; ③ concn.of H2O2:(ψ) 0.000 3％and ④ time of reaction:6 min.Detection limit (3s/k) of the method was found to be 0.045 μg · L-1.Test for recovery was made by standard addition method,giving results in the range of 91.0 ％-106 ％,with values of RSD's (n=5) less than%在0.4 mmol·L-1 B-R缓冲介质(pH 4.1)中,丁基罗丹明B(BRMB)被Fe(Ⅱ)与H2O2反应所产生的羟自由基迅速氧化而导致其产生的荧光强度明显减弱.当有己烯雌酚(DES)存在时,由于其对羟自由基有清除作用,而使上述反应体系的荧光减弱程度降低,即对BRMB-Fe(Ⅱ)-H2O2反应体系有抑制作用,而且反应体系的△F值(F-F0)与DES的质量浓度在0.1～50 μg·L-1范围内呈线性关系.据此提出了测定DES 的荧光光度法.反应体系的最佳条件如下:①BRMB的质量浓度:2.0 mg·L-1;②硫酸亚铁的浓度:0.05 mmol·L-1;③过氧化氢浓度:(ψ)0.000 3％及④反应时间:6 min.方法的检出限(3s/k)为0.045 μg·L-1.以水样作基体,做加标回收试验,测得回收率在91.0％～106％之间,测定值的相对标准偏差(n=5)均小于5％.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2013(049)008【总页数】3页(P985-987)【关键词】荧光光度法;己烯雌酚;丁基罗丹明B;羟自由基【作者】杜凌云;朱琳;王术皓【作者单位】聊城大学化学化工学院,聊城252059;青岛第十五中学,青岛266023;聊城大学化学化工学院,聊城252059【正文语种】中文【中图分类】O657.32己烯雌酚（DES）是一种人工合成的雌激素，化学名为1，2－双（4－羟苯基）－1，2－二乙基乙烯，俗名为乙底酚，为无色结晶或白色结晶性粉末。
固相萃取-高效液相色谱法测定水产品中的乙烯雌酚残留量
冷 撩
本 次 试 验 使 用 的试 剂 有 ： （ １）
好 地 促 进 各 类 水 生 动 物 生 长 发 育 ， 但 烷 ／ 磷 酸氢 二程海燕 钠／ 氯化 钠： （ ３）色 谱 口 胡燕杰 周诗瑾 宁海县食品检测中心 最大 的问题就是 该物质存 有致癌风 险。 纯 ，乙腈 ／ 甲醇 ／ 乙酸 乙 酯 。 最 后 是 此 中称 取 ５ ． Ｏ ｇ ，并将 称 取 的鳗 鱼 肉置 人 们 在 市 场 购 买 的水 产 生 鲜 ， 如鱼 、 次 使 的 乙 烯 雌 酚 标 准 溶 液 ， 称 取 乙 于 ５ ０ ｍ Ｌ的 离 心 管 中 ， 之 后 加 甲 醵 ２ ０
步 操 作 完 成 之 后 ，再 次 将 肉 浆 蕾 入 振 添 加 存 鱼 饲 料 中 ， 使 得 不 能 被 完 全 最 终 得 到 了 此 次 试 验 使 用 的 乙 烯 雌 酚 荡 器 中 振 荡 ５ ｍ ｉ ｎ ，４ ０ ０ ０ ｒ ／ ａ ｒ ｉ ｎ离 心 消化 吸 收 ，存在 于水生 动物 的肝 脏 、 标准 储 备液 （ 浓度 为 １ ∞ ｇ ／ ｍ Ｌ） 。 １ ０ ｍ ｉ ｎ ，最 终通过 吸液 管将 ｒ 清液 转 ｇ ／ ｍ Ｌ 。 肌 肉 中 ，严 重 危 害 人 们 的 身 体 健 康 其 中 ，标 准 中 间 液 浓 度 为 ２
该 化 学 物 质 与 水 不 相 溶 ，但 是 与 有 机 ／ 步琦 Ｒ ２ １ Ｏ（ 瑞士 ） 。
雌 酚这 一雌 激 素类 物质 ，被越 来越 多 纯 度达 到 ９ ９ ％的 乙 烯 雌 酚 标 准 样 品 应 用 于 水 产 养 殖 中。 乙 烯 雌 酚 可 以 更
（ Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ公 司 ）： （ ２） 分 析 纯 ， 正 己
就 是此 次所 要测 定 的试样 品 ，做 高效
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水产品中己烯雌酚快速检测方法试验分析摘要对一种快速检测水产品中己烯雌酚残留量elisa方法进行试验分析,结果表明:在0.15~9.00ng/ml浓度范围内,回归方程
y=-13.141ln(x)+43.52,相关系数r2=0.994 8;相对平均偏差为
3.0%~11.6%;回收率为73%~96%;样品检测下限为0.075ng/g;定量下限为0.25ng/g;操作过程简单,检测成本低,检测时间短,因而该方
法适用于大批量水产品中己烯雌酚残留量快速检测。
关键词水产品;己烯雌酚;elisa;快速检测
中图分类号 s912 文献标识码a文章编号
1007-5739(2009)15-0347-01
己烯雌酚(diethylstilbestrol,des)是一种人工合成的雌性激素,应用于水产养殖中能够促进蛋白质同化,提高饲料转化率,同时促进鱼虾类生长。
但因其在水产动物中代谢较慢且作用顽强,极小的残留都会对人体生理功能产生影响,主要危害是扰乱人体激素平衡,并具有致癌性,现已被禁止应用于水产养殖中,规定水产品中不得检出己烯雌酚[1]。
为此,从2002年开始我国要求水产品中己烯雌酚残留量的检出限为0.6 μg/kg,欧盟要求以2μg/kg为阳性下限。
目前,己烯雌酚常用的检测方法有高效液相色谱法(hplc)和酶联免疫法(elisa),但是hplc法[2]在检出限上不能满足要求;elisa 法[3]是目前水产品中des残留检测的标准方法,但也存在样品处理过程复杂、检测时间长、成本高等不足。
为了寻求一种经济、简便、
灵敏、特异性强的测定方法,笔者对一种快速检测水产品中己烯雌酚残留量的elisa方法进行试验分析,现将结果报告如下。
1材料与方法
1.1仪器与试剂
lab system mk3型酶标仪、mettler pb602-n电子天平、n- evap 氮吹仪、lrh-150s恒温培养箱、移液器(10μl、20μl、100μl和1ml各1支)、多道移液器(50~300μl)。
美国bioo maxsignaltm己烯雌酚elisa试剂盒、乙酸乙酯、正己烷、无水cacl2。
1.2测定方法
1.2.1预处理。
虾、蟹、甲鱼和淡水鱼取肌肉部分,用匀浆器对样品进行匀浆。
1.2.2提取。
称取3.00g匀浆样品(每个样品称2份),加入9ml 乙酸乙酯,0.3g无水cacl2,最大速度振荡3min;20℃,6 000rpm离心5min;移取6ml上清液到另一新的试管,氮气吹干。
1.2.3净化。
加入2ml正己烷溶解样品;加入1ml1×pbs-甲醇(3∶2,v/v),漩涡振荡2min;20℃,6 000rpm离心10min,除去上层正己烷层,部分蟹样再次加入正己烷重新净化1次,取50μl下层溶液进行检测。
1.2.4质控。
取不同批次的南美白对虾和中华绒螯蟹样品,以
20ng/ml的标准溶液分别添加3个不同的浓度水平测试回收率,同时做空白。
提取、净化过程同1.2.2和1.2.3。
1.2.5elisa反应测试步骤。
将bioo试剂盒从冷藏箱取出,并回温至室温。
按说明书稀释抗体、洗液和pbs;根据样品数量确定所需的微孔板数,设计好标准品、质控和样品的排布(每个浓度的标准品和每份处理后待测溶液均设平行双孔);分别加入50μl标准品和样品于所设定的孔中;在每孔中加入100μl一抗,混匀1min;室温(20~25℃)孵育30min;洗板3次,每次加入250μl1×洗液,最后一次将板尽量甩干并在吸水纸上吸干;每孔加入150μl二抗;室温避光孵育30 min;洗板3次,每次加入250μl 1×洗液;加入100μl 的tmb底物,轻敲微孔板边缘混匀1min;在室温下培养15min,加入100μl的终止液终止反应,在450nm下读od值。
2结果与分析
2.1线性范围
分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值:相对吸光度值(%)=(标准或样品吸光度值/零标准吸光度值)×100;以相对吸光度值为纵坐标,标准浓度为横坐标建立标准曲线(见图1)。
2.2精密度和回收率
从标准曲线上读取质控和样品的浓度值,计算南美白对虾和湖
蟹样品的精密度和回收率(见表1、表2)。
2.3检测限
从图1可知,0.15~9.00ng/ml浓度范围内,标准曲线线性关系良好,因此根据标准曲线范围内最低浓度0.15ng/ml,计算样品检测下限=0.15ng/ml×1ml×6ml/(4ml×3g)=0.075 ng/g;根据标准曲线范围内次低浓度为0.5ng/ml,计算样品定量下限=0.5ng/ml×1ml×
6ml/(4ml×3g)=0.25ng/g。
2.42种方法检测des比较
2种方法检测des的成本、时间比较见表3。
3结论与讨论
通过以上试验可知,快速检测水产品中己烯雌酚的方法在检测限、定量范围、精密度、回收率(73%~96%>70%)等技术指标上都满足标准[3]规定的要求;将其与德国r-biopharm己烯雌酚elisa试剂盒相比,操作过程简单,检测成本低,检测时间短,因而该方法非常适于大批量检测水产品中己烯雌酚残留含量。
同时,在试验中发现中华绒螯蟹样品的回收率比南美白对虾低,而在相同浓度下的相对平均偏差却较高。
这可能与中华绒螯蟹样品脂肪含量相对较高,提取物经过2次净化有关。
4参考文献
[1] 中华人民共和国农业部.ny5070-2002 无公害食品、水产品中鱼药残留限量[s].北京:中国标准出版社,2002.
[2] 中华人民共和国卫生部.gb/t 5009.108-2003 畜禽肉中己烯雌酚的测定[s].北京:中国标准出版社,2002.
[3] 中华人民共和国农业部.sc/t 3020-2004 水产品中己烯雌酚残留量的测定酶联免疫法[s].北京:中国农业出版社,2004.。