参考区间验证的实验程序
参考区间及临界值如何验证或建立
2
检验报告单：需要关注
1. 我们提供的参考区间、临界值或临床决定值 是否合适？ 2. 最好能提供检验方法、试剂厂商的信息！
3
内容
• 参考区间的验证和建立
1
• 临界值的验证和建立
2
4
参考区间的验证和建立
参考文献 1. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline-Third Edition CLSI Document EP28-A3c (ISBN 1-56238-682-4). Clinical and Laboratory Standards Institute,940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA, 19087-1898, USA, 2010. 2. 临床实验室检验项目参考区间的制定 WS/T 402-2012.
6. 特殊情况：若通过招募受试者来选择参考个体有困难，则 可从查体人群中选择临床诊断基本正常者作为参考个体。
《生物参考区间和临床决定值评价程序》（PKUPHL-2-PF-033-V2）
13
参考区间的验证和建立
标本采集、运输、检测和存储：按SOP操作。
《生物参考区间和临床决定值评价程序》（PKUPHL-2-PF-033-V2）
4. 入选受试者：获取临床资料，主要包括：年龄、性别、身 高、体重、血压、心率、性别、吸烟，心电图检查结果， 实验室检测指标等。入选受试者各项相关实验室指标无异 常，保留受试者体检结果。
医学实验室ISO15189认可性能验证实验方案
医学实验室ISO15189认可性能验证实验方案德信诚咨询为了满足目前医学实验室认可的需求保证实验室检测结果的准确性，特制定本方案。
本方案从准确度、精密度、参考范围、线性范围以及方法学比对5个方面对各个试验项目进行评价.一、精密度（Precision）:精密度是指在规定条件下所获得的检测结果的接近程度,表示测定结果中随机误差大小程度的指标.精密度通常用不精密度表示。
可以分别评价连续精密度(批内精密度）、重复性不精密度(中间精密度,包括批间、日间精密度等）和再现性精密度。
本方案采用批内和天间两种方法对各个试验项目的精密度进行评价.全部实验过程使用同批号试剂和质控品，并且保证检测当日质控在控。
1、批内精密度(连续精密度）:方法:在检测患者标本过程中,连续运行高低水平质控品各20次,记录检测结果.计算批内精密度的CV值和SD值。
结果评价（1)厂家评价标准：计算精密度指数=验证SD/厂商SD，精密度指数要求小于等于1,或者实测CV小于等于厂家要求的CV,两者符合其一即可。
具体见《精密度评价》表格。
（2）按照国际推荐标准：批内精密度应在CLIA88允许误差的1/4以内，见美国CLIA’88能力比对检验的分析质量要求。
2、天间精密度(中间精密度）：方法:同样使用两个水平的质控品，若需复溶冻干质控品做实验，要注意选择产品的稳定性和瓶间差.要严格控制每次复溶冻干品时的操作手法。
连续测试20天,每天检测1次。
在次过程中不能更换试剂批号及质控品批号,是否需要重新定标则取决于实验室。
测试完成后记录检测结果。
结果评价（1）厂家评价标准：计算天间的SD及CV值，并计算精密度指数=验证SD/厂商SD。
精密度指数要求小于等于1，或者实测CV小于等于厂家要求的CV，两者符合其一即可.具体见《精密度评价》表格。
（2)按照国际推荐标准:批内精密度应在CLIA88允许误差的1/3以内,见美国CLIA’88能力比对检验的分析质量要求。
二、准确度准确度(accuracy)指检测结果与被测量物真值之间的接近程度。
最新参考区间及临界值 如何验证或建立教程文件
≤2个结果超出 待验证区间
Pass
≤2个结果超出
待验证区间
Pass
20个结果
3个或4个结果 超出待验证区间
20个结果
≧3个结果 超出待验证区间
≥5个结果超出 待验证区间
检查分析程序，参考 人群差异，自行建立
《生物参考区间和临床决定值评价程序》（PKUPHL-2-PF-033-V2）
16
参考区间及临界值 如何验 证或建立
检验报告单的比较：
A院检验科 B院检验科
2
检验报告单：需要关注
1. 我们提供的参考区间、临界值或临床决定值 是否合适？ 2. 最好能提供检验方法、试剂厂商的信息！
3
内容
4
参考区间的验证和建立
参考文献 1. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline-Third Edition CLSI Document EP28-A3c (ISBN 1-56238-682-4). Clinical and Laboratory Standards Institute,940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA, 19087-1898, USA, 2010. 2. 临床实验室检验项目参考区间的制定 WS/T 402-2012.
差异。 2. 目前国际上使用最多的方法为免疫散射比浊法，使用的试剂
主要为英国的The Binding Site试剂及德国的SIEMENS试 剂。
性能验证方案(仅供参考)
性能验证(仅供参考)1 生化生化室项目需要验证的参数包括批内精密度，批间精密度，正确度，线性范围、参考区间，可报告区间等。
适用时，还要考虑分析灵敏度（仅对那些在接近 0 的低值有临床意义的项目有必要进行确定，必要时，可引用说明书中给出的低值）和干扰试验。
1.1精密度1.1.1标本准备及要求质控品、已经检测过的病人标本或具有血清基质的定值材料。
每个项目均需选择至少正常和病理两个浓度水平的验证材料进行验证。
所用样本一定要稳定，其基体组成应尽可能相似于实际检测的病人标本，样本中的分析物含量应在该项目的医学决定水平附近。
1.1.2方案1.1.2.1方案 1：对验证材料每天分析 1 批次，2 个浓度，每个浓度重复测定 4 次，连续 5 天。
记录结果并计算均值、标准差和批内精密度(%)。
1.1.2.2 方案 2：批内精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的检测方法，同批次内检测混合的新鲜临床标本 20 次。
记录结果并计算均值（X）、标准差（SD）和批内变异系数 CV（%）。
批间精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的检测方法（或将室内质控品按照常规标本的方法一样测定，测定结果在遵照厂商参数不出控的前提下），同批次内检测混合的新鲜临床标本 20 次，同一批号室内质控品某一时间段（至少 20 天）的室内质控数据逐步累积最终得出均值、标准差。
1.1.3结果判断从美国临床实验室室间质量评估允许误差表中查阅评价项目的允许误差范围，由实验数据统计的批内不精密度和批间不精密度小于允许误差范围的 1/4 和 1/3 作为检测系统不精密度性能的的可接受标准（或用卫生部临检中心的允许总误差、卫生标准等），且又小于厂商提供的精密度性能指标，说明由实验室评价的检测系统的不精密度性能可接受，符合要求。
若大于判断限，检测系统的不精密度是否符合要示，应再进一步做统计学处理作出判断。
医院实验室参考范围的确定与调整程序
医院实验室参考范围的确定与调整程序1.目的：规范各检测项目生物参考区间的建立。
2.范围：实验室开展的检测项目。
3.定义3.1参考个体：依据临床对某检验项目的使用要求确定选择原则，以此选择的检测参考值的个体。
所有参考个体的集合为参考总体。
3.2参考抽样组：从统计意义上，一定数量的参考个体是对参考总体的一个抽样。
在现今的参考值建立中，都是对参考抽样组作具体研究，在一定的可信限条件下，成为某项目的参考值和参考区间。
3.3参考值：对一个参考个体进行某项目检测得到的值为该个体的参考值，所有参考抽样组的各个参考值合起来即为参考值范围。
3.4参考区间和参考限：依据所有参考值的分布特性以及临床使用要求，选择合适的统计方法进行归纳分析后，确定参考值范围中的一部分为参考区间，区间的两端为参考区间的限值，分为低参考限和高参考限。
4.权责4.1各专业组组长负责评审本组检验项目的生物参考区间。
4.2技术负责人批准评审后的生物参考区间。
5.制度内容5.1检验科在下列情况下应重新评审生物参考区间。
5.1.1开展新的检验项目。
5.1.2改变当的检测系统。
5.1.3实验室有理由可以相信某一特定参考区间对参考人群不再适用时。
5.2工作程序5.2.1各专业组应为所运行的检验项目确定可靠的生物参考值区间。
5.2.2生物参考区间的设立可直接采用由国家权威机构发布或权威刊物出版的适合实验室的生物参考区间；还可直接引用试剂供应商提供的对应的生物参考区间；也可自行建立生物参考区间。
5.2.3自行建立参考值范围和参考区间计划。
5.2.3.1根据文献和实验研究，总结对该项目检测结果产生的生物变异和分析下扰的因素，供选择参考个体时用。
5，2.3.2确定参考个体的选择原则（或排除非参考个体的原则），编写与之对应调查表。
5.2.3.3依据调查表和其他有关记录，挑选候选的参考个体。
5.2.3.4依据排除原则，剔去不符合要求的候选对象。
5.2.3.5将采集标本前和采集时对受检查的要求，告诉各个受检参考个体，做好准备。
CL-2000i全自动免疫发光分析FT3、FT4、TSH参考区间验证
中国卫生产业CHINA HEALTHINDUSTRY[作者简介]李佐祥(1981-),男,贵州余庆人,本科,主管检验技师,主要从事临床生化与免疫检验研究工作。
生物参考区间是检验结果常用的一项评价指标,为患者疾病的诊断、治疗、预后和筛查提供信息。
游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺激素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)是反映甲状腺功能最常用的检测指标,常称为“甲状腺功能三项”。
FT3、FT4、TSH 以往主要采用放射免疫法和酶联免疫法测定技术。
目前实验室大多采用免疫标记的方法直接测定血清中的激素浓度。
随着免疫测定技术的发展,竞争性荧光免疫分析法、化学发光免疫法和电化学发光免疫法已能灵敏、特异、快速和准确地用于临床血清激素的测定。
许多实验室一般参照试剂说明书或者全国临床检验操作规程设定参考区间,在实际工作中,发现这些参考区间并不适合临床应用,其生物参考区间是解释检验结果分析检验信息是一个基本尺度和依据,实验室只有给临床检验项目提供可靠的生物参考区间,才能使临床医生对患者或健康体检者的诊断治疗有明确的指引[2]。
虽然不同厂家的检测系统提供了各自参考区间,但由于地域、人群等因素的差异,为了更好地服务于临床,提高这些指标对甲状腺疾病符合率,有必要对厂家提供的生物参考区间进行验证或进一步重新设定,这也ISO015189《医学实验室质量和能力认可提准则》及医院等级评审中所要求的内容之一。
按照CLSI 文件C28-P3《医学实验室参考区间的定义、建立和确认》中的推荐方法,参考IS015189:2003(E)《医学实验室一质量和能力的专用要求》条款要求,根据参考区间正确、科学的确定方法,按照建立参考区间的具体操作程序,保证参考区间的可靠、适用。
该研究通过2015—2016年调查该地区3172名体检者,现报道如下。
1资料与方法1.1一般资料选取到该院健康体检者3172名,年龄16~78岁,年龄:(32.02±8.99)岁;其中:男性2273名,年龄:(32.65±8.98)岁;女性899名,年龄:(30.42±8.47)岁。
参考区间及临界值 如何验证或建立
参考区间的验证和建立
数据分析：建立 按性别或年龄分组，进行Z检验，以确定是否需要分组建 立参考区间。以非参数方法确定参考区间如2.5th-97.5th 或0-95th 。
17
参考区间验证及定期评审
18
19
20
21
22
参考区间建立案例
血清IgG亚类测定现状：
1. 不同的检测方法，相同的方法不同厂家试剂其参考区间有 差异。
28
临界值：CAP认可的要求
在初次运行检验时，应确定区分阳性结果与阴性结果的临 界值，并且此后每六个月验证一次。如果校验品或校准验证材 料的值位于临界值附近，则校准或校准验证的过程符合本核查 表的要求。如果实验室不能从仪器中获得实际数值，则该核查 表要求不适用。 在分析用关键试剂的批次发生更改时也应验证临界值（除 非实验室主任确定这类更改不会影响临界值）；在更换主要仪 器元件、对仪器进行大的保养以及当 QC 出现不寻常的趋势、 偏移或超出实验室允许限，以及采取其他手段评估和纠正失控 还无法识别和纠正问题时应验证临界值。
验证16个结果20个结果2个结果超出待验证区间超出待验证区间5个结果超出待验证区间2个结果超出待验证区间3个结果超出待验证区间个结果20个结果生物参考区间和临床决定值评价程序pkuphl2pf033v2passpasspasspass检查分析程序参考人群差异自行建立检查分析程序参考人群差异自行建立参考区间的验证和建立数据分析
0.181 0.016 0.001 0.864 0.041
25
参考区间建立案例
血清IgG亚类：参考区间（2.5th-97.5th）
IgG1 (mg/dL) The Binding Site 厂商提供 SIEMENS 厂商提供 本实验室使用 SIEMENS试剂建立 382-929 405-1011 457-1177 IgG2 (mg/dL) 242-700 169-786 133-736 IgG3 (mg/dL) 22-176 11-85 11-95 IgG4 (mg/dL) 4-87 3-201 8-188
性能验证方案(仅供参考)
性能验证(仅供参考)1 生化生化室项目需要验证的参数包括批内精密度，批间精密度，正确度，线性范围、参考区间，可报告区间等。
适用时，还要考虑分析灵敏度（仅对那些在接近0的低值有临床意义的项目有必要进行确定，必要时，可引用说明书中给出的低值）和干扰试验。
1.1 精密度1.1.1 标本准备及要求质控品、已经检测过的病人标本或具有血清基质的定值材料。
每个项目均需选择至少正常和病理两个浓度水平的验证材料进行验证。
所用样本一定要稳定，其基体组成应尽可能相似于实际检测的病人标本，样本中的分析物含量应在该项目的医学决定水平附近。
1.1.2 方案1.1.2.1 方案1：对验证材料每天分析1批次，2个浓度，每个浓度重复测定4次，连续5天。
记录结果并计算均值、标准差和批内精密度(%)。
1.1.2.2 方案2：批内精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的检测方法，同批次内检测混合的新鲜临床标本20次。
记录结果并计算均值（X）、标准差（SD）和批内变异系数CV（%）。
批间精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的检测方法（或将室内质控品按照常规标本的方法一样测定，测定结果在遵照厂商参数不出控的前提下），同批次内检测混合的新鲜临床标本20次，同一批号室内质控品某一时间段（至少20天）的室内质控数据逐步累积最终得出均值、标准差。
1.1.3结果判断从美国临床实验室室间质量评估允许误差表中查阅评价项目的允许误差范围，由实验数据统计的批内不精密度和批间不精密度小于允许误差范围的1/4和1/3作为检测系统不精密度性能的的可接受标准（或用卫生部临检中心的允许总误差、卫生标准等），且又小于厂商提供的精密度性能指标，说明由实验室评价的检测系统的不精密度性能可接受，符合要求。
若大于判断限，检测系统的不精密度是否符合要示，应再进一步做统计学处理作出判断。
1.2 正确度1.2.1 卫生部临检中心室间质评含盖的项目，则以卫生部临床检验中心室间质评结果为准；成绩在80%者即为验证通过。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
参考区间验证的实验程序
1、目的
通过对引用的试剂说明书、参考书或文献中的参考区间进行验证，确保实验室提供的参考区间适合临床医生对病人诊疗的需要。
2、范围
适用于科室内所有定量检测的测试项目的临床可报告范围的评价。
3、职责
各实验小组的组长负责组织各组室相关定量测试项目的参考区间的验证。
4、定义
4.1参考值范围：对一个参考个体进行某项目检测得到的值为该个体的参考值，所有参考抽样组的各个参考值合起来即为参考值范围。
4.2参考区间和参考限：依据所有参考值的分布特性以及临床使用要求，选择合适的统计方法进行归纳分析后，确定参考值范围中的一部分为参考区间，区间的两端为参考区间的限值，分为低参考限和高参考限。
5、参考区间验证的实验要求
5.1选择健康参考个体，不能选择住院或门诊病人；
5.1.1下列内容常作为选择参考个体的排除要素：
* 饮酒、吸烟史；
* 血压不正常者；
* 正在用药者；
* 近期住院、动过手术者及近期输过血者；
* 孕期及哺乳期限
* 有遗传性疾病；
* 曾患有系统性疾病者；
5.1.2参考个体的年龄分布不应集中于大年龄组儿童，应尽可能选用该项目参
考区间相近的年龄分布；
5.1.3参考个体男女比例应相近；
5.1.4如引用的参考区间分年龄组和性别组，应考虑分组进行参考区间的验
证；
5.2严格按照《标本采集手册》规定的标本采集、处理、运送和保存的要求进行
参考个体的标本采集；
5.3对采集的标本进行分析的检验方法应有可靠的方法学评价；
5.4检测过程（包括定标品、质控品的选择）应与检测病人标本完全一致，就有
完整的质量控制措施；
5.5使用不同仪器或方法检测同一测试项目时，应对仪器、方法学间结果是否具
有可比性先作出评价，否则不同仪器或方法应各自有参考区间；
5.6如某一测试项目有多种样本类型，如血清、血浆、尿液标本，应分别对不同
类型的样本进行参考区间的验证；
5.7对于一些测试项目（如血中药物浓度的检测、脑脊液中总蛋白的检测等），
参考个体的样本较难获得，可直接使用引用的参考区间，不做参考区间的验证实验；
5.8进行参考区间验证的条件：
*新的测试项目开展前；
* 测试项目的分析方法学改变； * 病人群改变；
6、参考区间的验证程序
6.1选择至少10名男和10名女参考个体；
6.2统计各参考个体体测值，与引用的参考区间比较，计算比率R; 比率(R)
总的参考个体数
的参考个体数
检测值在引用参考区间
6.3参考区间验证实验的结果判定：
6.3.1 R 大于等于90%，验证结果可以接受，说明可以引用该参考区间； 6.3.2 R 小于90%，分析查找原因后重新进行参考区间的验证； 6.4形成参考区间验证结果报告，报告内容应包括但不限于： * 参考个体来源； * 样本类型；
* 测试项目及单位名称；
* 引用参考个体的检测值列表； * 测试日期
* 操作者签名及日期，审核者签名及日期
的参考区间验证
操作者： 日期：
审核者： 日期
统计计算：
%
100% 100%
=⨯=⨯=
总的参考个体数
的参考个体数
检测值在引用参考区间R 结 论：
R= %
允许值> 90% 允许值< 90%
全国临床检验操作规程或说明书的参考范围可以引用。
全国临床检验操作规程或说明书的参考范围不可以引用。